TSLC1基因异常甲基化及与HPV的关系在宫颈癌发生发展中的意义

目的:探讨TSLC1基因启动子甲基化状态以及与HPV感染的关系在子宫颈癌发生发展中的意义。方法:用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测68例原发性宫颈癌,67例CIN及29例慢性宫颈炎症石蜡包埋组织中TSLC1基因甲基化状态。用聚合酶链反应(PCR)法检测人乳头瘤病毒(HPV)DNA的感染状况。结果:宫颈癌组织中45例异常甲基化(66.2%),其中鳞癌67.8%(40/59),腺癌55.5%(5/9);67例宫颈上皮内瘤变组织中29例可见异常甲基化(43.3%);29例慢性炎症组织中2例甲基化(6.9%);将鳞癌、腺癌、CIN与慢性炎症比较,鳞癌与CIN比较,CINⅡ～Ⅲ与CINⅠ比较均显示差异有统计学意义(P<0.05),腺癌与CIN比较,鳞癌分化程度之间的差异无统计学意义(P>0.05)。HPV感染率宫颈癌组51.5%(35/68),CINⅠ23.1%(6/26),CINⅡ～Ⅲ41.5%(17/41),慢性炎症组17.2%(5/29);TSLC1甲基化与HPV感染相关性比较,CIN组之间差异有统计学意义(P<0.05),宫颈癌组之间的差异则无统计学意义(P>0.05)。结论:TSLE1基因启动子区CPG岛的高甲基化是导致TSLC1基因失活的重要机制,可能参与宫颈癌的发生;它与HPV之间的关系提示TSLC1基因可能是宫颈细胞癌变过程中的早期事件。

喉癌组织中TSLC1基因启动子过甲基化及mRNA表达

目的:探讨TSLC1基因启动子区过甲基化与喉癌的关系.方法:采用甲基化特异性PCR和RT-PCR法分析喉部正常粘膜、声带息肉、喉癌细胞Hep-2和喉癌组织中TSLC1基因启动子区过甲基化及其mRNA表达状况.结果:40例喉癌组织中,有21(52.5%)例TSLC1基因启动子区过甲基化,其在各病理分级、临床分期和分型之间差异无统计学意义(P>0.05),而在N分级(N0和N1)之间差异有统计学意义(P<0.05).喉癌细胞Hep-2也显示TSLC1基因启动子区过甲基化.RT-PCR结果显示,TSLC1 mRNA在所有甲基化的喉癌组织和喉癌细胞Hep-2中均无表达,而喉部正常组织,声带息肉组织和非甲基化的喉癌组织中均有表达.结论:喉癌组织中TSLC1基因启动子区过甲基化与其mRNA失表达有关,可能是喉癌发生、发展的原因之一,可作为喉癌诊断和预后分析的检测指标.

TSLC1基因甲基化与宫颈癌HeLa细胞凋亡相关性的研究

目的研究天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中肿瘤抑制基因TSLC1的甲基化的变化情况,并探讨其在宫颈癌的发生发展中的作用及细胞凋亡和抑癌基因甲基化的相关性,寻找新型的去甲基化药物。方法应用MTT法检测对HeLa细胞增殖抑制的影响;流式细胞仪分析天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞诱导凋亡作用;甲基化特异性PCR技术(MSP)检测天花粉蛋白处理前、后宫颈癌HeLa细胞中TSLC1基因启动子区CpG岛的甲基化的变化情况。结果宫颈癌HeLa细胞中TSLC1基因启动子区CpG岛是呈高度的甲基化状态,经天花粉蛋白处理后,HeLa细胞生长明显受抑,流式细胞仪分析出有特征性的亚二倍体凋亡峰,TSLC1基因启动子区CpG岛无异常甲基化表现。结论天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中对TSLC1基因有明显的去甲基化作用,可能是新型的甲基化抑制剂,肿瘤细胞凋亡与抑癌基因的甲基化失活之间可能存在某些相关性。并且TSLC1基因甲基化的检测有可能成为宫颈癌的早期诊断和指导临床治疗的又一指标。

人类TSLC1基因克隆及真核表达载体的构建

目的克隆人类TSLC1基因并构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)/TSLC1.方法从正常皮肤组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增TSLC1基因全长cDNA,克隆入pMD18-T载体并转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切鉴定均为阳性的克隆,进行核苷酸测序分析,再将TSLC1基因定向克隆入pcDNA3.1(+)载体中构建表达载体.结果RT-PCR扩增后的产物在约1413bp处出现明显的特异性条带,TSLC1基因的cDNA片段被成功插入真核表达载体pcDNA3.1(+)质粒的多克隆位点,经鉴定与GenBank收录的TSLC1 cDNA序列一致.结论TSLC1基因的cDNA片段被成功克隆,为以后的研究奠定了基础.

