许旺细胞基膜管与骨骼肌基膜管两种桥接体对大鼠脊髓损伤修复效果的比较

目的:比较许旺细胞基膜管与骨骼肌基膜管两种桥接体对脊髓损伤的修复效果。方法:实验于2005-08/2006-01在大连医科大学动物实验中心完成。①选取3月龄SD大鼠40只,随机数字表法分成4组:正常对照组、假手术组、许旺细胞基膜管移植组、骨骼肌基膜管移植组,10只/组。②许旺细胞基膜管移植组动物麻醉后,沿左上肢屈侧切开,取正中神经节段约1.0cm,经蒸馏水浸泡、液氮冷冻、生理盐水浸润再复温,挤出胞浆和崩解组织,修整成待移植的许旺细胞基膜管。骨骼肌基膜管移植组动物于左上肢三角肌取材后按类似过程制成待移植的骨骼肌基膜管。③除正常对照组外,其余各组均建立脊髓损伤模型。鼠尾呈痉挛性扑动,麻醉苏醒后左下肢完全瘫痪标志造模成功。④许旺细胞基膜管移植组将许旺细胞基膜管按走行方向植入脊髓切损处。骨骼肌基膜管移植组同法植入骨骼肌基膜管。假手术组、正常对照组不进行任何材料移植。观察动物存活情况、一般状态、伤口愈合、后肢溃疡情况及运动功能恢复等情况。⑤术后通过斜板试验观察大鼠左后肢负重功能恢复情况;并进行动物行为测试评分(满分7分,左后肢失去负重和行走功能为0分);测定皮层体感诱发电位;组织学观察和计算机图像分析半薄切片中轴突数目、直径以及石蜡切片中脊神经节细胞数。结果:40只大鼠全部进入结果分析。①移植术后一般情况:术后3周许旺细胞基膜管移植组、骨骼肌基膜管移植组左后肢有不同程度的运动功能恢复。术后8周动物全部存活,切口愈合较好。非正常对照组动物均发生胸腰段脊柱轻度侧弯畸形。②术后斜板试验结果:与正常对照组大鼠跌落时的木板倾斜度数比较,术后8周许旺细胞基膜管移植组、骨骼肌基膜管移植组大鼠跌落时的木板倾斜度数明显高于假手术组(t=2.378,P<0.05),但低于正常对照组(t=2.421,P<0.05)。③术后行为学测试结果:术后8周许旺细胞基膜管移植组、骨骼肌基膜管移植组行为评分与正常对照组基本相似(t=2.034,P>0.05),明显高于假手术组(t=3.647,P<0.01)。④术后皮层体感诱发电位检测结果:正常对照组可记录到潜伏期为(16.15±1.23)ms、波幅为(30.76±2.61)μV的皮层体感诱发电位波形。术后6周许旺细胞基膜管移植组潜伏期延长、波幅降低,但均优于骨骼肌基膜管移植组[(21.48±2.17),(26.72±1.83)ms;(23.74±2.02),(19.14±1.38)μV;P均<0.05];而假手术组未记录到相应皮层体感诱发电位波形。⑤术后大体及组织学观察结果:许旺细胞基膜管移植组其基膜管与脊髓交界处无明显瘢痕组织形成,移植物中再生轴索较多,辣根过氧化物酶示踪在宿主-移植物交界面头侧的正常脊髓前角内见较多标记神经元,再生轴突直径较粗,髓鞘较厚。骨骼肌基膜管移植组情况与其基本相似,但骨骼肌基膜管与脊髓交界处有少许瘢痕组织形成。⑥术后8周末轴突数目、轴突直径和脊神经节细胞数计算机图像分析结果:许旺细胞基膜管移植组的轴突数目、轴突直径和脊神经节细胞数目与正常对照组基本相似(t=2.116,P>0.05),但明显高于骨骼肌基膜管移植组、假手术组(t=2.494,P<0.05;t=3.573,P<0.01)。结论:许旺细胞基膜管比骨骼肌基膜管更适宜作为治疗脊髓损伤的桥接体材料。

