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凋亡抑制基因p35对杆状病毒增殖的影响
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作者 胡敏 李小锋 +1 位作者 齐义鹏 刘德立 《武汉大学学报(自然科学版)》 CSCD 2000年第2期203-206,共4页
以野生型苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒 (Autographa californica Nuclear Polyhedrosis Virus,Ac NPV)和多角体基因缺失 (ocu- )的 Ac NPV分别感染 Sf9- 35细胞 ,研究了 p35的稳定表达对杆状病毒增殖的影响 .发现p35基因在 Sf9- 35细胞内... 以野生型苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒 (Autographa californica Nuclear Polyhedrosis Virus,Ac NPV)和多角体基因缺失 (ocu- )的 Ac NPV分别感染 Sf9- 35细胞 ,研究了 p35的稳定表达对杆状病毒增殖的影响 .发现p35基因在 Sf9- 35细胞内组成型表达能够影响野生型 Ac NPV包涵体的形成 ,大幅度提高出芽病毒 (BuddedVirus,BV;即无包涵体病毒粒子 )产量 . 展开更多
关键词 p35基因 病毒复制 凋亡抑制基因 杆状病毒增殖
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粉纹夜蛾核型多角体病毒p35基因的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 施宪宗 龙綮新 +3 位作者 代小江 曲士芮 陈曲侯 庞义 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期262-264,共3页
粉纹夜蛾核型多角体病毒p35基因的克隆与序列分析施宪宗1王王旬章龙綮新2代小江曲士芮陈曲侯1庞义(中山大学生物防治国家重点实验室,广州510275)关键词TnNPVp35基因,序列分析,细胞凋亡目前所知,杆状病毒编码... 粉纹夜蛾核型多角体病毒p35基因的克隆与序列分析施宪宗1王王旬章龙綮新2代小江曲士芮陈曲侯1庞义(中山大学生物防治国家重点实验室,广州510275)关键词TnNPVp35基因,序列分析,细胞凋亡目前所知,杆状病毒编码两种阻遏宿主细胞因病毒感染而诱发细... 展开更多
关键词 昆虫病毒 粉纹夜蛾 核型多角体病毒 基因p35
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p35基因对MnCl_2诱导PC12细胞凋亡的作用 被引量:6
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作者 曾季平 王立祥 +5 位作者 胡晓燕 秦文 孔峰 杨玲玲 崔行 刘新垣 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2004年第6期625-628,共4页
目的:探讨p35基因对氯化锰(MnCl2)诱导的PC12细胞凋亡的作用。方法:将p35基因转染PC12细胞得到可稳定表达p35基因的PC12/p35细胞株,使用相差显微镜观察、MTT染色和流式细胞分析等方法检测p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞凋亡的作用。结果:... 目的:探讨p35基因对氯化锰(MnCl2)诱导的PC12细胞凋亡的作用。方法:将p35基因转染PC12细胞得到可稳定表达p35基因的PC12/p35细胞株,使用相差显微镜观察、MTT染色和流式细胞分析等方法检测p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞凋亡的作用。结果:p35基因在PC12细胞中的稳定表达可以有效地抑制MnCl2诱导的PC12细胞凋亡。结论:p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞具有保护作用。 展开更多
关键词 氯化锰 pC12细胞 基因 p35 细胞凋亡
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美国白蛾核型多角体病毒p35基因的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 曹广力 薛仁宇 +2 位作者 朱越雄 魏育红 贡成良 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期711-716,共6页
对美国白蛾核型多角体病毒 (HycuNPV ,Hyphantriacuneanucleopolyhedrovirus)p35基因的序列分析表明 :HycuNPVp35编码序列 90 0bp ,编码 2 99氨基酸。同源性分析表明 :HycuNPVp35与BomoNPVT3、AucaNPV、SpliNPV、LeseNPV、HearNPV在核... 对美国白蛾核型多角体病毒 (HycuNPV ,Hyphantriacuneanucleopolyhedrovirus)p35基因的序列分析表明 :HycuNPVp35编码序列 90 0bp ,编码 2 99氨基酸。同源性分析表明 :HycuNPVp35与BomoNPVT3、AucaNPV、SpliNPV、LeseNPV、HearNPV在核苷酸水平上为 99 9%、 95 7%、 93 6 %、 80 2 %和 87 2 % ,在氨基酸水平上为 99 7%、 90 3%、 77%、 6 4 9%和 73 2 % ,显示了杆状病毒p35基因在进化上的保守性。BomoNPVT3中位的H1 2 2 ,在HycuNPV中被R取代。推测HycuNPVp35蛋白的功能及抑制细胞凋亡的能力与BomoNPVT3p35蛋白的相似。 展开更多
