大鼠基底前脑Nestin阳性神经元纤维投射的分布

目的探讨基底前脑Nestin阳性神经元是否投射到内侧缰核、基底外侧杏仁核、腹侧被盖区和中脑脚间核及其规律。方法将36只SD大鼠编号后使用随机数字表分为4组,每组9只,分别在内侧缰核(MHb)、基底外侧杏仁核(BLA)、腹侧被盖区(VTA)和中脑脚间核(IP)注射逆行示踪剂快蓝(FB),5 d后取材,用免疫荧光染色观察基底前脑处Nestin、ChAT阳性神经元的投射情况。结果基底前脑可投射至内侧缰核、基底外侧杏仁核,但与腹侧被盖区、中脑脚间核并无投射环路,其中基底前脑-内侧缰核投射环路中约有14.5%由Nestin阳性神经元发出,这两个脑区之间的胆碱能环路中约有26.9%为Nestin亚型;基底前脑-基底外侧杏仁核投射环路中约有5.19%为Nestin阳性神经元,两脑区之间的胆碱能环路中有16.7%为Nestin亚型。结论除已有报道的脑区外,Nestin阳性神经元主要与内侧缰核形成神经环路,也少量投射至基底外侧杏仁核,可能与恐惧记忆、情绪等的调控有关。

推拿对睡眠剥夺小鼠基底前脑腺苷及A_(2A)受体的调节作用

目的:研究推拿对睡眠剥夺小鼠基底前脑腺苷、A_(2A)受体的调节作用。方法:C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组和推拿组,每组8只。经4 d睡眠剥夺并予6 d推拿治疗后,观察小鼠整体状态和日常活动量;以电生理记录脑电/肌电信号,分析小鼠觉醒、非快速眼动及快速眼动睡眠时间及基底前脑神经活动;ELISA法检测基底前脑腺苷水平;光纤记录法观察基底前脑星形胶质细胞释放腺苷情况;Western Blot法检测基底前脑腺苷A_(2A)受体蛋白表达。结果:①推拿干预后,睡眠剥夺小鼠毛发色泽和精神状态有所恢复;推拿组第4-6天日常活动量显著高于模型组(P<0.01);且第6天与空白组差异无统计学意义(P>0.05)。②推拿干预后,睡眠剥夺小鼠非快速眼期缩短(P<0.01),觉醒期增加(P<0.01);基底前脑δ、θ波活动降低。③推拿干预后,睡眠剥夺小鼠基底前脑腺苷水平降低(P<0.01);星形胶质细胞腺苷释放减少;A_(2A)受体蛋白表达下降(P<0.05)。结论:(1)推拿可增加睡眠剥夺小鼠日常活动,降低基底前脑δ、θ波活动,改善睡眠剥夺引发的嗜睡现象。(2)推拿可降低睡眠剥夺小鼠基底前脑腺苷水平及其受体A_(2A)蛋白表达,减少基底前脑星形胶质细胞腺苷释放,参与改善睡眠剥夺后觉醒过程。

鸡基底前脑胆碱能皮质投射神经元区的ChAT样免疫反应神经元

应用免疫组织化学SP法 ,对 5只产蛋高峰期鸡基底前脑胆碱能皮质投射神经元区的ChAT样免疫反应神经元的分布特征进行了研究。结果发现 :从内侧隔核至Meynert基底核 ,ChAT样免疫反应神经元呈连续性分布 ,且各区神经元的密度、大小及着色强度不均。MS、NDBV/H及旧纹体膨大部的阳性细胞分布密集 ,且突起较明显 ;原始旧纹体部阳性细胞分布稀疏 ,突起明显。结果表明 ,在鸡的基底前脑胆碱能皮质投射神经元区广泛分布着ChAT样免疫反应神经元 ,这为鸡的基底前脑—海马投射系统积累了资料 ,表明该区在鸡的学习、记忆中起着重要的调节作用。

