细胞外基质纤维连接蛋白和层粘连蛋白在糖尿病大鼠视网膜微血管病变表达的研究

目的 探讨细胞外基质纤维连接蛋白 (FN )、层粘连蛋白 (LN )与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。 方法 雄性Wistar大鼠 3 0只 ,随机分为糖尿病模型组 (DR组 ,n =2 0 )及正常对照组 (对照组 ,n =10 )。DR组大鼠腹腔注射链脲佐菌素 (STZ) 60mg/kg ,制备DR微血管病变模型。180d时处死大鼠 ,取外周血作血液流变学检查 ,眼球用 3 %胰酶消化 ,制成视网膜血管铺片 ,进行FN、LN免疫组织化学染色 ,并采用LEICA—Q550IW计算机图像分析系统定量分析FN、LN在视网膜微血管中的表达及分布。观察DR的形态学改变 ,计数内皮细胞与周细胞的比例。 结果 图像分析显示 :DR组FN、LN含量表达与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 0 1)。形态学观察 :DR组视网膜微血管周细胞减少、内皮细胞增生与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 0 1) ,毛细血管瘤、无细胞毛细血管形成 ,并有较多的白细胞栓塞血管腔。血液流变学检查 :血黏度、红细胞变形能力等改变与正常对照组比较差异均有显著意义 (P <0 0 5或 0 0 1)。 结论 细胞外基质中FN、LN的过度表达 ,介导细胞与细胞及细胞与间质之间相互作用 ,促进视网膜微血管内皮细胞增生、毛细血管瘤形成 ,并导致毛细血管闭锁、基底膜增厚等病理改变 。

角膜基底膜调控基质纤维化研究进展

基底膜是高度特化的细胞外基质,其形成是正常组织发育和功能正常的先决条件。基底膜是角膜的重要组成结构。角膜含有上皮基底膜及后弹力层2种基底膜。角膜损伤后基底膜主要通过层黏连蛋白、Ⅳ型胶原、巢蛋白和基底膜蛋白多糖相互作用组装再生。角膜损伤修复中,角膜基底膜不完全再生或延迟再生可使角膜基质纤维化,而基底膜的再生和功能重建可使角膜基质重塑,部分或完全恢复其透明性。角膜上皮和内皮的愈合、创面规则性、基质细胞残存量均影响角膜基底膜结构和功能重建。本文就角膜基底膜的成分及其功能、角膜基底膜与角膜基质纤维化的关系、损伤修复中角膜基底膜协同调节角膜基质纤维化及其再生的影响因素进行综述。

IGF-1R抑制剂通过调控自噬抑制碱烧伤小鼠角膜基质纤维化

目的:探究胰岛素样生长因子1-受体(IGF-1R)在碱烧伤小鼠角膜组织的表达情况,以及IGF-1抑制剂(PPP)对小鼠角膜基质纤维化的影响和作用机制。方法:81只C57BL/6J小鼠随机分为对照(Control)组、碱烧伤(AB)组、碱烧伤+溶剂组(DSMO)和碱烧伤+IGF-1R抑制剂组(PPP)。除Control组外,其余三组建立碱烧伤模型。自造模前1 d,PPP组给予2 mol/L PPP滴眼,DMSO组给予相同剂量溶剂,处理14 d。PCR和免疫蛋白印迹检测碱烧伤小鼠角膜组织中IGF-1R的mRNA和蛋白水平。裂隙灯显微镜观察IGF-1R抑制剂干预处理后小鼠角膜混浊情况,HE染色观察角膜组织病理损伤,PCR、Western Blot和免疫荧光染色检测角膜组织α-SMA和LC3mRNA和蛋白表达水平。结果:碱烧伤造模后14 d,与Control组相比,AB组IGF-1R蛋白和mRNA表达量增加;与DMSO组相比,PPP组角膜混浊和组织病理损伤减轻,α-SMA蛋白和mRNA表达水平降低,LC3蛋白和mRNA表达水平增加。结论:抑制IGF-1R可能通过促进自噬,抑制角膜基质纤维化,进而减轻碱烧伤小鼠角膜损伤。

