婴儿神经轴索营养不良致病基因PLA2G6突变分析

目的探讨婴儿神经轴索营养不良(INAD)PLA2G6基因突变的致病特点,丰富INAD的基因突变谱,为INAD相关遗传咨询提供依据。方法收集1例先证者的家系相关临床资料,采用三人家系全外显子组测序对先证者及其父母进行测序分析,筛选可能的致病突变位点,Sanger测序验证突变位点,结合生物信息学分析对突变位点的致病性进行预测,最后通过羊水穿刺检查为孕妇提供产前诊断。结果全外显子测序结果显示临床表现为精神运动发育倒退的先证者为PLA2G6基因c.1A>G(p.M1?)和c.2242G>A(p.A748T)复合杂合突变,其父亲为c.1A>G(p.M1?)杂合突变携带者,母亲为c.2242G>A(p.A748T)杂合突变携带者。根据美国医学遗传学与基因组学学会变异评级相关指南,c.1A>G(p.M1?)为致病性突变,c.2242G>A(p.A748T)为意义未明突变。产前诊断胎儿为c.1A>G(p.M1?)杂合突变携带者,现该孕妇已足月顺产一男活婴,产后随访7个多月生长状况良好。结论PLA2G6基因c.1A>G(p.M1?)和c.2242G>A(p.A748T)复合杂合突变为该先证者患INAD的遗传病因,其中c.2242G>A(p.A748T)为新发现的变异位点,这扩大了INAD的基因突变图谱,全外显子测序数据为该家系提供了精准的遗传咨询和产前诊断。

青杨脊虎天牛CYP4G2基因片段的克隆、序列分析与表达

根据报道的十几种昆虫CYP4家族基因的氨基酸序列保守区域设计一对引物,利用RT-PCR技术扩增编码青杨脊虎天牛Xylotechus rusticus中肠细胞色素氧化酶CYP4G2蛋白的cDNA片段,构建原核表达载体pET-CYP4G2,将其转化入大肠杆菌Escherichia coli JM109中表达。序列分析结果表明,该基因（CYP4G2,GenBank登录号为EF429250）保守区域阅读框全长387bp,编码129个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为16.9kD和5.75;推导的氨基酸序列与已报道的昆虫CYP4家族氨基酸序列一致性较高（63%～86%）,且具有细胞色素氧化酶的典型特征。IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳检测到一条22kD大小的外源蛋白,与预测融合蛋白的分子量大小相应。CO差光谱分析证明重组菌表达了有活性的pET-CYP4G2。

汉坦病毒76-118株G2基因的克隆及其在甲基营养型酵母中的表达

目的 获得汉坦病毒囊膜蛋白G2体外表达产物。方法 应用RT -PCR方法扩增汉坦病毒 76 -118株M片段编码的G2蛋白基因 ,并将扩增产物分别插入pPIC9K和pHIL -S1载体 ,命名为pPIC9K -G2和pHIL -S1-G2 ,分别与酵母的α因子信号肽和PH0 1信号肽 3’端融合 ,处于醇氧化物酶 (AOX1)启动子下游。这 2个载体经线性化后分别转化甲基营养型酵母菌株GS115和SMD116 8,筛选后分别得到His+ Muts 转化子和His+ Mut+ 转化子 ,诱导表达后 ,用Dot ELISA检测。结果 Dot-ELISA检测为阳性。结论 成功地表达了汉坦病毒G2囊膜蛋白 ,为进一步研究其结构功能以及生物学特性奠定了良好基础。