实时荧光PCR检测宫颈组织TSLC1基因表达

目的建立检测肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)基因mRNA表达的实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法。方法设计特异性引物和TaqM an探针,以3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因作为对照,建立检测TSLC1基因表达的实时荧光PCR方法,并采用细胞株和宫颈组织样本进行验证。结果该方法检测TSLC1基因mRNA的检测下限为每反应10个细胞或2拷贝cDNA,总不精密度为3.1%。TSLC1基因mRNA在子宫肌瘤、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)与宫颈癌患者宫颈组织中的表达率分别为100%、75%、55%和24%。宫颈癌细胞株中未检出TSLC1基因mRNA表达。所有样本中均有GAPDH基因mRNA表达。结论该实时荧光PCR方法能够有效检测TSLC1基因mRNA表达,是进一步研究TSLC1基因在宫颈癌发生中的作用及宫颈癌早期诊断的重要工具。

实时荧光PCR检测宫颈组织TSLC1基因方法的建立和应用

目的 建立实时荧光PCR检测宫颈组织TSLC1基因的方法,提高TSLC1基因检测方法的灵敏度和精密度.方法 用Light Cycler（R） R480 PCR仪根据设计好的引物与探针,在一定的反应条件下检测宫颈组织TSLC1基因,采用罗氏Light Cycler（R） R480 PCR专用软件进行数据分析.结果 该方法最低检测量为103 copies/ml,检测范围为107～102 copies/ml,10次总的Ct值CV为1.7%.结论 所建立的实时荧光PCR检测各类宫颈组织,正常组织低度鳞状上皮内病变（LSIL）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）、宫颈癌组织TSLC1基因的表达率分 别为100%,72%,56%,23%,可以作为进一步研究TSLC1基因表达在肿瘤早期诊断中的价值的重要工具.

人原发性肺癌组织中TSLC1基因甲基化检测及意义

目的探讨TSLC1基因启动子区甲基化状态与人原发性肺癌发生发展之间的关系方法采用甲基化特异性聚合酶链技术(MSP),对53例人原发性肺癌组织(肺癌组)、24例肺良性病变组织(良性病变组)、15例癌旁组织(癌旁组)及11例支气管鳞状化生组织进行TSLC1基因5’-CpG岛甲基化状态检测。结果肺癌组、癌旁组和肺良性病变组的TSLC1基因甲基化率分别为35.8%(19/53)、13.3%(2/15)、0.0%(0/24),三组相比差异有统计学意义(P<0.05);支气管鳞状化生组织的甲基化阳性率为18.2%(2/11)。TSLC1基因甲基化率肺癌吸烟者与非吸烟者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSLC1基因启动子区甲基化与肺癌的发生关系密切,可能出现在肺癌发生的早期阶段。

天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞TSLC1基因甲基化及其表达的影响

目的:检测人宫颈癌HeLa细胞中TSLC1基因甲基化的状况,研究在人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中TSLC1基因甲基化的变化情况,探讨肿瘤细胞凋亡与抑癌基因甲基化的相关性,并进一步证实天花粉蛋白(TCS)去甲基化作用是否存在普遍性,以促进天花粉蛋白的临床应用。方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测人宫颈癌HeLa细胞及其凋亡过程中TSLC1基因甲基化的状况;采用实时定量RT-PCR技术检测TCS处理前、后HeLa细胞TSLC1基因表达的变化。结果:肿瘤抑制基因TSLC1在人宫颈癌HeLa细胞中呈高度甲基化状态,经40μg/mLTCS处理48h后,TSLC1基因甲基化程度明显降低;RT-PCR检测结果显示,TCS处理组HeLa细胞中TSLC1mRNA的表达量高于未处理组,提示TSLC1基因启动子区CpG岛甲基化是导致其低表达的重要机制。结论:肿瘤抑制基因TSLC1启动子甲基化在人宫颈癌癌变过程中可能是一种重要的分子调控机制;人宫颈癌HeLa细胞凋亡与抑癌基因的去甲基化之间可能存在某些密切的相关性;TCS对肿瘤抑制基因TSLC1有一定的去甲基化作用。

