RNA结合基序蛋白3的生物学功能

RNA结合基序蛋白3(RNA binding motif protein 3,RBM3)是在哺乳动物细胞中发现的重要冷应激蛋白,伴随冷应激过程其表达量上调。研究发现RBM3与冷诱导RNA结合蛋白(cold inducible RNA binding protein,CIRP)在核酸结构和氨基酸结构上高度保守,具有较高的同源性,且发挥作用的方式也有很多相似之处。RBM3不仅具有介导冷诱导下细胞抗凋亡的保护作用,还能参与人和动物的缺氧应激、缺血应激、紫外照射应激、细胞增殖、骨骼肌调节、生殖发育,疾病的治疗等多种生理过程,而且它还能够作为原癌基因以及参与小RNA(microRNA,简称miRNA)生物学过程的调控作用。因此,深入开展RBM3功能性研究和应用性研究具有重要的基础研究价值和临床研究意义。

冷应激条件下猪睾丸细胞中RNA结合基序蛋白3过表达对Caspase 3表达的影响

目的:探讨冷应激(32℃)条件下,猪睾丸(ST)细胞系中RNA结合基序蛋白3(RBM3)过表达时凋亡蛋白半胱天冬酶3(Caspase 3)表达量变化情况。方法:利用本实验室成功构建的携带绿色荧光蛋白(GFP)的RBM3过表达慢病毒载体pLenti6/V5-GW/EmGFP-RBM3和空病毒载体pLenti6/V5-GW/EmGFP-DEST分别感染ST细胞,作为过表达病毒(OEV)组和空载体病毒(EVV)组,此外还设立野生型细胞(WTC)组作对照,利用实时荧光定量RCR(qPCR)法和Western blot分析法检测各组中RBM3 mRNA和蛋白的表达情况。然后对各组细胞进行37℃以及32℃(2 h、4 h,8 h)的冷应激处理,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测各组Caspase 3表达量的变化。结果:OEV组RBM3基因和蛋白相对表达量高于EVV组和WTC组。在37℃以及32℃冷应激实验(2 h、4 h,8 h)中,OEV组Caspase 3表达量显著低于EVV组和WTC组。结论:冷应激ST细胞中RBM3过表达能够显著地降低Caspase 3的表达程度,为RBM3基因具有抵抗低温诱导ST细胞凋亡作用提供实验依据。

RNA结合基序蛋白3在宫颈腺癌组织中的表达情况及临床意义

目的探究RNA结合基序蛋白3(RBM3)在宫颈腺癌组织中的表达情况及临床意义。方法选取2018年5月至2019年1月江西省妇幼保健院收治的100例宫颈腺癌患者作为研究对象,收集患者宫颈腺癌组织样本及癌旁组织样本。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测RBM3mRNA在宫颈腺癌组织及癌旁组织中的表达情况。以宫颈腺癌患者组织中RBM3mRNA相对表达量的平均值(3.72)为界值,将患者分为RBM3mRNA高水平组(RBM3mRNA>3.72)和RBM3mRNA低水平组(RBM3mRNA≤3.72),分析RBM3mRNA表达情况与宫颈腺癌患者临床特征及预后的关系。结果宫颈腺癌组织中RBM3mRNA相对表达量为(3.65±0.84),明显高于癌旁组织的(1.17±0.35),差异有统计学意义(P<0.05)。两组临床分期、组织学分级、淋巴结转移数目比较差异有统计学意义(P<0.05);两组年龄、肿瘤直径比较差异无统计学意义。RBM3mRNA高水平组无瘤生存期明显长于RBM3mRNA低水平组,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈腺癌患者的无瘤生存预后AUC值为0.817;Cox回归分析结果显示,临床分期、组织学分级、淋巴结转移数目及RBM3mRNA表达情况均为影响宫颈腺癌的患者无瘤生存期的独立因素(P<0.05)。结论RBM3mRNA高表达水平的宫颈腺癌患者预后效果更理想。

