肿瘤抑制基因7L通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胰腺癌细胞生长的作用机制

目的 探讨肿瘤抑制基因(ST)7L对胰腺癌细胞增殖和凋亡能力的影响及其作用机制。方法 收集胰腺癌患者及健康体检者血浆标本各22例,同时收集胰腺癌组织和癌旁组织标本13对。将ST7L过表达质粒及空白质粒分别转染胰腺癌细胞作为ST7L组和对照组,将ST7L敲降质粒及空白质粒分别转染胰腺癌细胞作为si-ST7L组和si-NC组。采用实时荧光定量(qRT)-PCR检测临床样本中ST7L的表达水平;采用Western blot检测胰腺癌细胞系中ST7L的表达水平;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测相关蛋白表达水平并分组进行比较。结果 胰腺癌患者血浆ST7L表达水平明显低于健康对照者,胰腺癌组织中ST7L的表达水平显著低于对应癌旁组织;ST7L在胰腺癌细胞系PANC-1、AsPC-1、PaCa-2中的表达水平均明显低于胰腺导管正常细胞H6C7(P<0.05)。ST7L组及对照组细胞24 h、48 h、72 h及96 h的增殖能力均依次升高,ST7L组细胞24 h、48 h、72 h及96 h的增殖能力均明显低于同期对照组(P<0.05)。ST7L组PANC-1及PaCa-2细胞凋亡率均高于对照组;ST7L组PANC-1及PaCa-2细胞凋亡相关蛋白Caspase-3表达水平均高于对照组,而Bcl-2表达水平均低于对照组(P<0.05)。ST7L组细胞β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达均低于对照组;si-ST7L组细胞β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达均高于si-NC组(P<0.05)。结论 ST7L可能通过降低Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达来抑制胰腺癌细胞生长。

微小RNA-452-5p及SRY盒相关基因7在食管癌组织中的表达水平及与临床病理参数和预后的关系研究

目的 探讨微小RNA-452-5p(miR-452-5p)及SRY盒相关基因7(SOX7)在食管癌组织中的表达水平以及临床病理参数和预后的关系。方法 选取2017年6月至2019年5月期间我院收治的106例食管癌患者作为研究对象。检测食管癌患者miR-452-5p、SOX7 mRNA的表达,分析癌组织中miR-452-5p、SOX7 mRNA表达与临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,并采用COX单因素和多因素分析影响食管癌预后的危险因素。结果 相比于癌旁组织,癌组织中的miR-452-5p表达水平更高(P<0.05),SOX7 mRNA表达水平更低(P<0.05)。相比于肿瘤Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度(Tis~T2)食管癌患者,miR-452-5p在有淋巴结转移、肿瘤分期Ⅲ期、浸润深度(T3~T4)癌组织中有更高的表达水平,SOX7 mRNA表达水平更低(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,患者3年总生存率miR-452-5p高表达组为30.4%(17/56),miR-452-5p低表达组为54.0%(27/50),累积总生存率差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=6.082,P=0.014);SOX7 mRNA高表达组和SOX7 mRNA低表达组患者患者3年总生存率分别为53.7%(29/54)、28.8%(15/52),累积总生存率差异有统计学意义(Log-rank χ^(2)=6.742,P=0.009)。COX单因素回归分析结果显示,miR-452-5p、SOX7 mRNA、肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移与食管癌预后有关。COX多因素回归分析结果显示,影响食管癌预后的独立因素有淋巴结转移、SOX7 mRNA低表达、肿瘤分期Ⅲ期、miR-452-5p高表达、浸润深度(T3~T4)。结论 miR-452-5p在食管癌组织中呈高表达、SOX7 mRNA在食管癌组织中呈低表达,其水平与淋巴结转移、肿瘤分期、浸润深度有关,且密切关联食管癌患者预后。

