髓母细胞瘤比较基因组杂交分析及ERBB-2异常表达的意义

目的研究髓母细胞瘤全基因组的遗传学异常,探讨癌基因的异常表达在髓母细胞瘤发病机制中的作用以及与预后的关系。方法应用比较基因组杂交(comparativegenomichybridization,CGH)技术检测14例髓母细胞瘤全基因组的遗传学改变;同时,在扩大系列的29例髓母细胞瘤中,应用荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)和免疫组化染色分别检测ERBB2在基因水平和蛋白水平的表达。结果(1)CGH结果显示,在所有14例髓母细胞瘤标本中,每一条染色体臂上都检测到了染色体的失衡(获得或丢失),最常见的染色体异常为17q(85.7%)和7q(35.7%)的获得,以及8p(50%)、16q(28.6%)和17p(35.7%)的丢失;(2)FISH检测中,44.5%(13/29例)的肿瘤细胞有ERBB2基因的异常表达;(3)免疫组化结果显示,37.9%(11/29例)的病例有抗体cerbB2的阳性表达;(4)在预后较差的16例患者中,56%(9/16例)的病例有ERBB2的过度表达。结论CGH研究发现了髓母细胞瘤全基因组的染色体失衡。在染色体17q特异性位点上ERBB2基因的异常改变很可能在髓母细胞瘤的发病机制中起着重要的作用,其过度表达与患者的预后密切相关。

结直肠癌中C-erbB-2基因扩增与KRAS基因突变的意义

目的探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2,又为C-erbB-2)基因与鼠类肉瘤病毒癌基因(Kirsten rat sarcoma viral oncogene,KRAS)突变情况及其与临床病理特征的关系。方法回顾性分析238例结直肠癌患者相关临床资料。采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法检测结直肠癌组织中的C-erbB-2扩增情况。采用荧光实时定量聚合酶链式反应(real time quantity polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测KRAS的突变情况,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果结直肠癌中C-erbB-2总扩增率为1.7%(4/238),KRAS总突变率为36.9%(88/238)。C-erbB-2扩增在年龄、性别、肿瘤发生部位、组织学分型、分化程度、淋巴结转移、Duke's分期及浸润深度等方面比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。KRAS突变在淋巴结转移及Duke's分期方面比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。C-erbB-2与KRAS二者表达无相关关系(r=0.086,P=0.184)。结论结直肠癌发生和发展过程中C-erbB-2扩增与KRAS突变无相关性,KRAS突变与淋巴结转移和Duke's分期有关。

乳腺癌C-erbB-2蛋白表达与基因CpG岛甲基化状态和mRNA表达的关系

目的探讨乳腺癌C-erbB-2蛋白表达与基因CpG岛甲基化状态和mRNA表达的关系。方法取经病理确诊的52例乳腺癌组织,分别用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)、免疫组织化学法(IHC)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测C-erbB-2启动子CpG岛甲基化状态、C-erbB-2蛋白表达水平和C-erbB-2 mRNA的表达。结果 C-erbB-2蛋白阴性和阳性的2组乳腺癌组织的非甲基化率分别为0%和23.5%,CpG岛低甲基化与C-erbB-2蛋白表达呈显著正相关(r=0.413,P=0.03)。C-erbB-2蛋白阴性和阳性组织中C-erbB-2 mRNA表达量分别为0.098±0.041和0.20±0.062,与C-erbB-2蛋白表达呈显著正相关(r=0.356,P=0.03)。结论 C-erbB-2启动子CpG岛的低甲基化和C-erbB-2 mRNA的表达均与C-erbB-2蛋白的高表达相关,C-erbB-2基因启动子的低甲基化可能在C-erbB-2蛋白过度表达中起一定作用。

c-erbB-2基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的相关性

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系。方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线。结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05)。存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株间D0值无显著性差异(F=0.287,P>0.05),CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株间Dq值均有显著性差异(P值分别<0.05、<0.05、<0.01)。结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;3种细胞株中,CALU-3对γ射线最不敏感,NCL-H520最敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关。

