细胞因子对HBVDNA基本核心C基因启动子变异、乙肝病情及HBVDNA复制的影响

目的 :探讨细胞因子 IL- 2、IFN- γ、IL- 4、IL- 1 0对 HBVDNA基本核心 C基因启动子 (BCP)变异、慢乙肝患者的病情及乙肝病毒 (HBV) DNA复制的影响。方法 :采用 PCR微板核酸杂交结合 EL ISA技术检测 HBVDNA BCP变异 ;荧光定量 PCR技术测定 HBVDNA含量 ;双抗体夹心 EL ISA法检测 IL- 2、IFN- γ、IL- 4和 IL- 1 0水平。结果 :1 HBVDNA BCP变异病人和非变异病人的 IL- 2、IFN- γ、IL- 4和 IL- 1 0水平无差别 (均 P >0 .1 ) ;2慢性重症肝炎组的 IL- 2、IFN- γ和 IL- 1 0水平高于肝炎后肝硬化和慢乙肝病人 (P <0 .0 5 ) ;而 IL- 4水平在各组无差别 (P >0 .0 5 ) ;3患者 HBVDNA水平随着 IL- 2水平的增高而下降 ,呈高度负相关 (r=- 0 .84 0 2 ;P <0 .0 1 ) ,其余 3种细胞因子水平与 HBVDNA水平未见相关关系。结论 :1机体的免疫压力可能对HBVDNA BCP变异无明显影响。2 IL- 2、IFN- γ和 IL- 1 0水平可能影响慢乙肝病情发展。3机体的 IL- 2水平对

乙肝肝硬化患者HBV前C区和基本核心基因启动子序列分析

用套式PCR(nPCR)对 3 5例肝硬化患者血清HBV前C区和基本核心基因启动子 (BCP)进行扩增 ,阳性者用直接测序法进行序列分析。结果 2 3例HBVDNA阳性 ,阳性率为 65 7% ( 2 3 / 3 5 ) ,无正常序列标本 ,与e抗原产生有关的突变 :nt1762、1764双突变 (AT、GA) ,占 73 9% ( 17/ 2 3 ) ;nt1896点突变 (GA) ,导致终止密码产生 ,占2 1 7% ( 5 / 2 3 ) ;nt185 8点突变 (TC) ,占 2 1 7% ,其中标本 417、42 6、43 0同时在nt 185 6发生点突变 (CT)。其它的突变有nt1799点突变 (CG) ,占 47 8% ( 11/ 2 3 ) ,为无义突变 ;有 6例在nt1846发生点突变AT ,4例nt180 2 - 180 4发生突变 (TTCCGT) ;4例nt175 2位点突变 (AG) ;标本 43 2在nt175 1插入TG导致移码突变 ,并在nt1774- 1874发生缺失突变。说明HBVBCP和前C突变株在肝硬化患者中很常见 。

乙型肝炎病毒基本核心启动子和前C基因序列分析

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)区及前C(PreC)区基因的变异情况,并且分析其发生频率、分布规律及其与临床病情的关系。方法应用套式PCR扩增nt1660-1935的HBV DNA片段及PCR产物直接测序的方法检测BCP区及Pre-C区基因的变异情况。结果130例乙型肝炎患者标本中,BCP区nt1762/nt1764发生双突变者75例(57.69%),Pre-C区nt1896发生突变者20例(15.38%),并且这两种突变在重型肝炎组(75.00%)及肝硬化组(72.22%)所占比例均明显高于慢性肝炎组(52.56%);此外,在BCP区及Pre-C/C区还发现了一些突变频率较高的其他突变位点(如nt1753,nt1766,nt1846,nt1899,nt1915),其中nt1753突变仅发生于有nt1762/1764双突变的患者,与重型肝炎及肝硬化的发生有一定关系;在BCP区有4处核苷酸突变共存者10例,其中重型肝炎组(12.50%)及肝硬化组(13.88%)所占比例明显高于慢性肝炎组(5.12%)。结论HBV BCP区nt1762/nt1764双突变和Pre-C区nt1896突变与肝炎的活动、重型化及肝硬化的发生有关;BCP区其他位点的突变共存对肝炎病情的进展也有重要影响。