多沙唑嗪对抗α_1受体抗体介导的糖尿病大鼠肾基质纤维化的影响

目的建立具有激动样活性的抗α1肾上腺素能受体自身抗体(anti-αadrenergic receptor autoantibody,α1-AA)的糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠模型,并观察该抗体对大鼠血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿蛋白(urine protein,Upro)、肾脏结构及Ⅳ型胶原、Smad2/3蛋白等表达及多沙唑嗪干预后的影响。方法用α1肾上腺素受体胞外第二肽段合成肽,于0、4、8、12、16周行鼠尾静脉注射法对DM大鼠进行α1-AA免疫介导(α1-AA注射量为100μg·100g-1),酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测α1-AA阳性率;电镜下观察肾脏的病理变化,免疫组织化学法检测大鼠肾脏组织中Ⅳ型胶原、Smad2/3蛋白分布及表达情况,并观察用受体阻断剂干预后受体阳性组大鼠的Scr、Upro、肾脏结构及Ⅳ型胶原、Smad2/3蛋白的表达情况。结果 1DM+α1-AA介导组阳性率91.7%(22/24),明显高于无介导组的27.30%及健康对照组的10.0%,差异具有统计学意义(P<0.01)。2DM+α1-AA介导组大鼠Scr和24 h Upro明显高于无介导组及健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。与无多沙唑嗪干预组相比,多沙唑嗪干预组中大鼠Scr和24 h Upro明显改善,差异具有统计学意义(P<0.01)。3电镜下观察肾脏病变发现DM+α1-AA介导组大鼠肾组织损伤最严重,DM无介导组损害不明显,DM+α1-AA介导组中干预组较无干预组病变明显减轻。4半定量分析大鼠肾组织Ⅳ型胶原、Smad2/3蛋表达结果显示,DM+α1-AA介导组MOD值显著高于无介导组(P<0.05)和健康对照组(P<0.01),DM+α1-AA介导组中干预组的上述表达明显减轻,与无干预组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论通过免疫介导的方法可以建立具有激动样活性的α1-AA的大鼠模型;并证实抗α1-AA介导可致DM大鼠肾基质重构,免疫介导参与DM肾损害病理生理过程,受体拮抗剂可改善和逆转肾损害。

人成纤维样基质细胞系对HL-60细胞增殖和VEGF表达的影响

为了观察正常人骨髓成纤维样细胞系 (HFCL)对白血病细胞系HL 60细胞增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响 ,用免疫组织化学对HFCL细胞进行组织学鉴定 ;建立HL 60细胞和HFCL细胞共培养体系 ,台盼蓝拒染法测定生长曲线 ;HE染色和瑞 姬姆萨染色后进行分裂指数 (MI)测定 ;流式细胞术检测细胞周期的变化 ;Westernblot检测增殖细胞核抗原 (PCNA)表达 ;ELISA双抗体夹心法检测HL 60细胞表达VEGF水平。结果发现 ,与HFCL细胞共培养后HL 60细胞生长受抑 ,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用大于用跨室共培养组 ,其分裂指数表现为单独HL 60细胞组大于用跨室共培养组 ,更大于与HFCL细胞直接接触组。同时发现HL 60细胞与HFCL细胞共培养后G1期细胞增多 ,S期细胞减少 ,且PCNA表达下调 ,以直接接触组为甚。HL 60细胞与HFCL细胞共培养后 ,培养上清的VEGF水平减低 ,直接接触组和跨室共培养组下降程度一样 ,而与HL 60细胞共培养 ,HFCL细胞增殖无明显变化。结论 :正常人骨髓成纤维样细胞能抑制白血病细胞系HL 60的增殖 ,抑制细胞周期 。

