循环轴向压缩应力增强基质依赖型组织工程骨骨再生能力的研究

目的研究循环轴向压缩应力(CACS)对基质依赖型组织工程骨(M-TEB)骨再生能力的影响。方法首先,在构建静态M-TEB过程中加载CACS,得到动态M-TEB;然后,对各组M-TEB进行表征,并构建动物模型来评价其骨再生能力;最后,通过转录组测序探究CACS对骨髓间充质干细胞(BMSCs)基因表达的影响,并研究M-TEB来源条件培养基对内皮祖细胞(EPCs)迁移、增殖和对BMSCs成骨分化的影响。结果①动态M-TEB组在骨缺损区有更多新骨生成,且骨体积分数和骨密度均显著优于假手术组和静态M-TEB组(P均<0.01);②前30个有显著差异(q<0.01)的基因本体论(GO)术语主要涉及MAPK通路、细胞凋亡和血管生成等,且差异基因VEGFA在这些GO术语中出现频次最高(28次);③相比静态M-TEB来源条件培养基,动态M-TEB来源条件培养基具有更强的促进EPCs迁移、增殖和BMSCs成骨分化的作用(P均<0.05),阻断实验证实VEGFA在其中发挥重要功能。结论CACS促进BMSCs表达和分泌VEGFA,提高动态M-TEB中VEGFA浓度,最终增强其在大鼠股骨缺损模型中的骨再生能力。

小肠黏膜下层脱细胞基质复合外泌体构建组织工程尿道

背景:小肠黏膜下层脱细胞基质已被临床与基础研究证实可用于尿道的修复重建,但其单独应用时存在宿主细胞生长缓慢、支架血管化不足而成活困难、重建尿道狭窄梗阻等问题,仅适用于较短的尿道狭窄。目的:探讨应用小肠黏膜下层脱细胞基质复合外泌体构建组织工程尿道的可行性。方法:从新西兰大白兔骨髓间充质干细胞中分离提取外泌体;制备猪小肠黏膜下层脱细胞基质,将外泌体负载于小肠黏膜下层脱细胞基质上。将小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体(PKH26染料标记)复合物与脐静脉内皮细胞共培养12 h,观察细胞摄取外泌体情况。选取生长状态良好的脐静脉内皮细胞,分3组培养:空白组常规培养,对照组加入小肠黏膜下层脱细胞基质,实验组加入小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体复合物,通过划痕实验、成管实验、血管生成因子分泌检测评估血管生成情况。取30只新西兰大白兔,建立长段(3 cm)尿道缺损模型,采用随机数字表法分3组干预(n=10):单独材料组植入小肠黏膜下层脱细胞基质,对照组植入小肠黏膜下层脱细胞基质-骨髓间充质干细胞复合物,实验组植入小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体复合物,植入后12周进行尿道造影、尿动力学检查及重建尿道切片病理观察。结果与结论:(1)荧光显微镜下可见小肠黏膜下层脱细胞基质中的外泌体可被脐静脉内皮细胞摄取。(2)与空白组、对照组相比,实验组材料可促进脐静脉内皮细胞的迁移、成血管能力以及成血管因子血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、白细胞介素8的分泌(P <0.05)。(3)尿道造影结果显示,单独材料组10只兔均出现尿道狭窄,对照组10只兔中2只出现尿道狭窄,实验组10只兔均未出现尿道狭窄。尿动力检查结果显示,单独材料组兔材料植入后12周的最大尿道压高于术前(P <0.05),对照组、实验组兔植入后12周的最大尿道压均低于空白组(P <0.05)。苏木精-伊红、Masson与免疫组化染色显示,单独材料组可见明显的再生上皮层、少量的皮下平滑肌与血管,以纤维组织增生为主,伴有明显炎性细胞浸润;对照组可见较完整的再生上皮与少量胶原,可见大量的皮下血管与平滑肌,伴有炎性细胞浸润;实验组可见完整的再生上皮层与大量的皮下血管、平滑肌,未见明显炎性细胞浸润,实验组AE1/AE3、ɑ-平滑肌肌动蛋白、CD31阳性表达均高于单独材料组、对照组(P <0.05)。(4)结果表明,小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体组织工程尿道可通过促进血管生成来修复尿道缺损。

