miR-875-5p靶向基质抗原2对宫颈癌细胞迁移及侵袭行为的影响

目的探讨miR-875-5p与基质抗原2(STAG2)的靶向关系,并分析两者对宫颈癌HeLa 229细胞侵袭及迁移的影响。方法选取2018年10月至2020年10月武汉大学人民医院收治的120例宫颈癌患者作为研究对象,留取其组织标本作为宫颈癌组。另选取同期武汉大学人民医院收治的120例子宫肌瘤患者,留取其宫颈组织标准本作为对照组。体外培养HeLa 229细胞,分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(inhibitor-NC组)、抑制miR-875-5p表达组(miR-875-5p-inhibitor组)、共转染组(miR-875-5p-inhibitor+STAG2-siRNA组)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测组织及各组HeLa 229细胞中miR-875-5p、STAG2 mRNA水平;划痕实验、Transwell实验分别检测各组HeLa 229细胞迁移、侵袭能力;免疫印迹法法检测STAG2蛋白及侵袭迁移相关蛋白[E-钙粘附蛋白(E-cadherin)、N-钙粘附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)]表达情况;采用TargetScan数据库预测miR-875-5p与STAG2靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。结果与对照组比较,宫颈癌组miR-875-5p水平升高,STAG2 mRNA水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与NG组、inhibitor-NC组比较,miR-875-5p-inhibitor组HeLa 229细胞miR-875-5p水平、划痕愈合率、侵袭细胞数、N-Cadherin、Vimentin蛋白表达均降低,STAG2 mRNA及其蛋白水平、E-Cadherin蛋白表达均升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-875-5p可能靶向上调STAG2表达,抑制宫颈癌HeLa 229细胞迁移及侵袭,其有望成为宫颈癌新的潜在治疗靶点。

基质抗原2在肿瘤中的研究进展

黏连蛋白(cohesin)在DNA修复、细胞周期和基因表达调控等生理过程中发挥重要作用。研究表明,cohesin功能缺陷与肿瘤的发生密切相关。Cohesin的核心蛋白-基质抗原2(STAG2)广泛存在于正常细胞中。近年来,因STAG2在多种肿瘤中的基因突变或蛋白缺失引起研究者的广泛关注。深入研究STAG2基因突变或蛋白缺失对肿瘤发生发展的影响及其相关分子机制,可为肿瘤的诊疗提供新思路,新靶点。该文就STAG2基因在人类恶性肿瘤中的研究现状进行以下综述。

RNA聚合酶2延长因子相关因子2通过调节骨髓基质抗原2的表达调控前列腺癌细胞的增殖与迁移

目的 观察雄激素应答基因RNA聚合酶2延长因子相关因子2（EAF2）对骨髓基质抗原2（BST2）的调节能力，以及EAF2通过BST2调节前列腺癌细胞增殖和迁移的能力。方法 以Lipofectamine 2000试剂转染针对EAF2和非特异性对照组的小干扰RNA（siRNA，分别为100 pmol），干扰前列腺癌细胞C4-2中EAF2的表达，采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot检测细胞内BST2的mRNA和蛋白水平表达变化；采用质粒转染的方法在293T细胞中过表达EAF2后检测BST2蛋白水平的变化，明确EAF2对BST2表达的影响；采用溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记法和Transwell小室法计算并检测干扰BST2表达后对前列腺癌细胞C4-2增殖能力和迁移能力的影响，明确BST2对前列腺癌细胞增殖和迁移的调节能力。结果 干扰EAF2表达后细胞内BST2 mRNA的表达明显升高，说明EAF2可以调节BST2的转录水平，进一步检测干扰EAF2表达后，BST2的蛋白水平表达明显升高，进一步干扰BST2表达后，检测到前列腺癌细胞的增殖比例由（22.09±1.08）%下降至（12.25±1.32）%（P＝0.001）。同时，迁移细胞的数量从（50.50±3.80）%下降至（24.25±1.42）%（P＝0.001）。结论 在前列腺癌细胞中，EAF2可以在转录和蛋白水平调节BST2的表达，BST2具有调节前列腺癌细胞增殖和迁移的能力。

