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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速检测生菜中嗜麦芽窄食单胞菌
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作者 魏超 代晓航 +3 位作者 张涛 杨强 李辉 刘文娟 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第23期303-309,共7页
目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)在即食果蔬中微生物风险监测的应用价值,确定生菜中的危害微生物及蛋白指纹图谱特征。方法对... 目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)在即食果蔬中微生物风险监测的应用价值,确定生菜中的危害微生物及蛋白指纹图谱特征。方法对成都地区50份生菜样品进行微生物的检测,对分离的嗜麦芽窄食单胞菌进行生化鉴定和MALDI-TOF MS鉴定,采用维恩分析(包括小于0.85‰偏差)对生菜中分离的嗜麦芽窄食单胞菌指纹图谱进行拟合,采用系统聚类法对分离的嗜麦芽窄食单胞菌指纹图谱进行聚类分析。结果50份生菜样品中检出11株嗜麦芽窄食单胞菌,MALDI-TOF MS获得其蛋白图谱拟合出特征性标识峰指纹图16组,与数据库中超级谱图比对有9组不同标识峰,为生菜分离菌特征峰;蛋白指纹图谱聚类结果表明嗜麦芽窄食单胞指纹图谱有一定来源指向性,但仍需更多数据修正。结论嗜麦芽窄食单胞菌在生菜中检出率较高,可作为危害风险特征微生物继续研究,MALDI-TOF MS可获得更多农产品中致病微生物特征信息,作为农产品危害识别微生物快速鉴定及差异性分析应更深入的研究和扩大数据量,并建立农产品微生物数据库系统。 展开更多
关键词 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 生菜 嗜麦芽窄食单胞菌 特征指纹图谱
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运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术分析分枝杆菌液体培养管污染菌菌群特征
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作者 蓝吉慧 唐柳生 +2 位作者 黄葵 刘爱梅 董捷 《新发传染病电子杂志》 2024年第2期7-10,共4页
目的了解分枝杆菌液体培养时产生的污染菌菌群特征,分析产生污染的原因,寻找降低污染的方法。方法收集广西壮族自治区胸科医院2023年5月10日至8月25日送检的痰液和肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)标本进行分枝杆菌液体培... 目的了解分枝杆菌液体培养时产生的污染菌菌群特征,分析产生污染的原因,寻找降低污染的方法。方法收集广西壮族自治区胸科医院2023年5月10日至8月25日送检的痰液和肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)标本进行分枝杆菌液体培养,运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术对分枝杆菌液体培养后产生的污染菌进行鉴定,将鉴定出的菌种进行统计归类,分析污染菌的菌群特征。结果6090份呼吸道标本中分枝杆菌阳性标本864份,培养阳性率14.19%(864/6090),污染标本71份,污染率为1.17%(71/6090)。71份污染标本中共分离出74株污染菌,主要菌属为芽孢杆菌和曲霉菌,分别占31.08%(23/74)和24.32%(18/74)。其中灌洗液标本1429份,培养出分枝杆菌阳性标本279份,培养阳性率19.52%(279/1429),污染13株,污染率0.91%(13/1429);痰标本4661份培养出分枝杆菌585株,培养阳性率12.55%(585/4661),污染标本58份,污染率1.24%(58/4661);两种标本培养的阳性率比较,差异有统计学意义(χ^(2)=43.68,P<0.05),污染率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=1.06,P>0.05)。结论分枝杆菌液体培养时产生的污染菌菌群复杂,以芽孢杆菌、曲霉菌为主,因此,必须规范标本的采集和运送,采用有效的前处理方法,以达到降低液体培养污染率的目的。 展开更多
关键词 污染菌 分枝杆菌 辅助激光解吸电离飞行时间质谱
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪微生物鉴定准确度快速评价参考品的研制 被引量:1
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作者 许庭莹 赵高岭 +3 位作者 刘美丽 刘东来 张园园 许四宏 《中国医药生物技术》 2024年第4期362-366,共5页