异种神经基膜管桥接周围神经缺损的初步研究

目的 探索经化学萃取的去细胞神经基膜管支架用于异种移植桥接周围神经缺损的可行性。方法 SD大鼠 30只 ,随机分为 5组 ,分别制作预溃变 2周 (溃变支架桥接组 )和新鲜的兔胫神经进行化学萃取 ,形成去细胞神经基膜管支架 (异体支架桥接组 ) ,兔新鲜胫神经束 (异种神经移植组 ) ;切取自体神经 15 mm原位移植 (自体神经移植组 ) ,修复大鼠坐骨神经长 15 mm的缺损。坐骨神经切断后不作移植修复 ,为对照组。术后 6个月行坐骨神经功能指数 (SFI)测定和疼痛试验 ,用美蓝染色、免疫组织化学、透射电镜等方法对吻合口、移植体中央和远侧神经段的再生神经纤维进行形态学观察 ,并对再生有髓纤维的数量、直径及髓鞘厚度等进行量化分析。结果 术后 3个月 ,仅有溃变支架桥接组、支架桥接组和自体神经移植组动物患肢行走逐渐恢复。 6个月时 ,针刺患足可引起背部肌肉收缩和下肢屈曲反应 ;术后 6个月行 SFI检测 ,溃变支架桥接组为 - 36 .2 %± 9.7% ,支架桥接组为 - 30 .7%± 6 .8% ,自体神经移植组为 - 33.9%±11.3% ,各组间比较无统计学意义 (P>0 .0 5 )。组织学观察见溃变支架桥接组与支架桥接组移植体中央横切面再生神经呈微束状分布。透射电镜观察见再生神经纤维具有正常的形态和结构。图像分析结果显示溃变支架?

雪旺细胞在大鼠脱细胞异体神经基膜管中迁移的研究

目的研究大鼠自体雪旺细胞在脱细胞异体神经基膜管中的迁移情况。方法取SD大鼠坐骨神经20mm,用化学萃取法制备脱细胞神经,行大体观察、HE、抗层黏蛋白（Anti-laminin）染色。另取32只雌性SD大鼠,体重250～300g,切取自体坐骨神经2mm,置于分别长10mm的两段大鼠异体脱细胞坐骨神经基膜管之间,形成22mm长的基膜管-自体神经嵌合体,与同样长度的单纯脱细胞神经基膜管埋入肌间隙中,于5、10、15和20d取材,行HE、S-100免疫组织化学染色。结果制备的脱细胞神经基膜管外观呈半透明;HE染色示基膜管内未见细胞核存在,基膜管部分不连续;Anti-laminin染色示基膜管深褐色。基膜管-自体神经嵌合体于术后各时间点HE染色均可见细胞存在,第15天开始可见S-100阳性雪旺细胞;单纯神经基膜管在各时间点HE染色中均可见细胞存在,未见S-100阳性雪旺细胞。结论大鼠坐骨神经的自体雪旺细胞可迁移至两侧异体脱细胞神经基膜管远端,为嵌合自体神经的异体脱细胞神经基膜管修复长段周围神经缺损提供了理论依据。

