RhoC基因沉默对口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的:分析RhoC对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制。方法:利用UALCAN和K-M plotter在线数据库预测分析RhoC在OSCC中的表达及其与病理分期分生存率的关系,并结合IHC实验检测OSCC组织中RhoC的表达水平。按照人RhoC基因构建两条小干扰RNA(siRNA)并将细胞进行实验分组。RT-qPCR检测转染后各组细胞RhoC的mRNA表达水平,Western blot法分析实验分组细胞中RhoC、FAK、MAPK、p-FAK、p-MAPK、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达;此外,比较各实验分组细胞的穿膜细胞数和划痕愈合面积分析细胞的侵袭和迁移活动。最终通过构建裸鼠肺转移模型对上述实验进行验证。结果:RhoC在OSCC中高表达,并和病理分期和病理分级等关联性大。RhoC的mRNA和蛋白相对表达量在OSCC中增高(P<0.01);RT-qPCR及Western blot结果显示,敲减RhoC表达后,RhoC的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.01),Western blot结果显示p-FAK、p-MAPK、MMP-2和MMP-9蛋白水平显著下降(P<0.05),FAK和MAPK蛋白表达无明显变化(P>0.05);细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01);实验组在动物活体荧光成像系统下发出的荧光强度显著低于对照组,且HE染色结果显示实验组裸鼠肺结节数量明显减少(P<0.05)。结论:RhoC基因可影响OSCC细胞的迁移和侵袭能力,其潜在机制可能是通过活化FAK和MAPK信号分子参与OSCC细胞的迁移和侵袭过程。

直肠癌RhoC基因表达与临床病理特点的关系

探讨RhoC基因在直肠癌的发生发展和侵袭转移中的作用 ,笔者观测了 64例直肠癌癌组织的RhoC基因表达水平与直肠癌组织临床病理特点的关系。结果显示 ,浸润超出浆膜层、有淋巴结转移和 /或肝肺转移灶的直肠癌 ,RhoC基因表达均较对照组明显升高 ,差异均有非常显著性(均 P <0 .0 0 1)。提示RhoC基因的高表达与直肠癌浸润转移有关 ,可作为判定直肠癌转移及预后的参考指标。

RhoC反义基因转染对人胆管癌QBC939细胞生长的抑制作用

目的 构建人 Rho C基因反义真核表达载体 ,研究 Rho C基因对胆管癌 QBC939细胞株增殖的影响。 方法 应用分子克隆技术 ,将含 Rho C基因全长开放阅读框目的片段克隆到真核载体 pc DNA 3.1/ Hyg(+)上 ,构建反义 Rho C c DNA真核表达载体 ,以脂质体转染人胆管癌 QBC939细胞。检测细胞生长曲线 ,RT- PCR检测Cyclin D1 在 QBC939细胞、转染空载体的 QBC939细胞 (QBC939- V)和转染反义 Rho C重组载体的 QBC939细胞(QBC939- AS)的 m RNA相对表达量。 结果 与 QBC939细胞及 QBC939- V细胞相比 ,QBC939- AS细胞体外生长较慢。 QBC939- AS细胞、QBC939- V细胞和 QBC939细胞的 Cyclin D1 的表达量分别为 0 .15 1± 0 .0 76 ,0 .2 96±0 .0 2 6和 0 .2 87± 0 .0 5 7;QBC939- AS细胞的 Cyclin D1 的表达量与 QBC939- V细胞及 QBC939细胞的差异有显著性 (P<0 .0 5 )。 结论 Rho C可能通过调节 Cyclin D1 来抑制 QBC939细胞的增殖能力。

