BDNF、NGF对体外长期培养的胚基底前脑胆碱能神经元的影响

本文探讨了脑源性神经营养因子、神经生长因子对体外长期培养的胚基底前脑胆碱能神经元是否具有延缓退变的作用。实验分为脑源性神经营养因子组、神经生长因子组、脑源性神经营养因子加神经生长因子组及单纯对照组。取孕 17d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 2 4孔培养板中 ,按分组加入含相应神经营养因子和不含神经营养因子的 DMEM培养液 ,分别于体外培养 12、18、2 4、3 0 d后进行乙酰胆碱酯酶组织化学反应。显微镜下计数各孔中乙酰胆碱酯酶阳性神经元数 ,每孔随机测量和计数 2 5个乙酰胆碱酯酶阳性神经元的平均胞体直径、发出的突起数和最长突起长度。数据用方差分析和 SNK检验进行统计学处理。结果显示 ,在培养的 4个时期 ,含脑源性神经营养因子组、神经生长因子组和脑源性神经营养因子加神经生长因子组的各项数据均明显地优于单纯对照组 ;脑源性神经营养因子加神经生长因子组的各项数据 ,特别是最长突起长度优于单独使用脑源性营养因子或神经生长因子组。提示 :脑源性神经营养因子和神经生长因子不仅对体外培养的胚胆碱能神经元发育生长具有促进作用 ,而且还可延缓体外长期培养的大鼠胚基底前脑胆碱能神经元的退变 ;

Genistein对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元影响的体内研究

本文旨在研究染料木素(genistein)对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响。雌性大鼠双侧卵巢切除2周后用genistein和雌激素替代治疗1周。称子宫重量以确定手术是否成功及雌二醇(E2)的治疗是否有效。用免疫组化染色、RT-PCR和Westernblot等方法对胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量进行检测。结果显示:去卵巢3周后子宫变轻,雌激素替代治疗能增加去卵巢子宫的重量,而genistein替代治疗对去卵巢子宫的重量影响不明显;去卵巢3周后,内侧隔核(MS)和斜角带垂直臂核(VDB)内的胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量均明显减少,雌激素和genistein替代治疗后能显著增加去卵巢大鼠MS和VDB内的胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量。本研究结果提示:genistein对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元具有类似雌激素样神经保护作用,而对子宫影响不明显。

额叶皮质损伤对大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响

本实验探讨了前额叶皮质局限性损伤对大鼠学习、记忆功能及基底前脑胆碱能神经元的影响。用外科手术造成大鼠一侧前额叶皮质局限性损伤后不同时间 ,用Y型迷宫检测学习、记忆功能 ,用组织化学技术检测基底前脑含乙酰胆碱酯酶 (AChE)活性神经元。实验观察到前额叶皮质损伤后 1周 ,动物学习、记忆功能有所障碍 ,损伤同侧的基底前脑胆碱能神经元有所减少 ,但均无统计学意义。损伤后 2 ,3,4周 ,动物学习、记忆障碍明显 ,损伤同侧基底前脑胆碱能神经元明显减少 (P <0 .0 5) ,且两者变化相平行。结果表明单侧前额叶皮质局限性损伤不仅可引起动物学习、记忆功能障碍 ,且可引起同侧基底前脑胆碱能神经元丢失 ,且两者发展相平行 ,提示基底前脑胆碱能神经元逆行性变性在动物额叶皮质损伤引起的学习。

植物雌激素对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响

目的:观察植物雌激素对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元表达的影响,探讨植物雌激素在中枢神经系统的保护作用及机制。方法:采用乙酰胆碱转移酶(ChAT)免疫组织化学ABC法,观察去卵巢大鼠5W后各组基底前脑内侧隔核(MS),斜角带垂直支(VDB)胆碱能神经元的数目。结果:与去卵巢对照组相比,植物雌激素用药组、雌激素用药组的内侧隔核,斜角带垂直支胆碱能神经元数目明显升高(P<0.05),与假手术组差别不明显。结论:本研究提示植物雌激素能明显增加去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元的表达,从而对中枢神经系统退行性病变起保护作用,并有望预防和治疗老年性痴呆。