猪骨髓基质抗原2基因的克隆、表达及生物学活性研究

研究目的是克隆猪骨髓基质抗原2(Bone marrow stromal antigen-2,BST-2)基因并进行真核表达,获得具有抗病毒活性的重组BST-2蛋白。研究通过RT-PCR从猪瘟弱毒疫苗和聚肌胞(Poly I:C)刺激的猪肾细胞(PK-15)中扩增出猪BST-2cDNA,克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,构建重组表达质粒pcDNA-BST-2,转染HEK293T细胞,纯化BST-2蛋白并经Bradford法定量,Western blot检测,研究BST-2抗病毒生物学活性。酶切鉴定和核酸序列测定证实pcDNA-BST-2真核表达质粒构建成功,转染HEK293T细胞后,经间接免疫荧光能够检测到绿色荧光。生物学活性测定重组BST-2蛋白具有一定的抗水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)、H9禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)及猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,PRRSV)的活性。结果表明,重组BST-2具有一定抗病毒生物功能,为进一步研究重组BST-2蛋白的活性以及BST-2抗病毒药物研究奠定了基础。

人骨髓基质干细胞抗原2在肿瘤发生发展中作用的研究进展

人骨髓基质干细胞抗原2(BST-2)是一种干扰素诱导的跨膜蛋白,最早作为B细胞终末分化的标记物而被发现,之后被鉴定为重要的可对抗艾滋病病毒(HIV)等包膜病毒的天然抗病毒因子。临床病理学分析、统计学数据和体内外实验研究表明BST-2同时具有促进肿瘤发生发展的能力。BST-2蛋白在乳腺癌、肺癌和鼻咽癌等多种癌症组织中高表达,其表达水平与患者生存期有关联。BST-2可促进癌细胞的迁移和侵袭,影响肿瘤的发生发展。BST-2促肿瘤进程的分子机制包括调控细胞DNA甲基化形式、对转化生长因子(TGF-β)的负调控作用、对细胞因子的诱导作用、对核因子κB(NF-κB)信号通路的激活以及促抗凋亡基因的表达等途径。破坏BST-2的分子结构、阻断其表达以及BST-2中和抗体的使用等已经在癌症治疗上体现出巨大价值。现综述BST-2对乳腺癌、肺癌、胃肠癌和鼻咽癌等不同癌症发生发展的影响,同时归纳其表达、转录后修饰及参与信号通路对其调控肿瘤发生发展的不同分子机制,揭示其作为肿瘤治疗潜在靶标的可能性。