RhoC基因对胆管癌细胞株QBC939细胞增殖和cyclinD1基因的影响

目的研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株的增殖及cyclinD1 mRNA表达的影响。方法将正、反义RhoC cDNA真核表达载体,转染人胆管癌细胞QBC939,检测细胞生长曲线,RT-PCR检测cyclinD1在QBC939细胞、转染空载体的QBC939细胞(QBC939-V)、转染正义RhoC的QBC939细胞(QBC939-S)、转染反义RhoC的QBC939细胞(QBC939-AS)的mRNA相对表达量。结果与QBC939及QBC939-V对照细胞相比,QBC939-S体外生长较快,QBC939-AS体外生长较慢,cyclinD1表达在QBC939-AS与对照组减少(P<0.05),cyclinD1表达在QBC939-S与对照组增加(P<0.05)。结论 RhoC可能通过调节cyclinD1来调控QBC939的增殖能力。

三氧化二砷抑制肝癌HepG2细胞侵袭转移及对RhoC基因表达的影响

目的了解三氧化二砷(As2O3)对肝癌HepG2细胞体外黏附、侵袭和迁移的抑制作用及对转移基因RhoC表达的影响,探讨As2O3抑制肝癌细胞转移的机制。方法分别采用MTT法、Transwell检测As2O3对HepG2细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响;采用RT-PCR、Westernblot方法检测As2O3作用前后HepG2细胞中RhoC基因的表达及变化。结果As2O3作用后HepG2细胞黏附率、侵袭及侵袭细胞数较对照组明显下降(P<0.05)。As2O3作用4、6、8天后RhoC-mRNA及蛋白表达水平逐渐下降(P<0.05)。HepG2细胞中RhoC-mRNA表达和蛋白表达具有相关性(r=0.92,P=0.046)。结论As2O3可明显抑制HepG2细胞细胞黏附、迁移和侵袭的能力;并可通过下调RhoC基因的表达而抑制其侵袭转移。

乙肝病毒X基因对肝癌细胞表达RhoC的影响

目的探讨X基因对肝癌细胞表达RhoC基因的影响。方法用定向克隆的方法构建X基因的真核表达载体pcDNA 3.1-X,脂质体转染HEPG 2细胞;潮霉素选择培养稳定表达X基因的HEPG 2-X细胞;免疫组化鉴定HEPG 2-X细胞RhoC蛋白表达。结果构建的真核表达载体pcDNA 3.1-X在HEPG 2细胞中有稳定表达,HEPG 2-X细胞表达RhoC蛋白增强。结论体外条件下,X基因可促进肝癌HEPG 2细胞RhoC表达增强。这可能与肝癌的侵袭、转移有关。

RhoC基因在原发性肝癌中的表达及其意义

目的 探讨原发性肝癌组织及癌旁肝组织中RhoCmRNA的表达及其意义。方法 采用RT-PCR技术分析 3 0例原发性肝癌病人的肝癌组织及癌旁肝组织中RhoCmRNA的表达。结果 肝癌组织中RhoCmRNA光密度相对值明显高于癌旁肝组织 (P <0 .0 1) ;有肝内转移灶者其癌组织中RhoCmR NA光密度相对值明显高于无肝内转移灶者 (P <0 .0 5 )。结论 RhoCmRNA的表达与原发性肝癌的转移程度可能有关 ,可望作为估计原发性肝癌转移的参考指标。

RhoC基因沉默对肝癌细胞Bel7402凋亡和迁移的影响

目的研究RhoC基因沉默对肝癌细胞Bel7402凋亡和迁移的影响。方法以RNAi沉默Bel7402细胞RhoC基因的表达,FACS和RT-PCR检测细胞凋亡和凋亡相关基因水平,细胞划痕损伤和软琼脂克隆形成试验检测细胞迁移和生长特性。结果RNAi组细胞凋亡率明显高于细胞对照组,RNAi组Bcl-2表达水平明显低于细胞对照组,只有RNAi组可检测到Bax基因的表达。两对照组细胞划痕损伤在48h内愈合,而RNAi组则不能修复。RNAi组软琼脂克隆形成能力明显低于两对照组。结论RhoC基因沉默能够促进肝癌细胞Bel7402凋亡并抑制细胞迁移和非锚定生长能力。