Genistein对大鼠基底前脑胆碱能神经元发育影响的体外研究

本文旨在研究染料木素(genistein)对体外培养的基底前脑胆碱能神经元发育的影响。取孕18d胎鼠基底前脑神经元,体外有血清培养7d后,随机分为3组:无血清培养液组(control组),genistein+无血清培养液组(G组)、E2+无血清培养液组(E2组)。48h后用MTT法测定细胞活力和代谢状态;用AChE组化染色以及ChAT和MAP2免疫荧光双重染色,镜下计数AChE阳性和ChAT阳性神经元数,并对两种神经元的细胞面积、第一级突起数及最长突起长度进行检测。结果显示:MTT法所测的OD值、AChE阳性和ChAT阳性神经元数、细胞面积、第一级突起数及最长突起长度在G组与control组之间无明显差异,然而E2组中的上述数值均明显增加。本研究的结果提示:genistein对体外培养的基底前脑胆碱能神经元无类似雌激素样的神经保护和营养作用。

胰岛素促进基底前脑胆碱能神经元树突的增生

本实验采用２月龄ＳＤ大鼠３０只，建立隔－海马通路损伤模型，分别存活２和４周．实验用药组给予胰岛素脑室内注射（０．６ｕ／次／３ｄ）．到期动物用Ｇｏｌｇｉ－Ｃｏｘ改良技术染片，并用ＣａｍｅｒａＬｕｃｉｄａ描绘出基底前脑内侧隔核和斜角带核神经元全貌，按Ｓｈｏｌｌ方法分析神经元树突结构．结果显示，基底前脑内侧隔核和斜角带核神经元树突结构在损伤后发生较大变化，神经元树突野明显缩小，但在胰岛素用药组，树突的截点数，总长均大于对照组（Ｐ＜０．０１）．Ｓｈｏｌｌ线性回归分析结果显示，用药组神经元树突的截距大于对照组（Ｐ＜０．０５），斜率小于对照组（Ｐ＜０．０５）．因此，本文认为胰岛素具有减少损伤后基底前脑内侧隔核和斜角带核神经元树突的丢失．促讲其增生的作用．

NGF预防大鼠额叶皮质损伤后基底前脑胆碱能神经元变性

目的 为了观察神经生长因子(NGF)对大鼠额叶皮质损伤后基底前脑胆碱能神经元变性的预防效果。方法 24只SD大鼠,随机平均分为3组:①实验组(NGF),②对照组(等容量的生理盐水),③正常组(假手术)。用外科手术造成双侧额叶皮质局限性损伤。动物的学习、记忆机能及基底前脑含乙酰胆碱酯酶(AChE)活性神经元则分别用Y型迷宫和组织化学方法进行检测。结果 额叶皮质损伤4周后,动物的学习、记忆机能明显下降(P<0.01),基底前脑含AChE活性神经元明显减少(P<0.01)。NGF治疗可有效地防止额叶皮质损伤大鼠学习、记忆障碍的发生及基底前脑含AChE活性神经元的减少(P<0.05)。结论 NGF对双侧额叶皮质损伤大鼠的学习、记忆机能障碍及基底前脑胆碱能神经元变性有预防效果。

重组腺伴随病毒载体表达hBDNF对大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤的保护作用

目的 探讨重组腺伴随病毒载体表达人脑源性神经营养因子 (hBDNF)对大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤的保护作用。方法 用 β淀粉样肽 (Aβ2 5 3 5)注入大鼠Meynert核损伤胆碱能神经元。损伤后 8～ 10d行hBDNF重组腺伴随病毒脑内注射。经避暗回避试验测试大鼠学习记忆能力 ,组织学及免疫组织化学观察hBDNF表达以及胆碱能神经元数量变化。结果 避暗回避试验结果显示 ,应用hBDNF重组腺伴随病毒 4周后 ,实验组动物的学习记忆能力增强 ,行为明显改善。胆碱乙酰转移酶 (ChAT)免疫组织化学染色显示 ,注射点附近免疫反应阳性神经元散在或成群分布 ,数目明显增多 ,经与模型组比较 ,胆碱能神经元数量增高约 3 7%。结论 hBDNF重组腺伴随病毒可在脑内表达hBDNF ,表达的hBDNF对损伤的胆碱能神经元具有营养和保护作用。