关键词 美国白蛾核型多角体病毒 p35基因 克隆 序列分析
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棉铃虫核型多角体病毒p35基因的PCR扩增和克隆及其在原核细胞中的表达 被引量:2
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作者 王业富 齐义鹏 +2 位作者 李志达 李晓锋 朱应 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期252-259,共8页
用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒( Ac N P V) 凋亡抑制基因p35 的合成引物,从棉铃虫核型多角体病毒( Ha N P V) 基因组中用 P C R 扩增到了1kb 片段。采用 P C R- 双脱氧核苷酸链终止银染法,测定了所扩增... 用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒( Ac N P V) 凋亡抑制基因p35 的合成引物,从棉铃虫核型多角体病毒( Ha N P V) 基因组中用 P C R 扩增到了1kb 片段。采用 P C R- 双脱氧核苷酸链终止银染法,测定了所扩增到的1 010bp 全序列,发现其开放阅读框完整,长897bp ,编码299 个氨基酸。用 D N A S I S 和 P R O S I S 软件分析发现,此片段与 Ac M N P V p35 基因同源区核苷酸同源性为91 % ,氨基酸同源性也达81 % ,证明了所扩增的片段是 Ha N P V 的p35 基因。为了研究此p35 基因的功能及其效应机制,克隆了这一基因并在大肠杆菌细胞中实现了表达。 展开更多
关键词 杆状病毒 棉铃虫 p35基因 凋亡 表达 pCR
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家蚕核型多角体病毒p35基因的核苷酸序列分析 被引量:3
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作者 贡成良 薛仁宇 曹广力 《蚕业科学》 CAS CSCD 2000年第4期219-223,共5页
对家蚕核型多角体病毒苏州株 (BmNPVsu)p35基因的序列分析表明 :BmNPVsup35编码序列为 897nt,编码 2 98aa。同源性分析表明 :BmNPVsup35与BmNPVT3、AcNPV、SlNPV在核苷酸水平上同源性分别为 99.5%、95.1 %、89.3% ,在氨基酸水平上的同... 对家蚕核型多角体病毒苏州株 (BmNPVsu)p35基因的序列分析表明 :BmNPVsup35编码序列为 897nt,编码 2 98aa。同源性分析表明 :BmNPVsup35与BmNPVT3、AcNPV、SlNPV在核苷酸水平上同源性分别为 99.5%、95.1 %、89.3% ,在氨基酸水平上的同源性分别为 98.7%、89.4 %、76.4 % ,显示了杆状病毒p35基因在进化上的保守性。BmNPVT3中位的N14 6、S2 0 2 、E2 0 4 、K2 4 4 ,在BmNPVsu中分别被G、N、Q、N取代 ,BmNPVT3中S2 2 2 ,在BmNPVsuP35中发生了缺失。 展开更多
关键词 家蚕核型多角体病毒 p35基因 核苷酸序列
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小鼠神经细胞cdc2类蛋白激酶调节亚基p35^(Nck5a)基因的克隆和鉴定 被引量:2
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作者 周常文 戴旭明 +1 位作者 薛红 傅继梁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期716-719,共4页
目的: 获取小鼠神经细胞cdc2 类激酶(Nclk)调节亚基p35Nck5a基因组DNA,用于构建基因重复性打靶载体。方法: 用噬斑原位杂交法从λPS基因文库中克隆小鼠p35Nck5a基因;用限制性内切酶酶切图谱分析和... 目的: 获取小鼠神经细胞cdc2 类激酶(Nclk)调节亚基p35Nck5a基因组DNA,用于构建基因重复性打靶载体。方法: 用噬斑原位杂交法从λPS基因文库中克隆小鼠p35Nck5a基因;用限制性内切酶酶切图谱分析和序列测定进行基因组结构分析。结果: 获得较完整的p35Nck5a基因组DNA酶切图谱;该基因由一个外显子组成,长924 bp,编码307 个氨基酸的蛋白质,内含子长208 bp,位于5′端侧翼序列中。测定的序列(- 1 080 至+ 924 bp 和+ 3 721至+ 4 222 bp)与已报道的序列基本一致,仅在- 135和- 295位各插入一个碱基G。结论: 得到的p35Nck5a基因组DNA 片段长约11 kb, 其5′端侧翼序列含有一些已知的调控序列,3′端含有poly A 的信号序列。 展开更多
