抑癌基因RASSF1A与RASSF1B基因的关系

目的:研究RASSF1基因2个转录本基因在胃癌组织及相对应的癌旁组织中表达情况以及RASSF1 2个转录本基因与肿瘤发生的相关性。方法:设计特异性的引物,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测胃癌及癌旁组织中RASSF1家族中2种不同转录本mRNA的表达情况。结果:40例胃癌组织中RASSF1A基因表达缺失率为60.2%(24/40),RASSF1B基因表达缺失率为37.5%(15/40)。结论:RASSF1A和RASSF1B2种转录本在胃癌组织中的表达下调,RASSF1A基因在胃癌的发展中起重要的抑制作用,RASSF1B的表达还可能与细胞的分化程度有关。

新型肺癌候选抑癌基因RASSF1A研究进展

Ras相关区域家族 1A(RASSF1A)是最近从 3p2 1 .3上发现的新型候选抑癌基因 ,在肺癌、乳腺癌和结肠癌等十几种恶性肿瘤中均出现高频率表达失活和异常高甲基化。将该基因转染入肺癌、肾癌等肿瘤细胞株中均可显著抑制癌细胞生长 ,逆转其恶性表型 。

阿帕替尼靶向治疗联合TACE对晚期原发性肝癌患者的疗效及外周血RASSF1A基因甲基化的影响

目的分析阿帕替尼靶向治疗联合肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗晚期原发性肝癌患者疗效及对外周血Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化的影响。方法64例晚期肝细胞癌(HCC)患者分为单一组(n=32)与联合组(n=32),单一组行TACE治疗,联合组行阿帕替尼靶向治疗联合TACE治疗,两组患者均行标准疗程TACE治疗,于治疗1个月(1 mo)及3个月(3 mo)评估临床疗效,比较治疗前后肝功能[白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)]、血清标志物[甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子(VEGF)、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)]、外周血RASSF1A基因甲基化、不良反应及TACE抵抗发生率。结果单一组治疗3 mo时的客观缓解率(ORR)较治疗1 mo时下降(P<0.05),且低于联合组(P<0.05);两组患者治疗3 mo时的ALT、AST均较治疗前下降(P<0.05),且联合组低于单一组(P<0.05),两组患者治疗3 mo时的AFP均较治疗前显著降低(P<0.05);联合组治疗3 mo时的VEGF较治疗前降低(P<0.05)、Caspase-8较治疗前升高(P<0.05),联合组治疗3 mo时AFP、VEGF低于单一组(P<0.05),Caspase-8高于单一组(P<0.05);联合组治疗3 mo时RASSF1A基因甲基化阳性率明显低于治疗前(P<0.05),而单一组组内比较差异无统计学意义(P>0.05);联合组手足综合征、高血压发生率高于单一组(P<0.05),TACE抵抗发生率略低于单一组、但差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿帕替尼靶向治疗联合TACE对晚期HCC效果及安全性良好,且对减少RASSF1A基因甲基化有利。

三氧化二砷对前列腺癌DU-145细胞RASSF1A基因的去甲基化作用

目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对激素非依赖性前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对RASSF1A基因去甲基化和蛋白表达的影响。方法应用MTT法检测不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、12.0、20.0μmol/L)的As2O3不同作用时间(24、48、72 h)对DU145细胞的生长抑制作用;应用甲基化特异性PCR(MSP)和West-ern blot检测As2O3对DU145细胞RASSF1A基因甲基化状态及蛋白表达的影响。结果 As2 O3可抑制DU145细胞的增殖,在一定范围内随着药物浓度的增高,抑制作用逐渐增强(F=838.089,P<0.05);同一浓度作用时间越长,抑制率越高(F=8.849,P<0.05);且As2O3可使RASSF1A基因甲基化逆转,蛋白重新表达。结论 As2O3可以逆转前列腺癌DU145细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的异常甲基化,诱导该抑癌基因的重新表达,抑制前列腺癌DU145细胞的增殖。

