加拿大棘球绦虫G7基因型研究进展

囊型包虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病。作为该病的病原之一,加拿大棘球绦虫G7基因型日渐成为囊型包虫病患者患病的重要病因。近年来,其流行区域有着逐渐扩大的趋势,因而从流行病学角度全面认识其对人和家畜的危害有着不容忽视的重要意义。本文全面总结了加拿大棘球绦虫G7基因型的流行特征,并对其生物学特性、线粒体基因组与基因组特征、分子遗传标记及防控进行综述,以期为我国的加拿大棘球绦虫G7基因型的分子流行病学调查和防控措施的制定提供参考。

国内新出现的基因7型Ⅰ类新城疫病毒的分离与鉴定

在主动监测中从广西活禽市场的家鸭中分离到1株Ⅰ类新城疫病毒,遗传进化分析证实该分离株属于基因7型(按照Diel DG的分类方法则属于基因1c亚型)。该分离株在裂解位点的氨基酸组成为112 ERQERL117,具有典型低致病性新城疫病毒的分子特征。这是我国首次检出基因7型Ⅰ类新城疫病毒,对于其来源和分布需要进一步加强监测和研究。

人乳头瘤病毒6b型E7基因的克隆和表达

目的 克隆人乳头瘤病毒 6b型E7(humanpapillomavirus 6bE7)基因 ,构建原核表达载体 ,并进行蛋白表达和纯化。方法 将HPV 6bE7基因经PCR扩增和亚克隆 ,与GST原核表达载体pGEX 4T 2重组 ,转化E .coliP2 3 92 菌表达蛋白 ,经GlutathioneSepharose 4B亲和层析纯化GST HPV 6bE7融合蛋白。结果 限制性酶切和DNA测序表明 ,HPV 6bE7DNA正确克隆于 pGEX 4T 2多克隆位点。经IPTG诱导表达的GST HPV 6bE7融合蛋白主要存在于可溶性上清。经亲和层析 ,每升诱导菌回收 8.4mg融合蛋白 ,10 %SDS PAGE分析融合蛋白表观分子量约 3 7kDa。结论 成功构建了HPV 6bE7基因原核表达载体 ,并大量表达和纯化了GST HPV

人类疱疹病毒8型k12/T0.7基因亚型与Kaposi肉瘤的相关性研究

目的:了解Kaposi肉瘤患者所感染的疱疹病毒8型(HHV-8)k12/T0.7基因亚型分类,初步探索k12/T0.7基因亚型与Kaposi肉瘤不同临床分型的相关性。方法:对30例病理诊断明确的Kaposi肉瘤石蜡包埋组织进行HHV-8 DNA提取、k12/T0.7基因扩增、双向测序。使用DNAMAN软件、ClustalW软件和PHYLIP软件包对测序结果进行系统发生学分析,确定HHV-8 k12/T0.7基因亚型。最后用Fisher确切概率法对结果进行统计学分析。结果:30例Kaposi肉瘤中有22例HHV-8阳性,阳性率为73.33%,其中7例艾滋病相关型患者HHV-8均阳性。30例HHV-8阳性患者中,10例为HHV-8 k12 A亚型,12例为A/C亚型。Kaposi肉瘤患者不同亚型间有无黏膜损害及临床分型的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:Kaposi肉瘤患者感染HHV-8 k12亚型以A亚型和A/C亚型为主,不同亚型与临床分型无关。

婴幼儿腹泻A组轮状病毒VP7基因型别的研究

目的 研究武汉地区A组轮状病毒基因VP7基因分型情况。方法 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法将检测出的A组轮状病毒阳性样本用一步多重RT PCR技术对其进行VP7基因分型研究。结果 武汉地区 793份腹泻患儿粪便样本经检测轮状病毒阳性 2 5 7份 ,阳性率为 32 .4 %。其中G1型 5例 (1.9% ) ,G2型 6例 (2 .3% ) ,G3型 2 0 2例 (78.6 % ) ,G1与G3混合感染 10例 (3.9% ) ,G2与G3混合感染 1例 (0 .4 % ) ,G3与G8混合感染 1例 (0 .4 % ) ,2 2例 (8.6 % )未能分出型别 ,另外发现非正常G3型 10例 (3.9% )。结论 武汉地区A组轮状病毒以G3型为主要流行基因型 ,轮状病毒阳性患儿年龄以 7～ 12个月为主 。