风湿性心脏病患者血清类风湿因子、自噬相关基因7水平与心功能、免疫炎症的关系

目的探讨类风湿因子(RF)、自噬相关基因7(Atg7)在风湿性心脏病患者血清中的表达及与心功能、免疫炎症的相关性。方法选取2018年5月至2021年5月长江大学附属仙桃市第一人民医院收治的102例风湿性心脏病患者为观察组,并根据纽约心脏协会心功能分级将患者分为Ⅳ级组(34例)、Ⅲ级组(36例)、Ⅱ级组(32例)。按照年龄、性别随机选择100例健康体检者为对照组。收集一般资料,检测血清RF、Atg7、免疫炎症相关指标水平并进行心脏超声检查。Pearson法分析RF、Atg7与心功能、免疫炎症指标的相关性。利用ROC曲线评价血清RF、Atg7水平对风湿性心脏病患者的诊断价值。结果观察组患者血清中RF、Atg7表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(t=72.872、15.973,均P<0.05);心功能Ⅳ级组和Ⅲ级组患者RF、Atg7、左心室舒张末期内径(LVEDD)水平均高于Ⅱ级患者,左心室射血分数(LVEF)均低于Ⅱ级组患者,差异有统计学意义(P<0.05);心功能Ⅳ级组患者RF、Atg7、LVEDD水平高于Ⅲ级组患者,LVEF低于Ⅲ级组患者,差异有统计学意义(P<0.05);风湿性心脏病患者血清中RF与Atg7表达呈正相关(r=0.463,P<0.05);风湿性心脏病患者血清中RF、Atg7表达与超敏C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白介素6、红细胞沉降率、免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、LVEDD均呈正相关,与LVEF均呈负相关(P<0.05);血清RF、Atg7水平预测风湿性心脏病患者的ROC曲线下面积分别为0.856(95%CI=0.799~0.901)、0.843(95%CI=0.786~0.890),对应的敏感度分别为84.31%、86.27%,特异度分别为89.00%、83.00%。两者联合检测风湿性心脏病患者的ROC曲线下面积为0.933(95%CI=0.889~0.963),敏感度和特异度分别为87.25%、86.00%。结论RF、Atg7在风湿性心脏病患者血清中高表达,与患者心功能及免疫炎症密切相关。

猪传染性胃肠炎病毒SC-1株的分离与基因7的克隆分析

从四川某猪场采集疑似病例的腹泻粪样中分离到1株病毒,该病毒经过ST细胞传代培养盲传至第4代时出现病变。通过荧光抗体染色、病毒中和试验、TCID50试验、核酸类型鉴定,结合样品正染后在电镜下的观察结果,确定该毒株为猪传染性胃肠炎病毒,命名为TGEV SC-1株。参照GenBank中收录的TGEV基因7的序列设计了1对特异性引物,以SC-1株的细胞增殖毒的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得了大小约为303 bp的基因片段,包括完整的基因7序列片段(237 bp),在GenBank上的登录号为DQ437507。核苷酸和推导的氨基酸序列比较分析结果表明,该毒株与其他毒株的同源性均在92.4%以上,TGEV SC-1株与美国的PURDUE和中国的TH-98毒株亲缘关系最近;与日本各分离毒株、中国TS株、美国Miller株、中国台湾TFI株和英国96-1933株的同源性较低。TGEV基因7在密码子使用的选择上,存在较大的偏向性;基因7编码蛋白在两端存在有明显的疏水性区域,在2～24和56～75位氨基酸残基处存在跨膜结构。

南方根结线虫食道腺表达基因7E12影响植物的初步研究

南方根结线虫(Meloidogyne incognita)是一种重要的植物寄生线虫,它的食道腺产生的分泌蛋白是对寄主造成危害的致病因子。鉴定这些编译分泌蛋白的基因特性,是认知南方根结线虫对植物致病性或寄生性机理的关键所在。通过使用烟草根部特异表达基因TobRB7的△0.3缺失的启动子,替换植物过表达载体pBI-121的CMV(烟草花叶病毒)35S启动子,构建了南方根结线虫食道腺细胞表达的基因7E12的植物表达载体pBI-Trp-7E12和pBI-Trp。pBI-Trp在本研究中作为空白对照使用。利用农杆菌侵染花粉管通道法把这2个载体转化了模式植物拟南芥。通过利用卡那霉素抗性培养基对已转化的拟南芥进行筛选,获得了T1代转基因植株。这为研究鉴定该基因的特性奠定了基础,以利于进一步研究南方根结线虫对植物的致病性机理。