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOF MS)技术,简称飞行质谱技术,可在短时间内完成对微生物种属水平的鉴定[1]。基本原理是使用已知菌种的蛋白... 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOF MS)技术,简称飞行质谱技术,可在短时间内完成对微生物种属水平的鉴定[1]。基本原理是使用已知菌种的蛋白质图谱建立数据库,利用不同菌种核糖体蛋白(2~20 kD)大小的差异,将未知样本的检测图谱与数据库中的微生物参考图谱进行比对,鉴定结果[2-3]。与传统的微生物表型和生理生化检测方法相比,质谱鉴定的分子量范围大、扫描速度快、操作通量高,且对样品纯度要求不高[4]。除了可鉴定常见细菌和真菌,对临床厌氧菌、苛养菌、丝状真菌以及分枝杆菌等疑难微生物和相对复杂样品的鉴定能力也更强,同时对耐药微生物的鉴定准确性相对较好[5]。 展开更多
关键词 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 微生物鉴定 参考品 苛养菌 分枝杆菌 蛋白图谱 分子量范围 快速评价
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)在食品药品中微生物检测的应用进展
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作者 刘音 《中文科技期刊数据库(全文版)自然科学》 2024年第7期0135-0137,共3页
MALDI-TOFMS是一种微生物鉴定和分型的技术,它相较于传统方法展现出了显著的优势。通过分析国内外的研究现状,指出MALDI-TOFMS在临床病原微生物、食源性微生物及环境微生物的鉴定中具有较大优势。该技术不仅加快了微生物鉴定的进程,还... MALDI-TOFMS是一种微生物鉴定和分型的技术,它相较于传统方法展现出了显著的优势。通过分析国内外的研究现状,指出MALDI-TOFMS在临床病原微生物、食源性微生物及环境微生物的鉴定中具有较大优势。该技术不仅加快了微生物鉴定的进程,还提高了鉴定的效率和准确性,有助于更迅速地确定微生物感染的病因。此外,还探讨了MALDI-TOFMS在新领域的应用进展和所面临的挑战,展望了其在微生物学领域的广泛应用前景,为我国相关技术的发展提供了重要参考。 展开更多
关键词 微生物 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 鉴定
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在食源性致病菌鉴定中的应用 被引量:1
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作者 任婷 史敏 +2 位作者 刘聪慧 黄一刚 裴金金 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第5期62-68,共7页
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)作为近年来发展的新型食源性致病菌鉴定技术,具有灵敏、准确、检测速度快等优点,该技术为食品病原微... 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)作为近年来发展的新型食源性致病菌鉴定技术,具有灵敏、准确、检测速度快等优点,该技术为食品病原微生物靶标性监测和食品安全事件应急检验提供了一种高效的鉴别技术参考,在保障民众生命健康和经济社会发展上发挥了重要作用。本文检索了近年来国内外MALDI-TOF MS技术在食源性致病菌检测中的相关研究案例,简要综述了MALDI-TOF MS检测原理、工作流程,影响鉴定结果的主要因素,介绍了MALDI-TOF MS技术应用于食源性致病菌检测中的实际案例,在此基础上分别从参考菌株数据库建设、标准化程序规范等方面对MALDI-TOF MS技术在食源性致病菌检测领域的未来研究方向进行展望,以期为后续食品安全检测及快速监管食源性致病菌污染提供技术支持。 展开更多
关键词 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 食源性致病菌 鉴定
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半夏炮制过程中毒性凝集素蛋白的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析
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作者 黄益曼 李春晖 +5 位作者 柏家辉 陆颖洁 李添 董志颖 苏越 郭寅龙 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第2期226-236,共11页