苦参碱及联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞中TSLC1基因表达的影响

目的探讨苦参碱及联合顺铂对宫颈癌Si Ha细胞中TSLC1基因表达的影响。方法以人宫颈癌细胞株Si Ha细胞株为试验材料,采取甲基偶氮唑蓝法检测并计算细胞抑制率。采取实时荧光逆转录聚合酶联反应法分析TSLC1 mRNA基因表达情况。结果顺铂、苦参碱联合顺铂均可显著抑制Si Ha细胞体外增殖,差异具有统计学意义(P<0.05);随着用药浓度的增加,抑制作用增强,不同浓度两两比较,差异具有统计学意义(P<0.05);联合组细胞抑制率高于苦参组、顺铂组,差异具有统计学意义(P<0.05)。三组用药后,TSLC1基因表达水平均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);随着浓度的增加,影响效果更强,组间不同浓度两两比较,差异具有统计学意义(P<0.05);联合组高于顺铂组、苦参碱组,同浓度比较,差异具有统计学意义(P<0.05);顺铂组与苦参碱组同浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论苦参碱及联合顺铂对宫颈癌Si Ha细胞中TSLC1基因表达有抑制作用,且与药物浓度呈剂量依赖性。

乳癌组织TSLC1基因mRNA表达及启动子甲基化状态

目的探讨乳癌组织中非小细胞肺癌抑制因子(TSLC1)基因mRNA表达及其启动子甲基化状态。方法应用实时荧光定量PCR和甲基化特异性PCR,分别检测39例人乳癌组织及对应癌旁组织中TSLC1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态,并探讨二者之间的关系。结果乳癌组织中TSLC1mRNA的表达量是癌旁组织的0.44倍。乳癌组织及癌旁组织中TSLC1基因甲基化率分别为56.4%、10.3%,乳癌组织中TSLC1基因甲基化率明显高于相应癌旁组织(χ2=16.673,P<0.01)。甲基化的癌组织中TSLC1mRNA的表达量是非甲基化者的0.60倍,表达TSLC1mRNA的癌组织的甲基化率为50%,不表达者为100%,两者之间差异有显著性(P=0.046)。结论 TSLC1基因异常甲基化是其在乳癌组织中表达缺失或下调的原因之一,在乳癌的发生发展中起一定作用,可能成为乳癌的早期诊断及治疗靶点基因之一。

TSLC1在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的:研究食管鳞状细胞癌组织中肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)基因的表达及临床病理意义,探讨其在食管鳞状细胞癌发生、发展过程中的作用。方法:应用免疫组化(SP法)检测50例食管鳞状细胞癌标本及癌旁正常食管组织中TSLC1基因的表达情况,分析其与食管鳞状细胞癌患者临床病理学参数之间的关系。结果:50例食管鳞状细胞癌组织中TSLC1基因表达阳性率为48.0%(24/50),其表达与癌组织浸润深度、区域淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。与性别、年龄、肿瘤大体分型、肿瘤大小、位置、分化程度无关(P>0.05)。50例癌旁正常食管组织中TSLC1基因高表达,阳性率为94.0%(47/50)。食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率显著低于癌旁正常食管组织,两者相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:食管鳞状细胞癌组织中有明显的TSLC1基因的表达缺失,TSLC1蛋白表达缺失与食管鳞状细胞癌的发生、发展有关。

Construction of eukaryotic expression vector carrying human TSLC1 gene and its expression in HepG2 cells

Objective： To construct the eukaryotic expression vector for human TSLC1 gene, and to express TSLC1 in HepG2 cells for investigating its effect on HepG2 cell growth. Methods： Full length of TSLC1 cDNA was amplified from RNA of normal human liver by RT-PCR, and cloned into pCI-neo expression vector. The recombinant plasmid pCI-TSLC1 was identified with restriction enzyme and sequenced, and then was stably transfected into HepG2 cells with lipofectamine 2000. The positive clones were examined by western-blotting and immunofluorescence, cell growth was analyzed with MTT assay. Results： The eukaryotic expression vector pCI-TSLC1 was successfully constructed and the stable cell line highly expressing TSLC1 protein was obtained. The growth of TSLCl-transfected cells was significantly suppressed in vitro. Conclusion： The HepG2 stable cell line could highly express TSLC1 protein, which provided a basis for further exploring the roles of TSLC1 in hepatocellular carcinoma.