精神分裂症患者G72基因表达水平的研究

目的本工作旨在检测精神分裂症（Schizophrenia）患者外周淋巴细胞中672基因的表达情况，进而探讨672基因的表达与精神分裂症的相关关系。方法工作在56例精神分裂症患者和84名年龄性别相匹配的对照中进行，在新鲜外周血样本中抽提总RNA，反转录成cDNA，基因表达量的检测在ABI Prism 7900HT型序列监测系统上进行，采用TaqMan的方法对患者及对照组样本的mRNA进行定量，采集的荧光数据经SDS2．1软件自动处理，每个样本作3次平行检测，取平均值作为该样本的最终定量。数据应用SPSS统计软件进行处理，对组间基因表达水平的差异采用独立样本的T检验，调用本实验室672基因单核苷酸多态性（SNPs）资料，用单因素方差分析的方法分析SNP与基因表达水平的关联性。结果检测得到672基因在对照组中的表达量为0．0586±0．0114amol／ng cDNA，在精神分裂症患者组中的表达量为0．0498±0．0121amol／ng cDNA；经统计学分析，672基因的表达水平在病例和对照组间差异无统计学意义，t=-0．512，df138，P=0．609，95％CI：-4．258—2．506；单因素方差分析结果显示，rs9 47267位置上的SNP与该基因的表达水平无相关，F=0．355，dt2，X^2=0．703；而舟2181953位置上的SNP与672基因表达水平相关联，F=6．275，dt2,X^2=0．004。AA基因型的患者基因表达水平显著高于其他基因型。结论精神分裂症患者672基因的表达量总体上较正常人并无显著变化，但rs2 181953位置上的基因型会影响精神分裂症患者该基因的表达。

婴儿神经轴索营养不良患者PLA2G6基因的突变检测

目的辅助临床确诊1例婴儿神经轴索营养不良(infantile neuroaxonal dystrophy,INAD)家系,为患者家庭遗传咨询和产前诊断提供依据。方法收集患者临床资料,提取先证者及家系成员外周血基因组DNA,PCR扩增INAD致病基因PLA2G6编码序列并进行测序。对发现的突变位点在对照人群中进行验证及相关生物信息学分析。结果先证者表现为进行性智力发育及运动能力落后,头颅MRI显示小脑萎缩。测序结果发现患者PLA2G6基因存在复合性杂合突变,分别为父源性的c.668C>T(p.Pro223Leu)和母源性的c.1534T>A(p.Phe512Ile)突变,且二者在对照人群中未检测到。生物信息学分析显示两种突变均为致病性突变,可引起蛋白质二级结构和氨基酸亲水性改变。结论发现PLA2G6基因的新突变位点c.1534T>A,该突变可与已知致病突变c.668C>T共同导致常染色体隐性遗传病INAD的发生。

PLA2G2A基因在胃癌前病变组织中的表达及意义

目的探讨并分析PLA2G2A基因与胃癌前病变组织之间的关系。方法选取2010年6月至2011年6月我院行胃镜检查,确诊为胃癌前病变的患者,同时随机选取53名健康对照,应用RT-PCR方法研究PLA2G2A基因在胃癌前病变组及正常对照组的表达是否存在统计学意义。结果 PLA2G2A基因在癌前病变组织中的表达明显高于正常组织(P<0.01),具有统计学意义。结论 PLA2G2A基因在癌前病变组织中的表达明显高于正常组织,提示PLA2G2A基因在胃癌前病变的发生中可能起到重要的作用,PLA2G2A基因可能成为预测癌前病变,甚至胃癌的重要指标。

PLA2G6基因多态性与偏执型精神分裂症的关联

目的:探讨PLA2G6基因多态性与偏执型精神分裂症的关系。方法:采用聚合酶链反应(PCR)和限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)方法,在109个偏执型精神分裂症患者核心家系中检测PLA2G6基因上的3个单核苷酸多态性(SNP)(rs2235346、rs2272831和rs2284060)。运用单倍型相对风险(HRR)分析和传递不平衡分析(TDT)方法进行关联分析。结果:所检测的3个SNPs的基因型在患者组和父母组中频数分布均符合Hardy-Weinberg平衡。HRR和TDT分析均表明,rs2272831位点与偏执型精神分裂症相关联(χ2=5.590,υ=1,P=0.018;χ2=5.333,υ=1,P=0.021),而rs2235346和rs2284060位点与偏执型精神分裂症无关联。结论:PLA2G6基因可能是偏执型精神分裂症的易感基因。

