高滴度腺病毒介导的绿色荧光蛋白和反义血管内皮生长因子165cDNA的制备

目的:制备高滴度腺病毒介导的绿色荧光蛋白(Ad-GFP)和腺病毒介导的反义血管内皮生长因子165(Ad-aVEGF_(165))cDNA。方法:人胚肾293腺病毒包装细胞转染第3代Ad-GFP和Ad-aVEGF_(165)cDNA后,反复冻融293细胞,提取腺病毒悬液,用氯化铯梯度离心法纯化腺病毒,在荧光显微镜下测定Ad-GFP的滴度,用空斑法测定Ad-aVEGF_(165)cDNA的滴度。结果:获取了实验所需的第4代腺病毒液,Ad-GFP的滴度为9.5×109efu/ml,Ad-aVEGF_(165)cDNA的滴度为1.2×1010pfu/ml。结论:成功制备了高滴度的Ad-GFP和Ad-aVEGF_(165)cDNA。