骨组织工程镁基支架的制备研究进展

骨组织工程为受损骨、病变骨的治疗提供了重要的途径。如何获得易于骨修复、高强度且具有良好生物相容性的支架,是当前骨组织工程支架应用的技术难点和研究热点之一。支架材料的种类及制备方法是影响骨组织工程结构及性能的主要因素。镁基合金因在生物相容性、降解行为等方面具有突出表现而受到了普遍的关注,被认为是一种前景广阔的骨组织工程支架材料。常见的骨组织工程镁基支架制备方法有熔体发泡法、渗流铸造法、固/气共晶定向凝固法和增材制造法等,然而现有制备方法在孔隙结构精细控制及造孔残留物对镁基支架生物相容性的影响等方面仍需进一步研究。本文综述了骨组织工程镁基支架的制备方法,分析了影响镁基支架孔隙结构和性能的因素,总结了每种制备方法的优缺点,并对未来的研究方向进行了展望。

间充质干细胞/内皮祖细胞基质依赖型组织工程骨修复大鼠股骨缺损

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)/内皮祖细胞(EPC)作为种子细胞构建的基质依赖型组织工程骨(ECM-TEB)修复大鼠股骨缺损的效果。方法分离培养骨髓来源的MSC和EPC并进行功能鉴定,种植上架于纳米晶胶原基人工骨颗粒,培养14 d后冻干,获得MSC/EPC ECM-TEB和MSC ECM-TEB。扫描电镜观察MSC和EPC在支架表面的生长形态。分别提取MSC ECM-TEB蛋白浸提液(对照组)和MSC/EPC ECM-TEB蛋白浸提液(实验组),加入EPC培养系统中进行迁移、划痕修复、管腔形成检测;另加入MSC培养系统中进行茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色检测,观察两组细胞募集、血管生成和成骨分化情况。选取12只SD大鼠,建立股骨缺损模型,按照随机数字表法分为:(1)假手术组:仅在缺损处进行清创处理;(2)MSC ECM-TEB组:在缺损处植入MSC ECM-TEB;(3)MSC/EPC ECM-TEB组:在缺损处植入MSC/EPC ECM-TEB,每组4只大鼠。2个月后行Micro-CT检查和缺损区Masson三色染色观察骨缺损修复情况。冻干后低温保存3个月,采取同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记蛋白质谱检测MSC ECM-TEB和MSC/EPC ECM-TEB在成血管方面的差异,并采用基因本体论/京都基因与基因组百科全书技术(GO/KEGG)功能富集方法分析其原因。结果MSC和EPC在支架表面生长、增殖良好,形成光滑的细胞层状结构。实验组在细胞迁移数、划痕修复比例和管腔形成长度分别为(121.6±8.3)个、(61.5±5.9)%、(11.3±0.6)mm,较对照组显著增多[(85.0±6.7)个、(39.3±3.6)%、(5.9±0.4)mm](P均<0.01)。茜素红染色和ALP染色结果显示,实验组钙结节矿化面积比例显著增加[(38.8±3.3)%∶(49.9±3.0)%、(38.8±2.4)%∶(45.3±3.3)%](P均<0.05)。Micro-CT和Masson染色结果表明,MSC/EPC ECM-TEB组骨缺损修复良好,MSC ECM-TEB组仅形成少量新骨,假手术组几乎没有新骨形成;骨体积分数、骨小梁数量和骨小梁厚度差异均有统计学意义(P<0.05)。蛋白质谱分析结果表明,与MSC ECM-TEB组相比,MSC/EPC ECM-TEB组中有83个血管生成相关的因子显著上调(差异倍数>2,P<0.05);GO/KEGG功能富集分析显示,与MSC ECM-TEB相比,MSC/EPC ECM-TEB在"血管发育"等生物过程存在明显差异(P<0.01),"血管平滑肌收缩通路"等显著增强(P<0.01)。结论与MSC ECM-TEB相比,MSC/EPC ECM-TEB在细胞募集、血管生成和新骨生成方面显著增强,是一种更佳的可用于创伤性骨缺损修复的组织工程骨构建策略。