关键词 p35^Nck5a基因 克隆 序列分析 cdc2类激酶 小鼠
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p35^(Nck5a)基因重复性打靶载体的构建和ES细胞基因打靶研究 被引量:2
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作者 周常文 傅继梁 薛红 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第8期659-665,共7页
为了在小鼠胚胎于细胞(ES)中引起神经细胞cdc2类激酶调节亚基p35Nck5a基因的定点 重复,采用常规的分子克隆技术,构建得到长约12.2kb的基因重复性打靶载体pGDTV。用电 穿孔法将线性化的pGDTV载体转入... 为了在小鼠胚胎于细胞(ES)中引起神经细胞cdc2类激酶调节亚基p35Nck5a基因的定点 重复,采用常规的分子克隆技术,构建得到长约12.2kb的基因重复性打靶载体pGDTV。用电 穿孔法将线性化的pGDTV载体转入ES细胞,经过G418和GANC分组药物选择,获得245个 双药物抗性的细胞克隆,细胞存活率为6.22 × 10-5。经PCR和基因组Southern杂交鉴定,2个 ES细胞克隆发生了p35Nck5a基因的重复,同源重组率为5.08×10-7、负向选择系统的应用使 同源重组事件的富集效率提高了7倍。为建立Alzheimer病的转基因小鼠模型打下了基础。 展开更多
关键词 p35^Nch5a基因 基因打靶 基因重复 NclK NFTS AD
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杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备 被引量:1
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作者 李玲玲 李朝飞 庞义 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期1-4,共4页
用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以... 用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以Ni2+-NTA偶连抗体检测证明所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,以纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,效价为1/1 024。免疫印迹分析表明,该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒p35基因基因表达多克隆抗体
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江西部分地区猪痘病毒PCR检测及P35基因的分析
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作者 邓舜洲 蒋新华 +4 位作者 冷闯 朱芝秀 邬向东 戴益民 张文波 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第2期64-67,共4页
为了解江西部分地区猪痘病毒(SWPV)的感染及流行情况,从江西省7个地区(市)共36个规模化猪场采集55份疑似猪痘病猪的皮肤痘痂组织,应用PCR方法对其进行猪痘病毒核酸检测,并随机挑选19个PCR产物进行序列测定和P35基因序列分析。结果表明,5... 为了解江西部分地区猪痘病毒(SWPV)的感染及流行情况,从江西省7个地区(市)共36个规模化猪场采集55份疑似猪痘病猪的皮肤痘痂组织,应用PCR方法对其进行猪痘病毒核酸检测,并随机挑选19个PCR产物进行序列测定和P35基因序列分析。结果表明,55份样品中,有44份样品检测为SWPV阳性,阳性率高达80%;所测的19条序列与SWPV参考毒株(登录号:AF410153.1)P35基因核苷酸同源性为96.3%~98.4%,推导的氨基酸同源性为87.5%~88.5%;各序列之间的核苷酸同源性为97.7%~100%,推导的氨基酸序列同源性为98.2%~100%。结果表明江西省部分地区的猪群中存在猪痘病毒感染。 展开更多
关键词 猪痘病毒 pCR检测 p35基因
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家蚕核型多角体病毒山东株p35基因的克隆及序列分析
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作者 姜丽华 钟万芳 +2 位作者 蔡平钟 徐兴耀 阎文昭 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期681-684,共4页
根据家蚕核型多角体病毒T3株p35基因非编码区序列设计一对特异性引物,应用PCR技术从家蚕核型多角体病毒山东株中扩增得到一条1080bp的片段。测序结果表明,该片段含有p35基因,开放阅读框长900bp,编码299个氨基酸,分子量为34.91kDa,pI=6.... 根据家蚕核型多角体病毒T3株p35基因非编码区序列设计一对特异性引物,应用PCR技术从家蚕核型多角体病毒山东株中扩增得到一条1080bp的片段。测序结果表明,该片段含有p35基因,开放阅读框长900bp,编码299个氨基酸,分子量为34.91kDa,pI=6.4。序列分析表明,BmNPV山东株的p35基因与T3株存在差异。 展开更多