诱导/封闭自噬相关基因7对肾癌786-0细胞自噬的调控作用研究

目的探讨诱导/封闭Atg7对肾癌786-0细胞自噬的调控作用。方法构建上调Atg7的慢病毒载体plenti6.3-Atg7,下调Atg7的慢病毒载体sh-Atg-1lv、sh-Atg-2lv,空载对照慢病毒载体sh-scramb-con lv、plenti6.3-GFP,分别转染肾癌786-0细胞系,未转染的786-0细胞系为空白对照。RT-PCR和Western blot检测各组Atg7的表达,研究plenti6.3-Atg7激活Atg7效率和sh-Atg-1lv、sh-Atg-2lv抑制Atg7效率。Western blot检测上述各组细胞LCII/LC3I蛋白比值,研究上调及下调Atg7对肾癌786-0细胞自噬的激活及抑制作用。结果经过筛选,成功构建稳定上调Atg7的786-0/plenti6.3-Atg7xbx细胞系、稳定下调Atg7的786-0/sh-Atg-2lv细胞系、空载对照786-0/sh-scramb-con lv、786-0/plenti6.3-GFP细胞系。与空白对照组比较,Atg7上调组786-0细胞LCII/LC3I比值显著升高(3.31±0.12 vs.2.23±0.10 P<0.01),具有稳定的自噬激活作用;Atg7下调组的786-0细胞LCII/LC3I比值显著降低(1.45±0.11 vs.2.23±0.10 P<0.01),具有稳定自噬抑制作用。结论上调Atg7对肾癌786-0细胞系具有自噬激活作用,下调Atg7对肾癌786-0细胞系具有自噬抑制作用。

重组腺相关病毒介导黑色素瘤分化相关基因7对人肝癌细胞体内外抑制效应的研究

目的观察PEG启动子调控腺相关病毒介导的黑色素瘤分化相关基因7（MDA-7）在体内外抑制肝癌细胞的生物学活性，探讨重组腺相关病毒介导MDA-7基因用于肝癌基因治疗的应用前景。方法构建重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统，体外感染人肝癌细胞株HepG2细胞。Western印迹检测转染细胞内MDA-7蛋白；MTT法检测细胞增殖抑制率；流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡变化。构建肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤模型，尾静脉注射rAAV-PEG-MDA-7，观察其对肝癌生长的抑制作用；ELISA方法检测血浆MDA-7蛋白浓度；TUNEL法分析MDA-7对肿瘤细胞的凋亡诱导情况；免疫组织化学分析MDA-7在肿瘤组织中的表达。结果重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7可特异性转染HepG2细胞，MDA-7蛋白在HepG2细胞中高效表达，并呈时间依赖性。重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡，G0／G1期细胞百分比明显增多，G2／M期的细胞显著减少（P〈0、05）。全身系统性给予rAAV-PEG-MDA-7后，血清中可持续检测到MDA-7蛋白，且注射后2周浓度达高峰（200ng／ml）；肿瘤生长受抑制，抑瘤率为62％（P〈0、05）；免疫组化结果显示MDA-7在肿瘤组织中表达；TUNEL结果显示rAAV-PEG-MDA-7可诱导肿瘤细胞凋亡。结论构建出的重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统具有良好的肿瘤靶向性，通过抑制肝癌细胞增殖和诱导其凋亡发挥抗肝癌作用。

