凋亡相关基因caspase-3在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义。方法 NSCLC患者60例。用免疫组化法(S-P法)检测caspase-3在肺癌组织及正常肺组织中的表达。采用TUNEL法检测凋亡细胞。结果有淋巴结转移者caspase-3表达阳性率较无淋巴结转移者低(χ2=21.728,P=0.000)。TNM分期Ⅰ期和Ⅱ期caspase-3表达阳性率要高于Ⅲ期和Ⅳ期阳性率(χ2=12.50,P=0.000)。caspase-3与凋亡指数成正相关(r=0.834,P=0.000)。caspase-3表达与年龄、性别、病理分型、分化程度、胸腔积液、肿瘤直径、吸烟、肿瘤生长部位无明显关系(P>0.05)。结论 caspase-3表达提示NSCLC的淋巴结转移,并有益于临床分期;caspase-3与细胞凋亡密切相关。

头穴丛刺法对急性脑梗死大鼠病理形态学及凋亡相关基因Caspase-3的影响

目的通过观察头穴丛刺对急性脑梗死大鼠病理形态学及凋亡相关基因Caspase-3表达的影响,探讨该方法治疗脑梗死的作用机制。方法将72只雄性Wister大鼠随机分为三组:假手术组(A)、模型组(B)、头穴丛刺组(C),每组24只。各组再按脑梗死后不同时间点分为6 h、24 h、3 d三个亚组,每组8只。采用线栓法制备急性脑梗死动物模型,观察头穴丛刺法对急性脑梗死大鼠不同时间点缺血侧脑组织病理形态学及凋亡相关基因Caspase-3表达的变化。结果脑梗死第3 d,B组大鼠梗死灶中心区坏死彻底,周围区神经细胞数目明显减少,脑组织水肿明显,可见神经毡疏松、淡染,与B组比较,C组大鼠梗死灶周边可见胶质细胞增生,脑组织水肿减轻;脑梗死后24 h至3 d,C组大鼠缺血侧皮层促凋亡基因Caspase-3表达明显减少,与B组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论头穴丛刺疗法能够改善脑梗死缺血半暗区神经细胞功能状态,促进神经胶质细胞的增生;并可通过抑制促凋亡基因Caspase-3的表达,而发挥一定的脑保护作用。

运动训练对出血性脑损伤细胞凋亡基因caspase-3及其蛋白表达的影响

目的:观察运动训练对脑出血大鼠神经细胞凋亡基因caspase-3及其蛋白表达的影响。方法:实验动物用健康雄性SD大鼠120只。随机分为3组,实验组(出血后运动,40只)、对照组(出血后不运动,40只)、假手术组(无出血不运动,40只)。各组又分为术后7d,14d,21d,28d共4个时相点,每个时相点5只用于免疫组化检测,5只用于RT-PCR和Western印迹法检测。实验组于术后24h开始跑笼训练,其余大鼠在标准笼内自由活动。结果:①免疫组化结果:caspase-3阳性细胞表达为细胞胞浆着棕黄色,阳性细胞主要分布于血肿周围和大脑皮质的神经元。实验组随运动训练时间延长似乎有表达上调趋势,28d时表达虽有下降迹象,但仍处于较高水平。对照组表达水平较实验组更明显,但两组差异无显著性意义(P>0.05),实验组和对照组与假手术组相比差异有非常显著性意义(P<0.01)。②Western blotting和RT-PCR结果与免疫组化一致。结论:caspase-3参与了脑出血后细胞凋亡的发生,但运动训练对caspase-3基因及其蛋白表达的抑制作用不明显。

生长激素对大鼠心肌缺血/再灌注后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3 Cleaved caspase-3蛋白表达的影响

目的研究生长激素(Growth hormone,GH)对大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia reperfusion,I/R)后心肌细胞凋亡及相关基因Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达的影响。方法24只大鼠随机分为三组,假手术组(sham-operated group,n=8,仅手术24h)、心肌缺血/再灌注(I/R)组(n=8)、GH组(n=8),后两组均缺血30min,再灌注24h,GH组于建立模型前7d每天给予人重组生长激素(reconbination human growth hormone,rhGH)针剂皮下注射(1U/kg体质量),其他二组等量生理盐水注射。以TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,DAB免疫组化法检测心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达并进行心肌组织病理学检查。结果大鼠心肌I/R24h后心肌细胞凋亡指数明显上升(对照于假手术组,P<0.05),心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达呈阳性染色指数明显升高(P<0.05),心肌病理检查见心肌缺血区呈大小不一的坏死灶,缺血心肌间有炎症细胞浸润,心肌排列不整齐(HE染色),而GH组心肌细胞凋亡率及心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达呈阳性染色指数明显好于I/R组(P<0.05),心肌细胞炎症细胞也明显减少,坏死灶也少于I/R组。结论GH可以减少心肌I/R后心肌细胞凋亡及细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3染色阳性指数,说明GH对I/R后的心肌具有保护作用。