乳腺癌患者c-erBb-2基因荧光定量PCR方法的研究

目的:建立乳腺癌中c-erbB-2基因的荧光定量PCR(FQ-PCR)方法。方法:乳腺癌细胞中的c-erbB-2基因与质粒PGEM-Teasy vector重组,转化大肠杆菌E.coliDH5α,获得克隆的c-erbB-2基因标准模板。用ABI PRISM7700PCR仪检测FQ-PCR扩增产物制成标准曲线来检测未知标本中c-erbB-2的含量。结果:FQ-PCR扩增产物呈“S”形动力学曲线;ct(循环阈值)与PCR体系中起始模板拷贝数的对数值之间存在严格的线性关系,显示了FQ-PCR定量的准确性。结论:FQ-PCR是一种快速、简便、灵敏、准确的定量c-erbB-2基因的方法。

C-erbB-2及VEGF基因蛋白在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:探讨C-erbB-2及VEGF基因蛋白在宫颈癌的表达及临床意义。方法:用免疫组化SP法检测60例宫颈癌组织、20例宫颈CIN组织和10例正常宫颈组织中C-erbB-2及VEGF基因蛋白的表达。结果:在宫颈癌组织、宫颈CIN组织和正常宫颈组织中,C-erbB-2阳性表达率分别为61.7%、35.0%和10.0%,VEGF阳性表达率分别为70.0%、35.0%和20.0%,组间差异有统计学意义(均P<0.05)。宫颈癌组的不同临床分期、不同病理学分级、有无淋巴结转移及不同肿瘤体积组间比较,C-erbB-2和VEGF的阳性表达率均有显著性差异(均P<0.05),且二者表达强度呈显著正相关(P<0.05)。C-erbB-2及VEGF表达阳性者较C-erbB-2及VEGF表达阴性者5年生存期显著缩短(均P<0.05)结论:C-erbB-2和VEGF基因蛋白的异常表达与宫颈癌的发生、发展有关,二者联合检测可作为评估宫颈癌恶性程度、预后及指导治疗的重要参考指标。

血清性激素水平及癌基因c-erbB-2在胃癌中的表达及临床意义

目的 :探讨胃癌患者血清性激素水平及癌组织中c erbB 2基因表达的临床意义。方法 :采用放射免疫法 ,测定 67例胃癌患者血清黄体生成素 (LH ) ,卵泡刺激素 (FSH) ,催乳素 (PRL) ,睾酮 (T )及雌二醇 (E )水平 ,同时检测癌组织中c erbB 2基因表达。结果 :胃癌患者LH、FSH、PRL水平均高于对照组 ,P >0 0 5 ,T、E2 水平低于对照组。其中 ,男性胃癌患者血清T水平显著低于对照组 ,P <0 0 5 ,与胃癌浸润深度 (P <0 0 5 )、肿瘤大小 (P <0 0 5 )、淋巴结转移 (P <0 0 5 )密切相关 ;胃癌组织中 ,c erbB 2基因表达阳性率为 3 7 3 1% (2 5 /67) ,与胃癌浸润深度(P <0 0 5 )、淋巴结转移 (P <0 0 5 )密切相关 ,与肿瘤大小无关。结论 :男性血清T水平及c erbB 2基因与胃癌生长、浸润、转移有密切关系 ,可作为判断预后的独立指标。

C—erbB-2及突变型P53基因均为阴性乳腺癌Ki-67表达状况分析

目的探讨C-erbB-2、突变型P53基因表达均为阴性乳腺浸润性癌Ki-67表达与肿瘤大小、淋巴结转移状况、ER、PR、月经状态的关系。方法选取2002年1月至2011年12月行行根治术的乳腺浸润性癌病例，其中C—erbB-2、突变型P53基因均为阴性乳腺癌共61例，回顾性分析了Ki-67表达状况，以及Ki-67的表达与肿瘤大小、淋巴结转移状况、ER、PR、月经状态的关系。结果Ki．67阳性表达率为45．90％，Ki-67的表达与肿瘤大小、淋巴结转移状况、ER、PR无显著相关（P〉0．05），与月经状态相关（P〈0．05）。结论C．erbB．2、突变型P53基因表达均为阴性乳腺浸润性癌Ki-67可作为绝经前乳腺癌判断预后的指标。