3D打印器官源脱细胞外基质血管支持补片重建腹壁的组织工程方法

以脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix, ADM)和聚乳酸(polylactic acid, PLA)为材料制备3D打印血管支撑补片(又称支架),用于动物模型腹壁缺损的修复.优化了3D打印可植入补片的设计和实验工艺条件.对制备的3D打印补片的机械强度、表面形态、细胞毒性和生物相容性进行了测试,并与猪小肠黏膜下层(porcine small intestinal submucosa,PSIS)补片和PLA补片进行了比较.结果表明, 3D打印补片的缝合载荷、抗拉强度、亲水性和降解率均显著高于PSIS补片和PLA补片.同时,对3D打印补片的细胞相容性进行体外评价,结果表明细胞活力好且无毒.以大鼠作为动物模型,对3D打印补片的生物相容性和腹壁重建效果进行体内评价.结果表明,缺损区域修复良好,无明显感染、血清肿、血肿等情况发生.综上,证明了所制备的3D打印ADM-PLA-ADM补片比PSIS补片和PLA补片具有更好的组织再生性能, 3D打印补片可实现腹壁缺损的无张力闭合.因此, 3D打印ADM-PLA-ADM补片有望应用于腹壁重建.

羊脱钙骨基质作为骨组织工程支架材料的性能评估

目的 制备山羊脱钙骨基质（decalcified bone matrix，DBM），研究其物理和生物力学特性，为其作为理想的组织工程骨支架材料提供理论依据。方法 制备山羊完全脱钙骨基质，观察其色泽、质地、孔隙度等物理性状，并用扫描电镜观察其孔隙度，测量其孔径；通过测定吸水率评估其亲水性；用生物力学测定仪测定其不同压缩比率下的瞬时形变恢复率、最大形变恢复率及最大极限压缩强度。结果 标准化制备DBM呈乳白色，密度均匀，表面布有较多的微孔，扫描电镜观察其孔径范围为350～450（409．2±39．7）μm，吸水后膨胀，最大值吸水率达（419．0±44．4）％；生物力学测定显示，DBM位移是压缩强度的函数，DBM压缩20％和30％时其最大极限强度分别为（1．43±0．35）N和（1．62±0．51）N，瞬时形变恢复率分别为100％和（91．0±8．2）％。结论 完全脱钙骨基质孔径大，亲水性强，形变恢复好，利于细胞的黏附生长，是理想的组织工程支架材料。

骨组织工程天然衍生细胞外基质材料

细胞外基质材料的开发是骨组织工程的重要组成部分 ,目前 ,在骨组织工程中应用较多的基质材料可分为天然衍生材料、人工合成材料以及这两种材料的复合材料。介绍了各种天然衍生骨材料如煅烧骨、脱钙骨基质、脱蛋白骨基质、重组合异种骨基质和天然高分子材料如胶原、纤维蛋白、几丁质、藻酸盐及其衍生物以及珊瑚衍生骨在骨组织工程中的应用 ,展望了骨组织工程细胞外基质材料的未来发展方向 ,认为未来的理想基质材料应该是集各种材料的优点于一身 ,能够充分适应体内各种生理环境并能采用智能化的加工方式进行大批量生产的生物仿生材料。

人骨髓基质细胞在骨组织工程临床应用中的探讨

目的研究人骨髓基质干细胞经体外诱导表达成骨细胞表型,作为骨组织工程临床应用种子细胞的可行性。方法人骨髓中密度梯度法分离骨髓基质干细胞,诱导组予条件培养液,对照组予单纯DMEM培养液,分别培养至第3代细胞,计算各代倍增时间和3代总的扩增倍数,经相差显微镜观察,钙结节茜素红染色,四环素荧光,免疫荧光检测骨钙蛋白,成骨细胞转录因子RT-PCR检测Ⅰ型胶原,骨钙蛋白mRNA表达。结果诱导组骨髓基质干细胞(MSC)经体外诱导,三代平均扩增163.4倍后,形成钙结节,骨钙蛋白(OCN),成骨细胞转录因子(cbfa1)免疫荧光结果阳性,RT-PCR证实Ⅰ型胶原,骨钙蛋白mRNA的表达;对照组未能形成钙结节,无成骨细胞特征性蛋白OCN,cbfa1的表达。结论人MSC体外经条件培养液诱导培养三代后仍可表达成骨细胞表型,可以满足骨组织工程临床应用对种子细胞质和量的需要。