TSLC1和BLU基因在鼻NK/T细胞淋巴瘤中CpG岛甲基化研究

目的了解鼻NK/T细胞淋巴瘤中抑癌基因TSLC1和BLU的甲基化状况,并探讨其在鼻NK/T细胞淋巴瘤发生发展中的作用及与临床病理参数之间的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测30例鼻NK/T细胞淋巴瘤、10例鼻咽淋巴组织增生中TSLC1和BLU基因启动子区的甲基化状况;应用原位杂交方法对30例鼻NK/T细胞淋巴瘤进行EB病毒检测。结果30例鼻NK/T细胞淋巴瘤中,TSLC1和BLU基因的甲基化频率分别为83.3%(2/530)和50.0%(1/530),且TSLC1和BLU基因中至少有1个抑癌基因发生甲基化的频率为86.7%(2/630);10例鼻咽淋巴组织增生中,2例发生了TSLC1基因甲基化,而BLU基因全部甲基化阴性而非甲基化阳性。未发现TSLC1和BLU基因CpG岛甲基化与EB病毒感染有关。TSLC1和BLU基因启动子区CpG岛甲基化与临床病理特征之间均无统计学相关性(P>0.05)。结论30例鼻NK/T细胞淋巴瘤中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件。两种抑癌基因启动子区CpG岛均具有很高的甲基化频率,表明其在鼻NK/T细胞淋巴瘤的发生发展中具有重要作用,可能对肿瘤的早期诊断及预后评估具有重要意义。

2个基因在宫颈不同病变表达、与HPV感染相关性及诊断宫颈癌的意义

目的研究脆性组氨酸三联体基因(FHIT)及肺癌抑制因子(TSLC1)基因在宫颈不同病变的表达、与人乳头瘤(HPV)感染相关性及诊断宫颈癌的意义。方法选取2016年6月-2017年6月纳入182例妇科患者的临床资料,根据诊断结果分为:对照组(正常人)45例、宫颈内上皮瘤变(CIN)Ⅰ组45例、宫颈内上皮瘤变(CIN)组Ⅱ-Ⅲ55例和宫颈癌组37例。观察TSLC1和FHIT在正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中的基因表达情况,研究TSLC1与FHIT在宫颈癌临床病理中的特点,分析2种基因与HPV感染的相关性,探讨TSLC1与FHIT在诊断宫颈癌的价值。结果 4组的高危HPV感染率有差异(P<0.01),4组的FHIT和TSLC1基因表达有差异(P<0.01)。FHIT、TSLC1表达在不同FIGO分期、不同分化及病理类型无统计学差异(P>0.05)。CINⅠ-Ⅲ组与宫颈癌组患者FHIT、TSLC1基因表达正常时的HPV感染率为0例(0.00%),FHIT、TSLC1基因表达缺失的HPV感染率升高(P<0.05)。FHIT、TSLC1基因表达情况与HPV感染呈显著性相关,两种基因表达缺失的患者HPV感染率升高(P<0.05)。FHIT基因缺失诊断宫颈癌的ROC的灵敏性为85.64%,特异性为82.33%;FHIT基因缺失诊断宫颈癌的ROC的灵敏性为88.52%,特异性为83.49%;两者缺失联合诊断宫颈癌的ROC的灵敏性为92.46%,特异性为95.32%,FHIT联合TSLC1基因缺失诊断宫颈癌的临床价值较单独基因缺失诊断价值高,差异显著(P<0.05)。结论TSLC1、FHIT基因表达在宫颈癌和HPV发生早期时会出现表达缺失。高危HPV感染患者早期行TSLC1、FHIT基因检测可提高宫颈癌的诊断率,此方法值得临床推广应用。