慢性HBV感染者HBV前C区/基本核心启动子区基因突变与临床应用

目的:探讨2010年10月至2013年6月来我院门诊及住院慢性HBV感染者中HBV前C(Pre C)区/基本核心启动子(BCP)区基因突变与其病程进展的相关性。方法:165例慢性HBV感染者血清生化指标检测,血清HBV DNA含量和HBe Ag定性检测,HBV Pre C区/BCP区突变率比较,分析Pre C区l896、BCP区1762/1764变异在HBV携带者(As C)、慢性乙型肝炎(CHB)和慢性乙型肝炎肝硬化(CHB-LC)患者中的分布。结果:血清生化指标在慢性HBV感染者病程发展中呈现相关性。与As C组比较:CHB组、CHB-LC组患者血清ALT、AST、AFP、TBA水平升高,差异有显著性意义(p<0.01),呈显著正相关,而TP、Alb、A/G水平降低,差异有显著性意义(p<0.05),呈负相关。HBe Ag(+)、HBe Ag(-)的标本中,BCP的突变率高于前C区突变率,差异有非常显著性意义。BCP区1762/1764双突变的突变率高于Pre C1896突变率。As C、CHB、CHB-LC 3组患者Pre C A1896、BCP区1762/1764变异率依次升高,与As C组比较,CHB组差异有显著性意义(P<0.05);CHB-LC组差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:对165例慢性HBV感染者观察,HBe Ag(+)/HBe Ag(-)患者及其病程不同发展阶段,Pre C/BCP出现相关联的突变率。特别需要注意的是HBe Ag(-)的慢性HBV感染者BCP区的突变率高于Pre C区的突变率,需要慎防HBV复制的危害性。HBV Pre C区/BCP区突变率可以预测到慢性HBV感染者病情的发展程度,对临床此类患者的研究具有重要意义。

儿童慢性乙型肝炎患者HBV前C/基本核心启动子区基因变异特点研究

目的探讨慢性乙型肝炎(慢乙肝)患儿HBV前C(procore, PC)/基本核心启动子(basic core promoter,BCP)区的变异特点。方法收集符合慢乙肝和肝硬化诊断标准的患儿血清166例。采用DNAout方法提取血清HBV DNA;巢式PCR方法扩增HBVPC/BCP区序列,PCR产物纯化后直接测序。分析HBVPC/BCP区相关位点变异情况。结果 166例患儿中,HBV B基因型的患儿占比20.83%,HBV C基因型的患儿占比79.17%。在感染HBV B基因型的患儿中,乙型肝炎(乙肝)肝硬化患儿与慢乙肝患儿的HBV DNA水平无明显差异,但前者G1899A位点突变率高于后者。在感染HBV C基因型的患儿中,与慢乙肝患儿相比,乙肝肝硬化患儿发生A1762T/G1764A、G1896A突变的比率明显升高且ALT水平较高。结论 HBV C基因型,ALT水平升高,发生A1762T/G1764A,G1896A位点变异的患儿,更容易发展为乙肝相关肝硬化。

HBeAg阴性血清中乙型肝炎病毒基本核心启动子和前C区变异研究

目的了解本地区乙型肝炎病毒(HBV)流行株基本核心启动子(BCP)和前C(PreC)基因的变异热点,为临床提供诊疗信息。方法通过设计3条特异性引物进行半巢式聚合酶链反应(PCR)扩增患者血清中HBV BCP和PreC基因序列,回收和纯化PCR产物,用引物P1、P2直接进行正反测序,然后进行比对分析。结果BCP变异主要集中在TATA样盒(TATA-like box)中的TA1、TA2、TA3区,而TA4极为保守,TA1-TA4未见插入或缺失突变,PreC变异主要集中在nt1896位G→A。另外,发现1例新奇的插入突变。结论BCP和PreC变异可使HBeAg阴转。