脱钙骨基质支架构建组织工程骨的实验研究

目的 以同种异体骨脱钙骨基质(demineralizedbonematrix ,DBM )为支架材料,复合体外诱导培养的人骨髓间充质干细胞(humanmesenchymalstemcells ,hMSCs) ,构建组织工程骨并通过裸鼠皮下异位成骨实验及裸鼠皮下致瘤性实验验证其成骨效果及安全性。方法 贴壁法培养hMSCs ,体外诱导培养扩增,以1 85 7×10 6/ml的密度与DBM复合构建组织工程骨,体外培养,并在扫描电镜下观察细胞与材料复合情况,进行组织学观察。同时进行了裸鼠皮下异位成骨实验。结果 细胞与支架复合后3d ,细胞与DBM表面及孔隙可实现良好复合;复合后5d ,扫描电镜观察到细胞基质分泌旺盛,充满支架孔隙。裸鼠皮下成骨实验证明其成骨效果良好。结论 以本实验中使用的细胞培养方法扩增、诱导分化的种子细胞生物安全性好,自制的DBM具有良好的生物相容性,可为种子细胞生长提供较好的三维空间,按照标准化工艺流程制备的组织工程骨安全、有效。

软骨脱细胞基质支架材料的软骨组织工程实验研究

目的应用软骨脱细胞基质作为支架材料,按照组织工程的原理再生软骨,为修复软骨缺损探索新的途径。方法取新西兰大耳白兔1只,体重2.4kg,按改良Courtman法对兔耳软骨行脱细胞处理后用于实验。选用纯种6月龄新西兰大耳白兔18只,雌雄不限,体重2.4～2.6kg。每只耳形成2处1cm×1cm软骨缺损,按修复方式不同随机分为3组,每组24处缺损。A组,软骨脱细胞基质加软骨膜;B组,软骨脱细胞基质;C组软骨膜,作为对照。术后每日观察兔耳修复区的大体变化,并分别于4、12周每组处死3只动物,于修复区切取标本,行HE染色、藏红花红-奥尔新蓝染色、Ⅱ型胶原基因探针原位杂交实验。结果术后4周内A、B组大体形态无明显改变;术后12周可见修复区轻度增厚,触摸时质地较正常软骨稍硬。C组术后2周,2只2处修复区形成痂皮,术后5周痂皮脱落形成穿孔。术后4周,A、B组HE染色可见软骨脱细胞基质周边有轻度的炎性细胞浸润,以淋巴细胞为主,未形成包囊,藏红花红-奥尔新蓝染色均阴性;C组软骨缺损处的软骨膜塌陷,无细胞增殖现象;各组修复区均未见Ⅱ型胶原基因探针原位杂交显色。术后12周,A组HE染色示部分软骨脱细胞基质内有新生细胞,细胞排列不规律,ECM嗜碱性增强,藏红花红-奥尔新蓝染色呈阳性,Ⅱ型胶原基因原位杂交显色示新生细胞内均有大片棕黄色阳性染色区域;B组HE染色示软骨脱细胞基质无吸收现象,周边无包囊,炎性细胞消失,藏红花红-奥尔新蓝染色呈阴性,未见Ⅱ型胶原基因原位杂交显色;C组HE染色示近软骨断端处可见部分形成新生组织,藏红花红-奥尔新蓝染色呈阳性,Ⅱ型胶原基因原位杂交显色可见棕黄色阳性染色细胞。结论脱细胞软骨可诱导软骨膜细胞向其中生长而重建软骨,软骨膜和脱细胞软骨复合移植是软骨组织工程的另一种选择。