骨髓基质抗原蛋白2对甲状腺乳头状癌细胞转移活性的影响

目的探究骨髓基质抗原蛋白2(BST2)调节磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路对甲状腺乳头状癌细胞增殖、转移和凋亡的影响.方法选取2022年8月至2023年11月在山西省肿瘤医院诊治的11例甲状腺乳头状癌患者[(65±8)岁]中收集癌组织和癌旁组织.将甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,通过随机数表法随机分为4组:阴性对照组,siBST2组,PI3K/Akt信号通路抑制剂组、pcDNA BST2组.免疫组化分析甲状腺乳头状癌组织和癌旁组织BST2的表达水平;CCK-8实验分析各组TPC-1细胞的增殖能力;细胞划痕实验分析各组TPC-1细胞的迁移能力;Transwell实验分析各组TPC-1细胞的侵袭能力;流式细胞术分析各组TPC-1细胞凋亡率;蛋白免疫印迹分析TPC-1细胞中BST2和PI3K/AKT通路蛋白的表达.两组间比较采用独立样本t检验.结果甲状腺乳头状癌组织中BST2表达高于癌旁组织(0.17±0.03比0.83±0.05,t=12.905,P<0.05);siBST2组TPC-1细胞的BST、Akt、PI3K蛋白表达低于阴性对照组(0.60±0.02比0.13±0.02,t=11.367,P<0.05;0.59±0.05比0.11±0.03,t=9.235,P<0.05;0.51±0.06比0.15±0.03,t=15.325,P<0.05);pcDNA BST2组的TPC-1细胞的BST、Akt、PI3K蛋白表达高于阴性对照组(0.60±0.02比0.88±0.55,t=11.911,P<0.05;0.59±0.05比0.81±0.03,t=16.255,P<0.05;0.51±0.06比0.82±0.03,t=13.271,P<0.05);siBST2组、PI3K/Akt信号通路抑制剂组的TPC-1细胞的增殖、迁移、侵袭能力低于阴性对照组(85.12±8.12比153.28±9.88,t=12.766,P<0.05;81.62±9.33比153.28±9.88,t=11.698,P<0.05);siBST2组、PI3K/Akt信号通路抑制剂组的TPC-1细胞的凋亡率高于阴性对照组(13.05±1.16比6.70±0.12,t=9.081,P<0.05;14.36±0.98比6.70±0.12,t=11.661,P<0.05);pcDNA BST2组的TPC-1细胞的增殖、迁移、侵袭能力高于阴性对照组(209.78±15.92比153.28±9.88,t=12.568,P<0.05);pcDNA BST2组的TPC-1细胞凋亡率低于阴性对照组(3.56±0.05比6.70±0.12,t=12.562,P<0.05).结论下调BST2或抑制PI3K/Akt信号通路能够抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进TPC-1细胞凋亡.

基质金属蛋白酶-14和Bst-2通过蛋白质结构域相互作用而抑制Bst-2的生物活性

Bst-2(骨髓基质细胞抗原-2)是一种II型膜蛋白,其主要功能是抑制病毒从感染细胞释放;基质金属蛋白酶-14(MT1-MMP)是一种膜蛋白酶,其主要功能是通过激活pro MMP2在细胞生长和迁移中扮演重要角色.本研究主要探讨了MT1-MMP抑制Bst-2生物活性的分子机制.实验结果表明,MT1-MMP通过与Bst-2相互作用进而抑制Bst-2的活性和功能;并且,在此相互作用中,这两种膜蛋白的细胞质结构域(Bst-2的N-末端结构域和MT1-MMP的C-末端结构域)起到了极为关键的作用.此外,还发现Bst-2的N-末端结构域在Bst-2抑制MT1-MMP活性的过程中也不可或缺.这些结果为临床上探索抑制病毒感染和肿瘤转移的新方法和新药物研制开发提供了理论依据.

STAG2基因敲除的IPEC-J2细胞系构建及其对PDCoV复制影响的研究

为探究猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中基质抗原2(STAG2)因子对猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)复制的影响,本研究针对STAG2基因设计并合成sgRNA,将其克隆至lentiCRISPR v2载体构建重组表达质粒。将重组质粒转染至IPEC-J2细胞后,利用嘌呤霉素(Puromycin)采用有限稀释法进行亚克隆,筛选STAG2基因缺失的单克隆细胞株,并经western blot鉴定后最终获得一株STAG2缺失的单克隆稳定细胞系IPEC-J2-STAG2-/-(KO)。利用western blot方法鉴定不同代次STAG2敲除细胞的遗传稳定性,结果显示,IPEC-J2-STAG2-/-细胞具有良好的遗传稳定性。为探究STAG2基因对PDCoV复制的影响,本研究将PDCoV分别感染IPEC-J2-STAG2-/-细胞和野生型IPECJ2细胞(WT),采用荧光定量PCR、western blot方法检测细胞中PDCo V N基因m RNA转录及其蛋白表达水平。结果显示,与WT组相比,IPEC-J2-STAG2-/-细胞中PDCo V N基因m RNA转录水平及其蛋白表达水平均极显著降低(P<0.01),表明STAG2缺失会抑制PDCoV在IPEC-J2细胞中的复制。为探究STAG2缺失是否刺激宿主细胞产生天然免疫应答,本研究利用荧光定量PCR方法检测敲除细胞中3种天然免疫应答相关干扰素刺激基因(ISGs)的转录水平,结果显示,与WT相比,IPEC-J2-STAG2-/-细胞内相关ISGs转录水平显著升高(P<0.01),表明STAG2缺失后宿主细胞启动天然免疫应答进而抑制PDCoV的复制。本研究首次发现STAG2基因缺失后显著上调了IPEC-J2细胞天然免疫抗病毒基因的转录水平,从而抑制PDCoV的复制,为研究PDCoV和宿主因子相互作用提供了新思路。