卵巢上皮性癌中RNA结合基序蛋白3及环氧化酶-2的表达与意义

目的探讨卵巢上皮性癌中RNA结合基序蛋白3(RBM3)及环氧化酶-2(COX-2)的表达与意义。方法选取2018年9月至2019年5月江西省妇幼保健院收治的卵巢上皮性癌患者100例,同时选取同期的良性卵巢上皮性肿瘤患者和正常卵巢组织患者各100例。所有患者的石蜡组织标本均经手术病理学确诊,均采用免疫组化法检测RBM3和COX-2,比较RBM3和COX-2在3组中的表达情况。结果COX-2、RBM3在卵巢上皮性癌组中的阳性率均明显高于良性卵巢上皮性肿瘤组和正常卵巢组织组(P<0.05)。结论RBM3和COX-2在卵巢上皮性癌中呈高表达,因此RBM3和COX-2可作为诊断卵巢上皮性癌的重要生物学指标。

浸润性乳腺癌组织中RNA结合基序蛋白3的表达水平及意义

目的探究RNA结合基序蛋白3(RBM3)在浸润性乳腺癌患者乳腺癌组织中的表达情况及临床意义。方法收集136例浸润性乳腺癌患者的肿瘤组织和对应癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织和癌旁组织中RBM3mRNA的表达情况。根据浸润性乳腺癌患者乳腺癌组织中RBM3mRNA相对表达量的平均值将患者分为RBM3mRNA高表达组(n=61)和RBM3mRNA低表达组(n=75),分析RBM3mRNA表达与浸润性乳腺癌患者临床特征及预后的关系。结果浸润性乳腺癌组织中RBM3mRNA的相对表达量明显高于癌旁组织(P﹤0.01);RBM3mRNA高表达组乳腺癌患者的TNM分期、组织学分级、淋巴结转移数目、雌激素受体(ER)表达情况、孕激素受体(PR)表达情况、人表皮生长因子受体2(HER2)表达情况与RBM3mRNA低表达组患者比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);RBM3mRNA高表达组患者的无瘤生存情况优于RBM3mRNA低表达组(P﹤0.05);RBM3mRNA诊断浸润性乳腺癌患者无瘤生存预后的AUC为0.822(95%CI:0.747~0.882);Cox多因素分析结果显示:TNM分期、肿瘤直径、淋巴结转移和RBM3mRNA表达情况是浸润性乳腺癌患者无瘤生存时间的独立影响因素(P﹤0.05)。结论RBM3mRNA高表达提示浸润性乳腺癌患者预后较好。

RNA结合基序蛋白3在神经系统疾病中的神经保护作用

RNA结合基序蛋白3(RBM3)是一种RNA结合蛋白,在低温诱导下RBM3表达增加。近年来,RBM3在中枢神经系统中对神经的保护作用引起了人们的重点关注,被认为是一个具有潜力的治疗靶点。文中对RBM3的表达、神经保护作用机制以及在各种神经系统疾病中的研究进行了综述。

RNA结合基序蛋白3在胃癌组织的表达及临床意义

目的 探讨RNA结合基序蛋白3（RBM3）在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学技术[链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法]检测103例胃癌、58例正常胃黏膜组织中RBM3的表达,分析其与病理参数和预后的关系.结果 RBM3主要在细胞核中表达.RBM3表达与T-分期[T1=1.97（0.00 ～3.00）、T2=1.66（0.00 ～3.00）、T3=1.09（0.00 ～3.00）、T4 =0.72（0.00 ～3.00）,P＜0.05]、M-分期[M0=1.15（0.00 ～3.00）比M1 =0.74（0.00 ～3.00）,P＜0.05]和分化程度[高分化=1.02（0.00 ～3.00）、中分化=0.91（0.00 ～3.00）、低分化=0.84（0.00 ～3.00）,P＜0.05]显著相关.通过Cox回归分析表明,TNM分期、RBM3低表达是影响胃癌患者生存期的独立预测因素（P＜0.05）.结论 RBM3可能在胃癌的进展中起重要作用,其蛋白低表达是胃癌患者预后差的独立预测因素.

RNA结合基序蛋白3的作用研究进展

RNA结合蛋白(RBPs)参与RNA转录后调控和翻译,它在细胞凋亡、细胞周期等细胞生命活动中发挥着至关重要的作用,并且基于其在肿瘤和神经保护方面的相关研究显示,它是目前研究细胞内RNA调节方式的热点,但对其的机制研究尚不清楚,本文以RNA结合基序蛋白3(RBM3)分子为代表就RNA结合蛋白的基本结构、机制和研究进展进行综述。