TNF-α基因启动子-308G/A与PPAR-γ2基因-C34G多态性的交互作用与急性胰腺炎及其严重程度的关系

目的探讨TNF-α基因启动子-308G/A与PPAR-γ2基因-C34G多态性的交互作用与急性胰腺炎(AP)及其严重程度的关系。方法选择轻度AP(MAP)、中度AP(MSAP)和重度AP(SAP)患者各150例,以450例健康体检者作为对照组。利用聚合酶链反应(PCR)技术检测外周血白细胞TNF-α基因启动子-308G/A和PPAR-γ2基因-C34G多态性,并用DNA直接测序法验证结果。结果 -308G/A(GA)、-308G/A(AA)、-C34G(CG)和-C34G(GG)基因型频率分布在MAP组分别为24.00%、26.67%、24.00%、26.00%,在MSAP组分别为34.67%、36.67%、34.00%、36.67%,在SAP组分别为42.00%、46.00%、43.33%、46.00%,在对照组分别为14.44%、14.22%、12.89%、14.67%,基因型频率在MAP组、MSAP组、SAP组与对照组之间均有统计学差异(P均<0.01)。-308G/A(GA)和-308G/A(AA)基因型者患AP的风险均显著增加(ORMAP=2.526 5,ORMSAP=6.182 5,ORSAP=17.876 0;ORMAP=2.570 0,ORMSAP=6.401 8,ORSAP=18.903 4),-C34G(CG)和-C34G(GG)基因型者患AP的风险也显著增加(ORMAP=2.668 4,ORMSAP=6.776 9,ORSAP=22.207 2;ORMAP=2.633 8,ORMSAP=6.472 5,ORSAP=21.570 2)。基因突变的协同分析发现,-308G/A(AA)/-C34G(GG)基因型在MAP组、MSAP组、SAP组和对照组的分布频率分别为7.33%、13.33%、20.67%和2.00%,经χ2检验各组之间均有统计学差异(P均<0.01)。-308G/A(AA)/-C34G(GG)基因型者患AP的风险显著增加(ORMAP=7.284 2,ORMSAP=41.296 1,ORSAP=363.973 6),-308G/A(AA)与-C34G(GG)基因型在AP发生、发展中存在正向的交互作用(γ2MAP=2.114 2,γ4MAP=2.080 0,γ2MSAP=2.108 7,γ4MSAP=2.050 6,γ2SAP=2.138 8,γ4SAP=2.000 1),另外在-308G/A(GA)和-C34G(GG)之间、-308G/A(GA)和-C34G(CG)之间及-308G/A(AA)和-C34G(CG)之间均存在正向交互作用(γ均>1)。结论携带-308G/A(GA)、-308G/A(AA)、-C34G(CG)和-C34G(GG)基因型的个体属AP高危险人群,基因型多态性的交互作用促进了AP的发生、发展。

G0S2基因在胶质瘤中的表达及生物学意义

目的分析G0S2(G0S2G0/G1 switch 2)基因与胶质瘤预后及恶性程度的相关性。方法应用生物信息学技术对GSE33331芯片进行分析得出差异性表达的基因G0S2,并使用DAVID、TCGA数据库(The Cancer Genome Atlas)对该基因进行GO(Gene Ontology)分析及生存分析,使用实时荧光定量PCR方法研究G0S2与胶质瘤级别的相关性。结果生物信息学分析结果提示G0S2是芯片中表达差异第3显著的基因(log FC=-2.53672,P<0.001),该基因参与肿瘤的脂质、分子等代谢过程,高表达该基因的胶质瘤患者生存时间显著下降(Chisq=150,P<0.001)。此外通过40例胶质瘤的q PCR结果证实G0S2在高级别与低级别胶质瘤中差异表达(t=3.168,P=0.003)。结论 G0S2基因表达水平与胶质瘤恶性程度及预后相关。

