乙型肝炎病毒基本核心启动子区热点突变与广西肝癌家族聚集性的相关性

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)区突变与广西肝癌家族聚集的相关性。方法:从广西肝癌高发及无癌家族中配对选取HBs Ag阳性成员各103例。采用聚合酶链反应(PCR)扩增BCP区并测序分析。结果:BCP区突变发生在前5位的热点位点为T1762、A1764、G1775、V1753、G1803。单因素分析:HBV DNA≥105copies/m L、T1762、A1764和V1753突变均与肝癌高发有关(P<0.05)。多因素Logistic分析显示:HBV DNA≥105copies/m L和A1764突变是肝癌高发的独立危险因素。结论:HBV DNA水平、BCP区突变与广西肝癌家族聚集存在相关性。

乙型肝炎病毒基本核心启动子区1762/1764双突变与基因型和HBeAg血清学转换的关系

目的:观察慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)自然史中不同基因型乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(basic core promoter,BCP)区1762(A-T)/1764(G-A)双突变的分布,以及与中国常见HBV基因型的关系和对HBeAg血清学转换的影响。方法:随机选取168例未进行过抗病毒治疗的CHB患者,利用制备的特异性TaqMan MGB探针,采用特异性探针实时荧光定量PCR(PSRT-PCR)方法对其血清行B、C基因型分型和双突变定量检测,比较双突变在B、C基因型的分布情况;同时采用微粒子化学发光免疫法(CMIA)检测血清HBeAg和抗HBe,比较B、C基因型各组双突变株和野生株病毒的HBeAg血清学转换。结果:C基因型CHB患者BCP区1762/1764双突变率(70.65%)明显高于B基因型(29.17%,P=0.000)。观察HBeAg阴性CHB患者比例,B基因野生组明显高于其双突变组(28.57%,P=0.004)和C基因野生组(22.22%,P=0.000);C基因双突变组(63.08%)明显高于其野生组(22.22%,P=0.000)和B基因双突变组(28.57%,P=0.018)。在所有HBeAg阴性患者中,B基因野生组抗HBe阳性率(84.00%)高于其双突变组(0.00%,P=0.003)和C基因野生组(16.67%,P=0.004);C基因双突变组抗HBe阳性率(19.51%)与其野生组(16.67%)和B基因双突变组(0.00%)比较,差异无统计学意义(P均=1.000)。结论:在我国慢性HBV感染人群中,C基因型患者更易发生BCP区1762/1764双突变;B基因野生型患者易产生HBeAg阴性并伴有抗HBe阳性,HBeAg血清学转换较彻底;而C基因双突变患者易产生HBeAg阴性但不伴有抗HBe阳性,HBeAg血清学转换不彻底。

广西肝癌高发区乙型肝炎病毒基本核心启动子区A1762T/G1764A双突变对肝癌家族聚集的影响

目的探讨广西肝癌高发区乙型肝炎病毒（HBV）基因组基本核心启动子（BCP）区A1762T/G1764A双突变对肝癌家族聚集的影响。方法收集2007年7月—2012年7月广西肝癌高发区39个肝癌高发家族中103例成员作为试验组,在相同地区59个无癌家族中选择与试验组年龄、性别、生活环境匹配的103例成员作为对照组,将试验组按家族患肝癌例数分为2~3例亚组（45例）和≥4例亚组（58例）;按亲属分级分为一级亲属组（48例）,二级亲属组（32例）,三级及以上亲属组（23例）。提取所有研究对象HBV DNA,PCR扩增并测序检测BCP区A1762T/G1764A双突变情况。结果试验组A1762T/G1764A双突变率高于对照组〔χ^2=12.518,P〈0.001;OR=2.788,95%CI（1.569,4.955）〕。试验组男性A1762T/G1764A双突变率高于对照组〔χ^2=11.377,P=0.001;OR=3.450,95%CI（1.659,7.176）〕;两组女性A1762T/G1764A双突变率比较,差异无统计学意义〔χ^2=1.983,P=0.159;OR=1.950,95%CI（0.766,4.965）〕。试验组≥30岁年龄段A1762T/G1764A双突变率高于对照组〔χ^2=10.743,P=0.001;OR=3.444,95%CI（1.622,7.314）〕;两组〈30岁年龄段A1762T/G1764A双突变率比较,差异无统计学意义〔χ^2=2.489,P=0.115;OR=2.053,95%CI（0.836,5.041）〕。试验组患肝癌2-3例亚组与≥4例亚组A1762T/G1764A双突变率比较,差异有统计学意义〔（χ^2=6.639,P=0.01;OR=3.122,95%CI（1.290,7.555）〕。3组A1762T/G1764A双突变率比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。一级亲属亚组双突变率高于二级亲属亚组（P〈0.05）。试验组HBe Ag阴性者突变率高于HBe Ag阳性者（χ^2=6.361,P=0.012）。试验组A1762T/G1764A双突变者HBV DNA水平低于无双突变者（Z=-3.957,P〈0.01）。结论广西肝癌高发区HBV BCP区A1762T/G1764A双突变与肝癌家族聚集密切相关,A1762T/G1764A双突变可能对肝癌的发生具有重要的预测价值。