黄芪注射液对大鼠左室重构及凋亡基因Caspase-3的影响

目的观察黄芪注射液对大鼠心肌梗死后左室重构及凋亡基因caspase3的影响。方法制作心肌梗死大鼠模型,实验分为4组,Ⅰ组(假手术组)、Ⅱ组(假手术+黄芪组)、Ⅲ组(模型组)和Ⅳ组(模型+黄芪组)。Ⅱ和Ⅳ组大鼠术后每日腹腔注射黄芪注射液2ml,Ⅰ组和Ⅲ组大鼠给等体积生理盐水,连续用药4周后,观察左室结构变化,心肌羟脯氨酸含量及用免疫组化检测caspase3表达。结果与Ⅲ组比较,Ⅳ组心肌超微结构和左室重构指标改善,羟脯氨酸含量减少(P<0.05),caspase3阳性细胞明显减少,caspase3mRNA表达明显下调(P<0.05)。结论黄芪注射液能改善大鼠心肌梗死后左室重构,并下调凋亡基因caspase3表达,抑制凋亡。

不同浓度Mg-6Zn合金浸提液对肠上皮细胞凋亡及其相关基因Caspase-3表达的影响

研究不同浓度Mg-6Zn合金浸提液对大鼠肠上皮细胞IEC-6的凋亡及凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。将Mg-6Zn合金制成不同浓度(20%和40%)的浸提液体外培养大鼠肠上皮细胞IEC-6,并以含10%胎牛血清的高糖DMEM(Dulbecco′s modified Eagle′s medium)培养基作为阴性对照。采用噻唑蓝(MTT)法通过计算细胞相对增殖率检测不同浓度合金浸提液对IEC-6细胞的毒性作用;采用流式细胞仪检测不同浓度合金浸提液对IEC-6细胞凋亡的影响;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同浓度合金浸提液对IEC-6细胞凋亡相关基因Caspase-3mRNA表达的影响。实验结果表明,20%和40%两种浓度的镁合金浸提液在体外培养IEC-6细胞第七天时细胞毒性分级分别为0级和1级,属于无毒性,符合医用材料细胞毒性分级的合格标准。40%和20%浓度镁合金浸提液中,IEC-6细胞的凋亡比例及Caspase-3活化度相对于对照组都增高,差异有统计学意义(P<0.05),40%浓度组中,IEC-6细胞的凋亡比例及Caspase-3活化度相对于20%浓度组增高,差异有统计学意义(P<0.05),说明Mg-6Zn合金浸提液在一定范围内处于较高浓度时易诱导IEC-6细胞的凋亡及Caspase-3的表达,且随浓度升高影响越大。

凋亡基因Caspase-3在子宫肌瘤中的表达及相关性研究

目的:探讨凋亡基因Caspase-3在子宫肌瘤组织中的表达及相关性。方法:应用免疫组化S-P法及图像分析技术检测30例子宫肌瘤组织及30例子宫肌肉组织中Caspase-3的表达。结果:子宫肌瘤组织及子宫肌肉组织中均显示Caspase-3的表达,但两者的表达强度不同,在子宫肌瘤组织中Caspase-3表达的阳性单位是3.12±2.24,而在子宫肌肉组织中表达的阳性单位是11.85±5.24,两者比较P<0.05。结论:子宫肌瘤的发生与Caspase-3的表达下调或呈现低表达状态相关。

CD59位点短肽封条对HeLa细胞凋亡相关基因caspase-3和survivin作用

目的检测CD59位点短肽封条对HeLa细胞凋亡相关基因caspase-3、survivin表达水平的影响,探讨CD59位点短肽封条促肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法将CD59位点短肽封条作用于HeLa细胞,利用免疫组织化学方法检测短肽封条作用12 h和24 h后HeLa细胞caspase-3、survivin的表达水平。结果caspase-3表达随短肽封条剂量和作用时间的增加而增加;survivin表达随短肽封条的剂量和作用时间的增加而减少。结论CD59位点短肽封条能下调survivin的表达并活化caspase-3,从而可能导致HeLa细胞的凋亡。