尼古丁对培养大鼠基底前脑胆碱能神经元生长存活及TrkA表达的影响

目的 探讨不同浓度的尼古丁对原代培养的大鼠基底前脑胆碱能神经元的高亲和力神经生长因子受体(TrkA)表达的影响 ,结合细胞形态学观察和四甲基偶氮唑盐 (MTT)实验了解TrkA表达变化对细胞生长的影响。方法 运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑胆碱能神经元并进行鉴定 ,用 0 .0 1,0 .1,1,10和 10 0 μmol/L五个终浓度的尼古丁对原代培养细胞进行干预 ,观察细胞的形态变化 ,MTT实验观察细胞的活力 ,提取细胞总RNA行RT PCR观察神经元TrkAmRNA表达的变化 ,免疫细胞学化观察TrkA表达的变化 ;用 10 μmol/L终浓度的尼古丁以不同的时间 (分别为 8,2 4 ,4 8h)进行干预 ,观察不同时间干预下上述指标的变化。结果 在 0 .0 1～ 10 μmol/L浓度范围内的尼古丁呈剂量依赖性地增加神经元TrkA的表达 ,10 0 μmol/L浓度的尼古丁则引起TrkA表达的下降 ,前浓度范围的尼古丁可以剂量依赖性地增加原代培养的神经元细胞突起数量、平均突起长度和最长突起长度 ,增加MTT法测得的OD值 ,10 0 μmol/L终浓度尼古丁则产生相反的作用。 结论 在一定浓度范围内 ,尼古丁可以增加原代培养的胆碱能神经元TrkA表达 ,对神经元可能具有营养作用。

神经生长因子和神经节苷脂GM1联合应用对鼠基底前脑胆碱能神经元的保护作用

目的探讨神经生长因子(NGF)和神经节苷脂GMl联合应用对基底前脑胆碱能神经元是否具有延缓退变的作用。方法实验分为NGF组、NGF+神经节苷脂GMl组和单纯对照组。取孕20 d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于24孔培养板中,按分组加入NGF、NGF+神经节苷脂GMl和不含神经营养因子的DMEM培养液,分别于体外培养12、18、24、30 d后进行乙酰胆碱酯酶组织化学反应。显微镜下计数各孔中乙酰胆碱酯酶阳性神经元数,每孔随机测量和计数20个乙酰胆碱酯酶阳性神经元的平均胞体直径、发出的突起数和最长突起长度。数据用方差分析和SNK检验进行统计学处理。结果在培养的4个时期,NGF组和联合组的各项数据均明显优于单纯对照组,神经节苷脂GMl+NGF组的各项数据,特别是最长突起长度优于单独使用NGF组。结论NGF和神经节苷脂GMl联合应用及NGF单独应用不仅对体外培养的胚胆碱能神经元发育生长具有促进作用,而且还可延缓体外长期培养的人鼠胚基底前脑胆碱能神经元的退变;联合应用效果更佳。

雌激素对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元及一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的 探讨雌激素补充治疗对去卵巢大鼠胆碱能神经元及一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元表达的影响及剂量效应关系。方法 2 0只去卵巢SD大鼠分成 4个不同剂量组 :0 μg(对照组 )、2 0 μg(0 0 8mg/kg)、5 0 μg(0 2 0mg/kg)、10 0 μg(0 4 0mg/kg)组 ;1周后 ,用乙酰胆碱转移酶 (ChAT)免疫化学方法及尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶 (NADPH d)组织化学方法研究。结果 NOS阳性神经元在内侧隔核 (MS) ,其数目在各组间无明显差异 (P >0 0 5 )。在斜角带垂直支 (VDB) ,5 0 μg剂量组与对照组相比有明显差异 (P <0 0 5 ) ;ChAT阳性神经元在内侧隔核 (MS) ,其 2 0 μg、5 0 μg剂量组数目出现剂量递增效应 ,与对照组比较有明显差异 (P <0 0 5 ) ,但 10 0 μg剂量组与对照组比较没有明显差异 (P >0 0 5 ) ,同时 5 0 μg与 10 0 μg剂量组比较有明显差异 (P <0 0 5 )。ChAT阳性神经元在斜角带水平支 (HDB) ,各组间均无明显差异 (P >0 0 5 )。结论 雌激素补充治疗能选择性影响基底前脑各亚区NOS和胆碱能神经元 ,并有可能影响学习和记忆能力。