关节软骨细胞外基质源性软骨组织工程取向支架的制备

背景:仿生天然软骨细胞外基质特殊的力学、结构特性和生化成分的软骨组织工程支架具有巨大的应用潜能。目的:观察仿生天然关节软骨细胞外基质的生化和结构特性,探讨关节软骨细胞外基质材料及软骨组织工程取向支架的制备方法,并对其理化性质进行检测。设计、时间及地点:组织工程材料支架制备及性能分析的体外实验,于2007-07/2008-07在解放军总医院骨科研究所完成。材料:将新鲜猪关节软骨湿法粉碎,差速离心,收集无细胞的软骨细胞外基质成分。脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶及碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺均为美国Sigma公司产品。方法:对关节软骨细胞外基质材料进行组织学和形态学检测后,用pH3.2的稀盐酸制成质量浓度为20g/L溶液,采用定向结晶及冷冻干燥技术制成关节软骨细胞外基质源性取向支架,再采用物理化学方法交联,同时制备多孔软骨细胞外基质源性非取向支架。主要观察指标:①关节软骨细胞外基质材料的生化组成和形态。②软骨细胞外基质取向支架和非取向支架的表面特征及孔道结构。③取向和非取向软骨细胞外基质支架的孔隙率、吸水膨胀率、力学特性的比较。结果:收集的关节软骨细胞外基质材料中无细胞存在,纤维为纳米尺度,甲苯胺蓝、番红花O、奥新蓝染色及Ⅱ型胶原染色阳性;制备的取向支架具有纵向排列的孔道结构,孔径100～200μm,分布均匀,非取向支架的孔呈海绵样结构;两种支架孔隙率均≥95%,吸水膨胀率均≥96%。取向支架纵向压缩模量和拉伸模量为:(2.02±0.02),(22.10±0.67)MPa,均大于非取向支架,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:天然关节软骨细胞外基质材料与天然关节软骨的生物力学特性相似,可满足软骨组织工程的需要,是一种比较理想的软骨组织工程支架。

新型多孔磷酸钙复合骨髓基质干细胞组织工程实验研究

目的观察新型生物材料多孔磷酸钙的生物相容性及复合骨髓基质干细胞(BMSCs)异位成骨情况。方法体外培养第2代Beagle犬BMSCs,转染绿色荧光蛋白(GFP)后与多孔磷酸钙(CPC)复合培养,获得最佳复合浓度,倒置和荧光显微镜、扫描电镜下观察BMSCs黏附和生长情况,复合体植入裸鼠皮下8周观察异位成骨。结果 BMSCs转染GFP与多孔CPC复合培养1d,细胞从材料中爬出,形态正常,7d可见细胞伸出伪足,分泌基质;复合体可异位成骨。结论多孔CPC生物相容性好,是一种较理想的骨组织工程支架材料。

同种异体脱钙骨基质的组织工程学特性

背景:由骨衍生的支架材料无论形态学和力学特征,具有合成材料无可比拟的优势,脱钙骨基质具有和自体骨最接近的三维结构,同时以Ⅰ型胶原为主,胶原是细胞黏附和生长的良好支架。目的:从组织工程学角度研究同种异体脱钙骨基质的生物学特性,探讨其作为软骨组织工程支架材料的可行性。方法:据Urist描述的方法制备青紫蓝兔同种异体脱钙骨基质,扫描电镜观察脱钙骨基质的超微结构,测定其孔径、孔隙率和降解率,测定同种异体脱钙骨基质与骨髓间充质干细胞的黏附率,兔体内植入法评价同种异体脱钙骨基质的组织相容性。结果与结论:脱钙骨基质呈多孔海绵状三维结构,孔径在210～320μm之间,孔隙率为92%,体外降解12周降解率达90%以上,脱钙骨基质与骨髓间充质干细胞共培养第2,4,6天的黏附率分别为(51.50±2.30)%,(94.13±2.14)%和(87.24±1.75)%。兔体内植入6周后脱钙骨基质周围界面未引起明显的炎症和排斥反应,并形成软骨样结构和少量骨组织。说明脱钙骨基质具有适宜的三维多孔结构,降解时间和软骨形成时间同步,同种异体脱钙骨基质与种子细胞黏附率高,与细胞组织相容性好,能满足软骨组织工程对支架材料的要求,是理想的软骨组织工程的支架材料。