TCF7L2基因多态性与妊娠期糖尿病相关性及影响因素的研究

目的 分析妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus, GDM)发病的相关影响因素,着重研究GDM患者的基因型分布和等位基因频率,以探讨两者相关性。方法 本研究选取2021年3月-2022年5月江门市妇幼保健院接收的378例孕妇作为研究对象,其中GDM孕妇90例,产检健康孕妇288例。CDKAL1 rs7754840、IGF2BP2 rs1470579、MTNR1B rs10830962和TCF7L2 rs7903146采用已建立的Agena MassARRAY系统方法进行基因分型。结果 患有GDM的女性明显年龄较大(OR=1.067,95%CI=1.012~1.126,P=0.017),有明显较高的体质指数(OR=1.108,95%CI=1.042~1.180,P=0.001),初产妇(OR=2.059,95%CI=1.151~3.778,P=0.018),并且有糖尿病家族史的孕妇(OR=2.689,95%CI=1.107~6.369,P=0.025),TCF7L2rs7903146(OR=7.071,95%CI=1.925~27.571,P=0.003)多态性与GDM风险相关。然而,其他变异CDKAL1 rs7754840、IGF2BP2 rs1470579或MTNR1B rs10830962都与发生GDM的可能性无关。结论 本研究结果表明伴有妊娠史、较高的体质指数和高龄以及糖尿病家族史的妊娠期妇女患GDM患病风险更高,并证实TCF7L2 rs7903146 CT基因型是GDM的风险因素。

宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的DNA改组

目的利用DNA改组技术进化人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因,建立HPV16E7基因突变体库。方法从宫颈癌标本中扩增出HPV16E7基因,用脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)碎片化该基因,切割成50 bp左右的小片段。这些小片段在不外加引物的条件下,利用PCR反应进行重聚,再将重聚物经过一轮普通PCR扩增。结果电泳切胶回收获得与原片段大小相当的基因片段,改组结果较为成功。结论DNA改组在HPV16E7改组中的应用并成功,有利于从HPV16E7基因突变题库中筛选出高免疫原性的基因型别,并为进一步构建HPV治疗性疫苗奠定基础。

转染人乳头瘤病毒16型E6E7重组基因及感染模型细胞建立

To investigate the functions of HPV-16 E6E7 protein in the development of cervical cancer,a recombinant plasmid pEGFP-HPV16E6E7,containing green fluorescent protein and HPV-16 E6E7 proteins was constructed and was transfected into HPV-negative cell line C33A mediated by liposome.The efficiency of tranfection was determined by inverted fluorescent microscope and the expression of E6E7 was detected by Western blot.It showed that transfection of C33A cell and Caski cell by HPV-16 E6E7 gene established a pair of transfected cell types to study the carcinogenesis of E6 and E7 proteins.

代谢型谷氨酸受体7基因的拷贝数变异与精神分裂症的相关性

目的探讨代谢型谷氨酸受体7(GRM7)基因的拷贝数变异(CNVs)与精神分裂症的相关性。方法收集180例中国山西汉族精神分裂症患者和33名正常对照的DNA样本及资料。应用实时定量PCR方法检测位于GRM7基因外显子2上游200 bp处和外显子8附近的CNVs。同时对实时定量PCR扩增区的基因序列进行测序。结果相对拷贝数分析显示,在GRM7基因外显子2上游200 bp处,1例精神分裂症患者具有双等位基因缺失,13例患者和1名正常对照具有单个等位基因缺失。测序显示GRM7基因外显子2上游200 bp处实时定量PCR反向引物(GRM7-SV-1R)的3末'端上游第5个碱基发生了C>G变异,实时定量PCR扩增中发现的等位基因缺失均由碱基变异导致。结论实时定量PCR结合测序可以避免PCR引物序列变异导致的假阳性缺失,是检测CNVs的有效方法。本研究GRM7基因的CNVs与精神分裂症无相关性,提示GRM7基因的CNVs可能不是中国汉族精神分裂症发病的主要原因,然而其潜在的罕见CNVs可能和部分精神分裂症有关,有待于进一步研究。

GRM7突变相关老年性耳聋研究进展

代谢型谷氨酸受体7基因(GRM7)编码的蛋白产物mGluR7主要存在于耳蜗的内、外毛细胞和螺旋神经节细胞内。mGluR7除了能与Gi/o-蛋白偶联、抑制腺苷酸环化酶和cAMP的形成、与G蛋白偶联内向整流钾通道调节突触功能之外,还能调节毛细胞和传入神经树突之间谷氨酸的浓度和传递。目前关于GRM7的研究主要集中于精神疾病方面,而对老年性耳聋的研究较少,其导致老年性耳聋的具体致病机制仍不清楚。本文旨在综述GRM7基因突变相关的老年性耳聋研究进展,以期进一步推动探索GRM7基因突变致聋机制研究与治疗措施更新。

表皮松解性角化过度鱼鳞病COL7A1基因突变研究

目的探讨一个表皮松解性角化过度鱼鳞病家系基因的突变。方法提取表皮松解性角化过度鱼鳞病患者及家族成员的基因组DNA,采用PCR扩增COL7A1基因所有的外显子及其邻近的剪切点并进行双向直接测序,用PCR检测突变位点从而进一步确定家系的致病原因。结果发现患者COL7A1基因的一条等位基因第2号外显子上存在S48P的错义突变,而另一条等位基因第27号外显子上存在3625del11缺失突变,造成编码区阅读框架的移位,最终导致蛋白终止密码(PTC)的生产。结论COL7A1基因的缺失突变和错义突变引起该患者临床症状的特异突变。