胰岛素与尼莫地平对大鼠基底前脑胆碱能神经元及空间学习记忆的影响

目的探讨胰岛素与尼莫地平对基底前脑胆碱能神经元与学习记忆在1型糖尿病脑病发生中的影响。方法将成年雄性Wistar大鼠随机分成糖尿病组、干预组、载体组及正常对照组。用链脲佐菌素成功建立成1型糖尿病模型12周后,对干预组大鼠每日皮下注射长效胰岛素(3 IU)、腹腔注射尼莫地平(20 mg/kg),连续用药6周,在相同条件下对载体组大鼠注射等体积的无药物液体,但对糖尿病组或正常对照组大鼠未进行任何处理。应用Morris水迷宫及胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫组化方法,分别测定各组大鼠的空间学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元的变化。结果糖尿病组大鼠内侧隔核、斜角带核垂直支、斜角带核水平支的ChAT阳性神经元数均明显减少(P<0.05),空间学习记忆能力也明显下降(P<0.05);干预组大鼠以上三个核团的ChAT阳性神经元数与学习记忆能力均明显大于糖尿病组大鼠(P<0.05),但干预组的各项指标仍然明显低于载体组大鼠或正常对照组大鼠(P<0.05)。结论在糖尿病的长期自然发展过程中,若不进行治疗则可累及到基底前脑胆碱能神经元,导致学习记忆障碍,这可能是引发1型糖尿病脑病的一个负性因素;此时联合应用胰岛素与尼莫地平仍可有效遏制该脑病向纵深发展的恶性势头。

基底前脑胆碱能神经元功能异常在阿尔茨海默病中的作用相关研究进展

细胞外老年斑的沉积和细胞内神经纤维缠结被认为是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)典型的病理改变。基底前脑胆碱能神经元(basal forebrain cholinergic neurons,BFCNs)功能异常导致的海马乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)功能下降也被认为是AD发生的主要特征。该文介绍了ACh突触传递过程、BFCNs投射系统、BFCNs在调节认知功能中的作用以及BFCNs功能异常在AD中的作用和近期的研究进展。

康复新对去卵巢大鼠学习记忆能力和基底前脑胆碱能神经元的影响

目的探讨康复新对去卵巢大鼠的学习记忆能力的影响及其可能机制。方法3月龄健康雌性SD大鼠36只,随机分成4组,即假手术组、去卵巢对照组、康复新低剂量组和康复新高剂量组,分别进行干预。8周后用Y迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,用免疫组化染色检测大鼠基底前脑不同区域胆碱能神经元的数目。结果康复新高剂量组大鼠"学会"所需总训练次数、训练错误次数及记忆检测时错误反应次数与去卵巢对照组比较明显减少(P<0.05),与假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05);康复新液高、低剂量组大鼠基底前脑内侧隔核(MS)、斜角带核垂直支(vDB)和水平支(hDB)的Ch AT阳性神经元数量增多;高剂量组基底前脑各区的Ch AT阳性神经元数明显高于去卵巢对照组(P<0.05),与假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05);而且康复新高剂量组大鼠vDB和h DB的Ch AT阳性神经元数明显高于康复新低剂量组(P<0.05)。结论康复新液可显著改善去卵巢大鼠学习记忆能力,其作用可能是通过增加基底前脑胆碱能神经元的功能实现的;康复新液有望成为防治雌激素撤退引起的神经功能障碍的药物。

段树民院士团队研究成果阐明基底前脑胆碱能神经元对睡眠觉醒行为的调控机制

一群睡着的小白鼠“帮助”科学家发现了一个关于睡眠的秘密：位于基底前脑的胆碱能神经元对睡眠觉醒行为具有特异的调节功能。浙江大学医学院神经科学研究所段树民院士团队3月6日在《细胞》（ Cell ）子刊《现代生物学》（ Current Biology ）发表论文“Selective Activation of Cholinergic Basal Forebrain Neurons Induces Immediate Sleep -wake Transitions”（ http：／／www．ncbi．nlm．nih．gov／pubmed／24613308）报道了上述新发现。 已知脑内一些区域分别具有促进睡眠和觉醒的功能，其中基底前脑是调控睡眠活动的中枢之一。在基底前脑的细胞群中，胆碱能神经元属于“少数民族”，只占该脑区所有细胞的5％，而经典的研究方法很难研究这样少量的神经元的活动对脑功能的影响。因此，胆碱能神经元虽被认为能引起脑皮层兴奋，但是其在睡眠觉醒中的确切作用与机制尚不清楚。研究团队采用光遗传学技术，对某一特定类型的神经元进行基因改造，把一种对光敏感的离子通道表达在这类神经元上，这种离子通道受到光刺激后就会开放，从而使神经元产生兴奋活动。这样，就能人为地用光来选择性地“操控”这些神经元的电活动。