长链非编码RNA(lncRNA)核仁小RNA宿主基因7(SNHG7)对葡萄膜黑色素瘤癌细胞增殖和侵袭力的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核仁小RNA宿主基因7(SNHG7)对葡萄膜黑色素瘤癌细胞增殖和侵袭力的影响。方法选取2011年8月至2019年8月在我院行手术治疗的葡萄膜黑色素瘤患者71例71眼作为葡萄膜黑色素瘤组,另选取因外伤摘除且葡萄膜完整、眼球正常的患者40例40眼作为正常组。两组患者性别、年龄、患眼眼别差异均无统计学意义(均为P>0.05)。采用实时荧光定量PCR检测两组患者眼球组织中SNHG7表达。取M23细胞进行培养,将对数生长期细胞分成3组,SNHG7干扰组转染SNHG7干扰序列;阴性对照组转染阴性对照序列;空白组不作任何处理。采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中SNHG7表达,CCK-8法检测转染后细胞增殖活性,Transwell法检测细胞侵袭力。结果葡萄膜黑色素瘤组患者眼球组织中SNHG7的相对表达量为2.05±0.16,正常组患者眼球组织中SNHG7的相对表达量为1.01±0.07,两组差异有统计学意义(t=39.461,P<0.001)。葡萄膜黑色素瘤组在发生巩膜浸润和眼外生长的患者眼球组织中SNHG7相对表达量均较无巩膜浸润和无眼外生长的患者高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。转染后继续培养48 h,SNHG7干扰组细胞SNHG7相对表达量(0.27±0.09)明显低于阴性对照组(1.01±0.07)和空白组(1.03±0.09)(均为P<0.001)。与阴性对照组和空白组相比,SNHG7干扰组细胞转染后24 h、48 h、72 h和96 h时光密度均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。转染后48 h,SNHG7干扰组侵袭细胞数(89.77±9.82)个显著低于阴性对照组(133.14±7.54)个和空白组(137.09±10.05)个(均为P<0.001)。结论葡萄膜黑色素瘤患者眼球组织中SNHG7呈高表达,且SNHG7高表达与肿瘤组织巩膜浸润和眼外生长有关,下调SNHG7基因表达可阻碍M23细胞增殖和侵袭。

支气管哮喘患儿基质金属蛋白酶-16、自噬相关基因5和自噬相关基因7的表达及其与肺功能的相关性

目的探讨支气管哮喘患儿外周血单个核细胞中基质金属蛋白酶-16(MMP-16)、自噬相关基因5(ATG5)、自噬相关基因7(ATG7)表达水平与肺功能的相关性。方法选取哮喘患儿80例作为观察组,健康体检儿童80例作为对照组。采集观察组和对照组患儿血样,检测第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%)、用力肺活量(FVC)、最大呼气峰流速占预计值百分比(PEF%),计算第1秒用力呼气容积占用力肺活量的比率(FEV_(1)/FVC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA和ATG7 mRNA水平;采用Pearson法分析急性发作期哮喘患儿MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA与肺功能指标的相关性。结果MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平在对照组患儿和观察组临床缓解期患儿及急性发作期患儿中呈依次显著升高趋势(P<0.05);FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC和PEF%在对照组患儿和观察组临床缓解期患儿及急性发作期患儿中呈依次显著降低趋势(P<0.05)。急性发作期哮喘患儿外周血单个核细胞MMP-16 mRNA与ATG5 mRNA、MMP-16 mRNA与ATG7 mRNA、ATG5 mRNA与ATG7 mRNA均呈显著正相关(r=0.536、0.542、0.534,P<0.05),且MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA均与FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC、PEF%呈显著负相关(P<0.05)。与轻度组比较,中重度组外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平较高,FEV_(1)%、FEV_(1)/FVC、PEF%较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘患儿外周血单个核细胞MMP-16 mRNA、ATG5 mRNA、ATG7 mRNA水平较高,且均与肺功能有密切联系。

血清微小RNA-20a和自噬相关基因7对急性ST段抬高型心肌梗死患者经皮冠状动脉介入治疗后主要不良心血管事件的预测

目的探讨血清微小RNA(miR)-20a和自噬相关基因7(ATG7)对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法纳入行PCI的初发急性STEMI患者233例,根据院内预后情况分为MACE组64例和非MACE组169例。比较两组患者血清氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、Ⅲ型前胶原氨端肽(PⅢNP)、ATG7及miR-20a水平并分析其相关性。结果MACE组患者年龄、NT-proBNP、PⅢNP、ATG7水平及Killip心功能Ⅳ级患者比例均高于非MACE组,血清miR-20a水平低于非MACE组(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,高龄、Killip心功能Ⅳ级、NT-proBNP、PⅢNP及ATG7水平升高是急性STEMI患者PCI后发生院内MACE的独立危险因素,而血清miR-20a水平升高是其独立保护因素(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,血清miR-20a与ATG7、NT-proBNP、PⅢNP均呈负相关(P<0.05),而血清ATG7与NT-proBNP、PⅢNP均呈正相关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,血清miR-20a联合ATG7预测急性STEMI患者PCI后发生院内MACE的价值高于血清miR-20a和ATG7。结论血清miR-20a和ATG7均与NT-proBNP、PⅢNP密切相关,是急性STEMI患者PCI后发生院内MACE的独立预测因素。