STAG2基因在人膀胱癌细胞系5637侵袭迁移和凋亡过程中的作用

目的:研究Stromal antigen 2(STAG2)基因在膀胱癌中的表达,并探讨STAG2基因在膀胱癌细胞侵袭迁移及凋亡过程中的作用。方法:采用逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)和蛋白印迹法(Western Blotting)分析STAG2在膀胱癌细胞表达特点;利用慢病毒技术过表达STAG2基因转染膀胱癌细胞并使用嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株;细胞划痕实验和Transwell实验观察STAG2过表达对膀胱癌细胞迁移和侵袭功能的影响;流式细胞仪检测STAG2基因过表达对膀胱癌细胞的凋亡影响,Western Blotting检测下游分子E-cadherin、Vimentin表达水平。结果:在膀胱癌细胞系5637中STAG2表达远低于正常膀胱上皮细胞;慢病毒过表达效率达到80%以上;STAG2过表达后膀胱癌细胞划痕愈合速度变慢;穿过Transwell小室的细胞数明显变少;膀胱癌细胞凋亡数明显增加,下游分子E-cadherin表达升高、Vimentin表达下降。结论:STAG2可能是一个新的肿瘤抑制基因,在膀胱癌细胞侵袭迁移和细胞凋亡中起着重要。

STAG2基因的特点及其在膀胱癌中的研究进展

骨髓基质细胞抗原2(STAG2)是一种最早在骨髓基质细胞中发现并广泛存在于正常细胞中的基因。到目前为止,STAG2基因在膀胱癌中的突变率约为11%,且STAG2基因表达缺失在低分期、低分级的膀胱癌中更为常见,是形成染色体非整倍体的主要原因。另外,STAG2基因的表达缺失与膀胱癌预后不良也有密切关系。深入研究STAG2基因对了解膀胱癌的发生、发展有重要意义,可为临床上膀胱癌的诊断和治疗提供一种新途径。

宫颈癌组织KLK4、STAG2的表达及其临床意义

目的:分析激肽释放酶4(KLK4)、基质抗原2(STAG2)在宫颈癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系。方法:选取2015年2月至2017年3月本院收治的397例宫颈癌患者为研究对象,在手术过程中收集癌组织及癌旁正常组织。检测组织KLK4 mRNA、STAG2 mRNA水平及KLK4、STAG2蛋白表达;采用Pearson相关系数检验KLK4 mRNA水平与STAG2 mRNA水平的相关性;采用Kaplan-Meier法绘制宫颈癌患者生存曲线;分析宫颈癌患者预后的影响因素。结果:与癌旁正常组织相比,宫颈癌组织KLK4 mRNA、STAG2 mRNA水平升高(P<0.05),且两者mRNA水平呈正相关(r=0.461,P<0.05)。宫颈癌组织KLK4蛋白阳性率、STAG2蛋白阳性率较癌旁正常组织高(P<0.05)。肿瘤直径>5.0 cm、FIGO分期为Ⅲ+Ⅳ期、肌层浸润深度>1/2的宫颈癌患者KLK4阳性表达比例、STAG2阳性表达比例均高于肿瘤直径≤5.0 cm、FIGO分期为Ⅰ+Ⅱ期、肌层浸润深度≤1/2的患者(P<0.05)。KLK4阴性组生存率高于KLK4阳性组(P=0.002),STAG2阴性组生存率高于STAG2阳性组(P<0.001)。KLK4阳性表达、STAG2阳性表达、FIGO分期(Ⅲ~Ⅳ)、肌层浸润深度(>1/2)是影响宫颈癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:宫颈癌组织KLK4、STAG2的mRNA水平及蛋白阳性表达率均显著高于癌旁组织,两者与肿瘤直径、FIGO分期、肌层浸润深度及预后密切相关。