RASSF1 A基因在子宫内膜癌组织中的表达及意义

目的:探讨RASSF1A(RAS相关区域家族1A)基因转录表达与子宫内膜癌发生、发展的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)方法检测50例子宫内膜癌组织及20例正常子宫内膜组织中RASSF1A mRNA的表达水平。结果:①RASSF1A mRNA在所有正常子宫内膜组织中表达,而在子宫内膜癌组织中存在较高的表达缺失率(54%);②RASSF1A mRNA的表达缺失与子宫内膜癌手术病理分期、淋巴结转移、肌层浸润及病理组织学类型有明显相关性(P<0.05);RASSF1A mRNA表达缺失与年龄和病理分级未见明显相关(P>0.05)。结论:RASSF1A转录表达缺失可能参与调控子宫内膜癌的发生、发展过程,并进而影响其生物学特点及预后。

RASSF1A基因启动子甲基化与非小细胞肺癌关系的meta分析

背景与目的肿瘤发生、发展过程中,抑癌基因启动子区域Cp G岛异常甲基化起着重要的作用。已有研究显示RAS相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)基因,作为一个抑癌基因其启动子区域甲基化与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的发生发展密切相关。在NSCLC患者癌组织中RASSF1A基因启动子往往表现为异常高甲基化。本研究采用meta分析的方法探讨RASSF1A基因启动子甲基化与NSCLC发生之间的关系。方法通过检索Medline、EMBASE、CNKI和万方数据库,按照已拟定的纳入与剔除标准筛选收集公开发表的关于RASSF1A基因启动子甲基化与NSCLC相关性的研究。以比值比(odds ratio,OR)和95%置信区间(confidence interval,CI)为效应指标,分析RASSF1A基因启动子甲基化与NSCLC的关系。结果共有23篇文献纳入本研究,RASSF1A基因启动子甲基化率在NSCLC患者肺部组织和对照组中分别为41.50%(95%CI:34%-49%)和5.58%(95%CI:2%-9%),meta分析显示肿瘤组织中的甲基化率高于对照组(OR=8.72,95%CI:4.88-15.58,P<0.05);亚组分析显示:肿瘤组织中的甲基化频率高于血浆(OR=10.99,95%CI:2.48-48.68)和正常对照组织(OR=8.74,95%CI:4.39-17.41)。结论 NSCLC患者肺癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化率高于对照组,组织中RASSF1A基因启动子甲基化率对肺癌的发生更具影响,RASSSF1A甲基化可能与肺癌的发生存在相关并可作为肺癌诊断的潜在标志物。

孕妇血浆中胎源性RASSF1A基因在无损性产前诊断中的应用研究

本研究旨在探讨运用非性别依赖的甲基化表观遗传学标记RASSF1A基因作为孕妇血浆中循环游离胎儿DNA存在的通用性标志的可行性。采用2种方法提取孕妇血浆游离DNA,选用其中效果较好的用磁珠法提取20例标本的游离DNA;采用RT-PCR方法扩增SRY基因以及甲基化酶处理后的RASSF1A基因,且对酶处理后RASSF1A基因的扩增体系进行条件优化。结果表明,在20例标本中11例检测有SRY基因,且与胎儿出生后性别相符;选用优化后的PCR体系扩增甲基化酶处理后的RASSF1A基因,在18例标本中检测有RASSF1A基因,在2例标本中未检测到此基因。结论:甲基化RASSF1A基因与SRY基因相比,不受胎儿性别限制,可作为广泛性胎儿特异性表观遗传学标记物,用于临床无损性产前诊断。

痰标本FHIT、P16、MGMT、RASSF1A、APC基因甲基化在肺癌诊断中的作用

目的探讨肺癌患者痰标本中FH IT、P16、MGMT、RASSF1A和APC等抑癌基因启动子异常甲基化及其联合检测在肺癌筛查及早期诊断中的价值。方法采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法,检测47例肺癌组织及对应的痰标本FHIT、P16,MGMT、RASSF1A和APC基因启动子区甲基化状态。24例肺良性疾病患者痰标本作为对照。结果 47例肺癌组织标本中FHIT、P16、MGMT、RASSF1A、APC基因启动子区甲基化检出率分别为40.4%(19/47)、53.2%(25/47)、36.2%(17/47)、21.3%(10/47)和38.3%(18/47);对照的痰标本中五者甲基化检出率分别为38.3%(18/47)、48.9%(23/47)、36.2%(17/47)、17.0%(8/47)和29.8%(14/47),两组甲基化检出率存在着一致性[P>0.05;κ(0.8～1.0)]。24例肺良性病变痰标本中未检测到任何异常甲基化,与肺癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)。五项指标联合检测可明显提高肺癌检测的灵敏度(80.9%)和特异度(100.0%)。FHIT和P16基因痰标本甲基化检出率与患者吸烟指数有相关性(P<0.05)。结论痰标本中多个肺癌相关基因甲基化联合检测有望成为肺癌筛查、早期诊断简便有效的指标。