在直肠癌组织中检测细胞凋亡及c-erbB-2癌基因表达的意义

目的:探讨直肠癌细胞凋亡及c-erbB-2癌基因表达与直肠癌预后的关系。方法:应用免疫组化TUNEL及SP法对106例直肠癌进行细胞凋亡及c-erbB-2癌基因表达检测,并分别以已知阳性对照切片作为阳性对照。结果:不同分化程度直肠癌中,细胞凋亡及c-erbB-2的阳性率不同。分化程度高,则细胞凋亡率高;分化程度低,则c-erbB-2阳性率高。同时有细胞凋亡和c-erbB-2阳性表达的几率在低分化直肠癌中最高。结论:细胞凋亡及c-erbB-2可作为判定直肠癌预后的可靠指标。

非小细胞肺癌细胞株c-erbB-2基因的表达

目的:分析非小细胞肺癌细胞株中人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因的mRNA水平和蛋白水平。方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株c-erbB-2蛋白水平。结果:肺腺癌CALU-3细胞株c-erbB-2mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P>0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:c-erbB-2基因在肺腺癌CALU-3细胞株中的表达均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株。

人胃癌裸鼠原位移植瘤P53、c-erbB-2癌基因蛋白免疫组化和超微结构的研究

为探讨胃癌的分子发病机制及为实验治疗提供理想动物模型 ,采用显微外科原位移植技术 ,将 47例人胃癌标本移植裸鼠胃粘膜层 ,观察原位移植成瘤、侵袭和转移情况 ,及P5 3、c erbB 2、raSP2 1癌基因的表达和形态学特征。从 47例胃癌标本中筛选出的人胃腺癌、鳞癌、鳞腺癌三株裸鼠原位移植模型 ,对三种癌蛋白均呈阳性表达 ,并与肿瘤生长方式、侵袭深度和淋巴结转移有关 ,超微结构观察发现移植瘤与来源人胃癌细胞相似。此模型可用于研究胃癌的分子发病机制、侵袭。

表皮生长因子及其受体与癌基因C-erbB-2在肾癌中研究进展

表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）与原癌基因ｅｒｂＢ－２产物（Ｐ１８５）均为具有酪氨酸激酶活性的受体蛋白，但两者结构不同，在某些肿瘤组织中表达不同。受体酪氨酸激酶在多细胞生物体发展过程中起协调和控制作用，与肿瘤形成有关。本文综述了表皮生长因子／受体、ｅｒｂＢ－２的一般生物学特性及其与肾癌生物学方面的联系。

erbB-2基因及其致癌机制

ｅｒｂＢ－２基因定位于人类染色体１７ｑ^（２１）；编码产物为Ｐ_（１８５）。该基因在人类多种肿瘤中通过扩增和／或转录异常而致癌。本文从分子水平对ｅｒｂＢ－２基因（包括Ｐ_（１８５））的特性、致癌机制及其基因治疗前景等作一综述。

ErbB-2转基因小鼠乳腺癌干细胞的分离培养

目的:分离、培养ErbB-2转基因小鼠乳腺癌干细胞(BRCSCS),探讨其生物学特性及培养传代条件,为药敏试验及动物实验进行基础性研究。方法:从ErbB-2转基因小鼠乳腺癌组织中获取乳腺癌细胞(BRCCS),然后以FITC标记的CD24、CD44抗体标记细胞,通过流式细胞仪检测并分选CD44+CD24-/low细胞。结果:Erb-B2转基因小鼠乳腺癌组织中CD44+CD24-/low细胞约占细胞总数的2.6%(2.3%～2.9%)。结论:小鼠乳腺癌组织中存在CD44+CD24-/low且具有干细胞特性的BRCCS,利用流式细胞仪可成功地将其从小鼠乳腺癌组织中分离出来。

C—erbB-2基因和巨噬细胞移动抑制因子在妇科恶性肿瘤中的研究进展

妇科恶性肿瘤和其它恶性肿瘤最基本的特征为局部浸润和远处转移，此特征与新生血管的形成有密切关系。最近的研究中发现C—erbB-2基因和巨噬细胞移动抑制因子（MIF）可促进肿瘤的血管形成，与肿瘤的生长，浸润和转移密切相关。因此联合检测C—erbB-2基因和MIF对妇科恶性肿瘤的诊断和预后有重要的价值。