慢性HBV感染者HBV前C区/基本核心启动子区基因突变与临床应用

目的:探讨2010年10月至2013年6月来我院门诊及住院慢性HBV感染者中HBV前C(Pre C)区/基本核心启动子(BCP)区基因突变与其病程进展的相关性。方法:165例慢性HBV感染者血清生化指标检测,血清HBV DNA含量和HBe Ag定性检测,HBV Pre C区/BCP区突变率比较,分析Pre C区l896、BCP区1762/1764变异在HBV携带者(As C)、慢性乙型肝炎(CHB)和慢性乙型肝炎肝硬化(CHB-LC)患者中的分布。结果:血清生化指标在慢性HBV感染者病程发展中呈现相关性。与As C组比较:CHB组、CHB-LC组患者血清ALT、AST、AFP、TBA水平升高,差异有显著性意义(p<0.01),呈显著正相关,而TP、Alb、A/G水平降低,差异有显著性意义(p<0.05),呈负相关。HBe Ag(+)、HBe Ag(-)的标本中,BCP的突变率高于前C区突变率,差异有非常显著性意义。BCP区1762/1764双突变的突变率高于Pre C1896突变率。As C、CHB、CHB-LC 3组患者Pre C A1896、BCP区1762/1764变异率依次升高,与As C组比较,CHB组差异有显著性意义(P<0.05);CHB-LC组差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:对165例慢性HBV感染者观察,HBe Ag(+)/HBe Ag(-)患者及其病程不同发展阶段,Pre C/BCP出现相关联的突变率。特别需要注意的是HBe Ag(-)的慢性HBV感染者BCP区的突变率高于Pre C区的突变率,需要慎防HBV复制的危害性。HBV Pre C区/BCP区突变率可以预测到慢性HBV感染者病情的发展程度,对临床此类患者的研究具有重要意义。

乙型肝炎病毒基本核心启动子区A1762T/G1764A双突变复制质粒的构建

目的:构建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基本核心启动子(base core promoter,BCP)区A1762T/G1764A双突变株的复制质粒。方法:以1.5拷贝HBV野生型全基因组序列质粒(pHBV1.5,C型)为模板,采用分子克隆、大引物PCR定点诱导突变和遗传检测法等技术,筛选出阳性克隆,提取突变质粒,经DNA测序鉴定质粒序列的正确性。将突变质粒转染到人肝癌HepG2.0细胞,测定细胞培养液HBV DNA载量和HBsAg水平来鉴定突变质粒的复制能力。结果:成功构建BCP区A1762T/G1764A双突变复制质粒,经转染人肝癌HepG2.0细胞培养后测定HBV DNA水平,双突变株复制能力高于野生株[分别为(3.29±1.27)×105拷贝/ml和(1.24±0.24)×105拷贝/ml,P=0.01]。结论:获得BCP区A1762T/G1764A双突变株质粒,为进一步研究启动子转录活性等基础性研究提供了基本模型。

慢性乙型肝炎前C区和基本核心启动子突变的临床意义

乙型肝炎病毒（HBV）全球有高流行率，超过20亿人感染过HBV，其中约4亿人为慢性HBV感染，约占世界人口的5％，每年有50万人因肝硬化或肝癌死亡，这些表明HBV具有高度传染性是全球的公共卫生问题。HBV属于嗜肝脱氧核糖核酸（DNA）病毒科，能导致急性和慢性肝脏疾病。HBV是部分双链DNA，全长3．2Kb，编码4种重叠开放读框（ORF），CORF编码乙型肝炎核心抗原，它是非结构形式，编码HBeAg，PORF具有逆转录活性，SORF和X0RF在发展至HBV相关性肝细胞癌起重要作用，基本核心启动子位于XORFE.