嗅黏膜嗅鞘细胞与肌基膜管联合移植修复脊髓损伤、

目的:观察嗅黏膜来源的嗅鞘细胞与肌基膜管联合移植后对脊髓损伤的修复效果。方法:1只SD大鼠行背正中切口,顺椎旁肌纤维切除约1.5cm×0.8cm×0.6cm的肌条,复温、漂洗并挤压肌条以排出肌浆,制成肌基膜管。4只SD大鼠麻醉后取出嗅黏膜,胶原酶消化法分离培养嗅鞘细胞,调整浓度至1011L-1。取SD大鼠50只,随机分成5组:嗅鞘细胞+肌基膜管联合组、嗅鞘细胞组、肌基膜管组、模型组、正常组,10只/组。除正常组外,其余组均建立脊髓损伤模型,于T10横断脊髓并切除约2mm,将培养7d的嗅鞘细胞与肌基膜管按组别分别植入脊髓断端,模型组用浸有DMEM的凝胶海绵桥接横断的脊髓。结果:移植后第8周,嗅鞘细胞+肌基膜管联合组、嗅鞘细胞组大鼠运动功能明显恢复,出现大关节大幅度运动,且前者运动功能BBB评分升高尤为显著(P<0.01);肌基膜管组大鼠仅见小关节轻微活动;模型组大鼠后肢挛缩重,无明显功能恢复。嗅鞘细胞+肌基膜管联合组后肢体感诱发电位及运动诱发电位的潜伏期显著低于其他各组(P<0.01)。苏木精-伊红染色和核转录因子免疫组化染色结果显示,嗅鞘细胞+肌基膜管联合组、嗅鞘细胞组的移植物与损伤脊髓整合较好,未见明显空洞,有大量染色呈阳性的纤维,纤维较长,由近侧端长入远侧端;肌基膜管组有空洞形成,染色阳性的纤维数量少,纤维细小且排列紊乱;模型组端断间充满瘢痕组织,未见明显染色阳性纤维。结论:嗅鞘细胞移植可促进脊髓损伤后的轴突再生,肌基膜管作为一种生物管道,两者联合应用可明显促进脊髓损伤后的轴突再生及功能恢复。

牛脑提取液与肌基膜管结合对脊髓损伤修复及再生的影响

目的:研究牛脑提取液对脊髓损伤修复及再生的影响。方法:用SD大鼠40只,过半切除长约0.5cm的左下胸段脊髓,肌基膜管(MBL)桥接脊髓缺损。局部用药组将MBL浸泡于牛脑提取液(ECB)中,全身用药组腹腔注射ECB,生理盐水作对照。结果:实验组动物行为学测试指标和斜板试验斜板实验(IP)分数均明显优于对照组;实验组术后6周可测到体感诱发电位(SEP)波形,而对照组未测到;实验组MBL与脊髓融和,有大量神经纤维通过交界处,近端脊髓前角区可见到较多标记的运动神经元,腰部脊神经节细胞结构完整,再生神经纤维髓鞘较厚,轴突直径较粗,均优于对照组;图像分析显示实验组再生有髓神经纤维数、轴突直径和脊神经节细胞数均优于对照组。结论:局部和全身应用ECB对脊髓再生均有明显促进作用,尤其对脊髓运动神经元的再生也有显著促进作用。

携带神经干细胞肌基膜管组织工程支架中神经干细胞的存活分化

背景:多项研究已证实神经干细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,肌基膜管具有良好的细胞、组织相容性和降解性,那么能否将二者结合起来构建一个新的神经组织工程支架?目的:以神经干细胞为种子细胞,以肌基膜管为支架,观察携带神经干细胞的肌基膜管组织工程支架中神经干细胞的存活与分化情况。方法:体外分离培养大鼠神经干细胞,并进行鉴定。用化学萃取方法制作去细胞骨骼肌基膜管支架,将神经干细胞移植入肌基膜管支架培养7d后,用免疫组织化学方法检测神经干细胞的存活及分化情况,扫描电镜观察其超微结构。结果与结论:神经干细胞分离培养第5天,Nestin免疫荧光染色可见大量神经球。加血清诱导神经干细胞分化至7d,进行抗NF、抗GFAP免疫荧光染色,镜下可见NF、GFAP阳性细胞,证明培养的神经干细胞具有多项分化潜能。苏木精-伊红染色法显示肌基膜管中肌细胞成分已消失,肌基膜管支架内主要是大致平行的管道。携带神经干细胞的肌基膜管组织工程支架免疫荧光染色证明,神经干细胞在支架内仍具有干细胞特性,并可分化为神经元和神经胶质细胞。扫描电镜显示神经干细胞可以稳固地贴附在肌基膜管内,提示制备的神经组织工程支架具有良好的生物相容性,可以进行体内移植治疗脊髓损伤等神经系统疾病。