RNA结合基序蛋白3及其神经元保护作用

背景RNA结合基序蛋白3（RNA binding motif protein3，RBM3）是一种低温诱导产生的冷休克蛋白，可在神经元、部分胶质细胞和其他一些细胞系中表达。RBM3在多种神经元损伤中起到保护作用。目的对RBM3的结构、功能和神经元保护作用等方面及相关研究进展进行综述。内容概述RBM3的结构、表达和功能，阐述其在神经元保护方面的作用。趋向对RBM3神经保护机制的研究为脑血管病变和心搏骤停患者损伤后的神经元复苏以及神经退行性疾病的治疗供新的方向。

RNA结合基序单链相互作用蛋白3在人乳头瘤病毒16型相关宫颈癌细胞和鳞状细胞癌组织中的表达

目的探讨RNA结合基序单链相互作用蛋白3(RBMS3)在人乳头瘤病毒16型(HPV16)相关宫颈癌细胞和鳞状细胞癌组织中的表达。方法通过Western blotting方法检测RBMS3在HPV16 E7表达阳性和阴性宫颈癌细胞中的表达,通过免疫组织化学(IHC)染色方法检测RBMS3在HPV16 E7表达阳性和阴性宫颈鳞状细胞癌组织中的表达,并分析RBMS3和HPV16 E7表达的关系。结果 Western blotting结果显示,HPV16 E7在宫颈癌C33-A细胞中不表达,而HPV16 E7在宫颈癌Si Ha细胞中表达;C33-A细胞中RBMS3的表达显著高于Si Ha细胞(P<0.01)。IHC结果显示,RBMS3在HPV16 E7表达阳性宫颈鳞状细胞癌组织中的表达显著低于HPV16 E7表达阴性宫颈鳞状细胞癌组织(P<0.01),RBMS3和HPV16 E7表达呈负相关(P<0.01)。结论 HPV16相关宫颈鳞状细胞癌组织中RBMS3的表达与HPV16 E7的表达呈负相关,RBMS3可能与HPV16相关宫颈癌的发生有关。

亚低温上调冷休克蛋白RBM3表达减轻肾脏缺血-再灌注损伤

目的探讨亚低温对肾脏缺血-再灌注损伤(IRI)的作用,以及RNA结合基序蛋白3(RBM3)及其下游效应分子在这一过程中的表达情况。方法健康SD雄性大鼠18只,随机分为正常对照(NC)组、IRI组和亚低温预处理(MHP)组,每组6只。通过检测血清肌酐水平评价肾功能,苏木素-伊红(HE)染色检测肾脏组织损伤情况,蛋白质印迹法检测肾脏组织的RBM3、Yes相关蛋白1(YAP1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量,免疫组织化学染色进一步检测RBM3及YAP1蛋白的表达情况,采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测肾脏组织细胞凋亡情况,通过测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性检测肾脏组织氧化应激水平。结果与NC组相比较,IRI组和MHP组血清肌酐水平、肾脏组织病理损伤评分均升高,RBM3、YAP1和Nrf2蛋白表达水平均升高,Bcl-2/Bax比值均降低,细胞凋亡率均升高,MDA含量均升高,SOD活性均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与IRI组相比较,MHP组血清肌酐水平、肾脏组织病理损伤评分均降低,RBM3、YAP1和Nrf2蛋白表达水平均升高,Bcl-2/Bax比值升高,细胞凋亡率降低,MDA含量降低,SOD 活性升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 亚低温对肾脏IRI 具有保护作用,可减轻IRI 所致细胞凋亡和氧化应激损伤,其机制可能为亚低温上调RBM3 及其下游效应分子YAP1 和Nrf2 的表达水平。

低温诱导的RBM3对各器官缺血再灌注损伤研究进展

缺血再灌注损伤(IRI)是一种复杂的血流动力学紊乱状态,致死率极高,且目前的治疗方法相对有限。亚低温治疗是临床上公认的一种缓解缺血、缺氧损伤的治疗方式,尤其在脑保护中的研究较多。多项研究表明,RNA结合基序蛋白3(RBM3)作为一种冷应激蛋白,主要在低温诱导下产生,可促进翻译,减轻氧化应激、降低细胞凋亡率。因此,诱导RBM3可能代表一种治疗IRI的新策略,代替亚低温治疗,减轻低温对机体的不良影响。基于这一观点,文章对RBM3蛋白功能的最新发现进行综述,重点关注RBM3对各器官IRI相关疾病的保护作用以及未来前景,为相关研究提供新思路。