RASSF1A基因甲基化作为肿瘤生物学标志的临床应用

RAS相关区域家族1A基因(ras-association domain family 1A,RASSFlA)是新近发现的一个位于人染色体3p21.3上的抑癌基因。RASSF1表达的缺失是人类恶性肿瘤中最常见的一个分子事件,目前至少有37种肿瘤存在该基因启动子的甲基化。RASSF1基因启动子CpG岛的甲基化在许多肿瘤组织和肿瘤患者体液中检测到,而在正常组织和体液中罕见,提示它具有肿瘤标志物的特征;RASSF1与其他一些基因组合的甲基化分析有助于卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肾癌、肺癌等的早期诊断。其次,RASSF1甲基化可作为恶变危险因素的监测,良性增生性病变RASSF1A甲基化的出现往往提示恶变的危险性增高。第三,应用于预后判断,因为某些恶性肿瘤RASSF1A甲基化与患者预后不良相关联。第四,RASSF1A甲基化提供了顺铂和三苯氧胺治疗是否耐药的一个标志,并可在癌症患者整个治疗过程给予监控。总之,RASSF1A甲基化作为肿瘤生物标志物在肿瘤的诊断及其他众多领域有一定的临床应用前景。

喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达

目的:探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系。方法:运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况。用Westernblotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况。结果:在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例(70.83%)、11例(22.92%)和6例(12.50%)发生了甲基化,喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血(P<0.05)。在48例喉癌组织中27例(56.25%)不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例(16.67%),喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P<0.01)。启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例(73.53%)呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例(14.29%),两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论:RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志。

诱导痰RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化在肺癌诊断中的价值

目的:探讨诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区异常甲基化及其联合检测在肺癌诊断中的价值。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测82例肺癌患者诱导痰和对应肿瘤组织以及25例肺部良性病变组织中RASSF1A,p16和DAPK3种基因启动子区甲基化改变,并分析三者与临床病理资料的关系。结果:肺癌病理组织中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化检出率分别为63.4%,59.8%和58.5%,对应的诱导痰三者甲基化检出率分别为54.9%,48.8%和51.2%;肺部良性病变组织中甲基化检出率均为零,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。RASSF1A基因甲基化检出率在中高分化和无淋巴结转移的肺癌中明显低于低分化和未分化及有淋巴结转移者(P<0.05),与年龄、性别、吸烟指数、临床分期及病理类型无关,而p16和DAPK基因甲基化检出率与上述因素均无明显相关性(P>0.05);联合检测3种基因甲基化的检出率为73.2%。结论:联合检测诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区高甲基化有可能作为诊断肺癌及评估预后的简便有效的指标,并能提高检出率。

非小细胞肺癌组织中RASSF_(1A)和p16基因启动子甲基化研究

目的:研究肺癌新型侯选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)和p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的甲基化情况,揭示两基因表达失活的机制,为NSCLC的基因诊断和治疗寻找新途径。方法:用甲基化特异性PCR(MSP)方法对96例NSCLC患者癌组织及相应的远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因启动子甲基化状态进行检测。结果:(1)96例NSCLC组织RASSF1A甲基化率48.96%,p16基因34.38%,96例远癌正常肺组织均未发现此两基因甲基化。(2)RASSF1A甲基化率鳞癌组(64.29%)高于腺癌组(37.04%,P<0.05);p16基因甲基化率50岁以上组(44.93%)高于50岁以下组(7.41%,P<0.05),鳞癌(61.90%)高于腺癌(12.96%,P<0.05),有淋巴结转移组(46.67%)高于无淋巴结转移组(13.89%,P<0.05)。(3)RASSF1A与p16基因启动子CPG岛甲基化呈正相关(r=0.256,P<0.05)。结论:RASSF1A和p16在NSCLC尤其是鳞癌中频繁甲基化,可能是两基因表达失活的主要原因。