原发性肝癌患者乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异的分析

目的:研究原发性肝癌患者乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异情况及与基因型的关系。方法:收集乙型肝病毒感染者血清132份,HBVDNA均阳性,用半巢式聚合酶链反应扩增HBV前C及C基因部分片段,产物纯化后直接测序,检测前CA1896联合BCPT1762/A1764变异。用S基因PCR-RFLP方法确定HBV基因型。结果:乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异在原发性肝癌组的阳性率为41.18%(14/34),显著高于慢性肝病组的11.22%(11/98)(P<0.01)。前C A1896联合BCP T1762/A1764变异在B基因型检出率与C基因型相比,差异无显著性(P>0.05)。结论:乙型肝炎病毒前C区联合基本核心启动子变异与原发性肝癌关系密切,与基因型无相关性。

乙型肝炎病毒基本核心启动子区1762/1764双突变与基因型和HBeAg血清学转换的关系

目的:观察慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)自然史中不同基因型乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(basic core promoter,BCP)区1762(A-T)/1764(G-A)双突变的分布,以及与中国常见HBV基因型的关系和对HBeAg血清学转换的影响。方法:随机选取168例未进行过抗病毒治疗的CHB患者,利用制备的特异性TaqMan MGB探针,采用特异性探针实时荧光定量PCR(PSRT-PCR)方法对其血清行B、C基因型分型和双突变定量检测,比较双突变在B、C基因型的分布情况;同时采用微粒子化学发光免疫法(CMIA)检测血清HBeAg和抗HBe,比较B、C基因型各组双突变株和野生株病毒的HBeAg血清学转换。结果:C基因型CHB患者BCP区1762/1764双突变率(70.65%)明显高于B基因型(29.17%,P=0.000)。观察HBeAg阴性CHB患者比例,B基因野生组明显高于其双突变组(28.57%,P=0.004)和C基因野生组(22.22%,P=0.000);C基因双突变组(63.08%)明显高于其野生组(22.22%,P=0.000)和B基因双突变组(28.57%,P=0.018)。在所有HBeAg阴性患者中,B基因野生组抗HBe阳性率(84.00%)高于其双突变组(0.00%,P=0.003)和C基因野生组(16.67%,P=0.004);C基因双突变组抗HBe阳性率(19.51%)与其野生组(16.67%)和B基因双突变组(0.00%)比较,差异无统计学意义(P均=1.000)。结论:在我国慢性HBV感染人群中,C基因型患者更易发生BCP区1762/1764双突变;B基因野生型患者易产生HBeAg阴性并伴有抗HBe阳性,HBeAg血清学转换较彻底;而C基因双突变患者易产生HBeAg阴性但不伴有抗HBe阳性,HBeAg血清学转换不彻底。

乙型肝炎病毒基本核心启动子突变与基因型的关系

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)突变与HBV基因型的关系。方法随机选取我院68例慢性乙型肝炎患者外周血,采用荧光定量PCR结合TaqmanMGB探针技术检测HBV基因型,并用基因扩增和DNA测序方法检测BCPT1762/A1764双突变。结果68例患者HBV分型中,B基因型20例,C基因型46例,B、C混合型1例,未分型(非B非C型)1例。66例B、C两基因型中,B基因型组T1762/A1764双突变5例,突变率25.0%(5/20),C基因型组T1762/A1764双突变24例,突变率52.2%(24/46),C基因型T1762/A1764双突变率明显高于B基因型(P<0.05)。结论苏州地区慢性乙型肝炎患者基因型以C型和B型为主,C基因型比B基因型更易发生T1762/A1764双突变。

鹅CYP2C45基因核心启动子的鉴定及其多态性与产肝性能的关系

鉴定鹅CYP2C45基因核心启动子序列,并筛选其单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,比较等位基因的转录活性差异及其与肝重性状的相关性,进而为肝重性状的选育筛选新的分子标记。通过双荧光素酶报告基因载体系统鉴定鹅CYP2C45基因启动子转录活性区域;通过PCR-SSCP、测序和序列比对方法分析朗德鹅的CYP2C45基因SNP,并分析不同基因型的转录活性;使用SPSS软件分析不同基因型与产肝性能的关系。结果表明通过双荧光素酶报告基因载体系统分析,发现鹅CYP2C45基因启动子活性区域为-165^+38bp;对朗德鹅群体进行了该区域SNP筛查,在5′上游-93bp处发现1个T/C突变,造成了屠体重的显著差异,对该突变造成的不同突变型进行转录活性分析,发现转录活性存在差异但未达到显著水平,推断CYP2C45基因的转录水平与鹅产肝性能呈正相关。本研究发现鹅CYP2C45基因核心启动子区域为-165^+38bp,该区域存在1个SNP,且与屠体重显著相关。