乙型肝炎病毒前-C区1896和基本C区启动子区1762、1764双突变及YMDD变异对拉米呋啶治疗的影响

目的 :研究乙型肝炎病毒前 - C区 G1896 A突变和基本 C区启动子区 A176 2 T、 G176 4 A双突变对拉米呋啶治疗的影响。方法 :采用直接测序法对服药前、中、后的血清标本的逆转录多聚酶区及前 - C、基本 C区启动子区进行检测。结果 :1前 - C区 G1896 A和基本 C区启动子区 A176 2 T、G176 4 A双突变在出现治疗中病毒学反弹与未出现治疗中病毒学反弹患者间及发生血清学转移与未发生血清学转换患者间差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;2 G1896 A突变在发生 YMDD变异和未发生 YMDD变异的患者间差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,发生 YMDD变异的患者很少伴有 G1896 A突变率低 (9% ) ;3出现治疗中病毒学反弹的患者 YMDD变异增加 ,与未出现治疗中病毒学反弹的患者比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :前 - C区 G1896 A和基本 C区启动子区 A176 2 T、 G176 4 A双突变对拉米呋啶治疗后出现的治疗中病毒学反弹和血清学转换没有影响 ;在 G1896 A突变株 YMDD变异减少 ;YMDD变异株的出现对治疗后出现的治疗中病毒学反弹有影响 ;YMDD变异可能是加剧肝细胞损伤引起治疗中病毒学反弹的因素之一。

乙肝肝硬化患者HBV前C区和基本核心基因启动子序列分析

用套式PCR(nPCR)对 3 5例肝硬化患者血清HBV前C区和基本核心基因启动子 (BCP)进行扩增 ,阳性者用直接测序法进行序列分析。结果 2 3例HBVDNA阳性 ,阳性率为 65 7% ( 2 3 / 3 5 ) ,无正常序列标本 ,与e抗原产生有关的突变 :nt1762、1764双突变 (AT、GA) ,占 73 9% ( 17/ 2 3 ) ;nt1896点突变 (GA) ,导致终止密码产生 ,占2 1 7% ( 5 / 2 3 ) ;nt185 8点突变 (TC) ,占 2 1 7% ,其中标本 417、42 6、43 0同时在nt 185 6发生点突变 (CT)。其它的突变有nt1799点突变 (CG) ,占 47 8% ( 11/ 2 3 ) ,为无义突变 ;有 6例在nt1846发生点突变AT ,4例nt180 2 - 180 4发生突变 (TTCCGT) ;4例nt175 2位点突变 (AG) ;标本 43 2在nt175 1插入TG导致移码突变 ,并在nt1774- 1874发生缺失突变。说明HBVBCP和前C突变株在肝硬化患者中很常见 。

愈肝颗粒治疗慢性乙型肝炎基本核心区启动子变异患者的疗效观察

目的:观察中药制剂愈肝颗粒治疗慢性乙型肝炎（CHB）基本核心区启动子（BCP）变异患者的疗效。方法:用微孔板杂交法和酶联免疫吸附试验联合检测乙型肝炎病毒（HBV）BCP变异,变异阳性组（简称P组,46例）和变异阴性组（简称N组,69例）。所有患者均给予愈肝颗粒治疗,观察患者治疗前后临床表现及实验室有关指标。结果:治疗结束后,两组患者症状积分显著减低,血清ALT、TBiL水平明显下降。P组HBeAg阴转率（60％）显著高于N组（30％,P<0.05）,而HBV-DNA阴转两组比较差异无显著性,两组综合疗效相似。结论:愈肝颗粒能够显著改善CHB患者的症状,降低血清ALT和TBiL水平,同时具有抗HBV作用,且对于BCP变异株感染与野生株感染同等有效。