BST-2参与HCMV感染诱导的恶性胶质瘤细胞增殖和迁移

为探讨BST-2蛋白是否参与人巨细胞病毒(HCMV)感染导致的恶性胶质瘤细胞增殖和迁移,以HCMV AD169株感染U251细胞,通过细胞划痕愈合实验检测HCMV感染对U251迁移的影响;通过Western-blot方法检测HCMV感染对BST-2蛋白表达的影响;通过CCK-8、细胞划痕愈合和transwell方法检测HCMV感染后下调BST-2对U251细胞增殖和迁移能力的影响。结果显示,HCMV感染可促进U251细胞迁移并高表达BST-2,沉默BST-2后可抑制由HCMV感染诱导的细胞增殖和迁移。结果证实HCMV感染可促进胶质瘤细胞U251增殖迁移,BST-2参与了HCMV感染导致的恶性胶质瘤细胞增殖和迁移。

骨髓基质抗原蛋白2靶向微泡的制备及小鼠肿瘤新生血管超声分子成像研究

目的研究制备针对骨髓基质抗原蛋白2（BST2）的TMBs造影剂（BST2-TMBs），通过超声分子成像技术对小鼠肿瘤血管内皮细胞进行检测，为肿瘤的发生、发展及早期诊断提供实验依据。方法将抗BST2的抗体通过生物素一亲和素桥接的方式连接于微泡（MBs）表面，获得BST2-TMBs，在光学显微镜下观察TMBs的形态，用粒径分析仪测定其粒径及其分布；通过体外细胞黏附实验研究TMBs与血管内皮细胞的结合性能，并对小鼠前列腺癌肿瘤血管内皮细胞行超声分子成像，用免疫组织化学染色分析BST2在肿瘤血管内皮细胞的表达。采用SPSS19．0软件行统计学分析，对独立样本行t检验。结果制备的BST2-TMBs的平均粒径为1．61μm，其中95％的微泡在1-5μm之间。BST2-TMBs能够与血管内皮细胞结合，平均每个视野有（165±25）个TMBs结合在内皮细胞表面，远高于非靶向微泡（IgG-MBs）对照组的（10±3）个微泡（t=10．662，P〈0．01）。黏附的TMBs能够明显增强内皮细胞的超声信号强度，TMBs为27．93±5．14（灰度值），非靶向微泡为3．61±1．67（灰度值）（t=7．239，P〈0．01）。小鼠在体肿瘤超声分子成像表明：BST2-TMBs处理组在微泡注射7min时信号强度（扣除微泡击碎后的信号强度）为38．79±0．29（灰度值），能保持47．65％的微泡注射30s时的信号强度（灰度值81．40±0．37），而IgG-MBs处理组在微泡注射7min时的信号强度（扣除微泡击碎后的信号强度）是9．46±0．17（灰度值），仅能保持11．39％的微泡注射30S时的信号强度（灰度值83．01±0．60）。相比之下，TMBs在肿瘤部位的超声信号强度较非靶向微泡提高4．27倍（t=65．587，P〈0．01）。免疫组织化学证实BST2蛋白在小鼠前列腺癌肿瘤血管内皮细胞上有表达。结论BST2-TMBs可以用于小鼠前列腺癌血管内皮细胞的超声分子成像，这为肿瘤的发生发展以及早期诊断提供了实验依据。