环六亚甲基双乙酰胺诱导人肝癌SMMC-7721细胞分化过程中核基质-中间纤维系统的构型变化

目的:研究环六亚甲基双乙酰胺(HMBA)诱导人肝癌SMMC-7721细胞分化过程中细胞核基质-中间纤维系统的构型变化。方法:应用选择性抽提整装光镜与电镜技术观察SMMC-7721细胞诱导前后其核基质-中间纤维系统的构型特征。结果:对照组SMMC-7721细胞中,核基质纤维与中间纤维具有数量较少、单丝纤维较少、分布不均匀、排列无序、核纤层较厚、与两类纤维联系不紧密等特点,其核区域内可见一至数个由少量纤维维系着的残余核仁;而在经HMBA诱导处理后的分化细胞中,两类纤维不仅数量增多、层次丰富、分布更为均匀、单丝成份增多,而且核纤层更加致密,呈现薄层均一结构并与两类纤维发生更为紧密的联系,形成较为规则的纤维网架体系,其残余核仁由更加丰富且呈放射状排列的纤维所维系。结论:HMBA诱导体外培养人肝癌SMMC-7721细胞分化过程中的核基质-中间纤维系统的构型发生了明显的变化,这种变化是癌细胞恶性表型逆转的重要形态和功能表现。

基质金属蛋白酶-2和纤维粘连蛋白mRNA表达与乳腺癌转移相关性的探讨

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)mRNA表达量与乳腺癌转移的关系。方法:采用荧光定量RT-PCR方法检测30例乳腺原发癌和配对淋巴结转移癌的MMP-2和FNmRNA表达量,分析MMP-2和FNmRNA表达量与乳腺癌转移的关系。结果:30例淋巴结转移癌的MMP-2和FNmRNA表达量低于原发癌,组间比较差异有显著性(P<0.05)。MMP-2和FNmRNA表达量呈线性分布,但线性回归和双变量线性相关分析表明两个基因的mRNA表达量无相关性(P<0.05)。结论:MMP-2和FNmRNA表达量在转移癌较原发癌下调。

兔纤维环干细胞与猪脱细胞纤维环基质的生物相容性

背景:脱细胞纤维环基质和纤维环干细胞均来源于纤维环组织,二者复合构建的组织工程复合物可能具有更好的生物相容性。目的:将兔的纤维环干细胞和猪的脱细胞纤维环基质进行体外共培养,观察细胞在脱细胞基质支架上的生长状态。方法:制备猪脱细胞纤维环基质,通过扫描电镜和DAPI染色观察材料制备效果,傅里叶红外光谱仪鉴定基质的成分;分离和培养兔纤维环干细胞,将第1代纤维环干细胞种植于脱细胞纤维环基质表面,行细胞骨架染色,倒置免疫荧光显微镜和扫描电镜下观察细胞形态,并绘制细胞生长曲线。结果与结论:制备成的猪脱细胞纤维环基质呈白色半透明状,扫描电镜下为纤维网状结构,DAPI染色显示无细胞残留,红外光谱分析显示脱细胞纤维环基质主要成分是胶原蛋白。细胞在支架材料上生长第1,3,7天的细胞骨架染色显示细胞很好的黏附于支架表面,生长状态良好,表明脱细胞纤维环基质有着良好的生物相容性,纤维环干细胞在其表面生长良好。

脱细胞纤维环基质对兔纤维环源干细胞分化的影响

目的观察脱细胞纤维环基质(DAFM)对纤维环源干细胞(AFSC)分化行为的影响,为新型纤维环组织工程支架材料的开发提供依据。方法将从新西兰大白兔获得的AFSC接种于由猪纤维环组织制备的DAFM膜和无DAFM膜培养皿,分别进行成脂、成骨、成软骨分化诱导,考察DAFM对AFSC分化行为的影响。结果 AFSC在DAFM膜上生长良好。DAFM膜上AFSC成脂、成软骨诱导分化水平低于无DAFM膜者,而成骨诱导分化水平显著高于无DAFM膜者;DAFM膜上的成脂、成骨及成软骨诱导比值(诱导组基因表达量/对照组基因表达量)均高于无DAFM膜者。结论猪DAFM有利于促进兔AFSC成骨分化,抑制其成脂及成软骨分化,较好地维持AFSC的差异性分化潜能。