BDNF、NGF对体外长期培养的胚基底前脑胆碱能神经元的影响

本文探讨了脑源性神经营养因子、神经生长因子对体外长期培养的胚基底前脑胆碱能神经元是否具有延缓退变的作用。实验分为脑源性神经营养因子组、神经生长因子组、脑源性神经营养因子加神经生长因子组及单纯对照组。取孕 17d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 2 4孔培养板中 ,按分组加入含相应神经营养因子和不含神经营养因子的 DMEM培养液 ,分别于体外培养 12、18、2 4、3 0 d后进行乙酰胆碱酯酶组织化学反应。显微镜下计数各孔中乙酰胆碱酯酶阳性神经元数 ,每孔随机测量和计数 2 5个乙酰胆碱酯酶阳性神经元的平均胞体直径、发出的突起数和最长突起长度。数据用方差分析和 SNK检验进行统计学处理。结果显示 ,在培养的 4个时期 ,含脑源性神经营养因子组、神经生长因子组和脑源性神经营养因子加神经生长因子组的各项数据均明显地优于单纯对照组 ;脑源性神经营养因子加神经生长因子组的各项数据 ,特别是最长突起长度优于单独使用脑源性营养因子或神经生长因子组。提示 :脑源性神经营养因子和神经生长因子不仅对体外培养的胚胆碱能神经元发育生长具有促进作用 ,而且还可延缓体外长期培养的大鼠胚基底前脑胆碱能神经元的退变 ;

Genistein对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元影响的体内研究

本文旨在研究染料木素(genistein)对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响。雌性大鼠双侧卵巢切除2周后用genistein和雌激素替代治疗1周。称子宫重量以确定手术是否成功及雌二醇(E2)的治疗是否有效。用免疫组化染色、RT-PCR和Westernblot等方法对胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量进行检测。结果显示:去卵巢3周后子宫变轻,雌激素替代治疗能增加去卵巢子宫的重量,而genistein替代治疗对去卵巢子宫的重量影响不明显;去卵巢3周后,内侧隔核(MS)和斜角带垂直臂核(VDB)内的胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量均明显减少,雌激素和genistein替代治疗后能显著增加去卵巢大鼠MS和VDB内的胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量。本研究结果提示:genistein对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元具有类似雌激素样神经保护作用,而对子宫影响不明显。

神经生长因子（NGF）对基底前脑NGF－受体阳性神经元损伤后的保护作用

切断老年鼠（２４月龄）左侧穹窿海马伞，造成隔海马胆碱能系统损伤模型。用免疫组化方法分析脑室注射ＮＧＦ对基底前脑神经生长因子受体（ＮＧＦ－Ｒ）阳性神经元损伤的影响、实验证明损伤一个月后，损伤对照组损伤例内侧隔核和斜角带核垂直支ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元数量分别减少了５９．４％和３７．２４％，残存的神经元发生萎缩及表面受体含量增加。ＮＧＦ治疗组，损伤侧的内侧隔核和斜角带核垂直支的ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元数量只减少４．４７％和２．３６％，细胞形态学参数及受体灰度值都类似于正常。提示ＮＧＦ对基底前脑ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元损伤后有较好的保护作用。

Orexin-A对氯胺酮麻醉老年大鼠学习记忆及基底前脑ChAT表达的影响

目的观察orexin-A对氯胺酮麻醉老年大鼠学习记忆及基底前脑ChAT表达的影响,并探讨其可能机制。方法将40只老年大鼠,随机分为空白对照组、模型对照组、orexin-A低剂量组、orexin-A高剂量组,各10只。以100 mg/kg氯胺酮腹腔注射建立实验模型。麻醉10 min后,治疗组侧脑室注入orexin-A 1、4nmol/10μL。对照组注入等量人工脑脊液。以Morris水迷宫行为学及免疫组化方法,观察麻醉后大鼠学习记忆功能和基底前脑胆碱乙酰基转移酶(ChAT)的表达变化。结果(1)氯胺酮麻醉后老年大鼠Morris水迷宫成绩明显下降,orexin-A可提高水迷宫各观察指标成绩,以4nmol剂量效果显著(P<0.05,P<0.01)。(2)氯胺酮麻醉后,基底前脑ChAT表达降低,4nmol orexin-A能部分逆转其变化(P<0.05)。结论一定剂量orexin-A可明显改善氯胺酮麻醉后老年大鼠学习记忆功能。此效应可能与其逆转麻醉后大鼠基底前脑ChAT的低表达密切相关。

植物雌激素对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响

目的:观察植物雌激素对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元表达的影响,探讨植物雌激素在中枢神经系统的保护作用及机制。方法:采用乙酰胆碱转移酶(ChAT)免疫组织化学ABC法,观察去卵巢大鼠5W后各组基底前脑内侧隔核(MS),斜角带垂直支(VDB)胆碱能神经元的数目。结果:与去卵巢对照组相比,植物雌激素用药组、雌激素用药组的内侧隔核,斜角带垂直支胆碱能神经元数目明显升高(P<0.05),与假手术组差别不明显。结论:本研究提示植物雌激素能明显增加去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元的表达,从而对中枢神经系统退行性病变起保护作用,并有望预防和治疗老年性痴呆。