胃癌组织中miR-760、BST2的表达变化及意义

目的观察胃癌组织微小RNA-760(miR-760)与骨髓基质细胞抗原2(BST2)表达变化,并探讨其意义。方法选取82例胃癌患者,应用荧光实时定量PCR技术检测胃癌组织和癌旁正常组织中的miR-760及BST2 mRNA,分析miR-760和BST2 mRNA与患者临床病理参数的关系及两指标的相关性。结果胃癌组织中miR-760的相对表达量低于癌旁组织,BST2 mRNA的相对表达量高于癌旁组织(P均<0.05)。胃癌组织中miR-760和BST2 mRNA的相对表达量与肿瘤TNM分期、细胞分化程度、淋巴结转移有关(P均<0.05)。胃癌组织中miR-760和BST2 mRNA的表达呈负相关(r=–0.545,P<0.05)。结论胃癌组织中miR-760低表达、BST2 mRNA高表达,两者均与肿瘤恶性程度有关,有望成为诊断胃癌新的生物标志物。

咪达唑仑调控miR-875-5p/STAG2轴对食管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨咪达唑仑(MID)调控miR-875-5p/基质抗原2(STAG2)轴对食管癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:用不同浓度的MID(0,10,20,30,40μmoL/L)处理食管癌Eca109细胞24h,通过CCK-8法筛选适宜的MID浓度;采用高通量miRNA转录组学对30μmoL/L处理的Eca109细胞中差异表达的miRNA进行筛选;流式细胞术检测Eca109细胞凋亡及细胞周期;qRT-PCR检测miR-875-5p及STAG2 mRNA表达水平;双荧光素酶实验验证miR-875-5p与STAG2的关系;将miR-875-5p模拟物(miR-875-5p mimics)转染于Eca109细胞并用30μmoL/L MID干预,观察细胞存活率、凋亡率、细胞周期的变化;Western blot检测STAG2蛋白表达;体内异种移植瘤实验检测MID及miR-875-5p对裸鼠体内移植瘤生长的影响。结果:选用30μmoL/L MID用于后续研究;在30μmoL/L处理的Eca109细胞中筛选出显著性下调的miRNA中有miR-875-5p;30μmoL/L MID干预或下调miR-875-5p表达均能够使Eca109细胞增殖能力、miR-875-5p表达、S期细胞比例降低,细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例增加(P<0.05);miR-875-5p和STAG2存在靶向负向调控关系;上调miR-875-5p表达可逆转MID对Eca109细胞增殖、凋亡及细胞周期的作用,同时还可逆转MID对裸鼠体内移植瘤生长的抑制作用。结论:MID通过下调miR-875-5p水平靶向促进STAG2表达,从而抑制Eca109细胞增殖,促进细胞凋亡。

BST-2在pSS患者唇腺、外周血淋巴细胞中的表达及增殖作用

目的探讨原发性舍格伦综合征(pSS)患者唇腺及外周血B淋巴细胞中骨髓基质细胞抗原2(BST-2)的表达情况及其在pSS中的作用。方法将2017年9月至2018年3月在内蒙古自治区人民医院接受治疗的40例pSS患者作为pSS组;将同期体检的30例健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测纳入研究者的唇腺组织及外周血B淋巴细胞中BST-2的表达水平。免疫组织化学法检测唇腺组织内BST-2的表达情况,并分析BST-2对淋巴细胞增殖的影响。结果pSS组的外周血B淋巴细胞和唇腺组织中BST-2的表达水平明显高于对照组(P<0.05);pSS患者唇腺组织中浸润的局灶性淋巴细胞和少数周围导管上皮内BST-2表达量较高,而在对照组中仅在导管上皮细胞内存在散在性少量表达。连续切片的pSS患者唇腺组织染色显示,pSS患者的唇腺组织内CD19染色阳性细胞和BST-2阳性细胞基本一致。结论pSS患者唇腺组织和外周血B淋巴细胞BST-2水平明显增高;BST-2通过对腺体内B淋巴细胞的浸润及增殖,参与pSS的发病及进展。