RhoC基因转染对胆管癌QBC 939细胞生物学行为的影响

目的将人RhoC正义、反义基因真核表达载体转染胆管癌QBC939细胞株,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖和侵袭能力的影响。方法以脂质体将包含正义、反义RhoC cDNA真核表达载体,分别转染人胆管癌QBC939细胞。应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化,Boyden小室侵袭实验检测侵袭及运动能力的变化。结果正义RhoC基因能促进胆管癌QBC939细胞增殖,流式细胞仪分析结果显示,转染后细胞出现G1期细胞减少;侵袭实验显示,转染后细胞侵袭能力较转染前有显著加强。反义RhoC基因能抑制胆管癌QBC939细胞增殖,流式细胞仪分析结果显示,转染后细胞出现G1期细胞增加;侵袭实验显示,转染后细胞侵袭能力较转染前有显著减弱。结论RhoC基因能够促进胆管癌QBC939细胞株的体外增殖和侵袭能力,反义RhoC基因可抑制胆管癌QBC939细胞的增殖和侵袭能力。

RhoC基因蛋白在直肠癌肝转移中的表达及其意义

目的 :探讨直肠癌肝转移病例直肠癌组织、肝转移癌组织和癌旁直肠黏膜组织中RhoC基因蛋白的表达水平及其意义。方法 :采用抗RhoC多克隆抗体SP免疫组织化学染色法 ,分析 4 6例直肠癌患者的癌组织、癌旁直肠黏膜组织和肝转移癌组织中RhoC基因蛋白的表达情况 ,并进行统计学分析。结果 :直肠癌组织、肝转移灶组织和癌旁直肠黏膜组织的蛋白表达灰度值分别为 (15 2 35± 14 0 1)u ,(138 5 2± 12 0 6 )u ,(117 6 3± 10 6 8)u。经t检验 ,三者有统计学意义 (P <0 0 5 )。结论 :RhoC基因蛋白的高表达与直肠癌转移有关 。

RhoC基因真核表达载体的构建及其表达

目的 为探讨RhoC基因的功能以及其对肝癌的侵袭转移的影响提供实验模型。方法 用限制性内切酶酶切RhoC基因 ,定向克隆到 pcDNA 3 .1上。利用脂质体将重组载体 (pcDNA 3 .1 RhoC)和空载体 (pcDNA 3 .1 )转染入HEPG2细胞 ,潮霉素选择培养 ,RT PCR及免疫组化鉴定其稳定表达。 结果 构建的真核表达载体 pcDNA 3 .1 RhoC在HEPG2细胞中有稳定表达。 结论 本实验为深入研究RhoC基因的功能以及其对肝癌的侵袭转移的影响提供了理想的体外实验模型。

反义RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株基质金属蛋白酶-9的抑制作用

目的 探讨反义RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株的金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法 通过质粒转染的方法向QBC939细胞中转染反义RhoC cDNA真核表达载体pcDNA 3.1Hyp(+)质粒,RT-PCR和Western-Blot检测MMP-9在QBC939细胞、转染空载体的QBC939细胞(QBC939-V)、转染反义RhoC的QBC939细胞(QBC939-AS)的mRNA和蛋白相对表达量.结果 对照组细胞QBC939中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.265±0.059)和(0.242±0.063),QBC939-V细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.257±0.039)和(0.303±0.031),而反义RhoC cDNA质粒转染组细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.125±0.062)和(0.095±0.043);对照组中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值均高于反义RhoC转染组,统计学分析表明在QBC939-AS组和对照组之间,MMP-9的平均光密度值差异有统计学意义(P<0.05).结论 反义RhoC基因在QBC939细胞株中可以抑制MMP-9表达.