原发性肝癌患者乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异的分析

目的:研究原发性肝癌患者乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异情况及与基因型的关系。方法:收集乙型肝病毒感染者血清132份,HBVDNA均阳性,用半巢式聚合酶链反应扩增HBV前C及C基因部分片段,产物纯化后直接测序,检测前CA1896联合BCPT1762/A1764变异。用S基因PCR-RFLP方法确定HBV基因型。结果:乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异在原发性肝癌组的阳性率为41.18%(14/34),显著高于慢性肝病组的11.22%(11/98)(P<0.01)。前C A1896联合BCP T1762/A1764变异在B基因型检出率与C基因型相比,差异无显著性(P>0.05)。结论:乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异与原发性肝癌关系密切,与基因型无相关性。

乙型肝炎病毒基本核心启动子突变与基因型的关系

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)突变与HBV基因型的关系。方法随机选取我院68例慢性乙型肝炎患者外周血,采用荧光定量PCR结合TaqmanMGB探针技术检测HBV基因型,并用基因扩增和DNA测序方法检测BCPT1762/A1764双突变。结果68例患者HBV分型中,B基因型20例,C基因型46例,B、C混合型1例,未分型(非B非C型)1例。66例B、C两基因型中,B基因型组T1762/A1764双突变5例,突变率25.0%(5/20),C基因型组T1762/A1764双突变24例,突变率52.2%(24/46),C基因型T1762/A1764双突变率明显高于B基因型(P<0.05)。结论苏州地区慢性乙型肝炎患者基因型以C型和B型为主,C基因型比B基因型更易发生T1762/A1764双突变。

HBV基本C区启动子区位点突变及病毒载量与拉米夫定耐药的关系

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）基本C区启动子（BCP）区第1762、1764位点突变及病毒载量与拉米夫定治疗慢性乙型肝炎（CHB）P区第552、528位点变异产生的关系。方法选择CHB且未接受过拉米夫定治疗的患者56例，应用拉米夫定治疗6个月，采用乙型肝炎病毒基因多态性检测芯片对拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒BCP区第1762、1764位点，P区第552、528位点进行检测，同时对患者治疗前后血清病毒载量进行检测。对比分析BCP区第1762、1764位点突变患者（A组）和未突变患者（B组）应用拉米夫定治疗6个月后，P区第552、528位点变异率，以及治疗前后血清病毒载量水平。结果（1）应用拉米夫定治疗6个月后，A组P区第552、528位点总突变率显著高于B组（P〈O．05）；第552、528单位点以及第552和528双位点突变率两组相比较差异均无统计学意义（P〉O．05）。（2）A组患者治疗前血清病毒载量水平显著高于B组患者（P〈O．05）。（3）产生P区第552、528位点变异患者治疗前血清病毒载量水平，显著高于P区未变异患者（P〈O．05）。结论（1）乙型肝炎病毒BCP区第1762、1764位点突变可增加拉米夫定治疗的耐药率。（2）BCP区第1762、1764位点突变可增加乙型肝炎病毒的复制水平。（3）BCP区位点突变所引起的乙型肝炎病毒大量复制可能是导致拉米夫定耐药率增加的主要原因。

乙型肝炎病毒前C/基本核心启动子区变异的生物学意义

乙型肝炎病毒（HBV）基因组变异率约为其他DNA病毒的104倍,主要原因：（1）HBV复制是以mRNA为模板反转录合成子代病毒DNA,该过程中缺乏校对酶的作用,容易发生碱基错配;（2）在内源性（宿主免疫清除）和外源性（疫苗接种、乙型肝炎免疫球蛋白注射、抗病毒药物治疗和诊断试剂检测）选择性压力下,

乙型肝炎病毒前核心区及基本核心启动子变异的检测及其对患者疾病谱的影响

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前核心区(前C区,nt1896)及基本核心启动子(BCP,nt1762/1764)变异在慢性HBV感染者疾病谱的分布及对患者疾病谱的影响。方法416例血清HBsAg阳性、HBVDNA定量大于1.0×104拷贝/毫升的患者,采用微流基因芯片检测HBV前C区及BCP变异。结果416例HBV感染者中302例为HBeAg(-)患者,其中248例(82.12%)有前C区或BCP变异,41.06%为前C区变异,31.12%BCP变异,2种同时变异为9.94%。HBeAg(-)的慢性乙型肝炎和肝硬化患者前C区变异分别为64.72%和83.33%(x2=0.89,P>0.05),均大于HBeAg(-)无症状携带者的28.47%(x2=54.20,P<0.01;x2=5.29,P<0.05);而HBeAg(-)无症状携带者BCP变异达77.19%,大于HBeAg(-)慢性乙型肝炎和肝硬化患者(x2=69.73,P<0.01;x2=10.58,P<0.01)。而在114例HBeAg(+)患者中28.95%有前C区或BCP变异。结论前C区或BCP变异在慢性HBV感染者疾病谱的分布不同,在HBeAg(-)/HBVDNA(+)与HBeAg(+)/HBVDNA(+)患者变异率差异显著。HBV前C区可能是该病变反复及加重的一个重要原因,但BCP变异临床意义不明确。