重组PcDNA3.1-hBMP-2转染骨髓基质干细胞及复合异种骨支架体外构建组织工程骨

目的 :构建人骨形态发生蛋白 2 (humanbonemorphogeneticprotein ,hBMP 2 )真核表达载体PcDNA3 1 hBMP 2 ,转染兔骨髓基质干细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSCs) ,种植去抗原牛松质骨(bovinecancellousbone ,BCB)支架体外构建组织工程骨。方法 :蛋白印迹法检测转染后细胞BMP 2的表达 ,碱性磷酸酶 (ALPase)活性检测分析基因转染对细胞分化的影响。然后将转染后细胞接种到BCB支架上 ,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 :转染后 ,BMSCs表达BMP 2 ,ALP活性明显增高。扫描电镜见转染细胞分布均匀 ,伸展良好。结论 :在脂质体介导下 ,BMP 2基因可导入细胞且稳定表达基因产物促进自身增殖分化 ,转染后细胞在支架材料上贴附生长良好 ,为进一步应用携带BMP

Interpore 500R复合人骨髓基质干细胞构建组织工程骨

目的 :研究可吸收性珊瑚羟基磷灰石 (Interpore 5 0 0R)作为骨组织工程支架材料的特点。 方法 :取人骨髓基质干细胞于含 10 0ml/L胎牛血清的DMEM培养液中培养 ,并向成骨细胞诱导。将细胞与可吸收性珊瑚羟基磷灰石复合 ,通过扫描电镜观察细胞附着情况 ,共聚焦显微镜观察I型胶原的分泌。同时将细胞 /Interpore5 0 0R复合物植入裸鼠体内构建骨组织 .40d后取裸鼠标本组织切片、HE染色观察成骨情况。结果 :骨髓基质干细胞在可吸收性羟基磷灰石表面附着良好 ,可分泌I型胶原 ,在裸鼠体内形成组织工程骨。结论 :可吸收性羟基磷灰石生物相容性好 ,细胞附着后仍继续保持成骨细胞特性 ,并可形成骨组织。作为骨组织工程的支架材料 ,应用前景良好。

大鼠骨髓基质细胞接种于纳米-羟基磷灰石构建组织工程化骨组织的研究

目的 :探讨用骨髓基质细胞 (MSC)作为种子细胞 ,三维多孔纳米 羟基磷灰石为支架材料构建组织工程化骨组织的可行性。 方法 :建立诱导大鼠MSC分化为成骨细胞的新的骨髓培养法 ,并进行鉴定。将诱导分化形成的成骨细胞 ,接种于三维多孔纳米 羟基磷灰石多孔支架中 ,培养 15天后 ,通过扫描电镜观察诱导分化的成骨细胞与三维多孔纳米 羟基磷灰石支架材料的复合情况。 结果 :大鼠MSC随着培养时间的延长 ,其碱性磷酸酶活性和骨钙素的分泌逐渐形成 ,并不断地增加。接种于三维多孔纳米 羟基磷灰石支架材料上的细胞生长良好 ,形成许多细小的钙结节和胶原纤维。 结论 :新的骨髓培养法可使大鼠MSC分化和增生为具有良好功能特性的成骨细胞 ,三维多孔纳米 羟基磷灰石是可利用的支架材料。用MSC作为种子细胞 ,三维多孔纳米 羟基磷灰石作为支架构建组织工程化骨组织有很多优点 ,具有广阔的应用前景。

浓集自体骨髓基质干细胞组织工程复合物治疗早期股骨头坏死的实验疗效

目的研究浓集自体骨髓基质干细胞组织工程复合物治疗兔早期股骨头坏死的实验疗效,为临床应用提供依据。方法24只新西兰大白兔随机分为两组,建立右侧股骨头骨缺损模型,并用液氮从缺损内将股骨头冷冻坏死,A组为对照组,仅植入空白明胶海绵,B组为实验组,植入复合物。术后每组分别于2、4、6、8周各处死3只动物,做影像学及组织学检查。进行有关指标检测。结果①影像学结果:随着时间延长无论是X线、CT表现还是MRI表现,实验组钻孔区由低密度逐渐增高,8周时有骨小梁结构;对照组钻孔区无新骨形成表现。②组织学结果:A组2周标本缺损区内,充满坏死的组织碎片;4周标本,缺损区内为疏松的纤维肉芽组织;6周标本缺损区内为纤维组织;8周标本缺损区内仍为纤维组织,无新生骨组织。B组2周标本缺损区内,有大量的成骨细胞;4周标本,缺损区内有大量骨小梁及类骨质填充;6周标本缺损区内出现比较成熟的骨小梁;8周标本缺损区内骨小梁成熟,骨髓组织形成。结论浓集自体骨髓基质干细胞组织工程复合物对兔股骨头坏死有极好的修复作用。

