同型半胱氨酸诱导基因HCY-2在大鼠体内的表达与分布

目的 :研究同型半胱氨酸诱导基因 (homocysteineinducedgene,HCY 2 )在大鼠体内的表达及分布 ,为进一步探讨该新基因的功能奠定形态学基础。方法 :用免疫组织化学ABC法染色 ,对成年Wistar大鼠心、肝、脾、肺、肾、大脑、小脑及脊髓等器官中HCY 2基因的表达与分布状况进行形态学观察与半定量分析。结果 :发现心脏中HCY 2阳性反应物质主要在心肌纤维、Pukinje纤维、大动脉中膜平滑肌和外膜营养血管平滑肌中 ;肾中HCY 2表达强烈 ,分布较广泛 ;脊髓前脚运动神经元和中央管室管膜细胞、肺内小支气管至肺泡管上皮及肺泡Ⅱ型细胞HCY 2均高表达 ;肝、大脑、小脑中表达很弱 ;胰腺和脾几乎没有表达。结论 :同型半胱氨酸诱导基因在大鼠体内分布广泛 ,但在不同器官中的表达强弱不甚相同 ,同一器官内HCY

大鼠胚胎心脏的发育过程及基因HCY-2在大鼠胚胎心脏内的表达

目的 研究大鼠胚胎心脏的发育过程和同型半胱氨酸诱导基因 (HCY 2 )在大鼠胚胎心脏上的表达 ,为进一步探讨该基因与心血管疾病之间的关系奠定形态学基础。方法 分别于大鼠妊娠 11～ 19d取胚胎 ,用组织学和免疫组织化学方法 ,观察大鼠胚胎心脏的发育过程和Hcy 2基因的表达并进行图像分析。结果 大鼠胚胎心脏 11d出现第一房间隔 ,13d出现第二房间隔 ,14d心房不完全分隔完成 ;12d出现室间隔肌部 ,16d心室已分隔完成。Hcy 2在大鼠胚胎心脏不同发育时期表达不同 ,11、12d表达强 ,13d表达减弱 ,14、15、16d表达又逐渐增强 ,17、18、19d表达强。结论 大鼠胚胎心脏内部分隔晚于小鼠 ;基因Hcy

一种新的细胞凋亡相关基因—高同型半胱氨酸诱导基因HCY-2的功能初探

目的 探讨高同型半胱氨酸 (HCY)血症引起心血管病和出生性缺陷的作用机制。方法 采用诱导筛选方法克隆高同型半胱氨酸诱导基因 HCY- 2 ,以 Northern印迹分析检测 HCY- 2基因在大鼠不同组织中的表达 ,以免疫组化方法验证 HCY- 2蛋白在大鼠不同组织中的表达。结果 以诱导筛选方法从大鼠血管平滑肌细胞内克隆到一个新的全长 c DNA,即高同型半胱氨酸诱导基因 HCY- 2 ,它编码 142个氨基酸。Northern印迹分析和免疫组化检测表明 ,HCY- 2基因可在大鼠心、肾、脑、肝、肺等组织中广泛表达。在体外 ,将重组 HCY- 2基因转移至内皮细胞中 ,能够引起细胞凋亡和 DNA损伤 ;在体内 ,将 HCY- 2基因转移至鸡胚内 ,则诱发鸡胚细胞凋亡 ,并引起畸形。结论 HCY- 2基因可能是一种新的凋亡基因 ,高同型半胱氨酸血症可能通过 HCY- 2基因诱发心血管病和出生性畸形。

转HCY-2基因对鸡胚神经管发育的影响

为探讨新基因ＨＣＹ－２与神经管畸形表型的关系及明确其是否具有基因毒性作用，应用脂质体介导基因转移技术将构建的含有全长ＨＣＹ－２ ｃＤＮＡ（２０１４ｂｐ）的真核表达载体转入新生鸡受精卵，培养３．５天后观察其对神经管闭合时期胚胎的整体分子生物学效应，利用Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹和免疫组化等技术研究在整体环境下ＨＣＹ－２蛋白的表达和分布情况。结果显示转ＨＣＹ－２基因（５～２０μｇ）可诱导早期鸡胚发生神经管畸变，而空载质粒组胚胎发育正常；Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹和免疫组化分析发现有ＨＣＹ－２蛋白大量表达，主要分布于胚脑组织中，显著高于空载质粒对照组；透射电镜观察发现转ＨＣＹ－２基因后，胚脑细胞超微结构受损和出现呈弥散分布的凋亡细胞。结论是ＨＣＹ－２基因对神经管闭合时期的胚胎神经系统发育具有明显基因毒性作用。

HCY-2基因和同型半胱氨酸与鸡胚先天性心脏畸形发生的关系

目的 探讨新基因HCY 2和同型半胱氨酸与早期先天性心脏畸形发生的关系。方法 应用鸡胚致畸试验观察同型半胱氨酸 (0～ 1 6 μmol/胚胎 )对鸡胚心血管发育的影响 ;采用脂质体介导基因转移法将已构建的含有全长HCY 2cDNA的真核表达载体转入新生鸡卵 ,培养 4d后再用Western杂交和免疫组织化学等方法观察HCY 2基因对早胚心血管发育的致畸作用及其编码产物的表达和分布。结果 HCY对器官形成期的心脏有明显的致畸作用并呈剂量 反应关系 (P <0 .0 5 )。转1 0 μg和 2 0 μgHCY 2基因能诱导鸡胚心血管系统发育异常 ,心脏畸形发生率分别为 1 6 .7%和 2 4.0 % ,主要表现型是心包积液、异位心、心外露和心脏过小。Western杂交显示转 1 0 μg和 2 0 μg基因组胚胎样品有HCY 2蛋白大量表达 ,其分布以胚胎心脏组织为主。HCY 2基因可引起心脏结构紊乱、心内膜垫缺损和抑制心室心房发育 ,并可损害心肌细胞的超微结构。结论 HCY/HCY 2基因可能是一种新的心脏发育毒性因子 ;HCY 2基因的异常表达在心血管畸形发生过程中起重要作用。