关键词 家蚕核型多角体病毒 山东株 p35基因 克隆 序列分析
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转抗细胞凋亡基因p35黏虫细胞克隆株研究
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作者 郑桂玲 李长友 +2 位作者 李国勋 Wang Ping Robert R.Granados 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第20期2226-2230,共5页
通过脂质体介导的方法将抗细胞凋亡p35基因导入黏虫细胞系Ms7311,经Zeocin抗性筛选和细胞克隆,获得了转基因细胞株TMs7311.PCR检测证明,转基因细胞株基因组DNA中含有p35基因特异扩增谱带.该转基因细胞株形态与原始细胞系不同,生长速度快... 通过脂质体介导的方法将抗细胞凋亡p35基因导入黏虫细胞系Ms7311,经Zeocin抗性筛选和细胞克隆,获得了转基因细胞株TMs7311.PCR检测证明,转基因细胞株基因组DNA中含有p35基因特异扩增谱带.该转基因细胞株形态与原始细胞系不同,生长速度快,群体倍增时间为25.4h,对磷酸缓冲液(PBS)有较强的营养抗性,能抑制放线菌素D诱导的细胞凋亡;病毒产量和β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)以及碱性磷酸酶(secretedalkalinephosphatase,SEAP)的表达水平明显高于原始细胞系Ms7311,是一株高表达重组蛋白和高产杆状病毒的优良细胞株. 展开更多
关键词 p35基因 黏虫细胞系 重组蛋白 细胞凋亡 重组病毒 载体质粒
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小鼠神经细胞p35^(nck5a)基因5′非编码区基因表达调控功能初步研究
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作者 朱海英 周常文 +4 位作者 王秀凤 傅继梁 李建秀 王新民 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期147-149,共3页
目的 :观察阿尔茨海默病 (AD)的相关基因 p35 nck5a基因 5′侧翼区指导报告基因表达的能力。方法 :将对本实验室所克隆的 p35 nck5a基因 5′侧翼片段连接于报告基因 β-半乳糖苷酶基因的上游构建表达载体 ,利用体外培养细胞和转基因小... 目的 :观察阿尔茨海默病 (AD)的相关基因 p35 nck5a基因 5′侧翼区指导报告基因表达的能力。方法 :将对本实验室所克隆的 p35 nck5a基因 5′侧翼片段连接于报告基因 β-半乳糖苷酶基因的上游构建表达载体 ,利用体外培养细胞和转基因小鼠实验体系来观察该片段在体内、外基因表达调控的差异。结果 :体外培养细胞中 p35 nck5a基因 5′侧翼序列不具有决定报告基因神经特异性表达的能力 ,但在基因组中整合有相同表达载体的转基因小鼠体内却能够指导报告基因的神经限制性表达。 结论 :这种差异提示进行体内。 展开更多
关键词 p35^nck5a基因 小鼠 基因 基因表达 调控 神经细胞 AD病
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家蚕核型多角体病毒p35基因的核苷酸序列分析
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作者 贡成良 魏育红 +1 位作者 曹广力 薛仁宇 《常熟高专学报》 2000年第4期68-71,共4页
对家蚕核型多角体病毒苏州株 (BmNPVsu)p35基因的序列分析表明 :BmNPVsup35编码序列为 897nt,编码 2 98aa。同源性分析表明 :BmNPVsup35与BmNPVT3、AcNPV、SlNPV在核苷酸水平上同源性分别为 99.5%、95 .1 %、89.3% ,在氨基酸水平上的同... 对家蚕核型多角体病毒苏州株 (BmNPVsu)p35基因的序列分析表明 :BmNPVsup35编码序列为 897nt,编码 2 98aa。同源性分析表明 :BmNPVsup35与BmNPVT3、AcNPV、SlNPV在核苷酸水平上同源性分别为 99.5%、95 .1 %、89.3% ,在氨基酸水平上的同源性分别为 98.7%、89.4 %、76.4% ,显示了杆状病毒p35基因在进化上的保守性。BmNPVT3中位的N1 4 6、S2 0 2 、E2 0 4、K2 44,在Bm NPVsu中分别被G、N、Q、N取代 ,BmNPVT3中S2 2 2 ,在BmNPVsuP35中发生了缺失。 展开更多
关键词 家蚕 核型多角体病毒 p35基因 核苷酸序列
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含人IL-12基因的重组质粒p2Bac-hIL-12p35p40的构建
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作者 陆宇新 高志昕 张学光 《苏州医学院学报》 1998年第10期1021-1023,共3页