纤维蛋白凝胶基质材料用于组织工程修复兔关节软骨缺损与Ⅰ型胶原凝胶和混合凝胶性能特征的比较

目的:观察纤维蛋白凝胶、Ⅰ型胶原凝胶、混合凝胶3种不同生物型细胞外基质用于组织工程修复兔关节软骨缺损形态学及性能特征比较。方法:实验于2002-01/2003-12在哈尔滨医科大学附属二院实验中心进行。6月龄日本大耳白兔48只。①人工软骨制备:传代培养兔骨髓基质干细胞,与纤维蛋白原凝胶、Ⅰ型胶原凝胶、纤维蛋白-Ⅰ型胶原混合凝胶混合制成3种人工软骨。②模型制备与动物分组:兔麻醉后取膝关节外侧切口,显露髌股关节面,作直径4.5mm,深3mm转孔获得关节软骨缺损模型。48只兔分为4组,每组12只。纤维蛋白凝胶组,缺损区充填骨髓基质细胞纤维蛋白凝胶;Ⅰ型胶原凝胶组,充填骨髓基质细胞Ⅰ型胶原凝胶;混合凝胶组,充填骨髓基质细胞纤维蛋白-Ⅰ型胶原混合凝胶;空白对照组,不充填材料。术后各组动物膝关节不予外固定,自由活动。③标本观察:分别于4,8,12周每组取3只(6侧膝关节)麻醉后处死,行膝关节大体观察,选择损伤区股骨干切片作苯胺蓝、苏木精-伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色采用光学显微镜观察,并按改良的Seller评分(0分为正常关节,分数越高表示关节退行性变越严重)进行量化评分。结果:①各组兔膝关节4周及12周时大体形态学观察:4周时:纤维蛋白凝胶组、混合凝胶组为淡粉色半透明的软骨样结构,Ⅰ型胶原凝胶组、空白对照组多数缺损区仍呈暗红色,表面不规则。12周时:纤维蛋白凝胶组、混合凝胶组修复组织与周围软骨平滑过渡高度一致、光泽度较正常软骨略差;Ⅰ型胶原凝胶组、空白对照组修复区多数不平整,中央凹陷且存在龟裂。②各组兔股骨组织切片观察结果:纤维蛋白原凝胶、混合凝胶组各时间点组织化学染色均显著优于Ⅰ型胶原凝胶组和空白对照组;纤维蛋白原凝胶、混合凝胶组无显著差异。③组织切片的Seller评分结果:纤维蛋白凝胶组、混合凝胶组在8,12周均显著低于Ⅰ型胶原凝胶组与空白对照组犤8周:(19.7,20.5)分比(27.0,25.1)分,P<0.05;12周:(7.4,9.1)分比(18.2,20.0)分,P<0.05犦。结论:纤维蛋白凝胶作为支架材料修复缺损软骨,材料成分接近透明软骨,优于Ⅰ型胶原,与纤维蛋白Ⅰ型胶原混合物无显著差异,可作为理想的细胞外基质用于组织工程修复关节软骨缺损。

正常人骨髓成纤维样基质细胞对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖的影响

为了观察正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL对多发性骨髓瘤细胞系RPMI82 2 6增殖的影响 ,建立了RPMI82 2 6细胞和HFCL细胞共培养体系 ,用MTT法测粘附率 ,台盼蓝拒染法测定生长曲线 ;流式细胞术 (FCM )检测细胞周期的变化 ,瑞氏 吉姆萨染色后进行分裂指数 (MI)测定 ,Westernblot检测增殖细胞核抗原 (PCNA)表达。结果显示 ,与HFCL细胞共培养 1小时后 ,RPMI82 2 6细胞的粘附率为 2 9.4 % ;生长曲线显示直接接触组RPMI82 2 6细胞生长受抑 ,而非直接接触组 (transwell组 )无变化 ;RPMI82 2 6细胞与HFCL细胞共培养后 ,直接接触组G1期细胞增高 ,S期细胞减少 ;其分裂指数表现为单独骨髓瘤细胞组大于与HFCL直接接触组 ;直接接触组PCNA表达下调。结论 :正常人骨髓成纤维样基质细胞HFCL能抑制骨髓瘤细胞系RPMI82 2 6的增殖 ,阻止其细胞周期的运行。