组织内TRIM3及FoxO1表达与原发性肝癌患者病理特征及预后间的关系分析

目的探讨组织内三重基序蛋白3(TRIM3)及叉头转录因子O家族1(FoxO1)表达与原发性肝癌(PHC)患者病理特征及预后间的关系。方法回顾性分析2018年1月—2019年12月南京医科大学附属淮安第一医院收治的119例PHC患者的临床资料。比较PHC患者肝癌组织与癌旁组织中的TRIM3、FoxO1表达,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的病理特征,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的预后。结果PHC患者肝癌组织中TRIM3、FoxO1阳性率(46.22%、42.02%)显著低于癌旁组织(75.63%、79.83%)(P<0.05)。TRIM3阳性患者肿瘤大小<5 cm、高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于TRIM3阴性患者(P<0.05),FoxO1阳性患者肿瘤大小<5 cm、单发、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于FoxO1阴性患者(P<0.05)。肝癌组织内TRIM3阳性患者、TRIM3阴性患者3年生存率分别为61.82%、31.25%,差异有统计学意义(Log Rank=10.242,P=0.001);FoxO1阳性患者、FoxO1阴性患者3年生存率分别为60.00%、34.78%,差异有统计学意义(Log Rank=6.978,P=0.008)。结论组织内TRIM3及FoxO1表达与PHC患者病理特征及预后显著相关,可作为评估PHC患者病情及预后的重要指标。

IGF-1调控RBM3表达抑制低温应激诱导牦牛卵丘细胞凋亡

【目的】探索动物机体遭受低温应激及细胞冷冻过程中胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor,IGF-1)与RNA结合基序蛋白3(RNA-binding motif protein 3,RBM3)之间的作用关系,及IGF-1参与哺乳动物细胞抑制低温损伤的机制。【方法】体外培养牦牛卵丘细胞,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot,WB)和免疫荧光技术检测不同浓度(0、50、100、200 ng·mL^-1)IGF-1和低温应激(30℃、25℃)对RBM3表达影响。卵丘细胞经最佳浓度IGF-1(100 ng·mL^-1)和对照组(0 IGF-1)作用30 h后,低温(30℃、25℃)应激8 h,比较RBM3表达水平。评估在低温应激组、100 ng·mL^-1IGF-1处理组和100 ng·mL^-1IGF-1+RBM3抑制剂处理组,卵丘细胞25℃应激8 h后凋亡水平差异,并从基因和蛋白水平检测3组卵丘细胞中凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达水平。【结果】(1)IGF-1作用卵丘细胞后RBM3基因和蛋白的表达水平显著上升(P<0.05),其在100 ng·mL^-1IGF-1处理组最高,免疫荧光检测显示100和200 ng·mL^-1IGF-1处理组卵丘细胞胞核和细胞质均可检测到RBM3,而0和50 ng·mL^-1处理组,RBM3仅定位在细胞质。(2)卵丘细胞经受低温应激时,RBM3的表达水平显著增加,但其在30℃和25℃应激处理组差异不显著;100 ng·mL^-1IGF-1作用卵丘细胞30 h后,其再次接受25℃、8 h低温应激,卵丘细胞中RBM3的表达水平显著高于低温应激前未经IGF-1处理卵丘细胞中RBM3的表达水平,且该处理组卵丘细胞胞质和胞核均可检测到RBM3。(3)25℃应激后,100 ng·mL^-1IGF-1处理组卵丘细胞的凋亡率为(15.94±2.03)%,显著低于其在未经IGF-1处理组和100 ng·mL^-1IGF-1+RBM3抑制剂处理组中卵丘细胞的凋亡率,两者分别为(25.86±1.09)%和(20.14±2.65)%,在100 ng·mL^-1IGF-1处理组Bcl-2的表达水平显著高于其余两个处理组(P<0.05),而Bax的表达水平显著低于其余两个处理组(P<0.05)。【结论】RBM3参与牦牛卵丘细胞低温应激调控,IGF-1可调控其在低温应激中的表达水平,从而降低低温诱导的卵丘细胞凋亡。本研究为揭示IGF-1和RBM3参与动物机体或细胞免受低温损伤的分子机制提供了关键信息,为体细胞和生殖细胞冷冻技术的提高提供了理论依据。