基底前脑NOS神经元移植至成年鼠海马内的发育

目的研究基底前脑ＮＯＳ神经元移植至成年鼠海马内后，ＮＯＳ的发育变化规律，同时观察移植物与宿主海马间发生联系的情况。方法将大鼠１４～１６ｄ胚胎的基底前脑移植到单侧穹隆海马伞切断的成年大鼠海马内，动物在移植后存活５、７、１４、３０、６０、９０、１５０和１８０ｄ分别取脑，经ＮＡＤＰＨ－ｄ法和尼氏染色观察。结果在移植后第７ｄ时ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性染色才出现在ＮＯＳ阳性神经元内，随着移植物成活时间的延长，ＮＯＳ阳性神经元逐渐生长在３０ｄ时已发育成熟，而且３０ｄ时可见其与宿主海马发生联系，直到１８０ｄ仍有良好的联系。结论移植物的ＮＯＳ阳性神经元在海马的发育有一定的规律。移植物可以在海马内长期存活并可以和宿主脑整合生长，表明移植物可能有功能。

额叶皮质损伤对大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响

本实验探讨了前额叶皮质局限性损伤对大鼠学习、记忆功能及基底前脑胆碱能神经元的影响。用外科手术造成大鼠一侧前额叶皮质局限性损伤后不同时间 ,用Y型迷宫检测学习、记忆功能 ,用组织化学技术检测基底前脑含乙酰胆碱酯酶 (AChE)活性神经元。实验观察到前额叶皮质损伤后 1周 ,动物学习、记忆功能有所障碍 ,损伤同侧的基底前脑胆碱能神经元有所减少 ,但均无统计学意义。损伤后 2 ,3,4周 ,动物学习、记忆障碍明显 ,损伤同侧基底前脑胆碱能神经元明显减少 (P <0 .0 5) ,且两者变化相平行。结果表明单侧前额叶皮质局限性损伤不仅可引起动物学习、记忆功能障碍 ,且可引起同侧基底前脑胆碱能神经元丢失 ,且两者发展相平行 ,提示基底前脑胆碱能神经元逆行性变性在动物额叶皮质损伤引起的学习。

银杏内酯对胚基底前脑NOS、AChE阳性神经元发育的影响

目的 探讨银杏内酯对胚基底前脑NOS和AChE阳性神经元发育的影响。方法 实验分成银杏组、NGF组、BDNF组和单纯对照组 ,取孕 17dSD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 96孔培养板和 2块 2 4孔培养板中 ,分别加入含银杏内酯、NGF、BDNF及不含上述成份的DMEM培养液 ,于体外培养 18d后 ,96孔培养板行MTT比色分析测定光吸收值 (OD值 ) ,以检测培养的神经元活力。2块 2 4孔培养板分别行NADPH d和AChE组化染色 ,显微镜下计数各组每孔中的NOS和AChE阳性神经元数 ,并用CMM 30 1图像分析系统对两种神经元的细胞面积和细胞周长进行处理 ,数据用方差分析和SNK检验进行统计学处理。结果 银杏组MTT比色分析的OD值和NOS、AChE阳性神经元数、细胞面积、细胞周长等指标均明显地好于单纯对照组 ,达到或仅稍差于NGF组或BDNF组的指标。

成人基底前脑巢蛋白免疫阳性神经细胞的细胞化学观察

目的 探讨巢蛋白 (nestin)免疫阳性细胞在人基底前脑内的分布规律及化学特性。 方法 采用nestin 331B、10C2、Rat4 0 1抗体显示人基底前脑的nestin免疫阳性细胞 ,并应用NSE、p75NGFR、ChAT、GFAP抗体分别对nestin免疫阳性细胞进行了双标免疫细胞化学研究 ,同时还应用NADPH d进行组织化学染色。 结果 在成人基底前脑有一个连续的nestin免疫阳性细胞带 ,胞体较大 ,呈卵圆形或梭形 ,有 1～ 3个突起 ,分布于隔核、斜角带核、Meynert核、无名质及杏仁核群。双标染色显示 ,nestin阳性细胞被NSE抗体标记 ,并与ChAT、NGFR、NOS阳性神经元间杂分布 ,多数不呈交叉反应。约 2 8%nestin免疫阳性细胞为ChAT阳性神经元 ,15 %为NGFR阳性神经元 ,6 %为NOS阳性神经元。此外 ,透明隔及隔区靠近软膜处有少量nestin免疫阳性细胞 ,其形态与星形胶质细胞相似 ,不与GFAP有交叉免疫阳性反应。 结论 成人基底前脑存在一个有别于ChAT、NGFR、NOS神经元的nestin免疫阳性神经元簇 。