正常人骨髓成纤维样基质细胞对HL-60/VCR耐药细胞增殖的影响

目的 观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对白血病多药耐药细胞HL-60／VCR增殖和分化的影响。方法 采用四唑氮蓝(MTT)法进行HL-60／VCR细胞药物敏感实验。建立HL-60／VCR细胞和HFCL细胞共培养体系,苔盼蓝拒染法测定生长曲线;硝基四氮唑蓝(NBT)确定细胞分化;流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14、CD33细胞表面抗原进一步鉴定细胞分化;Western blot检测增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)和P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)。结果 HL-60／VCR细胞对多种药物耐药。与HFCL细胞共培养后,HL-60／VCR细胞生长受抑,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用>用transwell组。同时发现HL-60／VCR细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增多,S期细胞减少;同时CD11b和CD14表达增高,CD13和CD33变化不大;且NBT阳性细胞轻度增多。Western blot检测结果显示,PCNA表达下调,以直接接触组为甚。但是P-gp表达无变化。结论 正常人骨髓成纤维样细胞HFCL能抑制白血病MDR细胞HL-60／VCR的增殖,抑制PCNA的表达,出现G1期阻滞,并部分向单核细胞分化。

重组人骨形成蛋白-2对正常人骨髓成纤维样基质细胞的影响

目的:研究重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)对正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL的影响。方法:Western Blot检测HFCL细胞PCNA表达的改变,并用软件对Western Blot结果进行密度扫描,计算量的变化。瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态变化和计算细胞核分裂像指数。流式细胞仪检测细胞周期及CD11b、CD14细胞表面抗原进一步鉴定细胞分化。结果:经过rhBMP-2作用24h后,HFCL细胞PCNA表达下降,经灰度扫描下降幅度为0.65倍;瑞氏-吉姆萨染色后发现细胞核分裂像减少,分裂指数下降,但细胞形态没有变化;HFCL细胞S期中的细胞数量减少,G1期数量增多,出现G1期阻滞;rhBMP-2作用没有使HFCL细胞向髓系或单核方向分化的趋势。结论:rhBMP-2可抑制HFCL细胞的增殖,但对HFCL细胞向髓系或单核方向分化影响不大。

聚硅酸硫酸铝对超轻质植物纤维基材料阻燃性能的影响

以有机混合物(废纸板纤维、聚乙烯醇和聚丙烯酰胺)和无机聚硅酸硫酸铝(PASS)为原料,通过有机--无机杂化,利用液体发泡方法制备出超轻植物纤维基材料。为了研究PASS对超轻植物纤维基材料阻燃性能的影响,首先对PASS的热稳定性、样品燃烧前后的微观形貌以及PASS在纤维管胞内外的厚度进行观察和测量,然后采用锥形量热仪对样品的阻燃性能进行测试。结果表明:PASS具有好的耐高温性能;与有机混合物杂化后具有很好的成膜性,能在纤维表面形成热稳定性涂层;管胞内、外层膜的平均厚度分别为0.182和0.667μm;PASS与氯化石蜡的协效作用显著降低了样品燃烧过程的热释放与质量损失。因此,这种有机--无机杂化可显著提高超轻植物纤维基材料的阻燃性能。

以国产微晶纤维素膜作固体基质五种多环芳烃的室温磷光法研究

本文考察了10种国产纤维素膜用于多环芳烃固体基质室温磷光(SS-RTP)的可行性。实验表明:MN-C和MN-P两种型号的微晶纤维素膜用于多环芳烃的SS-RTP是适宜的。阴离子交换纤维素膜、CM-纤维素膜和聚酰胺-6膜也能诱导出多环芳烃的RTP来,但其性能逊于前两种。故本文应用MN-C和MN-P两种微晶纤维素膜基质考察了五种多环芳烃的RTP特征,并建立了它们的SS-RTP新方法。并与用滤纸作基质的实验结果进行了比较,表明两种新的固体基质的RTP性能优于滤纸基质。