PLA2G6基因突变致早发型帕金森病2例

PLA2G6基因是常染色体隐性遗传相关的致病基因,临床报道较少。此基因突变可导致iPLA-2β酶不同程度的改变,临床表现为四种不同的临床类型。本文报告两例PLA2G6基因突变导致的青年型帕金森综合征。其中1例患者为PLA2G6基因c.991G>T合并c.1A>G双杂合突变,临床表型为肌张力障碍-帕金森综合征(dystonia-Parkinsonism,DP),多巴胺能药物治疗有效但运动并发症出现较早,肌张力障碍治疗效果欠佳。患者接受了脑深部电刺激手术,术后运动功能较前改善;另1例患者为PLA2G6基因c.991G>T合并c.2752A>G、c.35C>G杂合突变,临床表型为早发型帕金森综合征(early-onset Parkinsonism,EOP)型,左旋多巴治疗效果欠佳。临床分型与杂合突变导致临床异质性有关。基因检测是诊断及鉴别要点。

5-HTR2A基因-1438A/G多态性与重性抑郁障碍及药效学作用的关联研究

目的探讨5-HTR2A基因-1438A/G多态性(rs6315)与重性抑郁障碍(MDD)及氟西汀治疗MDD疗效的关系。方法采用聚合酶链反应扩增技术与限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)检测MDD患者(病例组)和正常健康者(对照组)5-HTR2A基因-1438A/G多态性的基因型和等位基因频率。氟西汀治疗MDD患者6周末,采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评价疗效,分析疗效与基因型之间的关系。结果对照组与病例组在基因型、等位基因及A等位基因携带者的分布频率间存在明显差异,有统计学意义(P<0.05);病例组的-1438A等位基因的频率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。氟西汀治疗反应较好的MDD患者携带G/G等位基因的频率较高,差异有统计学意义(P<0.05);治疗反应不好的MDD患者携带A等位基因的频率较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论5-HTR2A基因-1438A/G多态性与MDD的发病有关,A等位基因可能是MDD发病的危险因素;5-HTR2A基因-1438A/G多态性与氟西汀的抗抑郁疗效有关,携带A等位基因的患者对氟西汀的治疗反应较差,G/G基因型的患者比A/A、A/G基因型的患者对氟西汀有更好的反应。

玉米RNA结合蛋白GRMZM2G052926基因的生物信息学分析

为了研究玉米RNA结合蛋白在玉米生长发育中的调节机制,以一个玉米RNA结合蛋白GRMZM2G052926基因为材料,采用生物信息学的方法,对其理化性质、跨膜结构域、亚细胞定位、功能域、二级结构等方面进行了预测和分析。结果表明:基因包含一个1 335bp开放阅读框,是一种具有亲水能力的不稳定酸性蛋白,相对分子质量38.301 1kDa,包含两个RRM超亲家族(RRM superfamily),无信号肽序列,无跨膜结构域,亚细胞定位在细胞质上,二级结构由无规则卷曲、α螺旋、延伸链和β折叠构成;系统进化树分析表明,GRMZM2G052926蛋白与水稻Os05g0437300蛋白亲缘关系最近,同源性达到87%。