肌基膜管移植及神经生长因子对脊髓横断性损伤的修复作用

目的 :对神经生长因子 (NGF)及其结合肌基膜管 (MBL)修复脊髓横断性损伤进行组织学评价。方法 :以雌性家犬为实验对象 ,手术将其脊髓横断 ,随机分为 3组 :( 1) 7只行MBL移植结合注射NGF(A组 ) ;( 2 ) 6只单纯注射NGF组 (B组 ) ;( 3) 4只为对照组。 6个月后用免疫组化对神经轴突和胶质细胞网格框架结构进行特异染色 ,并用图像分析方法对脊髓横断处的远、近端横截面神经纤维进行定量研究。结果 :各组间远端神经纤维数量均有显著性差异 ;MBL移植物中有神经纤维通过 ,对照组断端为坏死空腔。电镜证实横断远端存在新生神经纤维。结论 :MBL移植结合NGF修复脊髓横断性损伤 ,神经轴突能越过移植区到达远端 ;

肌基膜管植入对大鼠脊髓半横断损伤模型的血管化作用

目的:观察肌基膜管移植治疗大鼠脊髓损伤的血管生成情况,为在脊髓损伤中应用肌基膜管作为组织工程支架提供理论和实验依据。方法:利用冻融法将大鼠骨骼肌制备成肌基膜管,将其移植入大鼠脊髓半横断损伤模型中,分别于术后3、5、7、14和28 d取材,利用碱性磷酸酶染色观察各个时间点支架中血管生成情况,比较不同时间点(3、5、7、14和28 d)血管生成数量。结果:肌基膜管在移植入大鼠脊髓损伤区后,血管由脊髓和肌基膜管交界处长入肌基膜管内部,最终在肌基膜管内部形成血管网。新生血管面积比5 d组高于3 d组(P<0.05),7 d组高于5 d组(P<0.01),14 d组高于7 d组(P<0.01),28 d组高于14 d组(P<0.05或P<0.01)。结论:肌基膜管移植入大鼠脊髓半横断损伤模型中具有良好的血管化作用,有望成为修复脊髓损伤理想的组织工程材料。

肌基膜管桥接神经缺损的研究现状

外伤或手术引起的神经系统损伤性疾病的临床修复一直是尚未解决的疑难问题之一。肌基膜管是通过去除肌细胞而得到的一种天然生物材料,它不仅有效的保留了完整的基膜,而且肌基膜管内部的排列结构与神经膜管类似,它们能够为再生轴突的生长提供足够空间,可根据需要做成特定的形状。肌基膜管作为一种生物支架桥接受损伤的神经纤维逐渐受到人们的重视。本文就肌基膜管的制备、本身的结构特点及在神经缺损中的应用作一综述。

大鼠坐骨神经去细胞基膜管的组织形态学研究

目的:观察采用化学萃取法和反复冻融法制备大鼠坐骨神经去细胞基膜管的组织形态学变化。方法:雌性Sprague-Dawley鼠坐骨神经16条随机分为化学萃取法(chemicalextractednerve,CEN)和冻融法(freeze-thawednerve,FTN)两组,每组18条。分别予Trinton-100化学萃取、-196℃～20℃反复冻融处理后,光镜、电镜观察其组织、形态学变化。结果:(1)CEN组基膜管管壁完整、贯通,无细胞结构,可见管状神经轮廓。(2)FTN组基膜管管壁破损、管腔堵塞,轴突、髓鞘、雪旺细胞及小血管变性、坏死,可见大量细胞碎片。结论:两种方法均能保持周围神经正常的三维空间结构,CEN制备的周围神经去细胞基膜管更具有组织形态学优势。