人巩膜成纤维细胞体外三维胶原基质培养系统的构建及其生物力学特性

背景眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一，建立合理的人巩膜成纤维细胞（HSFs）培养体系模型有助于进一步探讨HSFs在高度近视形成过程中与胶原基质相互作用的生物学机制。 目的构建HSFs与Ⅰ型胶原的三维培养系统，微观模拟在体巩膜，建立巩膜重塑模型。 方法采集新鲜供体巩膜组织，采用组织块培养法分离和培养HSFs，采用免疫荧光技术检测细胞中波形蛋白和角蛋白的表达以鉴定细胞；获取8周龄SPF级雄性SD大鼠鼠尾腱制备鼠尾胶原，400 μl胶原加入50 μl NaOH（0.1 mol/L）溶液中混匀，加入80 μl 10倍培养液，混匀，溶液pH值约为7。加入1 100 μl终浓度1×106/ml细胞悬液混合形成凝胶培养系统，于倒置相差显微镜下观察HSFs的增生情况和细胞形态，采用IPP-5软件对三维培养的含细胞胶原收缩面积进行测量以分析三维胶原系统的物理特性；采用生物力学试验机对三维胶原系统的生物力学特性进行测定。 结果培养的HSFs波形蛋白呈阳性表达，角蛋白表达阴性。未接种培养细胞的无成纤维细胞SD鼠鼠尾胶原凝胶透明，实验期间性状无明显变化，而含HSFs的三维胶原凝胶随着细胞培养时间的延长细胞数量增加，倒置相差显微镜下可观察到数十层成纤维细胞相互交错呈网状排列，培养后7～14 d凝胶块呈乳白色，凝胶面积保持在正常的10%左右，三维培养系统中的HSFs接种后24 h细胞产生多向性突起，呈双极形或纺锤形。HSFs胶原凝胶复合物的弹性材料蠕变曲线呈非线性（0～100 s）部分与线性（100～600 s）部分，前者是胶原凝胶在短暂应力的作用下本身的弹性变化，后者是胶原凝胶在定力的作用下随拉伸时间的延长而出现的蠕变变化。 结论鼠胶原凝胶对培养的HSFs有良好的生物相容性，HSFs胶原凝胶可形成三维复合物，可呈现机械性生物学特性，是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型，可用于巩膜重塑的模拟研究。

丹参酮ⅡA对人角膜基质细胞纤维化的抑制作用

目的研究丹参酮ⅡA (tanshinoneⅡA,TSN)对转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人角膜基质细胞(human keratocyte,HK)纤维化的作用,探索该药物是否具有防治角膜瘢痕的潜能。方法采用胰蛋白酶消化培养HK,并传代至4-7代用于实验。通过TGF-β1诱导建立HK纤维化模型,并分别用5.0μg·L^(-1)TGF-β1和不同浓度的TSN联合给药方法对HK进行处理。采用Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)与Vimentin的表达,qPCR检测纤连蛋白(fibronectin,FN)和I型胶原(collgen I,COL I) mRNA的表达;利用细胞免疫荧光染色观察HK细胞形态的改变氉。结果 5.0μg·L^(-1)TGF-β1可以显著上调α-SMA与Vimentin蛋白的表达和胞外基质成分FN mRNA(2.238±0.227)、COL I mRNA(3.554±0.526)的表达。2.5μmol·L^(-1)和5.0μmol·L^(-1)TSN均能抑制α-SMA蛋白的表达和FN mRNA(0.619±0.017、0.263±0. 006)、COL I mRNA(0.631±0.011、0.275±0.081)的表达。5.0μg·L^(-1)TGF-β1诱导组HK形态呈长梭形,具有两极,细胞呈极性分布; 5.0μmol·L^(-1)TSN联合5.0μg·L^(-1)TGF-β1培养HK形态同原始细胞形态,细胞呈三角形或星形。结论 TSN可抑制TGF-β1诱导的HK纤维化,具有抗角膜瘢痕的潜力。

