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Keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞系的构建
1
作者
郑雯
钟亚丹
+3 位作者
王炫
刘慧婷
杨斌
刘军
《皮肤性病诊疗学杂志》
2022年第4期299-304,共6页
目的利用CRISPR/Cas9技术构建一种keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞(hESCs)系,为研究表皮基底角质形成细胞异常的皮肤病提供一种细胞模型。方法构建针对目的基因keratin 5的sgRNA质粒及打靶Donor质粒,利用CRISPR/Cas9技术完成对ke...
目的利用CRISPR/Cas9技术构建一种keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞(hESCs)系,为研究表皮基底角质形成细胞异常的皮肤病提供一种细胞模型。方法构建针对目的基因keratin 5的sgRNA质粒及打靶Donor质粒,利用CRISPR/Cas9技术完成对keratin 5的定向切割,将IRES-eGFP敲入至keratin 5终止密码子上游,诱导hESCs分化为表达绿色荧光蛋白(GFP)的基底层角质形成细胞。结果PCR及Sanger测序结果表明IRES-eGFP成功整合至hESCs细胞系的keratin 5终止密码子上游,分化培养后观察细胞形态与角质形成细胞系HaCat形态一致。免疫荧光染色验证hESCs分化获得的ES-KC细胞系稳定表达GFP与keratin 5。结论成功制备了keratin 5-IRES-eGFP敲入的hESCs细胞系,并诱导hESCs成功分化出带有绿色荧光蛋白标记的基底层角质形成细胞。
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关键词
人胚胎干
细胞
CRISPR/Cas9技术
角蛋白5
基底层角质形成细胞
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职称材料
题名
Keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞系的构建
1
作者
郑雯
钟亚丹
王炫
刘慧婷
杨斌
刘军
机构
南方医科大学皮肤病医院
佛山市第一人民医院
出处
《皮肤性病诊疗学杂志》
2022年第4期299-304,共6页
基金
中国博士后科学基金面上项目(2019M662983)。
文摘
目的利用CRISPR/Cas9技术构建一种keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞(hESCs)系,为研究表皮基底角质形成细胞异常的皮肤病提供一种细胞模型。方法构建针对目的基因keratin 5的sgRNA质粒及打靶Donor质粒,利用CRISPR/Cas9技术完成对keratin 5的定向切割,将IRES-eGFP敲入至keratin 5终止密码子上游,诱导hESCs分化为表达绿色荧光蛋白(GFP)的基底层角质形成细胞。结果PCR及Sanger测序结果表明IRES-eGFP成功整合至hESCs细胞系的keratin 5终止密码子上游,分化培养后观察细胞形态与角质形成细胞系HaCat形态一致。免疫荧光染色验证hESCs分化获得的ES-KC细胞系稳定表达GFP与keratin 5。结论成功制备了keratin 5-IRES-eGFP敲入的hESCs细胞系,并诱导hESCs成功分化出带有绿色荧光蛋白标记的基底层角质形成细胞。
关键词
人胚胎干
细胞
CRISPR/Cas9技术
角蛋白5
基底层角质形成细胞
Keywords
human embryonic stem cell
CRISPR/Cas9
keratin 5
basal keratinocytes
分类号
R329.2 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞系的构建
郑雯
钟亚丹
王炫
刘慧婷
杨斌
刘军
《皮肤性病诊疗学杂志》
2022
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