RASSF1A基因甲基化在上皮性卵巢肿瘤中的检测及临床意义

卵巢癌是严重威胁女性健康的一种恶性肿瘤,由于缺乏早期诊断方法,70%的患者就诊时已是晚期,5年生存率仅为20%～30%。因此,如何早期诊断卵巢癌已是当前的研究热点。DNA甲基化是肿瘤发生的早期事件,

RASSF1A基因在前列腺癌中甲基化检测及其表达

目的探讨RASSF1A基因在中国人前列腺癌和前列腺增生组织中的表达及其甲基化检测。方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测33例前列腺癌、28例前列腺增生和5例癌旁组织中的RASSF1AmRNA表达,并采用甲基化特异性PCR法分析其甲基化状态。结果48.5%的前列腺癌组织和17.9%的前列腺增生组织中RASSF1A表达缺失,66.7%的肿瘤组织中发现甲基化,高前列腺特异性抗原(PSA)和高TNM者启动子区甲基化的频率明显高于低PSA和低TNM者(P=0.01和0.049)。启动子区甲基化与发病年龄、细胞分化不相关,仅在2例前列腺增生组织中发现甲基化。结论RASSF1A甲基化可作为一个分子标志物,成为诊断肿瘤和预后的新方法。

上皮性卵巢肿瘤RASSF1A基因甲基化与蛋白表达的关系及意义

目的:检测上皮性卵巢肿瘤中RASSF1A基因启动子CpG岛的甲基化状态,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达的关系及其意义。方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)方法对62例上皮性卵巢癌、21例交界性囊腺瘤及30例良性囊腺瘤的RASSF1A基因启动子甲基化状态进行检测,免疫组化S-P法检测上述标本中RASSF1A蛋白表达,并结合肿瘤生物学行为进行分析。结果:上皮性卵巢癌组织、卵巢交界性囊腺瘤组织中RASSF1A基因启动子区甲基化率(58.06%、42.85%)显著高于卵巢良性囊腺瘤组织(13.33%),差异有统计学意义(P<0.05)。RASSF1A基因启动子区甲基化与上皮性卵巢癌的细胞分化程度和临床分期密切相关(P<0.05)而与组织类型和患者年龄及绝经与否无相关性(P>0.05);RASSF1A基因甲基化与其蛋白表达下降一致。结论:卵巢癌组织中存在RASSF1A基因启动子CpG岛的异常甲基化,可能和该蛋白表达缺失的主要原因,是导致该基因失活的重要机制之一。

宫颈癌中RASSF1A基因杂合性丢失及HPV感染状态的研究

[目的]研究RASSF1A基因的杂合性丢失(loss of heterozygosity,LOH)及人乳头瘤病毒(human papillo-mavirus,HPV)感染与宫颈癌临床病理参数之间的关系。[方法]选择3p上2个微卫星位点,对110例宫颈组织进行LOH及HPV感染状态的分析。[结果]宫颈癌及CIN中RASSF1A基因LOH阳性的比例明显高于正常宫颈(P﹤0.05);宫颈癌Ⅲ期和Ⅳ期LOH的阳性率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期(P﹤0.05);低分化宫颈癌的LOH阳性率明显大于高中分化宫颈癌(P﹤0.05);随CIN级别的增加LOH阳性率也呈逐渐递增趋势,高级别CIN(CINⅢ及原位癌)明显高于低级别CIN(CINⅠ/Ⅱ)(P﹤0.05)。宫颈癌中HPV感染阳性率明显高于CIN组及正常宫颈组(P﹤0.05);RASSF1A的LOH阳性率在HPV感染阳性组明显高于阴性组(P﹤0.05)。[结论]RASSF1A基因的改变是宫颈癌发生过程中的较晚期事件,RASSF1A基因的LOH对于宫颈癌的筛查、早期诊断及判断预后可能具有临床实用价值。HPV感染与RASSF1A基因的LOH共同作用在宫颈癌发展过程中更有意义。