RhoC慢病毒干扰载体的构建及其对卵巢癌SKOV3细胞中RhoC mRNA表达的影响

目的:构建慢病毒介导的能够稳定沉默卵巢癌SKOV3细胞中RhoC基因的干扰载体,观察其对卵巢癌SKOV3细胞中RhoC基因表达的抑制作用。方法:人卵巢癌SKOV3细胞分为psiHIV-RhoC1组(转染Lenti-shRhoC1)、psiHIV-RhoC2组(转染Lenti-shRhoC2)、阴性对照组(转染Lenti-NC)和空白对照组(未经转染)。观察各组SKOV3细胞中绿色荧光蛋白的表达;采用RT-PCR法检测各组SKOV3细胞中RhoC mRNA的表达水平。结果:psiHIV-RhoC1、psiHIV-RhoC2和阴性对照组SKOV3细胞中均可见绿色荧光蛋白的表达。成功构建了特异性干扰载体,将其转染至SKOV3细胞后,psiHIV-RhoC1和psiHIV-RhoC2组SKOV3细胞中RhoC mRNA的表达水平较空白对照组明显降低。结论:构建的重组慢病毒RhoC shRNA干扰载体能有效抑制SKOV3细胞中RhoC mRNA的表达。

siRNA沉默RhoC表达诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡

目的:研究siRNA沉默RhoC基因表达对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响及其机制,为肝癌的基因治疗提供实验依据。方法:构建RhoC-siRNA真核表达载体pU6mRFPRhoC-siRNA,转染BEL7402细胞,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blotting鉴定RhoC基因沉默效果;流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和瑞氏染色检测BEL7402细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果:成功构建pU6mRFPRhoC-siRNA重组载体,转染BEL7402细胞的效率为70%,RT-PCR和Western blotting检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞凋亡显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞[(21.00±2.23)%vs(6.47±1.64)%、(4.63±0.47)%,P<0.01)],pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞DNA呈典型的"梯状"条带,瑞氏染色见转染组BEL7402细胞中有大量凋亡细胞。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞Bcl-2基因水平显著低于、而Bax基因水平显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞(0.28±0.15vs0.96±0.21,1.03±0.24,P<0.05;1.09±0.21vs0.26±0.10,0.25±0.07,P<0.01)。结论:siRNA沉默RhoC基因可诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2基因、上调Bax基因表达有关。

RhoA、C干扰载体的构建及其对直肠癌HCT116细胞相应基因表达的影响

目的构建RhoA和RhoC干扰载体,观察其对结直肠癌细胞内RhoA和RhoC基因表达的抑制作用。方法设计合成针对人RhoA和RhoC基因序列的各4对含有小发夹结构的寡核苷酸序列,将其连入pGensil-1质粒中,构建特异性shRNA表达载体并转染结直肠癌细胞HCT116。应用荧光定量PCR法检测HCT116细胞中的RhoA和RhoC mRNA。结果成功构建了特异性shRNA表达载体,将其转染HCT116细胞后,细胞内RhoA和RhoC mRNA的表达水平与未转染组相比,P<0.05。结论构建的RhoA和RhoCshRNA干扰载体能有效抑制HCT116细胞的RhoA mRNA和RhoC mRNA表达。

结直肠癌组织中RhoC mRNA的表达及意义

目的观察RhoC mRNA在结直肠癌组织中的表达变化,探讨RhoC mRNA的表达在结直肠癌发生、发展和侵袭转移中的作用。方法实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测RhoC mRNA在结直肠癌、癌旁组织及大肠正常黏膜中的表达及其与结直肠癌临床病理学指标的关系。结果RhoC mRNA在结直肠癌组织中的表达较癌旁组织及正常黏膜组织明显增高(P<0.05)。RhoC mRNA的表达与结直肠癌的淋巴结转移、肝转移及肠壁浸润深度有关(P<0.05)。结论RhoC mRNA表达与结直肠癌的发生、发展和侵袭转移密切相关。

非小细胞肺癌RhoC及PTEN的表达水平及相关性研究

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)RhoC及PTEN)的表达水平,为探讨评估NSCLC恶性程度、转移及预后提供参考。方法:选取NSCLC病理标本112例,进行免疫组化SP染色,观察RhoC及PTEN表达情况。结果:RhoC、PTEN蛋白表达与患者性别、年龄、组织学类型无明确的相关性,而与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移有关。结论:RhoC蛋白往往呈现高表达、PTEN蛋白过低表达的现象,RhoC、PTEN蛋白具有较好的相关性。

