沙眼衣原体ompA基因克隆及其在真核细胞中的表达(英文)

目的克隆D型沙眼衣原体(Ct)ompA基因,构建真核表达重组质粒,转染真核细胞,为核酸疫苗的研制作准备。方法用PCR技术从D型Ct基因组DNA中扩增ompA基因片段,重组入pUCm-T克隆载体。将pUCm-T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应,亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体,进行序列分析和酶切鉴定后,运用脂质体将重组体pcDNA3.1/ompA转染HeLa细胞,免疫组化法观察目的的基因的表达。结果从D型Ct基因组DNA中扩增出特异的ompA基因片段;序列测定证实与GenBank登陆的D型Ct一致;重组质粒pcDNA3.1/ompA在HeLa中获得表达。结论Ct ompA基因能够在体外真核细胞表达,为进一步研究致病机制及疫苗的研究提供理论依据。

胃镜下采集的疑似胃癌组织的基因表达谱分析

背景:基因芯片等高通量的研究手段已在肿瘤研究中得到广泛的应用,胃癌方面的研究主要集中在手术切除标本,对胃镜下取得的疑似胃癌组织的基因表达比较研究则较少报道。目的:比较胃镜下取得的病理诊断为胃癌和非癌样品的基因表达谱特征,为识别胃癌早期诊断的指标和疾病的分子分型奠定基础。方法:内镜下取47例胃癌疑似病变组织和对应非病变组织,经病理学诊断为胃癌28例,非癌病变19例。提取RNA,采用含14592个点的人cDNA芯片,经RNA放大技术进行基因表达谱的检测,检测结果采用GeneSpring软件分析,数据标准化用局部加权回归分析(LOWESS)处理,胃癌和非癌两组样品的组内和组间差异的显著性分析应用差异显著性分析(SAM)方法。结果:以30%样品中的表达调节水平大于1.5倍作为差异基因筛选标准,胃癌组表达上调的基因有133个,下调的有143个。非胃癌样品中有51个基因表达上调,22个表达下调,其中分别有18个上调基因和13个下调基因与胃癌组相同。组间差异分析筛选出40个基因,其表达调节可以由之进行胃癌和非癌组样品的区分。结论:基因表达谱芯片技术可以有效地应用于识别胃癌和非癌样品中的差异表达基因,并可用于肿瘤发病机制和分子分型的研究。