儿童慢性乙型肝炎患者HBV前C/基本核心启动子区基因变异特点研究

目的探讨慢性乙型肝炎(慢乙肝)患儿HBV前C(procore, PC)/基本核心启动子(basic core promoter,BCP)区的变异特点。方法收集符合慢乙肝和肝硬化诊断标准的患儿血清166例。采用DNAout方法提取血清HBV DNA;巢式PCR方法扩增HBVPC/BCP区序列,PCR产物纯化后直接测序。分析HBVPC/BCP区相关位点变异情况。结果 166例患儿中,HBV B基因型的患儿占比20.83%,HBV C基因型的患儿占比79.17%。在感染HBV B基因型的患儿中,乙型肝炎(乙肝)肝硬化患儿与慢乙肝患儿的HBV DNA水平无明显差异,但前者G1899A位点突变率高于后者。在感染HBV C基因型的患儿中,与慢乙肝患儿相比,乙肝肝硬化患儿发生A1762T/G1764A、G1896A突变的比率明显升高且ALT水平较高。结论 HBV C基因型,ALT水平升高,发生A1762T/G1764A,G1896A位点变异的患儿,更容易发展为乙肝相关肝硬化。

江苏省常州市乙型肝炎病毒基因分型与基本核心启动子突变分析

近年来大量研究表明乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）基因型与乙型肝炎的临床表现、治疗及预后密切相关。变异是生物适应环境生存的重要方式，HBV具有较高的变异性，其中基本核心启动子（basecorepromoter，BCP）A1762T／G1764A双位点突变是HBV变异的重要方式之一，与重症肝炎、肝硬化和肝癌的发生密切相关，本研究旨在分析HBV基因分型与基本核心启动子A1762T／G1764A突变的临床特点及相关性，为临床优化治疗乙型肝炎提供依据。

乙型肝炎病毒基本核心启动子和前C基因序列分析

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)区及前C(PreC)区基因的变异情况,并且分析其发生频率、分布规律及其与临床病情的关系。方法应用套式PCR扩增nt1660-1935的HBV DNA片段及PCR产物直接测序的方法检测BCP区及Pre-C区基因的变异情况。结果130例乙型肝炎患者标本中,BCP区nt1762/nt1764发生双突变者75例(57.69%),Pre-C区nt1896发生突变者20例(15.38%),并且这两种突变在重型肝炎组(75.00%)及肝硬化组(72.22%)所占比例均明显高于慢性肝炎组(52.56%);此外,在BCP区及Pre-C/C区还发现了一些突变频率较高的其他突变位点(如nt1753,nt1766,nt1846,nt1899,nt1915),其中nt1753突变仅发生于有nt1762/1764双突变的患者,与重型肝炎及肝硬化的发生有一定关系;在BCP区有4处核苷酸突变共存者10例,其中重型肝炎组(12.50%)及肝硬化组(13.88%)所占比例明显高于慢性肝炎组(5.12%)。结论HBV BCP区nt1762/nt1764双突变和Pre-C区nt1896突变与肝炎的活动、重型化及肝硬化的发生有关;BCP区其他位点的突变共存对肝炎病情的进展也有重要影响。

萍乡地区原发性肝癌患者HBV-DNA核心基因启动子和前C区突变研究

目的研究萍乡地区原发性肝癌患者HBV-DNA核心基因启动子和前C区突变。方法进行基因芯片杂交检测和DNA序引分析。结果用基因芯片检测与测序的方法结果基本一致,这两个样本三确是野生型、变异型病毒共存。结论通过对前C区1896位与BCP区1762/1764位变异的检测,对预测病变的转归和预后有重要的临床意义。