大鼠坐骨神经去细胞基膜管异体移植的比较研究

目的:探讨化学萃取法(CEN)、冻融法(FTN)制备的异种鼠坐骨神经去细胞基膜管移植术后8、13、23天神经再生轴突距离、Schwann细胞迁入、再血管化及炎症反应异同。方法:将36只雌性Wistar鼠随机配对,分为CEN组与FTN组,每组18只,分别桥接移植两种方法制备的SpragueDawley鼠坐骨神经去细胞基膜管。观察术后8、13、23天移植物物理性状及组织形态学变化。结果:术后8、13、23天,神经轴突再生距离、近和远端Schwann细胞数、再血管化及炎症反应差异有显著性(<0.05),CEN组优于FTN组。结论:化学萃取法制备的异种周围神经去细胞基膜管较冻融法能更快、更好地修复周围神经缺损,亦应有更大的临床实用价值。

基膜管-自体神经嵌合体修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的寻找一种简单有效,修复长段周围神经缺损的方法。方法在两段同种异体大鼠的脱细胞坐骨神经之间置入一段自体坐骨神经,形成基膜管-自体神经嵌合体,与单纯基膜管、硅胶管带自体神经、单纯硅胶管、自体神经等其他桥接物比较修复神经缺损的效果。结果分组动物实验显示基膜管-自体神经嵌合体组的神经功能、形态恢复最佳。结论基膜管-自体神经嵌合体修复周围神经缺损简单有效,并能延长修复长度,在修复长段周围神经缺损方面有着良好的应用前景。

缓控释肥硅基膜材的制备与表征

以钙镁磷肥、硅丙树脂为主要原料,加入甲基硅酸钠作粘结剂,制备了缓控释肥硅基膜材,并采用撒粉离心包衣、底喷式流化床工艺制备了密封型硅钙镁磷肥、粘结型硅钙镁磷肥、改性硅丙树脂3种包膜尿素,通过静水试验研究了此3种包膜尿素的释放特征。结果表明,3种包膜尿素的释放周期分别为60、79、96 d,在水中均能保持完整球形,耐水性较好。通过扫描电镜、红外光谱、X-射线衍射法对膜材形貌特征和结构进行表征,发现钙镁磷肥和硅丙树脂为成膜材料;甲基硅酸钠作为密封剂和防水剂参与了成膜反应,有效增加了膜材的塑性和韧性,此复合材料可用作缓控释肥的胶结剂和包膜剂。

明胶基膜的改性与制备及应用研究

明胶从胶原蛋白中提取而来,具有优异的生物相容性和生物降解性,明胶基膜已成为研究热点。文章介绍了明胶常见的改性方法和明胶基膜的制备方法,综述了明胶基膜在食品包装、创口敷料、组织工程、控释药物、生物传感器等领域的应用研究现状,并对其未来发展进行了展望。

一种低共熔溶剂制备明胶基膜前驱液特性研究

以明胶为原料,经一种三水乙酸钠/尿素/水-低共熔溶剂(DES/H_(2)O)体系溶解后制备明胶基膜前驱液。与传统水体系溶解相比,DES/H_(2)O溶解的明胶暴露出更多活性基团,以碳二亚胺盐酸盐为交联剂可与聚乙烯醇形成更多酯键。对获得的明胶基膜前驱液进行表征,结果表明,DES/H_(2)O体系中DES含量为60%时(以DES/H_(2)O溶液总质量为基准),所制备的明胶基膜前驱液的透光率为95.23%,粒径为1524.0 nm,结晶温度为-31℃,当剪切速率为10 s^(-1)时,黏度为449.07 mPa·s。表明此明胶基膜前驱液的交联作用较强,相容性较好,内部结构稳定,为制备具有较好物化性能的明胶基膜提供了新方法。