用PCR技术克隆hIL-12p35和p40两个亚基的cDNA,经酶切反应和琼脂电泳,获得的p35和p40基因的大小分别为0.77kb和1.1kb。SK+质粒酶切后和p35、p40片段分别进行连接.形成SK+-p35和SK+-p40重组质粒。再经酶切反应.p35、p40片段先后连接... 用PCR技术克隆hIL-12p35和p40两个亚基的cDNA,经酶切反应和琼脂电泳,获得的p35和p40基因的大小分别为0.77kb和1.1kb。SK+质粒酶切后和p35、p40片段分别进行连接.形成SK+-p35和SK+-p40重组质粒。再经酶切反应.p35、p40片段先后连接至p2Bac质粒中,形成同时含有hIL-12两个亚基基因的重组质粒p2Bac-hIL-12p35p40。SK+-p35和SK+-p40作为模板,进行p35、p40重组基因的测序,其结果与文献报道一致。 展开更多
关键词 HIL-2 p2Bac 质粒 p35基因 p40基因
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杆状病毒p35基因延缓昆虫细胞凋亡 被引量:2
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作者 李小峰 齐义鹏 +3 位作者 林宏 Mallam Nock Joshua 李燕 李志达 《武汉大学学报(自然科学版)》 CSCD 1998年第4期501-505,共5页
构建了以新霉素抗性基因为筛选标记的带有p35基因的转移载体p35IE1Neo,以此载体转染Sf9细胞,经G418筛选得到染色体上稳定整合质粒p35IE1Neo的Sf9细胞,克隆化培养后取名为Sf9-35.经细胞原位杂... 构建了以新霉素抗性基因为筛选标记的带有p35基因的转移载体p35IE1Neo,以此载体转染Sf9细胞,经G418筛选得到染色体上稳定整合质粒p35IE1Neo的Sf9细胞,克隆化培养后取名为Sf9-35.经细胞原位杂交实验证明,Sf9-35细胞的染色体DNA上含有p35基因;经放线菌素D处理后的细胞核酸电泳检测,证实Sf9-35具有抗凋亡特性能够支持凋亡抑制基因缺失的vAcΔp35病毒复制;发现p35基因在细胞内组成型表达只能延缓vAcΔp35感染及放线菌素D处理诱发的细胞凋亡的过程,而不能完全阻止其诱发的细胞凋亡. 展开更多
关键词 抗凋亡 细胞凋亡 p35基因 杆状病毒 病毒感染
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油桐尺蠖核型多角体病毒p35基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
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作者 陶杨娟 徐旭士 +1 位作者 谭啸 王冠 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2005年第2期99-103,共5页
用PCR技术从油桐尺蠖核型多角体病毒基因组中扩增得到p35基因的DNA序列,把PCR产物克隆到pMD 18载体上,核苷酸序列测定表明此片段与AcNPVp35基因同源性为100%,继而构建了表达质粒pGBp35,诱导后经SDS PAGE检测表明获得了BsNPVp35基因在大... 用PCR技术从油桐尺蠖核型多角体病毒基因组中扩增得到p35基因的DNA序列,把PCR产物克隆到pMD 18载体上,核苷酸序列测定表明此片段与AcNPVp35基因同源性为100%,继而构建了表达质粒pGBp35,诱导后经SDS PAGE检测表明获得了BsNPVp35基因在大肠杆菌BL21中包涵体形式的特异表达。 展开更多
关键词 油桐尺蠖核型多角体病毒 p35基因 凋亡 pCR
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杆状病毒p35基因序列与分子进化 被引量:1
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作者 黄宇琳 曹广力 +1 位作者 薛仁宇 贡成良 《中国蚕业》 2006年第3期13-22,共10页
本文对家蚕核多角体病毒(BomoNPV)、苜蓿银纹夜蛾核多角病毒(AucaNPV)、斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpliNPV)、粘虫核型多角体病毒(LeseNPV)、美国白蛾核型多角体病毒(HycuNPV)和薄荷灰夜蛾核型多角体病毒(RaouNPV)6类杆状病毒的p35基因进... 本文对家蚕核多角体病毒(BomoNPV)、苜蓿银纹夜蛾核多角病毒(AucaNPV)、斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpliNPV)、粘虫核型多角体病毒(LeseNPV)、美国白蛾核型多角体病毒(HycuNPV)和薄荷灰夜蛾核型多角体病毒(RaouNPV)6类杆状病毒的p35基因进行序列比对和进化分析。结果显示,LeseNPV、AucaNPV、SpliNPV、RaouNPV、BomoNPVp35基因核苷酸序列之间同源性在78% ̄100%之间,氨基酸间的同源性在58% ̄100%之间,总体上p35基因在进化上具有保守性;Chou-Fasman法对蛋白2级结构的预测结果显示,不同杆状病毒P35蛋白的2级结构在总体上具相似性,但在某些区域显示明显的差异,这种差异也许是导致P35抗凋亡活性不同的原因。Neighbor-Joining算法建立了基于p35基因的分子进化系统树,结果显示:LeseNPV处于无根树的最根部,与其它NPV相距较远,AucaNPV、SpliNPV、RaoumuNPV各自形成独立的分枝,BomoNPV与HycuNPV形成独立的1组;12种不同来源的BomoNPVp35基因的系统进化分析显示,BomoNPV基本上按采集地聚类。 展开更多