骨髓基质干细胞作软骨组织工程种子细胞研究

目的 综述近年来骨髓基质干细胞体外培养、定向分化为软骨细胞的条件及相关研究进展。方法 广泛查阅相关文献 ,对上述研究进展进行整理、综合和分析。结果 骨髓基质干细胞易于分离培养 ,体外增殖能力强 ,传代多次后仍保持有多分化潜能 ;体内成软骨能力明确 ;但骨髓基质干细胞定向分化的软骨细胞 ,不是终末分化阶段 ,而只是一个中间阶段。结论 骨髓基质干细胞以其自身多方面的特点已成为软骨组织工程的另一种可选择的种子细胞 ,但其进一步分化为成熟软骨细胞的条件尚需进一步研究。

天然珊瑚和同种异体脱钙骨基质作为骨组织工程支架的组织相容性研究

目的 :评价天然滨珊瑚 (NC)和同种异体脱钙骨 (DBM)的组织相容性 ,探讨其作为骨组织工程支架的可行性。方法 :将NC和DBM直接植入动物体内 ,术后 1、2、6周取材 ,通过大体观察和组织学检查观察生物材料在体内组织反应。结果 :两种材料均未引起明显的炎症和排斥反应 ,对实验动物无不良影响。同时发现DBM组诱导出少量骨组织 ,NC组未见新生骨。结论 :NC和DBM具有良好的组织相容性 ,DBM还具有骨诱导性 。

骨髓基质干细胞与PDPB体外构建组织工程骨的适宜条件

背景：骨组织工程支架材料中PDPB是一种较为理想的骨移植材料，目前多采用体外培养的骨髓基质干细胞与支架材料构建组织工程骨后修复骨缺损。目的：实验拟验证骨髓基质干细胞与PDPB体外构建组织工程骨的最佳浓度及移植入体内的最佳时机。设计．时间及地点：随机分组设计，对照观察，于2007—10／12在中国科学院动物研究所完成。材料：2周龄日本大耳兔，体质量2．0kg左右，用于培养骨髓基质干细胞。取新鲜的猪椎骨制备PDPB。方法：传代培养骨髓基质干细胞，矿化液对兔骨髓基质干细胞进行分化鉴定后，取不同浓度（1×10^10L^-1、5×10^9L^-1、1×10^9L^-1、5×10^8L^-1）的兔骨髓基质干细胞与PDPB复合体外构建组织工程骨。主要观察指标：倒置显微镜下观察细胞的生长形态：扫描电镜观察骨髓基质干细胞在PDPB上的黏附情况：四甲基偶氮唑盐法检测各浓度骨髓基质干细胞在PDPB上的生长情况。结果：①原代培养24h部分细胞开始贴壁，6d后贴壁生长的细胞数量增多，10--12d集落逐渐增大，并融合为单层。经矿化液诱导培养21d后，行矿化沉积茜素红染色及碱性磷酸酶细胞化学染色，可见大量细胞呈碱性磷酸酶阳性及大量钙结节形成。②扫描电镜观察骨髓基质干细胞在PDPB上黏附良好，第8天时细胞和材料结合紧密。第10天细胞呈梭形生长，部分细胞突起翘起。③各浓度组骨髓基质干细胞在PDPB上的生长曲线形态基本相同，呈“S”形。2-6d细胞开始在支架材料上大量增殖，第6天后细胞活力逐渐降低，其中5×10^9L^-1浓度骨髓基质干细胞复合PDPB后细胞可以很好的黏附，细胞活性好。结论：骨髓基质干细胞和PDPB复合的最佳浓度是5×10^9L^-1，移植的最佳时机为6d。