乙型肝炎病毒前C/基本核心启动子区变异的生物学意义

乙型肝炎病毒（HBV）基因组变异率约为其他DNA病毒的104倍,主要原因：（1）HBV复制是以mRNA为模板反转录合成子代病毒DNA,该过程中缺乏校对酶的作用,容易发生碱基错配;（2）在内源性（宿主免疫清除）和外源性（疫苗接种、乙型肝炎免疫球蛋白注射、抗病毒药物治疗和诊断试剂检测）选择性压力下,

猪CYP11A1基因编码区扩增及核心启动子区的鉴定与分析

[目的]本文旨在扩增猪CYP 11A1基因编码区,鉴定并分析其核心启动子区,探究猪CYP 11A1基因的转录调控机制。[方法]通过基因克隆测序技术获得猪CYP 11A1基因编码区全序列并对其序列特征进行分析;利用荧光素酶活性鉴定猪CYP 11A1基因核心启动子区,再通过生物信息学分析猪CYP 11A1基因核心启动子区潜在的甲基化位点与转录因子结合位点;利用Western blot、RT-qPCR以及染色质免疫沉淀(ChIP)等分子生物学手段解析转录因子NR2C1对猪CYP 11A1基因的转录调控功能。[结果]猪CYP 11A1基因的编码区序列全长为1563 bp,在哺乳动物的进化过程中高度保守;猪CYP 11A1基因的核心启动子区为-398~-108 bp(转录起始位点为+1),序列特征分析发现猪CYP 11A1基因核心启动子区包含多个潜在的转录因子的结合元件,包括NR2C1、SOX10、NFIX和ELF5等;另外,转录因子NR2C1可促进猪CYP 11A1基因核心启动子区活性,同时显著上调体外培养的猪卵巢颗粒细胞中CYP 11A1基因的表达。[结论]哺乳动物CYP 11A1基因在进化过程中高度保守,转录因子NR2C1能够促进猪卵巢颗粒细胞中CYP 11A1基因的转录。

慢性乙型肝炎前C区和基本核心启动子突变的临床意义

乙型肝炎病毒（HBV）全球有高流行率，超过20亿人感染过HBV，其中约4亿人为慢性HBV感染，约占世界人口的5％，每年有50万人因肝硬化或肝癌死亡，这些表明HBV具有高度传染性是全球的公共卫生问题。HBV属于嗜肝脱氧核糖核酸（DNA）病毒科，能导致急性和慢性肝脏疾病。HBV是部分双链DNA，全长3．2Kb，编码4种重叠开放读框（ORF），CORF编码乙型肝炎核心抗原，它是非结构形式，编码HBeAg，PORF具有逆转录活性，SORF和X0RF在发展至HBV相关性肝细胞癌起重要作用，基本核心启动子位于XORFE.

江苏省常州市乙型肝炎病毒基因分型与基本核心启动子突变分析

近年来大量研究表明乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）基因型与乙型肝炎的临床表现、治疗及预后密切相关。变异是生物适应环境生存的重要方式，HBV具有较高的变异性，其中基本核心启动子（basecorepromoter，BCP）A1762T／G1764A双位点突变是HBV变异的重要方式之一，与重症肝炎、肝硬化和肝癌的发生密切相关，本研究旨在分析HBV基因分型与基本核心启动子A1762T／G1764A突变的临床特点及相关性，为临床优化治疗乙型肝炎提供依据。

萍乡地区原发性肝癌患者HBV-DNA核心基因启动子和前C区突变研究

目的研究萍乡地区原发性肝癌患者HBV-DNA核心基因启动子和前C区突变。方法进行基因芯片杂交检测和DNA序引分析。结果用基因芯片检测与测序的方法结果基本一致,这两个样本三确是野生型、变异型病毒共存。结论通过对前C区1896位与BCP区1762/1764位变异的检测,对预测病变的转归和预后有重要的临床意义。