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7调控卵巢癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因7(SNHG7)调控卵巢癌SK-OV-3细胞迁移和侵袭的机制。方法研究起止时间为2019年6—12月,SK-OV-3细胞购自美国ATCC;卵巢癌SK-OV-3细胞中转染SNHG7干扰表达质粒(SNHG7 shRNA),实时定量PCR方法测定细胞中SNHG7表达变化,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定SK-OV-3细胞增殖能力,用平板克隆实验及Transwell小室法分别检测细胞克隆形成、侵袭和迁移能力,用Western blotting方法检测波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达。用starbase生物信息软件发现SNHG7和微小RNA-34a(miR-34a)有互补结合位点,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。卵巢癌SK-OV-3细胞中共转染SNHG7 shRNA、miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor),检测细胞增殖、克隆、侵袭以及迁移能力变化。结果Control组、Sh-NC组、Sh-SNHG7组细胞A值分别为(0.45±0.03)、(0.44±0.05)、(0.23±0.02);克隆数目分别为(167.25±11.87)个、(169.57±12.76)个、(103.69±9.92)个;侵袭数目分别为(135.68±10.75)个、(134.21±10.27)个、(76.33±8.20)个;迁移数目分别为(178.69±15.46)个、(180.26±13.71)个、(99.83±8.64)个;与Control组和Sh-NC组比,Sh-SNHG7组细胞A值降低,克隆数目减少,侵袭和迁移数目减少,Vimentin蛋白表达量减少,E-cadherin蛋白表达量升高,差异有统计学意义(P<0.001)。SNHG7靶向调控miR-34a。与Sh-SNHG7+anti-miR-NC组比较,Sh-SNHG7+anti-miR-34a组miR-34a水平降低,SK-OV-3细胞A值升高[(0.40±0.04)比(0.24±0.03)],SK-OV-3细胞克隆形成数[(152.16±10.35)个比(106.58±10.52)个]、侵袭数[(122.64±9.93)个比(77.69±6.50)个]及迁移数[(168.43±12.84)个比(100.39±7.91)个]增多,Vimentin蛋白表达水平升高,E-cadherin蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.001)。结论下调lncRNA SNHG7抑制卵巢癌SK-OV-3细胞迁移和侵袭,机制与靶向调控miR-34a有关。

长链非编码小核仁RNA宿主基因7调控微小RNA-331-3p表达影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨长链非编码小核仁RNA宿主基因7(lncRNA SNHG7)对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及潜在的作用机制。方法本研究起止时间为2018年1月至2019年2月,人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1和人甲状腺癌细胞K1、BCPAP、TPC-1购自中国科学院上海细胞库,用q RT-PCR检测SNHG7和微小RNA-331-3p(miR-331-3p)的表达水平;将si-NC组(转染SNHG7干扰表达载体阴性对照)、si-SNHG7组(转染SNHG7干扰表达载体)、si-SNHG7+anti-miR-NC组(共转染SNHG7干扰表达载体和miR-331-3p抑制剂阴性对照)、si-SNHG7+anti-miR-331-3p组(共转染SNHG7干扰表达载体和miR-331-3p抑制剂),均用脂质体法转染至TPC-1细胞;采用蛋白质印迹法(Western Blotting)检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1相比,人甲状腺癌细胞K1、BCPAP、TPC-1中SNHG7的表达水平显著升高[(1.42±0.16)、(1.51±0.18)、(2.56±0.15)比(1.01±0.05)];miR-331-3p的表达水平显著下降[(0.63±0.11)、(0.60±0.10)、(0.42±0.08)比(1.00±0.06)],差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组相比,si-SNHG7组TPC-1细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平显著降低,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平显著升高,TPC-1细胞活性显著降低[24 h:(0.20±0.06)比(0.49±0.10),48 h:(0.50±0.13)比(1.10±0.22),72 h:(0.60±0.13)比(1.60±0.10)],迁移细胞数降低[(63±8.97)个比(144±11.36)个],侵袭细胞数降低[(55±10.03)个比(136±13.38)个],差异有统计学意义(P<0.05)。SNHG7可靶向调控miR-331-3p的表达。抑制miR-331-3p表达可逆转干扰SNHG7对TPC-1细胞的作用。SNHG7可靶向调控miR-331-3p的表达。抑制miR-331-3p表达可逆转干扰SNHG7对TPC-1细胞的作用。结论干扰SNHG7可通过上调miR-331-3p抑制TPC-1细胞的恶性生物学行为。