成年大鼠基底前脑存在一个Nestin免疫阳性神经元簇

目的 观察Nestin免疫活性在成年大鼠基底前脑中的表达和分布 ,并探讨其与胆碱能神经元之间的关系。方法 采用免疫组化方法对成年大鼠基底前脑的切片进行nestin免疫组化染色及其与ChAT ,NADPH d双标染色。结果 在成年大鼠基底前脑的隔斜角带复合体有一个连续的nestin免疫阳性细胞带 ,胞体较大 ,梭形或多极形 ,有 2～ 4个突起。双标染色显示 ,Nestin阳性神经元与ChAT ,NADPH d阳性神经元间杂分布 ,大多数不呈交叉反应 ,只有少数 ,约 10 %呈双标染色。结论 成年大鼠基底前脑存在一个有别于胆碱能神经元的nestin免疫阳性神经元簇 ,其化学属性和生物学意义有待进一步研究。

成年大鼠基底前脑nestin阳性神经元的性别差异

为了探讨成年雌雄大鼠基底前脑nestin阳性神经元的性别差异及其意义,本实验应用免疫组织化学方法对正常成年雌雄SD大鼠及去势2周和4周的雌雄SD大鼠基底前脑的内侧隔核(MS)、斜角带垂直支(vDB)及斜角带水平支(hDB)的nestin阳性神经元的变化进行了比较研究。结果显示正常雌雄大鼠MS、vDB及hDB的nestin阳性神经元数十分接近(P>0.05);而去睾丸2周大鼠组MS、vDB、hDB的nestin阳性神经元数则明显高于去卵巢2周大鼠组(P<0.05,P<0.01);去睾丸4周大鼠组vDB、hDB的nestin阳性神经元数依然明显高于去卵巢4周大鼠组(P<0.05),但两组MS间的nestin阳性神经元数差别不大(P>0.05);各组大鼠的nestin阳性神经元的胞体和树突均相似。以上结果表明,正常成年雌雄大鼠基底前脑的nestin阳性神经元数不存在性别差异,无论去势与否,nestin阳性神经元的形态始终不存在性别差异;而去势后nestin阳性神经元数却存在着明显的性别差异。提示基底前脑nestin阳性神经元的性别差异不仅与雌激素和雄激素在雌雄个体中所发挥的不同作用密切相关,而且还可能是促使学习记忆出现性别差异的形态学基础。

剥夺卵巢雌激素对成年大鼠基底前脑神经元表达Nestin的影响

目的 探讨剥夺卵巢雌激素对成年大鼠基底前脑神经元表达Ｎｅｓｔｉｎ的影响。方法 将健康成年雌性大鼠随机分为正常对照、卵巢切除２周及４周三组，用免疫组化法观察卵巢切除后基底前脑的内侧隔核（ＭＳ）、斜角带垂直支（ｖＤＢ）及水平支（ｂＤＢ）Ｎｅｓｔｉｎ免疫反应阳性（Ｎｅｓｔｉｎ－ＩＲ） 神经元的形态和数目变化。结果 卵巢切除２周、４周组ＭＳ、ｖＤＢ及ｈＤＢ的Ｎｅｓｈｎ－ＩＲ神经元形态与正常对照组相比无明显变化；但卵巢切除２周、４周组ＭＳ、ｖＤＢ及ｈＤＢ的 Ｎｅｓｔｉｎ－ＩＲ神经元的数目与正常对照组相比均有不同程度的减少，尤以ｈＤＢ的减少最明显（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）。结论 提示基底前脑Ｎｅｓｔｉｎ－ＩＲ神经元的Ｎｅｓｈｎ表达受卵巢雌激素的影响，ｈＤＢ的Ｎｅｓｈｎ－ＩＲ神经元的表达受此影响更大。

神经生长因子缓释微球植入后阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元的变化

背景:已有研究表明,神经营养因子对中枢和周围神经损伤后的存活修复有促进作用。然而,神经生长因子是大分子蛋白类物质,生物半衰期很短,很难透过血脑屏障,寻找有效的神经营养因子投递系统至关重要。目的:观察了神经生长因子微球对阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元的保护作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-11/2006-07在广州医学院神经生物学实验室完成。材料:采用双乳化技术制备神经生长因子缓释微球。28只SD大鼠,随机分为3组:正常对照组8只,模型对照组8只,神经生长因子缓释微球植入组12只。方法:模型对照组和神经生长因子缓释微球植入组左侧穹隆海马伞切断制备阿尔茨海默病模型,正常对照组不做任何处理。神经生长因子缓释微球植入组切断后即刻行基底前脑注射神经生长因子缓释微球。正常对照组和模型对照组注射等量生理盐水。主要观察指标:注射4周后,利用免疫组化法观察各组大鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元变化。结果:28只大鼠均进入结果分析。模型对照组损伤侧的内侧隔核和斜角带核的神经生长因子受体阳性神经元大量减少,分别减少59.7%和54.4%;神经生长因子缓释微球植入组损伤侧的内侧隔核和斜角带核细胞数分别减少17.9%和19.8%,明显高于模型对照组损伤侧的神经生长因子受体阳性神经元存活数(P<0.05)。结论:神经生长因子缓释微球植入对阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经生长因子受体阳性神经元有明显的保护作用。