鸡基底前脑胆碱能皮质投射神经元区的ChAT样免疫反应神经元

应用免疫组织化学SP法 ,对 5只产蛋高峰期鸡基底前脑胆碱能皮质投射神经元区的ChAT样免疫反应神经元的分布特征进行了研究。结果发现 :从内侧隔核至Meynert基底核 ,ChAT样免疫反应神经元呈连续性分布 ,且各区神经元的密度、大小及着色强度不均。MS、NDBV/H及旧纹体膨大部的阳性细胞分布密集 ,且突起较明显 ;原始旧纹体部阳性细胞分布稀疏 ,突起明显。结果表明 ,在鸡的基底前脑胆碱能皮质投射神经元区广泛分布着ChAT样免疫反应神经元 ,这为鸡的基底前脑—海马投射系统积累了资料 ,表明该区在鸡的学习、记忆中起着重要的调节作用。

卵巢切除和衰老对基底前脑的胆碱能神经元的影响(英文)

目的:本实验通过观察卵巢切除和衰老对基底前脑的内侧隔核和斜角带水平肢的乙酰胆碱转移酶胆碱能神经元变化,来探讨卵巢切除和衰老对基底前脑的胆碱能神经元胞体和突起的影响。方法:通过利用乙酰胆碱转移酶免疫组织化学的方法观察正常成年雌性组、切除卵巢组和老年组的动物胆碱能神经元形态和突起的变化。结果:切除卵巢组的动物的胆碱能神经元的细胞数(237±8),细胞大小(100.86±37.01)μm2,突起长度(100.86±37.01)与正常成年雌性组之间有明显的差异性(t=4.82～33.08,P<0.05)。正常雌性组和老年组的乙酰胆碱转移酶的细胞数(320±11,185±12;220±14,164±11),细胞大小(172±63,200±69;125±38,129±44),突出数目(1.17±0.45,1.64±0.23;0.76±0.45,1.17±0.42)有明显的差异性(t=9.11～31.02,P<0.05)。结论:切除卵巢和衰老能够引起基底前脑的胆碱能神经元胞体大小、数目及其突起数目的明显减少,这有可能解释衰老或神经退行性疾病导致的认知功能障碍。

树鼩基底前脑的胆碱能神经元分布

目的 :研究树基底前脑的胆碱能神经元的细胞特征、分布特征及比例。方法 :用细胞免疫组织化学技术。结果 :树基底前脑的胆碱能神经元分为Ch1～Ch4 4群。Ch1分布于内侧隔核 (MS)的外侧和靠中线处 ,占 2 1.6 % ,细胞多为卵圆形 ,胞体直径 11～ 13μm ,突起 1～ 2条 ;Ch2与非胆碱能细胞混杂或呈簇状分布于斜角带核垂直支 (VDB) ,占 6 4 % ,胞体以卵圆形为主 ,直径 13～ 16 μm ,突起 2～ 3支 ;Ch3均匀分布于斜角带核水平支 (HDB) ,但内侧部的较密 ,占 5 1.2 % ,外侧部的稀疏 ,仅占 2 1.7% ,胞体也多呈卵圆形。直径 12～ 16 μm ,突起多为 1条 ;Ch4均匀分布于Meynert基底核 (NB) ,占 6 8.1% ,胞体深染 ,形态多样 ,直径 14～ 17μm ,突起少。结论 :树基底前脑的胆碱能神经元的分布与大鼠、猴的基本类似。

基底前脑巢蛋白阳性胆碱能神经元抗损伤作用

目的:探索基底前脑巢蛋白阳性和阴性胆碱能神经元对神经毒性损伤的不同反应。方法:30只SD大鼠随机分成5个组,即对照组和秋水仙碱Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组(10、20、50、100μg)。分别经侧脑室注射10μL生理盐水或不同剂量的秋水仙碱,24 h后4%多聚甲醛灌注取脑,冰冻切片,行胆碱乙酰转移酶和巢蛋白免疫组化。计数和分析基底前脑不同区域巢蛋白阳性和阴性胆碱能神经元的数目。结果:侧脑室秋水仙碱注射后,大鼠基底前脑不同区域巢蛋白阳性和阴性胆碱能神经元数目都下降。注射剂量越大,神经元数目下降越明显。与巢蛋白阳性神经元相比,巢蛋白阴性胆碱能神经元下降出现更早,下降更明显。结论:巢蛋白表达可增强基底前脑胆碱能神经元的抗损伤作用。