产前诊断SMN1基因7、8号外显子缺失突变致脊髓性肌萎缩症1例

目的探讨SMN1基因7、8号外显子缺失突变致SMA的基因产前诊断结果及再生育指导。方法分析一例SMA家族史的产前诊断病例,利用高通量DNA测序法+STR连锁分析及多重连接探针扩增技术(MLPA)进行产前诊断及家系分析和验证。结果通过MLPA检测到父母均为SMN1基因7、8号外显子杂合缺失突变,胎儿产前诊断高通量测序结果为7号染色体q11.21处重复0.68 Mb区域,MLPA检测结果为SMN1基因7、8号外显子纯合缺失突变。结论脊髓性肌萎缩症是一种遗传性神经肌肉疾病,导致进行性肌肉无力和萎缩等临床症状,产前基因检测确诊有助于预后评估、干预,进而降低出征缺陷率,对于有先证者的家庭,常规染色体核型分析及高通量测序无异常,建议进一步进行MLPA基因诊断。对于此类家庭提供优生遗传指导,并为再生育给予相应的指导和建议。

ALDH7A1和EDNRB2基因分型及其与乌骨鸡皮肤乌色度关联分析

【目的】为进一步验证醛脱氢酶7家族成员A1(ALDH7A1)和内皮素受体B2(EDNRB2)在乌骨鸡黑色素沉积中的作用,本研究对ALDH7A1和EDNRB2基因单核苷酸多态性(SNPs)位点进行基因分型,分析其多态位点与皮肤乌色度的关联性,找出对皮肤乌色度有显著效应的SNP标记,为培育乌色度高的屠宰型乌骨鸡肉鸡的分子标记辅助育种提供参考。【方法】采用基于飞行时间质谱对丝羽乌骨鸡192个个体的ALDH7A1和EDNRB2基因SNPs位点进行基因分型,采用HaploView 4.1软件分析这些SNPs位点的连锁不平衡(LD)程度,并分析不同基因型和单倍型与皮肤亮度(L^(*))值的相关性。【结果】ALDH7A1基因的2个SNPs位点(rs317018616 C>A和rs15992676 T>C,分别为SNP1和SNP2)和EDNRB2基因2个SNPs位点(rs739725493 G>A和rs316614064 C>T,分别为SNP3和SNP4)质谱检出率为100%,ALDH7A1基因2个SNPs位点只有2种纯合子基因型,EDNRB2基因2个SNPs位点都有3种基因型。卡方检验表明,ALDH7A1基因2个SNPs位点偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05),EDNRB2基因2个SNPs位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。SNP1位点遗传多样性较低(PIC<0.25),其他3个SNPs位点为中度多态(0.25<PIC<0.05);SNP2位点TT基因型乌骨鸡大腿部皮肤L^(*)值显著低于CC基因型(P<0.05),SNP4位点CC和CT基因型乌骨鸡大腿部皮肤L^(*)值显著低于TT基因型(P<0.05),SNP1和SNP3位点不同基因型间乌骨鸡大腿部皮肤L^(*)值无显著差异(P>0.05)。连锁不平衡分析表明,ALDH7A1基因SNP1和SNP2位点处于强连锁不平衡状态,SNP1-SNP2连锁后产生3种单倍型,其中AATT和CCTT单倍型乌骨鸡大腿部皮肤L^(*)值显著低于CCCC(P<0.05),但3种单倍型个体间背部皮肤和胸部皮肤L^(*)值均差异不显著(P>0.05)。【结论】ALDH7A1和EDNRB2基因与丝羽乌骨鸡大腿部皮肤乌色度密切相关,ALDH7A1基因的AATT、CCTT单倍型和EDNRB2基因的TT基因型可作为研究丝羽乌骨鸡大腿部皮肤乌色度的候选分子标记,本研究为下一步利用分子标记辅助育种加快培育乌色度高的丝羽乌骨鸡新品种提供参考。