牦牛RBM3的基因克隆及其在不同繁殖时期卵巢、输卵管、子宫中的表达定位

旨在研究RBM3在牦牛(Bos grunniens)生殖相关调控中的作用。本研究以卵泡期、黄体期和妊娠期4~6岁健康雌性牦牛各3头为采集对象,采集其卵巢、子宫和输卵管共9组试验样品,每组设置3个生物学重复。利用基因克隆技术克隆牦牛RBM3基因并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)分别在基因层面和蛋白层面检测RBM3在牦牛子宫、卵巢和输卵管中的相对表达量;利用免疫组织化学(immunocytochemistry,IHC)方法检测RBM3蛋白在试验样品中的分布定位。牦牛RBM3基因(GenBank No.:MF142258.1)被成功克隆并预测出二、三级结构,发现其与野牦牛亲缘性最近,基因编码区第51位、98位核苷酸不同于常见哺乳动物,生物信息学分析预测其编码的蛋白质为稳定的非跨膜蛋白。RBM3蛋白在本试验9组样品的表达量有如下差异:在卵巢中,黄体期显著高于卵泡期和妊娠期(P<0.05);输卵管中,卵泡期显著低于黄体期和妊娠期(P<0.05);子宫上,卵泡期显著高于黄体期和妊娠期(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,RBM3在卵巢中的主要表达位置是卵泡膜、颗粒层和黄体细胞;在输卵管的表达位置是黏膜上皮;子宫上的表达主要以子宫内膜和子宫腺为主。本研究结果提示,RBM3可能参与牦牛个体发情周期和妊娠过程的调控以及妊娠识别等过程,为RBM3这一冷应激调节因子参与牦牛对高原环境的适应性生理机制方面的研究提供参考。

肺腺癌患者肺组织中RBM3 mRNA表达及意义

目的探讨肺腺癌患者肺组织中RNA结合基序蛋白3(RBM3)mRNA表达及意义。方法选择2012年1月至2016年1月我院收治的92例肺腺癌患者作为研究对象。采用RT-PCR法检测肺腺癌患者肺组织中RBM3 mRNA相对表达量,分析RBM3 mRNA相对表达量与肺腺癌患者预后的关系。结果肺腺癌组织中RBM3 mRNA相对表达量明显低于癌旁组织[(0.39±0.12)vs(0.45±0.10),P<0.05]。RBM3 mRNA与肿瘤直径、TNM分期、分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05)。死亡组患者RBM3 mRNA相对表达量明显低于生存组[(0.34±0.08)vs(0.54±0.13),P<0.05]。RBM3 mRNA<0.38肺腺癌患者平均生存时间明显低于RBM3 mRNA≥0.38患者[17.39(95%CI:14.62~20.16)个月vs 27.77(95%CI:23.92~29.62)个月,P<0.05]。Cox单因素及多因素分析显示,肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移及RBM3 mRNA与肺腺癌患者生存时间密切相关。结论肺腺癌患者肺组织中RBM3 mRNA表达降低,检测肺组织中RBM3 mRNA相对表达量有助于了解患者预后情况。

miR-143-3p靶向LASP1抑制胃癌细胞侵袭和迁移的研究

背景肿瘤远处转移作为影响胃癌患者预后的一大危险因素,常导致治疗失败。因此,亟需探索针对肿瘤转移的新治疗靶点以改善胃癌患者的预后。目的探讨通过生物信息学筛选的miRNA能否通过靶向LASP1抑制胃癌细胞的侵袭和迁移。方法通过生物信息学方法预测靶向于LASP1的miRNAs,基于TCGA数据库分析miRNAs在胃癌中的表达水平及LASP1与miRNAs的相关性。利用双荧光素酶报告实验验证miR-143-3p与LASP1之间的靶向互作关系。以胃癌MGC-803细胞系为实验对象,分别转染miR-143-3p模拟物、抑制剂及其阴性对照,据此将实验分为miR-143-3p模拟物对照组(miR-143-3p mimic NC)、miR-143-3p模拟物组(miR-143-3p mimic)、miR-143-3p抑制剂对照组(miR-143-3p inhibitor NC)和miR-143-3p抑制剂组(miR-143-3p inhibitor)。应用Transwell侵袭实验和划痕愈合实验测定各组MGC-803细胞侵袭和迁移能力的变化。qRT-PCR检测转染后MGC-803细胞中LASP1的mRNA表达水平,Western blot检测MGC-803细胞中LASP1的蛋白表达水平。结果生物信息学分析提示miR-143-3p可能靶向于LASP1,二者相关性r=-0.284(P<0.01)。双荧光素酶报告实验进一步证实LASP1是miR-143-3p的一个直接靶基因(P<0.01)。Transwell侵袭实验和划痕愈合实验证实miR-143-3p对胃癌MGC-803细胞的侵袭和迁移能力有明显抑制作用。qRT-PCR实验结果显示miR-143-3p mimic组的LASP1的表达水平低于miR-143-3p mimic NC组(P<0.01),而miR-143-3p inhibitor组的LASP1的表达水平高于miR-143-3p inhibitor NC组(P<0.05)。此外,Western blot与qRT-PCR的实验结果一致。结论miR-143-3p可通过靶向下调LASP1,抑制胃癌细胞的侵袭和迁移。