蟾毒灵对裸鼠结肠癌原位移植瘤凋亡基因Caspase-3表达的影响

目的:探讨蟾毒灵治疗裸鼠结肠癌原位移植瘤的作用及机制。方法 :应用不同剂量蟾毒灵(0.5、1.0、1.5 mg/kg)处理人结肠癌细胞株HCT-116建立的裸鼠原位移植瘤模型,分别用生理盐水(NS)(0.2 mL/只)、5-FU(25 mg/kg)做阴性(NS组)和阳性对照(5-FU组),测量移植瘤的体积,观察蟾毒灵对移植瘤的肿瘤抑制率、裸鼠生存期的影响;HE染色观察移植瘤的坏死程度;TUNEL标记法检测肿瘤细胞的凋亡指数;荧光定量PCR方法检测基因Caspase-3 mRNA的表达,免疫组化法和Western印迹法检测Caspase-3蛋白的表达。结果:蟾毒灵各剂量组和5-FU组裸鼠原位移植瘤体积明显小于NS组(P<0.05);NS组,5-FU组和蟾毒灵0.5、1.0、1.5 mg/kg剂量组的裸鼠中位生存期分别为40、37和47、46、45 d,生存分析显示蟾毒灵各剂量组裸鼠的生存时间与NS组相比明显延长;1.0和1.5 mg/kg剂量组和5-FU组移植瘤的坏死程度增加(P<0.05);蟾毒灵各组移植瘤的凋亡指数与NS组相比明显增加(P<0.05),凋亡相关基因Caspase-3 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:蟾毒灵能够抑制裸鼠人结肠癌原位移植瘤的生长,促进肿瘤细胞凋亡,其机制可能与上调基因Caspase-3表达有关。

脑心康片对大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡相关基因Caspase-3表达的影响

[目的]观察脑心康片对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,进一步探讨其作用机制。[方法]Wistar大鼠雄性70只,按照体质量随机分为7组,每组10只。即脑心康片高剂量组、中剂量组、低剂量组、尼莫地平组、银杏叶片组、模型组和假手术组,分别给等体积生理盐水,各组均连续灌胃给药7d。末次给药30min后,采用大鼠大脑中动脉线栓法制备不完全脑缺血模型,观察脑心康片给药前后大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠神经功能缺损导致的行为学变化;免疫组织化学法检测脑心康片对脑缺血后24、48、72h脑组织半胱氨酰天冬氨酸激酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。[结果]脑心康片能明显改善脑缺血大鼠的神经功能缺损症状,抑制Caspase-3蛋白的表达。[结论]脑心康片对脑缺血具有保护作用,遵循一定的时效关系和量效关系,其机制可能与脑心康片抑制凋亡相关基因的表达,进而抑制神经元细胞凋亡有关。

2ME2对脊髓损伤大鼠运动功能及凋亡相关基因caspase-3表达的影响

目的探讨2-甲氧基雌二醇(2ME2)对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能及细胞凋亡相关基因caspase-3表达的影响。方法成年雄性SD大鼠72只按随机数字表法分为假手术组、脊髓损伤组和2ME2治疗组,每组24只,采用改良的Allen’s法制作脊髓损伤模型,2ME2干预组大鼠自脊髓损伤模型建立后第1天开始按24 mg/kg给予2ME2腹腔注射,连续注射7 d,在造模成功后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d采用BBB运动评分系统对各组大鼠运动功能进行评估,造模成功后第7天应用免疫荧光技术检测各组大鼠caspase-3表达,应用TUNEL染色进行凋亡细胞计数。结果造模后14 d、21 d、28 d 2ME2治疗组BBB评分显著高于脊髓损伤组,差异具有统计学意义(P<0.05),与假手术组相比,脊髓损伤组及2ME2治疗组caspase-3表达阳性细胞数及凋亡细胞数显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05),2ME2治疗组较脊髓损伤组caspase-3表达阳性细胞数及凋亡细胞数显著减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 2ME2治疗能改善脊髓损伤大鼠肢体运动功能,具有一定神经保护作用,其治疗机制可能与通过抑制脊髓损伤后的进一步细胞凋亡相关基因的表达有关。