结膜基质环境对杯状细胞分化调控作用的研究

目的探索结膜基质纤维细胞对结膜上皮杯状细胞分化的调控作用。方法将实验研究对象分为A、B两组,A组为兔结膜上皮细胞与兔基质纤维细胞共培养组:即先在培养皿内培养兔结膜基质组织块1周,此时可见组织块周围生长直径约1cm的基质纤维细胞,然后在距该细胞2～3cm位置培养兔结膜上皮组织块,二者在同一培养皿内共培养1周;B组为单纯结膜上皮细胞培养组:即仅在培养皿内培养兔结膜上皮组织块1周。应用光学倒置相差显微镜观察两组结膜上皮细胞分泌泡的形态,通过免疫组化技术对比两组PAS及Muc5AC染色阳性细胞的数量及分布,并对两组Muc5AC阳性细胞数进行统计学分析及对比。结果培养1周后,A组见大量顶浆分泌的杯状细胞,PAS及Muc5AC染色阳性细胞数A组均明显高于B组,A组Muc5AC染色阳性细胞数量平均为(26.40±4.78)个,B组平均为(15.00±4.31)个,两组相比差异有显著统计学意义(P<0.001)。结论结膜基质纤维细胞具有促进结膜上皮杯状细胞分化和分泌的作用。

结直肠癌肝转移患者TACE治疗后含表皮生长因子的纤维蛋白样细胞外基质2水平及意义

目的分析结直肠癌肝转移患者外周血单个核细胞中含表皮生长因子的纤维蛋白样细胞外基质2(EGF containing fibulin-like extracellular matrix protein 2,EFEMP2)水平与TACE治疗疗效的关系。方法选择2015年3月至2017年7月在海安市中医院接受治疗的152例结直肠癌肝转移患者作为研究对象。用Ficoll密度梯度分离法分离外周血中单个核细胞;用蛋白质印迹法检测单个核细胞中EFEMP2表达水平。分析EFEMP2表达水平与TACE治疗疗效的关系。结果生存组和死亡组EFEMP2水平均随时间进展呈升高趋势。生存组不同时间节点时EFEMP2水平均高于死亡组,差异均有统计学意义(P<0.05)。高EFEMP2组中位生存时间高于低EFEMP2组,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析结果显示靶向治疗和T3-EFEMP2均是结直肠癌肝转移患者3年生存预后的独立保护因素(P<0.05)。限制性立方样条拟合Cox回归分析结果显示T3-EFEMP2与结直肠癌肝转移患者3年生存预后呈非线性关系(P<0.05)。结论直肠癌肝转移患者外周血单个核细胞中EFEMP2水平与TACE治疗疗效有关,其水平低提示TACE治疗临床获益较小。

成纤维母细胞样基质细胞促进假体周围骨溶解

目的探讨松动假体周围的假膜组织中成纤维母细胞样基质细胞在假体周围骨溶解中的作用。方法从人工假体周围的假膜标本中分离成纤维母细胞样基质细胞并作体外培养,传代后与外周血单核细胞共培养,并向各组内分别加入骨水泥颗粒和破骨细胞形成抑制因子(OPG)等,检测是否有破骨细胞形成及其活性;并采用半定量RT-PCR法检测成纤维母细胞样基质细胞中核因子κB受体活化因子配基(RANKL)和OPG等破骨细胞调节因子mRNA表达量的变化。结果细胞共培养结束时观察到抗酒石酸磷酸酶(TRAP)和玻璃蛋白酶受体(VNR)阳性的多核细胞及骨吸收陷窝形成,这一过程可被OPG彻底阻断;骨水泥颗粒组骨吸收陷窝的数量较对照组增加。同时基质细胞表达RANKL和OPGmRNA,骨水泥颗粒组的表达量较对照组分别增加,并且RANKL/OPG的比率增大。结论人工假体周围假膜中成纤维母细胞样基质细胞表达膜蛋白型及可溶性RANKL,支持破骨细胞分化及其骨吸收活性,从而促进假体周围骨溶解。