MYH7基因c.1574A>G突变致扩张型心肌病1S型家系分析

目的 采用全外显子组测序分析1例左心系统扩张患儿的基因变异情况,并进行家系分析,确认扩张型心肌病1S型(DCMIS)的病因。方法 收集1例左心系统扩张患儿的临床资料。采用染色体拷贝数变异测序(CNV-seq)检测患儿染色体结构缺失和重复情况。采用全外显子组测序分析患儿基因变异情况,采用Sanger测序对患儿及其父母、异卵双生姐姐变异位点进行验证。通过生物信息学分析评估变异位点的危害性。结果 患儿心脏彩色多普勒超声示左心功能降低,左心系统明显扩张增大,肺动脉高压,二尖瓣和三尖瓣反流。CNV-seq结果为seq[hg19]46,XN,未发现染色体异常。全外显子组测序分析结果显示,患儿β-心肌肌肉球蛋白重链7(MYH7)基因发生杂合变异[c.1574A>G(p.Glu525Gly)]。检索OMIM、ClinVar数据库,未见相关报道;检索ESP数据库、千人基因组数据库、ExAC数据库和gnomAD数据库,该变异位点未被收录,属于新发变异。Sanger测序证实变异存在,患儿父母、姐姐MYH7基因均正常。MYH7基因c.1574A>G(p.Glu525Gly)变异导致蛋白侧链O端与第484位赖氨酸侧链N端之间形成的氢键侧链相互作用消失。结论 c.1574A>G(p.Glu525Gly)为新发现的MYH7基因变异,是造成患儿左心系统明显扩张的原因。新发变异的检出丰富了DCMIS致病机制研究数据。

COL7A1基因变异致新生儿营养不良型大疱性表皮松解症1例并文献复习

大疱性表皮松解症是一种遗传相关性皮肤病,临床罕见,男女均可发病^([1])。其临床表现为皮肤受到机械性损伤后出现水疱、大疱,触之破溃,随之出现表皮大片剥脱,皮损多发生于四肢末端及关节部位,严重者水疱不仅局限于表面皮肤,亦可累及体内的软组织(黏膜)。

编辑ZmCCT10、ZmCCT9、ZmGhd7基因的串联DsRed荧光表达盒的CRISPR/Cas9系统的构建及验证

CCT家族基因影响植物开花,在玉米中,ZmCCT10、ZmCCT9基因是光周期敏感基因,ZmGhd7基因是与开花期相关的基因。利用CRISPR/Cas9技术靶向编辑ZmCCT10、ZmCCT9、ZmGhd7基因为研究基因的功能和快速改良玉米的开花期提供了可能。本研究以玉米ZmCCT10、ZmCCT9、ZmGhd7基因为编辑对象,以KN5585为稳定转化受体、以CML312SR、LCL-1、LCL-2为预改良的晚熟材料受体,首先通过Sanger测序验证了3个基因靶标区域在4份玉米材料中的保守性,其次根据sgRNA设计原则选择了1个sgRNA复合编辑3个基因,并利用同源重组方法构建了将由胚特异性启动子Zm3896驱动的DsRed表达盒和由ZmU6-2启动子驱动的sgRNA表达盒串联的CRISPR/Cas9基因编辑敲除载体CCT-CPD,然后采用酶切法和Sanger测序法分析T0代KN5585中3个基因的突变率和突变类型,验证了该系统的基因编辑效果,最后通过对稳定遗传转化植株所结籽粒在籽粒水平、组织水平进行DsRed荧光标记表型鉴定,验证了该系统中DsRed荧光筛选标记的有效性。在此基础上,通过杂交育种法以晚熟材料为母本、以T1代KN5585阳性株为父本获得F1并经过DsRed荧光筛选获得含有有效编辑转基因元件的晚熟材料。本研究构建的编辑ZmCCT10/ZmCCT9/ZmGhd7基因的串联DsRed荧光表达盒的CRISPR/Cas9系统为创制单基因突变体,双基因突变体,三基因突变体奠定了基础,该系统中DsRed荧光筛选标记的应用可以快速筛选区分有无转基因成分的玉米籽粒,成本低,鉴定效率高,具有大规模籽粒筛选的潜力,本研究为鉴定ZmCCT10、ZmCCT9、ZmGhd7三个基因的功能和创制玉米光周期钝感材料奠定了材料基础和高效的技术基础。