关键词 p35基因 杆状病毒 分子进化 斜纹夜蛾核型多角体病毒 基因序列 美国白蛾核型多角体病毒 粘虫核型多角体病毒 家蚕核多角体病毒 苜蓿银纹夜蛾 系统进化分析
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穿透支原体主要外膜蛋白pET20b(+)/p35重组载体的构建、表达及鉴定
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作者 左建宏 谭立志 +1 位作者 朱翠明 陈超群 《实用预防医学》 CAS 2005年第2期263-265,共3页
目的 构建高表达且稳定的pET2 0b(+ ) /p3 5重载体,能在其中进行诱导高表达并得到纯化的p3 5蛋白。 方法 运用Blast、Pfam等生物信息学手段对穿透支原体(Mpe) p3 5基因序列结构与功能预测,将p3 5基因全长插入原核表达载体pET2 0b(+ )... 目的 构建高表达且稳定的pET2 0b(+ ) /p3 5重载体,能在其中进行诱导高表达并得到纯化的p3 5蛋白。 方法 运用Blast、Pfam等生物信息学手段对穿透支原体(Mpe) p3 5基因序列结构与功能预测,将p3 5基因全长插入原核表达载体pET2 0b(+ )中,在BL2 1StarTM(DE3 )进行诱导表达、用Ni柱纯化,在GSH -GSSH体系中逐渐降低其变性剂的方法复性蛋白,Western -blot进行鉴定。 结果 成功的构建了pET2 0b(+ ) /p3 5重组载体,并能在宿主菌中较高表达;此蛋白以包涵体的形式进行表达。 结论 得到了纯化的p3 5蛋白。 展开更多
关键词 穿透支原体 主要外膜蛋白 p35基因 原核表达
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Baculovirus-mediated Expression of p35 Confers Resistance to Apoptosis in Human Embryo Kidney 293 cells
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作者 Jian-hua SONG Chang-yong LIANG Xin-wen CHEN 《中国病毒学》 CSCD 2007年第5期389-396,共8页
Baculovirus has many advantages as vectors for gene transfer.We demonstrated that recombinant baculovirus vectors expressing p35(Ac-CMV-p35) and eGFP(Ac-CMV-GFP) could be transduced into human kidney 293 cells efficie... Baculovirus has many advantages as vectors for gene transfer.We demonstrated that recombinant baculovirus vectors expressing p35(Ac-CMV-p35) and eGFP(Ac-CMV-GFP) could be transduced into human kidney 293 cells efficiently.The level of transgene expression was viral dose dependent and high-level expression of the target gene could be achieved under the heterogonous promoter.MTT assay suggested that both Ac-CMV-p35 and Ac-CMV-GFP did not have cytotoxic effect on human embryo kidney 293 cells.Cell growth curve showed the Ac-CMV-p35 and Ac-CMV-GFP transduced and non-transduced cells had similar proliferation rate,so baculovirus-mediated p35 expression had no adverse effect on cell proliferation.In addition,baculovirus-mediated p35 gene expression protected human embryo kidney 293 cells against apoptosis induced by various apoptosis inducers such as Actinomycin D,UV or serum-free media.These results suggested that the baculovirus vector mediated p35 gene expression was functional and it could be widely used in molecular research and even gene therapy. 展开更多
关键词 细胞凋亡 基因治疗 p35基因 基因表达 胚胎肾细胞 杆状病毒
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