骨髓基质细胞抗原2敲低促进创伤性颅脑损伤大鼠神经功能的恢复

【目的】探索骨髓基质细胞抗原2(bone marrow stromal cell antigen 2,Bst2)对颅脑创伤的影响。【方法】将大鼠随机分为假手术组,创伤性颅脑损伤(Traumatic brain injury,TBI)组,TBI+Bst2 siRNA组。其中TBI+Bst2 siRNA组在损伤后同时原位注射Bst2 siRNA。通过改良大鼠神经功能缺损评分,伊文思蓝通透性,脑干湿比重比较Bst2敲低对TBI损伤大鼠的影响。通过免疫印迹检测水通道蛋白-4(aquaporin 4,AQP4),基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein,MMP9),组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator,tPA),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,Tnf-α),表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,Egfr)表达水平的变化。【结果】Bst2 siRNA降低了TBI大鼠神经功能损伤评分,降低了伊文思蓝通透性,降低了脑水肿;免疫印迹结果显示Bst2敲低后Aqp4,Mmp9,tPA,Tnf-α和Egfr的表达水平降低。【结论】Bst2敲低通过降低Aqp4,Mmp9,tPA,Tnf-α和Egfr的蛋白水平减轻了脑水肿,改善了血脑屏障通透性和神经功能。

胶质母细胞瘤骨髓基质细胞抗原2基因的表达及其与非CpG岛DNA甲基化和预后的关系

目的探讨骨髓基质细胞抗原2(BST2)基因在胶质母细胞瘤(GBM)中的表达水平及其与DNA甲基化水平和患者预后的关系。方法共纳入3组GBM样本[美国癌症基因组图谱(TCGA)数据库(35例)、基因表达综合(GEO)数据库中GSE22891队列(50例)、中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库(105例)]及非肿瘤对照脑组织(NTB)(TCGA数据库10例、GSE22891队列6例、CGGA数据库5例用于基因表达水平比较,GSE63347队列25例、GSE22891队列4例以及CGGA数据库8例用于甲基化数据比较)。利用公共数据库中GBM基因表达芯片和DNA甲基化芯片数据,通过GBM与NTB间BST2基因表达水平比较、生存分析、生物信息学分析等,获得BST2基因在GBM中的表达状态以及其与非CpG岛DNA甲基化、GBM分子亚型[CpG岛甲基化表型(G-CIMP),非G-CIMP的前神经元型、神经元型、经典型和间质型]、患者总生存(OS)时间以及功能基因表达谱之间的关系。结果与NTB样本比较,BST2 mRNA在GBM中呈高表达状态(mRNA表达数据采用Z-score标准化)(TCGA数据库比GSE63347队列:-0.97±1.14比-2.32±0.21,t=3.74,P<0.05;GSE22891队列:9.03±1.28比7.18±0.22,t=3.42,P<0.05;CGGA数据库:-0.43±1.11比-0.62±0.35,t=2.09,P<0.05)。TCGA数据库中,BST2 mRNA在不同肿瘤分子亚型中均高表达(G-CIMP为-1.96±0.94,非G-CIMP的前神经元型为-1.74±0.88,神经元型为-0.83±0.98,经典型为-0.71±1.18,间质型为-0.55±1.01),与NTB样本(-2.32±0.21)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);BST2 mRNA在神经元型、经典型及间质型肿瘤之间表达差异均无统计学意义(均P>0.05),但均高于G-CIMP和非G-CIMP的前神经元型(均P<0.05)。BST2非CpG岛DNA甲基化水平与其mRNA表达负相关(TCGA数据库:r=-0.30,P<0.05;GSE22891队列:r=-0.54,P<0.05;CGGA数据库:r=-0.29,P>0.05)。生存分析表明,非G-CIMP且非前神经元型患者的BST2 mRNA表达水平与OS呈负相关(HR=1.18,95%CI 1.00~1.39,P<0.05),而在G-CIMP及前神经元型的亚组中,BST2 mRNA表达与患者OS无相关性(HR=1.08,95%CI 0.84~1.40,P>0.05)。生物信息学分析表明,在TCGA数据库非G-CIMP且非前神经元型的样本中,高表达BST2的GBM样本显著富集于与免疫反应负性调控和核因子κB(NF-κB)通路激活相关的功能基因簇。结论BST2基因在GBM中表达上调,可能与非CpG岛DNA低甲基化改变有关;该基因可能成为评估非G-CIMP且非前神经元型GBM亚型临床预后的潜在生物标志物。