Aβ31-35和ApoE4对体外大鼠基底前脑神经元存活和生长的协同作用

目的 探讨 β-淀粉样蛋白 (Aβ)和载脂蛋白 (Apo E4)对基底前脑神经元存活和生长的影响 ,研究Alzheimer病 (AD)发病的细胞分子机制。 方法 体外培养基底前脑神经细胞 ,MTT法和免疫细胞化学方法结合体视学分析 ,观察 Aβ31- 35和 Apo E4对基底前脑神经元存活及胞体和突起生长的影响。 结果 (1) MTT法测得的 Aβ- 31- 35 +Apo E4组的 A值 ,与对照组比较明显减小 (P<0 .0 5 ) ,说明神经元的存活力降低 ,存活数量减少 ;(2 )Aβ31- 35 +Apo E4组的神经元胞体最长径和最短径明显低于对照组和 Apo E4组 (P<0 .0 5 ) ;平均突起长度也明显低于对照组、Apo E4组和 Aβ31- 35 (10 μmol/ L)组 (P<0 .0 1) ;(3) Aβ31- 35 (2 0 μm ol/ L)组平均突起长度比对照组、Apo E4组和 Aβ31- 35 (10 μmol/ L)组明显减小 (P<0 .0 1) ;(4) Aβ31- 35 +Apo E4组和 Aβ31- 35 (2 0 μm ol/ L)组的胆碱能神经元最长突起长度、总突起长度及平均突起长度均明显低于对照组 (P<0 .0 1) ;且这两组的 Ch AT阳性神经元的胞体平均灰度也明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,说明 Ch AT的活性下降。单独 Apo E4对基底前脑神经元的存活和生长均无明显影响。 结论 Aβ31- 35 +Apo E4比单独 Aβ31-

β-淀粉样蛋白增加基底前脑神经元对谷氨酸的易感性

目的探讨β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)与谷氨酸(Glu)联合应用,对原代培养的大鼠基底前脑神经元的作用。方法原代培养大鼠基底前脑神经元,应用形态学、MTT法结合ChAT免疫组织化学染色,分别观察Aβ25-35与Glu联合应用,对原代培养的基底前脑神经元存活率、形态学及ChAT免疫反应阳性神经元的影响。结果将100 nmol/L、1μmol/L Aβ分别和20μmol/L Glu联合用于培养的基底前脑神经元,在倒置显微镜下观察,细胞表面粗糙,立体感减弱,胞浆中出现深色颗粒,细胞肿胀或收缩;尼氏染色显示尼氏体减少;MTT检测显示神经元存活率明显下降,100nmol/L Aβ+20μmol/L Glu组与100 nmol/L Aβ组间,1μmol/L Aβ+20μmol/L Glu组与1μmol/L Aβ组间比较均具有统计学差异(P<0.05);ChAT免疫阳性神经元的灰度和截面积均减小。结论Aβ25-35可增加神经元对Glu神经毒性作用的敏感性,表明Glu在阿尔茨海默病发病中起着非常关键的作用。

Genistein对大鼠基底前脑胆碱能神经元发育影响的体外研究

本文旨在研究染料木素(genistein)对体外培养的基底前脑胆碱能神经元发育的影响。取孕18d胎鼠基底前脑神经元,体外有血清培养7d后,随机分为3组:无血清培养液组(control组),genistein+无血清培养液组(G组)、E2+无血清培养液组(E2组)。48h后用MTT法测定细胞活力和代谢状态;用AChE组化染色以及ChAT和MAP2免疫荧光双重染色,镜下计数AChE阳性和ChAT阳性神经元数,并对两种神经元的细胞面积、第一级突起数及最长突起长度进行检测。结果显示:MTT法所测的OD值、AChE阳性和ChAT阳性神经元数、细胞面积、第一级突起数及最长突起长度在G组与control组之间无明显差异,然而E2组中的上述数值均明显增加。本研究的结果提示:genistein对体外培养的基底前脑胆碱能神经元无类似雌激素样的神经保护和营养作用。