荧光原位杂交与免疫组化检测乳腺癌组织Her-2/neu基因扩增或表达情况的比较

目的比较荧光原位杂交法(FISH)与免疫组化法(IHC)对乳腺癌组织中Her-2状态检测结果的差异性和相关性。方法以IHC法检测20例乳腺癌细胞膜上的Her-2蛋白,以FISH法检测上述乳腺癌细胞内的Her-2/neu基因扩增情况,以χ2检验对两种方法检测结果的相关性进行分析。结果两种方法检测结果的总符合率为85·0%,二者之间存在显著正相关(χ2=80·00,P=0·000)。结论IHC法与FISH法在检测乳腺癌Her-2状态方面有良好的一致性。

IHC和FISH检测乳腺癌组织HER-2基因扩增及蛋白表达

目的分析比较荧光原位杂交(FISH)与免疫组织化学(IHC)检测乳腺癌组织HER-2基因扩增或蛋白表达情况。方法选择2008年1月至2012年5月行改良根治术的乳腺癌患者110例,对手术切除的乳腺癌组织均予以FISH与IHC检测,对检测结果进行比较分析。结果 110例乳腺癌组织中HER-2蛋白表达为(+++)者25例(22.73%);(++)者44例(40.00%);(+)者26例(23.64%);(-)者15例(13.64%)。110例乳腺癌组织中HER-2基因扩增28例(25.45%),无扩增82例(74.55%)。IHC检测阳性(+++)与FISH的阳性符合率一致,IHC检测阴性(+/-)与FISH的阴性符合率一致,IHC检测可疑阳性(++)与FISH结果比较,差异有统计学意义(P<0.05)。但IHC检测结果与FISH检测结果的总符合率为89.29%(25/28),两种检测方法呈正相关(χ2=84.89,P<0.01)。结论 IHC阳性及阴性表达,与FISH检测结果具有较好一致性。IHC可疑阳性表达,与FISH检测结果的一致性较差,提示IHC检测可疑阳性标本需再以FISH检测。

肿瘤标志物Bcl-2和c-erbB-2在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨肿瘤标志物Bcl-2和c-erbB-2在乳腺癌中的表达和两者的相关性。方法应用免疫组化方法对70例乳腺恶性肿瘤标本和24例纤维腺瘤标本进行Bcl-2和c-erbB-2癌基因蛋白检测。结果Bcl-2和c-erbB-2在乳腺癌中的阳性率分别为68.1%和67.1%;在纤维腺瘤中的阳性率分别为87.5%和0%。Bcl-2和c-erbB-2的阳性表达与有无淋巴结转移呈显著相关。乳腺癌中Bcl-2和c-erbB-2的阳性表达呈负相关(r=-0.28)。结论乳腺癌中Bcl-2的高表达提示患者的预后较好,c-erbB-2的高表达提示患者预后较差。

靶向Her2基因SiRNA对人卵巢癌细胞株SKOV-3顺铂敏感性的影响

目的通过siRNA沉默Her2基因的表达探讨其对卵巢癌细胞株SKOV-3顺铂(DDP)敏感性的影响。方法靶向Her2的siRNA通过阳离子脂质体介导转染到SKOV-3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2基因表达的SK-OV-3细胞株,通过RT-PCR方法检测各组SKOV-3细胞Her2基因的表达。应用四甲基偶氮唑蓝检测DDP对各组SKOV-3细胞增殖水平的影响,应用膜联蛋白V异-硫氰酸荧光素细胞凋亡试剂盒在流式细胞仪上检测DDP作用后各组SKOV-3细胞凋亡水平。结果建立了稳定抑制Her2基因表达的细胞株,SKOV3/siRNA-1组和SKOV3/siRNA-2组细胞Her2基因表达分别为对照组的53.8%和38.4%,而空载体组为92.3%。在DDP作用下SKOV3/siRNA-1和SKOV3/siRNA-2的细胞存活率在4 d时分别为67.7%±4.4%和66.4%±3.3%,与未转染对照组81.7%±1.3%和空载体组81.3%±1.4%比较差异有显著性(P<0.05)。FCM分析显示SK-OV3/siRNA-1和SKOV3/siRNA-2细胞的DDP诱导凋亡率分别为38.6%±1.1%和42.8%±1.4%,明显高于未转染组9.1%±0.8%和空载体组8.8%±0.7%,差异有显著性(P<0.05)。结论靶向Her2基因的siRNA可以增强卵巢癌细胞株SKOV-3对DDP的敏感性。