贲门腺癌中RASSF1A基因的甲基化状态及表达

目的研究贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中RASSF1A基因的甲基化状态及其蛋白表达情况。方法分别应用甲基化特异性PCR(MSP)、RT-PCR及免疫组织化学SP法检测贲门癌组织及相应癌旁组织的RASSF1A甲基化情况和mRNA水平及蛋白表达情况。结果92例贲门癌组织中有54例发生了甲基化,甲基化率为58.7%,显著高于癌旁正常组织(P<0.01)。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者中RASSF1A基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05)。92例贲门癌组织中有43例RASSF1A基因蛋白表达阴性,与相应癌旁正常组织相比有显著性差异(P<0.01)。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌RASSF1A基因蛋白表达显著低于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05)。发生甲基化的贲门癌组织中RASSF1A的mRNA水平的表达显著低于未发生甲基化的贲门癌组织(P<0.01)。结论RASSF1A基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一。

RASSF1A基因在宫颈癌组织中的表达及意义

目的: 探讨RASSF1A基因在宫颈癌发生过程中的作用及其与HPV感染的关系. 方法: 采用逆转录聚合酶链技术在39例宫颈癌及12例正常宫颈组织中检测RASSF1A基因的表达,并分析宫颈癌中HPV16 /18的感染状况. 结果:39例宫颈癌组织RASSF1A基因表达显著低于对照组(P<0. 01);淋巴结转移组RASSF1A表达亦低于淋巴结未转移组(P<0. 05 );宫颈癌组HPV16 /18的感染率为69. 2% ( 27 /39). 宫颈癌中RASSF1A基因表达与患者年龄、肿瘤大小、病理分级、临床分期及HPV感染无显著相关性(P> 0. 05 ).结论: RASSF1A基因的表达失活使其丧失了抑癌作用,是促进正常宫颈上皮细胞癌变的一个重要因素.

RASSF1A基因对乳腺癌细胞恶性生物学特征的作用研究

目的通过脂质体介导细胞转染,构建Ras相关区域家族1(RASSF1A)基因过表达的乳腺癌MCF-7细胞株,研究RASSF1A基因对乳腺癌MCF-7细胞株增殖、克隆形成、凋亡的作用。方法构建RASSF1A过表达载体并鉴定,通过脂质体介导细胞转染将空载体及含有目的基因的重组载体转染到乳腺癌MCF-7细胞株中。分别通过荧光显微镜观察、实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western Blot观察转染效率及确定最优转染条件。并通过四甲基偶氮唑盐法(MTT)、平板克隆、流式细胞术分别检测RASSF1A重组基因转染组、空载体转染组及空白细胞对照组细胞增殖、细胞克隆形成以及细胞凋亡的情况。结果转染RASSF1A基因后的乳腺癌MCF-7细胞株出现该基因mRNA及蛋白质水平显著提升,证明RASSF1A基因过表达的MCF-7细胞株构建成功。MTT、平板克隆及流式细胞术检测结果显示:与对照组相比,RASSF1A基因过表达的MCF-7细胞株增殖、克隆形成能力受到抑制,而细胞凋亡率增加。结论成功构建了RASSF1A基因过表达的MCF-7细胞株,RASSF1A基因可能参与了乳腺癌MCF-7细胞株增殖、凋亡的调控,其机制可能与抑制BC细胞增殖、促进凋亡有关。

结直肠癌患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化状态观察

目的观察结直肠癌(CRC)患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化状态。方法 CRC患者50例(肿瘤组)、结直肠良性病变者50例(良性组)、健康体检者50例(正常组),采用甲基化特异度PCR的方法检测各组粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化检出率,并分析其与CRC临床病理参数的关系。根据肠镜病理诊断结果进行验证,比较粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A单独及联合检测诊断CRC的敏感度和特异度。结果肿瘤组、良性组、正常组粪便p16INK4a基因甲基化检出率分别为74%、28%、14%,MGMT基因甲基化检出率分别为56%、24%、12%,RASSF1A基因甲基化检出率分别为72%、20%、10%,肿瘤组分别与正常组、良性组比较,P均<0.05。p16INK4a基因甲基化状态与CRC分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关,MGMT基因甲基化状态与CRC淋巴结转移相关,RASSF1A基因甲基化状态与CRC分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关,P均<0.05。三者联合检测诊断CRC的敏感度为95.8%,特异度为83.4%,ROC曲线下面积为0.816(95%CI 0.739%~0.894%)。结论 CRC患者粪便p16INK4a、MGMT、RASSF1A基因甲基化检出率明显高于结直肠良性病变者及健康体检者,联合检测上述指标有助于CRC患者的早期诊断及其生物学行为的判断。