新型冠状病毒感染诱发抗肾小球基膜肾炎及免疫性血小板减少

34岁女性患者,因“恶心、呕吐1月余,肉眼血尿伴血清肌酐(SCr)升高20余天”入院。患者入院前当地医院诊断新型冠状病毒感染、肠胃炎,随后出现肉眼血尿、尿量减少,伴贫血、血小板减少,SCr进行性升高需要行肾脏替代治疗,抗肾小球基膜(GBM)抗体阳性,血小板特异性抗体阳性,肾活检病理符合抗GBM肾炎。予抗感染、激素、利妥昔单抗、环磷酰胺及蛋白A免疫吸附治疗后患者病情好转脱离透析。

离子控制的石墨烯基膜在盐湖有价离子精确提取领域的应用展望

中国盐湖蕴含丰富的无机盐资源,是我国重要的战略资源。然而,从复杂的盐湖体系中精确分离出各个组分十分困难,这限制了盐湖资源的深度开发利用。文章综述了离子控制的石墨烯基膜在离子筛分领域中的最新研究进展,提供了一种基于离子控制的氧化石墨烯膜对不同尺寸的盐湖离子分离的新方案,展望了离子控制的石墨烯基膜技术在盐湖有价离子分离提取中的应用潜力。

基膜聚糖通过抑制1型辅助T细胞分化提高耐药性卵巢癌治疗效果

目的探讨基膜聚糖(LUM)在卵巢癌顺铂耐药中的作用机制,并初步探索其对1型辅助T(Th1)细胞分化的影响。方法通过基因表达数据集(GEO)筛选卵巢癌顺铂耐药株及敏感株中差异表达的基因,通过实时定量PCR检测其表达水平。利用小干扰RNA(siRNA)敲低人卵巢癌细胞中LUM表达,并用Western blot法验证敲低效率。通过流式细胞术检测敲低LUM对顺铂处理后的卵巢癌细胞系周期及凋亡的影响。通过蛋白质相互作用(PPI)网络筛选LUM潜在靶蛋白,并用分子对接验证其相互作用。肿瘤免疫评估资源数据库(TIMER)筛选LUM对卵巢癌系分泌细胞因子的影响,并利用ELISA与实时定量PCR验证。流式细胞术分析LUM对共培养的CD4^(+)T细胞分化的调控作用。结果GEO数据显示LUM在顺铂耐药株中显著上调,且其表达水平与患者预后相关。LUM在卵巢癌顺铂耐药细胞株中表达水平较高,且顺铂治疗能促进LUM的表达。敲低LUM增加顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡和细胞周期阻滞,提高药物敏感性。靶基因筛选表明,LUM可能通过与Src同源域磷酸酶2(SHP2)相互作用调控卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。另外,TIMER分析结果提示高表达LUM抑制Th1细胞分化,在卵巢癌耐药株中敲低LUM促进Th1细胞分化,通过调控γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)分泌影响免疫细胞的肿瘤杀伤力。结论LUM在卵巢癌顺铂耐药中表达上调,可能通过调控SHP2相关信号通路降低卵巢癌细胞顺铂敏感性。LUM还通过调控卵巢癌细胞细胞因子分泌,进而抑制Th1细胞分化,促进肿瘤耐药性产生,可能是卵巢癌治疗新的潜在靶点。

Alport综合征肾移植后新发非典型抗肾小球基膜肾炎

青年男性患者,自体肾活检诊断为Alport综合征,肾移植术后6年,病程中血清肌酐和蛋白尿反复增高,肾活检组织学为肾小球系膜增生性病变,IgG沿肾小球基膜(GBM)呈线性沉积,电镜下观察肾小球系膜区有电子致密物沉积。结合临床,考虑为移植肾非典型抗GBM肾炎,同时伴混合性排斥反应、免疫复合物相关肾小球病。