肝细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2在慢性乙型重型肝炎中的作用

目的探讨肝细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2在慢性乙型重型肝炎(慢重肝)发生发展机制中的作用。方法选择慢重肝肝组织标本68例(慢重肝组),正常肝组织标本20例(对照组)。采用原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)技术和免疫组织化学法检测2组肝组织中Cas-pase-3和Bcl-2的表达及肝细胞凋亡情况。结果慢重肝组凋亡指数的平均值为41.6±4.9,而在正常对照组肝组织中,未见到TUNEL阳性表达的肝细胞,2组差异有统计学意义。慢重肝组的肝组织中Caspase-3蛋白阳性表达程度明显高于对照组(P<0.05),而Bcl-2蛋白阳性表达程度明显低于对照组。Spearman相关分析发现,慢重肝组的肝组织中肝细胞凋亡指数与Caspase-3表达之间呈正相关(r=0.592,P<0.01),与Bcl-2表达之间呈负相关(r=-0.461,P<0.05)。结论肝细胞凋亡在慢重肝的发生过程中起重要作用,而Caspase-3和Bcl-2均参与了慢重肝的肝细胞凋亡过程。

载荷对老年关节软骨组织凋亡基因Caspase-3 mRNA表达的影响

目的 对体外培养的老年关节软骨组织块进行不同性质压应力载荷干预,观察不同的载荷条件对关节软骨细胞凋亡过程的调控。方法 在体外对加工成一定几何形状、未纤维化的老年关节软骨组织块予以不同频率(0. 01、0 .1、1Hz与静止力)、载荷量(1. 5、1 .0与 0 .5MPa)的压应力,并通过反转录-聚合酶链反应法来观察不同应力条件下凋亡基因Caspase- 3mRNA的表达情况。结果 各应力组均有Caspase- 3mRNA的表达,其中对照组表达水平较低,中频各组表达与对照组无明显统计学差异;在静止应力组,以及高、低频组则有较强的表达。就表达强度而言,各载荷值无组间差异。结论 老年人关节软骨细胞的凋亡对于外界应力敏感,中频应力组对细胞的凋亡表现为抑制作用,其余各组则起到促进作用。

盐酸戊乙奎醚预处理对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤及凋亡相关基因caspase-3的影响

目的:观察盐酸戊乙奎醚预处理对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为3组(每组20只)。对照组(C组):进行假手术操作,未使用线栓法建立局灶脑缺血模型;缺血-再灌注组(I-R组):麻醉前30min腹腔内注射生理盐水2.0mg·kg-1后,使用线栓法建立大鼠局灶脑缺血模型,缺血120min后进行再灌注;盐酸戊乙奎醚预处理组(P组):麻醉前30min腹腔内注射盐酸戊乙奎醚2.0mg·kg-1后,使用线栓法建立大鼠局灶脑缺血模型,缺血120min后进行再灌注。氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察测定脑梗塞体积;HE染色法观察大鼠海马神经细胞形态的变化;半定量RT-PCR法测定海马组织caspase-3 mRNA的表达水平。结果:与I-R组比较,P组脑梗塞体积显著减小(P<0.05);I-R组海马神经细胞发生严重损伤,细胞核固缩、浓染,P组海马神经细胞损伤显著减轻;I-R组和P组caspase-3 mRNA表达水平明显高于C组(P<0.05),但P组caspase-3 mRNA表达水平低于I-R组(P<0.05)。结论:盐酸戊乙奎醚预处理可以显著改善大鼠局灶脑缺血再灌注后海马神经细胞损伤,从而对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用,这种保护作用可能与盐酸戊乙奎醚抑制大鼠脑海马组织凋亡蛋白酶caspase-3 mRNA的表达有关。

益气通脉口服液对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡基因caspase-3、bcl-2表达的影响

目的:观察益气通脉口服液对缺血再灌注心肌细胞凋亡基因表达的影响,探讨益气通脉口服液抑制心肌细胞凋亡的机制。方法:通过结扎和再通大鼠左冠状动脉前降支(LAD)造成心肌缺血再灌注,取心脏用免疫组化法测caspase-3、bcl-2蛋白表达。结果:(1)凋亡标志因子caspase-3在心肌缺血再灌注损伤后表达增多,益气通脉口服液可降低其表达,且用药剂量增大caspase-3表达逐渐降低。(2)抑凋亡基因bcl-2在心肌缺血再灌注损伤后表达减少,益气通脉口服液可使bcl-2表达增多,且用药剂量增大表达逐渐增高。结论:益气通脉口服液对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡起抑制作用。