同源盒基因A7在胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨同源盒基因A7(HOXA7)在脑胶质瘤组织的表达及其对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法选择2010年9月至2016年8月新乡医学院第一附属医院神经外科手术切除的46例神经胶质瘤标本和10例颅脑外伤手术切除的正常脑组织,应用实时荧光定量聚合酶链式反应检测脑胶质瘤组织和正常脑组织中HOXA7 mRNA相对表达量。选取对数生长期U251细胞随机分为空白对照组、无义序列对照组和HOXA7 siRNA组,空白对照组细胞不进行转染,无义序列对照组细胞转染无义序列Scrambled小干扰RNA(siRNA),HOXA7 siRNA组细胞转染HOXA7 siRNA;应用实时荧光定量聚合酶链式反应检测3组细胞中HOXA7 mRNA相对表达量,细胞计数盒-8增殖实验检测3组细胞增殖活力,流式细胞仪检测3组细胞的细胞周期及凋亡率。结果高级别脑胶质瘤中HOXA7的mRNA相对表达量显著高于低级别脑胶质瘤和正常脑组织,低级别脑胶质瘤中HOXA7 mRNA相对表达量显著高于正常脑组织(P<0.05)。HOXA7 siRNA组U251细胞中HOXA7 mRNA相对表达量显著低于空白对照组和无义序列对照组(P<0.05),空白对照组与无义序列对照组U251细胞中HOXA7 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养24、48、72、96 h时,HOXA7 siRNA组U251细胞增殖活力显著高于空白对照组和无义序列对照组(P<0.001);空白对照组与无义序列对照组U251细胞增殖活力比较差异无统计学意义(P>0.05)。HOXA7 siRNA组G_(0)/G_(1)期U251细胞占比显著高于空白对照组和无义序列对照组(P<0.05);空白对照组与无义序列对照组G_(0)/G_(1)期U251细胞占比比较差异无统计学意义(P>0.05)。HOXA7 siRNA组S期U251细胞占比显著低于空白对照组和无义序列对照组(P<0.05);空白对照组和无义序列对照组S期U251细胞占比比较差异无统计学意义(P>0.05)。HOXA7 siRNA组G_(2)/M期U251细胞占比显著高于空白对照组和无义序列对照组(P<0.05);空白对照组与无义序列对照组G_(2)/M期U251细胞占比比较差异无统计学意义(P>0.05)。HOXA7 siRNA组U251细胞凋亡率显著高于空白对照组和无义序列对照组(P<0.05),空白对照组与无义序列对照组U251细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论HOXA7在脑胶质瘤组织中呈高表达,且随着脑胶质瘤级别的增加其表达水平显著增高;HOXA7可能通过促进脑胶质瘤细胞的增殖能力和抑制脑胶质瘤细胞的凋亡,参与脑胶质瘤的发生发展。

牦牛TBC1D7基因克隆、生物信息学及表达分析

为探究西藏牦牛Tre2-Bub2-CDC16结构域家族成员7(TBC1D7)基因的特征及结构,利用RT-PCR克隆了TBC1D7基因的CDS区序列,并对其进行了生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测了TBC1D7基因在牦牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉及脂肪组织的表达水平。结果表明,牦牛TBC1D7基因的CDS区全长为882 bp,共编码293个氨基酸;系统进化树分析结果表明,西藏牦牛与野牦牛的亲缘关系最近,与兔的最远;生物信息学分析结果表明,牦牛TBC1D7蛋白不存在信号肽和跨膜结构,属于亲水性蛋白,主要存在细胞核中,且该蛋白具有24个潜在的磷酸化位点,蛋白的高级结构由α-螺旋(65.53%)、延伸连(3.75%)、β-转角(3.75%)和无规则卷曲(29.96%)构成。qPCR检测结果显示,TBC1D7基因在西藏牦牛脾脏组织中的表达最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。