PPAR-γ2基因-C34G、NADPH氧化酶p22phox亚基基因-C242T多态性与幽门螺杆菌感染的交互作用和食管鳞状细胞癌的关系

目的探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体-γ2（PPAR-γ2）基因-C34G、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶p22phox亚基基因-C242T多态性与幽门螺杆菌（H.Pylori）感染的交互作用和食管鳞状细胞癌（ESCC）的关系。方法选择我院2010年5月~2015年3月收治的ESCCBroderⅠ级、BroderⅡ级和BroderⅢ级患者各200例,以200例健康体检者作为对照组,以上述各组患者的外周血白细胞为样本,利用PCR-RFLP检测PPAR-γ2基因-C34G和NADPH氧化酶p22phox亚基基因-C242T多态性。采用14C-UBT检测受检者H.Pylori与14C结合的每分钟衰变数（DPM）以判断H.Pylori感染情况。采用非条件Logistic回归对-C34G、-C242T多态性与H.Pylori感染的交互作用进行分析。结果 -C34G（CG）和-C34G（GG）基因型者患ESCC的风险均显著增加,-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型者患ESCC的风险也显著增加。基因突变的协同分析发现-C34G（GG）和-C242T（TT）基因型在ESCC发生、发展存在正向的交互作用,另外在-C34G（CG）和-C242T（TT）之间、-C34G（CG）和-C242T（CT）之间及-C34G（GG）和-C242T（CT）之间均存在正向交互作用（γ均大于1）。H.Pylori感染者患ESCC的风险性均明显增高。H.Pylori感染与-C34G（CG）、-C34G（GG）、-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型与均有正向交互作用（γ均大于1）。结论携带-C34G（CG）、-C34G（GG）、-C242T（CT）和-C242T（TT）基因型的个体属ESCC高危险人群,这些基因型和H.Pylori感染的交互作用促进了ESCC的发生、发展,应当采取根除H.Pylori或调控基因表达的措施以达到有效预防LSCC的目的。

5-羟色胺2C受体基因-759C/T和-697G/C多态性与抗精神病药物所致体质量增加的关联

目的:探讨5-羟色胺2C受体(5-hydroxytryptamine 2C receptor,HTR2C)基因-759C/T和-697G/C多态性与抗精神病药物所致体质量增加的相关性。方法:用病例匹配进行对照研究,研究组为85例服用抗精神病药物后体质量增加≥7%的精神分裂症患者,对照组为85例服用抗精神病药物体质量增加<7%的精神分裂症患者,对照组在抗精神病药物种类和治疗时间上与研究组匹配。采用高温连接酶检测反应法对170例患者进行单核苷酸多态性分析。结果:研究组男性患者中携带HTR2C-759C半合子和女性患者中携带HTR2C-759C/C型的比率明显高于对照组;研究组男性患者中携带HTR2C-697G半合子和女性患者中携带HTR2C-697CG/GG型的频率明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:5-羟色胺2C受体基因启动子区-759C/T和-697G/C多态性可能与抗精神病药物引起的体质量增加存在关联。

PLA2G4B基因多态性与精神分裂症的关联性分析

目的:探讨中国北方汉族人群PLA2G4B基因多态性与精神分裂症的遗传关联性。方法:采用聚合酶链反应(PCR)和连接酶检测反应(LDR)方法,在201个精神分裂症患者核心家系中检测PLA2G4B基因上的错义突变位点rs3816533的单核甘酸多态性,应用遗传统计学方法对研究对象进行单倍型相对风险分析(HRR)和传递不平衡分析(TDT)。结果:PLA2G4B基因rs3816533位点在精神分裂症患者组和父母组中基因型频数分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05);HRR分析结果显示:父母传递和未传递给患病子女的等位基因频数分布差异无显著性(χ2=0.840,P>0.05);TDT分析结果显示:杂合子父母双亲的2个不同等位基因传递概率没有偏离50%(χ2=0.818,P>0.05)。结论:在中国北方汉族人群中PLA2G4B基因rs3816533位点单核甘酸多态性与精神分裂症可能无关联。

汉坦病毒G2膜蛋白基因在毕赤酵母GS115中的表达

目的 研究汉坦病毒G2膜蛋白基因在甲醇营养型巴斯德毕赤酵母中的克隆表达。方法 采用RT PCR扩增G2基因 ,转化感受态大肠杆菌DH5α,DNA序列分析后 ,SnaBI、NotI两次酶切下G2 ,再连接到经同样酶切的pPIC9K表达载体上 ,构建表达载体 pPIC9K G2 ,SalI线形化后电转化导入毕赤酵母宿主菌GS115 ,G418筛选转化子 ,1%甲醇诱导、摇瓶培养。结果 序列分析表明 ,克隆序列与设计相符 ,12 %SDS PAGE显示重组蛋白为5 0KD ,Western Blot证实其生物学活性。