腺病毒7d基因型与7b基因型全基因组比较分析

为了解重庆地区流行的7型腺病毒(Human adenovirus 7,HAdV-7)基因型型别,从全基因组水平探讨HAdV-7b和HAdV-7d可能的致病性差异,收集儿童急性下呼吸道感染患儿的呼吸道分泌物标本分离培养,提取DNA后进行HAdV-7基因型别鉴定、限制性酶切分析和全基因组测序,再利用MEGA6比较分析。本研究在2009年6月~2013年1月间共收集4334份急性下呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物标本,随机选取2411份进行病毒分离培养,共有164份(164/2411,6.8%)鼻咽抽吸物HAdV阳性,其中HAdV-7 87例。限制性酶切分析显示,随机挑选的3株HAdV-7分离株均为HAdV-7d。CQ1198株行全基因组测序并与其他HAdV-7全基因组构建进化树,结果发现16株中国地区的HAdV-7为HAdV-7d基因型,且上述16株HAdV-7与7d2的同源性为99.9%,与7b的同源性为98.2%。相较于ak40株(HAdV-7b),CQ1198共有49处核苷酸替换,其中20处可导致非同义替换;4处核苷酸插入,其中24bp和18bp 2个片段插入分别位于病毒相关RNAⅡ(Virus-associated RNAⅡ,VA RNAⅡ)和L3的pⅥ区域。HAdV-7可有多个基因型致病,且一直处于进化过程中,其主要流行基因型由HAdV-7b变为HAdV-7d。应加强对HAdV分子流行病学监测,明确其进化规律,为HAdV疫苗研发提供分子流行病学依据。

重构型人caspase-7基因对肿瘤细胞的促凋亡作用

目的观察重构型caspase-7的表达对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。方法用反转录PCR方法获取野生型人caspase-7基因,用重组PCR构建了两种重构型caspase-7基因,即大、小亚基序列次序颠倒的rev-ca2spase-7以及N-端带有绿脓杆菌外毒素转膜结构域部分肽段的融合蛋白(PEⅡ=rev-caspase-7)的基因。将两种重构型caspase-7基因克隆入表达载体pIRES2-EGFP,脂质体法转染肿瘤细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察、MTT检测等方法检测重组基因的表达及其对肿瘤细胞的促凋亡活性。结果 成功获得了caspase-7基因,构建了rev-caspase-7基因和rev-caspase-7与绿脓杆菌外毒素(PE)转膜肽段的融合蛋白(PEⅡ-rev-caspase-7)基因及其表达载体。将两种重构型caspase-7转染肿瘤细胞后,证实细胞发生凋亡。结论两种重构型caspase-7均可以有效地诱导肿瘤细胞发生凋亡。

半巢式多重PCR法对A组轮状病毒VP7基因的分型

目的采用半巢式多重PCR法对A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)VP7基因进行分型。方法根据GenBank中RVA VP7基因5′端保守区设计合成多组基因分型引物,提取11个RVA代表流行毒株病毒的RNA,采用半巢式多重PCR方法进行RVA的VP7基因分型,使用BLAST在线软件与GenBank上相应VP7核苷酸序列比对。结果经琼脂糖凝胶电泳鉴定,11株RVA的多重PCR产物大小均与预期一致,能正确鉴别具有代表性的流行毒株VP7基因型[G1、G2、KN105(Wa-like G3)、To16-01(equine-like,DS-1-likeG3)、G4、G8、G9及G12];经BLAST在线软件比对,RVA病毒株VP7基因序列与设计的上游引物匹配,并与下游引物互补,引物特异性良好。结论利用设计的引物成功建立的半巢式多重PCR方法能正确识别RVA的VP7基因型。

GRM7基因多态性与噪声性听力损失易感性的关系

目的研究汉族职业噪声接触人群中代谢型谷氨酸受体7基因(metabolic glutamate receptor 7 gene,GRM7)多态性与噪声性听力损失(noiseinduced hearing loss,NIHL)易感性关系。方法采用1比1匹配的巢式病例-对照研究方法,从某钢铁厂噪声接触工人的研究队列中选取听力损失组277例,根据同性别、同工种、年龄相差≤5岁、接触噪声工龄相差≤2年的匹配标准,得到对照组277例。通过中高通量单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)分型检测技术(SNPscanTM法)检测GRM7基因rs3749380、rs11928865、rs9877154、rs3828472、rs9819783、rs11920109、rs1485175及rs9826579位点的多态性。构建加性、显性、隐性、共显性4种基因模型,分析其与NIHL易感性之间的生物学关联。使用Phase 2.0.2构建研究对象可能的双体型,并分析其与NIHL之间的关系。按照累积噪声暴露量(cumulative noise exposure,CNE)分层分析影响因素间交互作用。采用单因素及多因素条件Logistic回归分析GRM7基因与NIHL间的联系。结果听力损失组和对照组一般人口学特征比较发现,吸烟的个体发生NIHL的危险度是不吸烟个体的2.051倍(95%CI 1.456~2.891,P<0.001)。GRM7基因多态性与NIHL易感性关系的分析中未发现差异具有统计学意义的结果。结论吸烟可增加职业噪声接触工人发生NIHL的风险;未发现GRM7基因多态性与NIHL易感性之间的关系。