132例乙型肝炎病毒感染者基本核心启动子变异分析

目的研究乙型肝炎病毒（HBV）感染者基本核心启动子（BCP）变异情况。方法收集HBV感染者血清标本132份（HBVDNA均阳性），用半巢式聚合酶链反应扩增HBVC基因部分片段，产物纯化后直接测序，检测BCPT1762／A1764变异。用S基因错配聚合酶链反应（PCR-RFLP）法确定HBV基因型。结果51例乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性患者BCPT1762／A1764双变异检出率为27．45％，81例HBeAg阴性患者BCPT1762／A1764双变异检出率为62．96％，两组比较，差异有高度显著性（χ^2=15．79，P=0．00）。BCPT1762／A1764双变异的HBV感染者B基因型检出率为33．85％，明显低于C基因型的检出率66．15％（χ^2=24．25，P=0．00）。结论HBV感染者普遍存在BCPT1762／A1764双变异，以C基因型感染者多见。

HBV前C区及基因启动子区基因变异与乙肝肝硬化相关性初步研究

目的探讨HBV前C(PC)区和基本核心启动子(BCP)区与乙型肝炎患者病情进展的关系。方法选择37例慢性乙型肝炎患者(慢乙肝组)及27例乙型肝炎肝硬化患者(肝硬化组),分析2组患者的一般资料和临床特征,对2组患者血清样本进行A1762T/G1764A、G1896A基因突变检测,比较组间差异。结果肝硬化组患者的年龄大于慢乙肝组,ALT、HBV DNA水平低于慢乙肝组,层粘连蛋白水平高于慢乙肝组(P均<0.05)。肝硬化组患者A1762T/G1764A双位点突变发生率为78%,高于慢乙肝组的49%(P<0.05);肝硬化组G1896A突变发生率为48%,慢乙肝组为60%,2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论乙肝肝硬化患者HBV PC/BCP区A1762T/G1764A突变率高于慢乙肝患者,A1762T/G1764A突变可能参与慢乙肝发展至肝硬化的过程。

慢性乙肝患者HBV核心蛋白启动子变异的初步研究

目的 通过对乙型肝炎病毒 (HBV)基本核心基因启动子 (BCP)变异的研究 ,阐明HBV准种在慢性感染者中存在的意义。方法 以中国株HBV基因序列为依据 ,设计特异性多聚酶链反应 (PCR)引物 ,自 4 0例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV的BCP基因 ,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)技术展示缺失突变 ,DNA测序确定病毒的变异程度。结果 聚丙烯酰胺凝胶电泳结果发现 ,6 0 % (2 4 / 4 0 )患者血清中可见 2～ 3条扩增条带 ;测序结果发现BCP区存在多种突变形式 :点突变中以 14 0nt(T→C)最为常见 ,缺失突变多见于TA1,TA2及TA3,多表现为 8bp和 2 0bp的缺失。 结论 HBVBCP区内有一缺失高变区 ,并在患者体内存有多种变异形式 ;TA1,TA2和TA3的变异可能影响e抗原的表达。

乙型肝炎病毒基本核心启动子及前C区突变与基因型的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒 (HBV)基本核心启动子 (BCP)及前C区突变与基因型之间的关系。方法 随机选取 113例慢性HBV感染者外周血 ,采用INNO LiPA法测定BCPT176 2 A176 4双突变及前C区A1896突变 ,测定HBVS基因序列明确基因型。结果 在C基因型感染者中BCPT176 2 A176 4双突变率明显高于B基因型感染者 ,差异有显著性 (34.2 %∶10 % ,χ2 =6 .74 ,P <0 .0 1) ,而前C区A1896突变率在B基因型和C基因型感染者中差异无显著性 (2 .5 %∶4 .1% ,χ2 =0 .0 0 ,P >0 .0 5 )。结论 与B基因型相比 ,C基因型感染者更易发生BCPT176 2 A176 4双突变。