RBMS3-AS3对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制

目的:探讨RNA结合基序单链相互作用蛋白3反义链3(RBMS3-AS3)对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法:培养人宫颈永生化细胞Ect1/E6E7和宫颈癌HeLa、Caski和SiHa细胞,实时荧光定量PCR检测细胞中RBMS3-AS3表达水平,Western blot法检测RNA结合基序单链相互作用蛋白3(RBMS3)蛋白水平。将HeLa细胞分为对照组(细胞正常培养)、si-RBMS3-AS3组(转染RBMS3-AS3小干扰RNA)、阴性序列组(转染乱序无意义阴性序列)、si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组(共转染RBMS3-AS3和RBMS3的小干扰RNA)和si-RBMS3-AS3+阴性序列组(共转染RBMS3-AS3与乱序无意义阴性序列),四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测各组HeLa细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果:宫颈癌细胞系HeLa、Caski和SiHa中RBMS3-AS3表达水平均高于Ect1/E6E7细胞(P<0.05),而RBMS3蛋白表达低于Ect1/E6E7细胞(P<0.05)。与对照组或阴性序列组相比,si-RBMS3-AS3组HeLa细胞的活性、侵袭细胞数、Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率及RBMS3和Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。与si-RBMS3-AS3+阴性序列组比较,si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组HeLa细胞活性、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:抑制RBMS3-AS3表达可抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,这可能与上调RBMS3表达有关。

RBM3重组慢病毒载体的构建、包装和鉴定

构建含有冷休克蛋白RNA结合基序蛋白3(RBM3)基因的慢病毒表达载体,产毒感染ST细胞,以评价重组慢病毒载体提高RBM3蛋白表达的效果.应用分子生物学技术提取仔猪脾脏组织的总RNA,通过反转录方法扩增RBM3基因,将其连入慢病毒载体Plenti6/v5-DEST中,在感受态细胞DH5α中扩增培养,并进行RBM3基因的测序鉴定,将重组的慢病毒质粒转染293T细胞,收获病毒液,感染293T细胞并提取细胞RNA,用逆转录PCR方法检测RBM3 mRNA在感染病毒的293T细胞中的表达,用含有慢病毒空载体pLenti6/V5-DEST的病毒液、含有重组慢病毒载体pLenti6/V5-RBM3的病毒液和无菌去离子水分别感染ST细胞后通过Western blot方法检测RBM3蛋白在感染病毒的ST细胞中的表达.结果表明:构建的慢病毒载体Plenti6/v5-RBM3经测序分析证实基因序列正确.包装后的慢病毒滴度为107 PFU/mL.逆转录PCR方法检测到感染病毒的293T细胞中,RBM3基因在转录水平上有表达,Western blot方法检测到感染病毒的ST细胞中,空载体组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量接近相同(分别为0.312±0.022和0.282±0.028);过表达组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量(0.568±0.045)显著增加(P<0.05),RBM3蛋白在翻译水平有表达.因此,本研究构建的携带RBM3基因的重组慢病毒能够感染ST细胞,并使其RBM3蛋白表达量增加.

冷休克蛋白的研究进展

冷休克蛋白是一类在低温条件下表达上调的序列高度保守的蛋白质,可通过与目的蛋白质信使核糖核酸(mRNA)的结合,调节这些蛋白质在低温、缺氧、紫外线照射等应激条件下的表达,并参与细胞的增殖、凋亡等多种生理过程,在细胞快速适应这些应激条件的过程中发挥着重要的作用.