BST2敲除的MDCK细胞构建及H9亚型禽流感病毒增殖效果的观察

为提高细胞培养系统中禽流感病毒的增殖效率,通过构建缺失BST2编码序列的MDCK细胞系,探索BST2对H9亚型禽流感病毒在细胞系中增殖的影响。利用CRISPR/Cas9系统对MDCK细胞BST2主要功能区域进行基因编辑,获得MDCK-BST2-KO单细胞克隆,并检测细胞的增殖能力。通过慢病毒表达转染获得BST2表达细胞系,检测接毒后不同细胞系的BST2蛋白表达情况,并比较病毒的增殖情况。结果表明,利用CRISPR/Cas9系统成功获得MDCK-BST2-KO单细胞克隆,该细胞克隆生长能力与母细胞无差异但增毒能力增强,且BST2蛋白抑制H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞中的增殖。

miR-1290在乳腺癌组织中表达及对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的观察miR-1290在乳腺癌组织中表达情况,探讨其对乳腺癌细胞增殖、凋亡及骨髓基质抗原2(stromal antigen 2,STAG2)表达的影响。方法取120例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-1290相对表达量。对数生长期MCF-7细胞,随机分为对照组、模拟物对照组、模拟物组、抑制物对照组和抑制物组,对照组加入含LipofectamineTM 2000的完全培养液,模拟物对照组、模拟物组、抑制物对照组和抑制物组分别转染miR-1290模拟物阴性对照、miR-1290模拟物、miR-1290抑制物阴性对照和miR-1290抑制物。采用CCK-8法检测细胞相对活力,采用TUNEL法检测细胞凋亡率,采用Western blot法检测细胞STAG2蛋白相对表达量。结果乳腺癌组织miR-1290相对表达量(3.84±0.76)高于癌旁组织(1.06±0.18)(P<0.05)。模拟物组细胞miR-1290相对表达量(4.83±0.25)和细胞相对活力[(124.71±2.74)%]高于对照组[2.67±0.16、(100.00±1.15)%]和模拟物对照组[2.72±0.18、(101.32±2.18)%](P<0.05),细胞凋亡率[(3.25±0.48)%]和STAG2蛋白相对表达量(0.58±0.04)低于对照组[(6.72±0.74)%、0.74±0.08]和模拟物对照组[(7.04±0.69)%、0.72±0.06](P<0.05);抑制物组细胞miR-1290相对表达量(1.31±0.12)和细胞相对活力[(78.82±2.02)%]低于对照组和抑制物对照组[2.59±0.17、(98.65±1.83)%](P<0.05),细胞凋亡率[(34.17±1.16)%]和STAG2蛋白相对表达量(1.12±0.07)高于对照组和抑制物对照组[(6.69±0.67)%、0.81±0.05](P<0.05)。结论miR-1290在乳腺癌组织中表达上调,可能通过调控STAG2的表达促进乳腺癌细胞增殖,抑制细胞凋亡。