RhoC、Bmi-1在食管鳞癌中浸润转移及其与预后的关系

目的探讨食管鳞癌组织中RhoC、Bmi-1基因表达及其对预后的影响。方法采用免疫组织化学方法检测RhoC、Bmi-1基因在80例食管鳞癌患者中的表达,应用检验、COX回归模型和Kaplan-Meier生存曲线检测分析其与患者预后的关系。结果在食管癌组织中RhoC、Bmi-1蛋白表达明显高于食管正常黏膜组织(72.5%和30.0%,78.8%和5.0%,P<0.05)。RhoC、Bmi-1的表达与食管浸润深度、淋巴结浸润有关(P均<0.05),但与年龄、民族无关。RhoC和Bmi-1的表达呈正相关(r=0.338,P<0.05)。10年总生存率为20.0%。单因素Kap-lan-Meier生存分析表明,食管癌RhoC、Bmi-1高表达组较低表达组有生存优势,但差异无统计学意义。Cox模型多因素分析表明,RhoC和Bmi-1不是影响生存期的独立因素,而肿瘤浸润深度和转移是影响生存期的独立因素。结论 RhoC、Bmi-1在食管癌组织中表达均较高,其表达水平与食管肿瘤的发生发展有一定的关系,结合临床病理可作为判断预后的指标。

Expression and significance of RhoC gene in hepatocellular carcinoma

AIM: To investigate the expression of RhoC gene inhepatocellular carcinoma (HCC) and to evaluate therelationship between RhoC gene expression and invasionand metastasis of HCC.METHODS: mRNA expression level of RhoC gene wasexamined by reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) in 25 cases of HCC and para-cancerous normalliver tissues. In addition, mutation of RhoC gene wasexamined by polymerase chain reaction-single strandconformational polymorphism (PCR-SSCP).RESULTS: The mRNA expression levels of RhoC in tumortissues were significantly higher than those in para-cancerousnormal liver tissues (1.8±1.1 vs 1.0±0.7, P＜0.01). Themetastatic lesions outside of liver also showed significantlyhigher RhoC mRNA levels than corresponding tumor tissuesin liver (3.3±0.5 vs2.0±0.7, P＜0.01). There were significantassociations between RhoC gene expression and certainclinical and pathological findings, including celldifferentiation, vein invasion, number of tumor nodes andmetastatic lesions. Mutation of RhoC gene was not foundby PCR-SSCP.CONCLUSION: The RhoC gene may be related to malignanttransformation and development of HCC and may play animportant role in the invasion and metastasis of HCC byoverexpression but not mutation.

RhoC基因及蛋白在胃癌肝转移中的表达及意义

目的 探讨胃癌肝转移中胃癌组织及肝转移癌组织中RhoCmRNA及蛋白的表达和意义。方法 采用逆转录 聚合酶链式反应技术 (RT PCR)分析 2 8例胃癌患者的癌组织 (GC)及癌旁胃粘膜组织 (PGMT)、肝转移癌 (ML)组织中RhoCmRNA及蛋白的表达 ;免疫组织化学染色分析RhoC蛋白的表达情况。结果 GC组织中RhoCmRNA吸光度相对值为 0 .13 5± 0 .0 65 ;PGMT的吸光度相对值为 0 .118± 0 .0 74,两者差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;ML中RhoCmRNA吸光度相对值为 0 .64 1± 0 .113 ,与GC相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。RhoC蛋白的表达中 ,肝转移灶者、胃癌组织、癌旁胃粘膜组织的灰度值分别为 (12 8.5 2 3± 11.486)U ,(14 6.694± 7.0 79)U ,(162 .3 5 1±14 .612 )U ,经t检验 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;ML中RhoCmRNA及蛋白吸光度相对值明显高于GC(P <0 .0 5 )。结论 RhoCmRNA及蛋白的表达与胃癌转移有关 ,可作为判定胃癌转移及预后的指标。