阿勒泰羊PLA2G16基因多态性检测及其对蛋白质高级结构影响的分析

本研究以脂肪沉积能力超强的阿勒泰羊为研究对象，探究绵羊PLA2G16基因多态性并分析其对氨基酸序列和蛋白高级结构的影响，为后续深入研究该基因在绵羊脂肪代谢中的作用机制奠定基础。采用PCR—SSCP技术对阿勒泰羊PLA2G16基因第4外显子的多态性进行了检测，并分析了氨基酸序列和高级结构的变化特征。结果表明，阿勒泰羊PLA2G16基因第4外显子处存在一个G〉A突变，该突变使原来的密码子GAG变为AAG，从而使PLA2G16蛋白第111位的氨基酸残基由谷氨酸变为赖氨酸．蛋白质高级结构预测软件显示该突变可以引起蛋白结构的变化，这可能影响其正常的生物学功能。该结果为进一步探讨PLA2G16基因在阿勒泰羊脂肪代谢中的作用机制，培养低脂肪绵羊品种积淀了数据基础。

PLA2G6基因突变致青年帕金森病的临床特征(附1例报告)

目的本文报道了一个可能致病的PLA2G6基因突变的新位点,并对PLA2G6基因突变所致青年帕金森病患者的临床特征进行探讨。方法回顾性分析1例PLA2G6基因突变相关帕金森病患者的临床资料并做相关文献复习。结果患者青年女性,隐匿性起病,病程两年余。主要临床表现为右下肢震颤、右侧肢体肌张力障碍及运动迟缓,病情逐渐进展。应用小剂量左旋多巴效果好,但维持时间较短。基因检测发现PLA2G6基因复合杂合突变:c.991G>T(p.D331Y)、c.1630A>G(p.M544V),后者可能是一个新的突变位点。结论 PLA2G6突变所致帕金森病临床罕见,临床表现多样,临床容易误诊,基因检查为鉴别要点。

玉米穗行数相关基因GRMZM2G398848的生物信息学分析

研究采用生物信息学的方法,对一个玉米穗行数相关基因GRMZM2G398848的理化性质、跨膜结构域、功能域、二级结构、三级结构等方面进行了预测和分析。结果表明:该基因编码蛋白由9 195个原子构成,其相对分子质量为65.681 1kDa,是一个不稳定亲水性蛋白,包含1个F-box超亲家族和2个AMN1超亲家族,无跨膜结构域,无信号肽,由α螺旋、无规则卷曲、延伸链和β折叠构成。

PLA2G12A基因多态性与中国北方汉族儿童孤独症谱系障碍的关联性分析

目的:研究PLA2G12A基因单核苷酸多态性(SNPs)与中国北方汉族儿童孤独症谱系障碍(ASD)的关联性,探讨PLA2G12A基因是否是ASD的易感基因。方法:采用Sequenom Mass ARRAY系统对纳入的85例ASD患儿(病例组)和183名健康儿童(对照组)PLA2G12A基因上的4个SNPs位点(rs6533451、rs2285714、rs2285713和rs11728699)进行基因型和等位基因检测;采用在线SNPStats分析程序行HardyWeioberg检验,分析2组研究对象基因型和等位基因型频数分布的差异;采用遗传模型分析各位点的基因多态性与ASD的关联性;采用Haploview 4.2软件分析各个单体型与ASD的关联性。结果:病例组和对照组研究对象PLA2G12A基因4个位点的基因型和等位基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡检验(P>0.05)。病例组和对照组PLA2G12A基因的4个位点基因型和等位基因频数分布差异无统计学意义(P>0.05);5个遗传模型下,各位点多态性与ASD均无关联(P>0.05);3个位点(rs6533451、rs2285714和rs11728699)组成的单体型与ASD无关联(P>0.05)。结论:PLA2G12A可能不是中国北方汉族儿童ASD的易感基因。