锌和维生素E对糖尿病大鼠抗凋亡基因Caspase-3表达的意义

目的:探讨锌和维生素E对糖尿病大鼠抗凋亡基因Caspase-3表达的意义。方法:按体重将大鼠随机分为正常对照组(10只)和实验组(40只),实验组动物采用腹腔注射链脲左菌素(streptozotocin,STZ),60mg/kg一次注射,制备糖尿病大鼠模型。将40只按血糖值参考体重分为4组:糖尿病对照组,糖尿病补锌组,糖尿病补VE组,糖尿病补Zn+VE组。6周后将各组大鼠处死,切取心室肌组织,进行免疫组织化学染色,观察各组心肌组织Caspase-3的表达水平,利用HPIAS-2000图像分析系统测定Caspase-3在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果:正常对照组心肌细胞内Caspase-3表达较弱,糖尿病对照组心肌细胞内Caspase-3表达较高;糖尿病补锌组和糖尿病补VE组心肌细胞内Caspase-3表达较弱;糖尿病补Zn+VE组心肌细胞内Caspase-3表达弱。图像分析结果显示:糖尿病补Zn+VE组与糖尿病对照组、糖尿病补锌组及糖尿病补VE组之间Caspase-3的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.05);糖尿病补Zn+VE组与正常组之间Caspase-3的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性意义(P>0 05)。结论:Zn和VE联合使用可减低糖尿病导致大鼠心肌细胞凋亡的作用,对心肌细胞起了重要的保护作用。

凋亡相关基因caspase-3及Bcl-2在人类大肠腺瘤和大肠癌中的表达及意义

目的 探讨凋亡相关基因caspase 3和Bcl 2在大肠腺瘤及大肠癌组织中的表达及其意义。方法 应用免疫组织化学ABC法检测 2 0例大肠正常黏膜、3 0例大肠腺瘤及 40例大肠癌组织中caspase 3和Bcl 2的表达。用TUNEL法检测细胞凋亡。结果 大肠正常黏膜、腺瘤和大肠癌组织中caspase 3的阳性表达分别为 95 %、70 %、65 %。Bcl 2的阳性表达分别为 15 .0 0 %、86.67%、62 .5 %。正常黏膜组织caspase 3的表达高于大肠腺瘤和大肠癌 (P <0 .0 5 ) ,而Bcl 2表达低于后两者 (P <0 0 5 )。caspase 3及Bcl 2的表达与凋亡指数密切相关 (r =0 73及 -0 89 P <0 0 0 1) ,但均与大肠癌临床病理分期无关。结论 大肠腺瘤及大肠癌组织中caspase 3低表达和Bcl 2的高表达与细胞凋亡异常密切相关 。

晶状体上皮细胞(LECs)凋亡及凋亡相关基因caspase-3表达与老年性白内障

目的探讨晶状体上皮细胞(LECs)凋亡及凋亡相关基因caspase-3表达与老年性白内障发生的关系。方法选择32例老年性白内障患者晶状体前囊膜标本(白内障组),同时收集高度近视患者晶状体前囊膜标本28例(高度近视组)。采用免疫组化法检测两组的晶状体前囊膜组织中凋亡相关基因caspase-3的表达,并应用TUNEL法检测两组LECs的凋亡情况。结果白内障组LECs中凋亡细胞百分率(30.4±3.7)%,明显高于高度近视组LECs中凋亡细胞百分率[(0.27±0.12)%],差异有统计学意义(P<0.05)。白内障组LECs中caspase-3蛋白的阳性表达率为84.38%,明显高于高度近视组LECs中caspase-3蛋白的阳性表达率(10.71%),差异有统计学意义(P<0.05)。等级Logistic回归分析显示:老年性白内障患者的LECs中caspase-3蛋白的表达明显高于高度近视组(P<0.01)。结论 LECs的凋亡及caspase-3的表达在老年性白内障的发生发展过程中起重要作用。

稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠AS不稳定斑块凋亡相关基因Caspase-3表达的影响

目的观察稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法利用6~8周龄ApoE基因敲除小鼠建立动脉粥样硬化不稳定斑块模型,并随机分为空白对照组,模型组,稳斑汤低、中、高剂量组,他汀组。空白对照组及模型组均给予0.9%氯化钠溶液灌胃,稳斑汤低、中、高剂量组及他汀组分别给予不同剂量稳斑汤及阿托伐他汀钙片干预。采用HE染色进行主动脉组织病理学观察,利用反转录PCR法检测Caspase-3mRNA水平。结果与空白对照组比较,模型组Caspase-3mRNA表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,稳斑汤中、高剂量组Caspase-3mRNA表达水平均降低(P<0.05);与他汀组比较,稳斑汤中、高剂量组Caspase-3mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。镜下观察斑块面积,模型组小于稳斑汤各剂量组和他汀组。结论稳斑汤可能通过下调ApoE基因敲除小鼠AS不稳定斑块凋亡相关基因Caspase-3的表达来干预动脉粥样硬化不稳定斑块的形成及破裂。