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)受灵敏度和重复性的影响,对完整蛋白的定量分析存在困难。本研究采用纤维素纳米晶体(CNC)辅助MALDI-TOF MS,结合内标法定量分析半夏炮制过程中半夏凝集素(PTL),通过优化CNC辅助样本制备... 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)受灵敏度和重复性的影响,对完整蛋白的定量分析存在困难。本研究采用纤维素纳米晶体(CNC)辅助MALDI-TOF MS,结合内标法定量分析半夏炮制过程中半夏凝集素(PTL),通过优化CNC辅助样本制备的时长和比例,以麦胚凝集素(TVL)为内标,直接分析不同炮制程度半夏各炮制品及其浸泡上清液中PTL含量。结果表明,CNC辅助MALDI样本制备有效提升了MALDI-TOF MS定量分析的线性和重复性。随着炮制时间的延长,姜半夏、清半夏和法半夏炮制品的PTL含量逐渐下降,浸泡上清液中PTL含量逐渐上升。其中,由于pH值的改变,法半夏炮制品浸泡上清液中PTL含量呈先上升后下降的趋势。此外,将该方法应用于不同饮片生产企业的多批次半夏炮制品饮片中,均未检出PTL。该方法操作简便,可有效分析半夏炮制过程中PTL含量的变化,为研究半夏炮制过程对PTL的影响提供了参考。 展开更多
关键词 半夏 炮制方法 半夏凝集素(PTL) 纤维素纳米晶体(CNC) 辅助激光解吸电离飞行时间质谱(maldi-tof MS)
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基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法快速测定米饭和乳制品中蜡样芽孢杆菌呕吐毒素Cereulide
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作者 曾羲 王宇 +3 位作者 徐巨才 黄穗东 王涓 徐振林 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第1期232-238,共7页
建立基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)法分析蜡样芽孢杆菌呕吐毒素Cereulide的快速检测方法。分析了Cereulide标准物质的裂解规律,考... 建立基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)法分析蜡样芽孢杆菌呕吐毒素Cereulide的快速检测方法。分析了Cereulide标准物质的裂解规律,考察基质种类、点靶方式、基质溶剂和用量、激光强度等对Cereulide的质谱信号强度的影响,并进行方法学验证和实际样品检测。结果表明,选择以α-氰基-4-羟基肉桂酸为基质,均匀分散在50%乙腈-水(含0.1%三氟乙酸)中,采用先点基质再点样品的点样方式,反射线性正离子模式下选择激光强度70%进行食品中MALDI-TOF MS筛查时,可检测到Cereulide的[M+Na]^(+)和[M+K]^(+)目标离子峰,此质谱信号稳定、强度高、响应重复性好。方法学验证结果表明,Cereulide的[M+Na]^(+)和[M+K]^(+)目标离子峰在5~100 ng/mL范围内线性好,相关系数(r)>0.99;方法的检出限分别为3.0 ng/g和5.0 ng/g;对米饭和牛乳样品的加标回收率为73.3%~118.2%,相对标准偏差为0.3%~10.9%(n=6)。本方法分析速度快、准确性高、灵敏度好、抗干扰能力强、无需内标即可实现对米饭和乳制品中Cereulide的批量筛查和检测。 展开更多
关键词 辅助激光解吸-电离飞行时间质谱 蜡样芽孢杆菌 呕吐毒素 α-氰-4-羟肉桂酸
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基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法测定α/β-二羰基类化合物与标准瓜氨酸化肽段之间的衍生化反应活性
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作者 李雁凤 周丹丹 +7 位作者 陈旭飞 赵娟娟 高春丽 邱兴泰 唐紫超 邓楠 赵伟宁 边阳阳 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期711-720,共10页
蛋白质瓜氨酸化是一种由生物酶调控的不可逆翻译后修饰,其与免疫相关疾病、癌症、神经系统性疾病和老年痴呆症等重大疾病的发生和发展密切相关。蛋白质的瓜氨酸化修饰丰度低、缺乏亲和标签、m/z变化小且易受同位素及脱酰胺化作用干扰,... 蛋白质瓜氨酸化是一种由生物酶调控的不可逆翻译后修饰,其与免疫相关疾病、癌症、神经系统性疾病和老年痴呆症等重大疾病的发生和发展密切相关。蛋白质的瓜氨酸化修饰丰度低、缺乏亲和标签、m/z变化小且易受同位素及脱酰胺化作用干扰,因此对蛋白质的瓜氨酸化修饰进行质谱分析面临着巨大挑战。通过对瓜氨酸侧链脲基进行化学衍生反应,可以提高瓜氨酸化肽段的m/z差值,引入亲和富集标签,可有效提高瓜氨酸化分析的灵敏度和精准度。本研究以标准瓜氨酸化肽段为研究对象,以基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)为检测手段,对一系列二羰基类化合物与瓜氨酸化肽段之间的化学反应活性进行测定。在对α-二羰基类化合物的考察中发现,苯乙二醛、丙酮醛、1,2-环己二酮和1,10-邻二氮杂菲-5,6-二酮对瓜氨酸化肽段的衍生化效率很高,并且能够生成单一的衍生化产物;2,3-丁二酮、乙二醛与瓜氨酸化肽段之间的反应效率也很高,但会生成一系列副反应产物。在对β-二羰基类化合物的考察中发现,1,3-环己二酮、2,4-戊二酮在与瓜氨酸化肽段进行反应后,均可以产生单一的衍生化产物,但反应效率很低,不适用于瓜氨酸化肽段的化学衍生反应。实验结果表明,α-二羰基结构是实现高效、特异性瓜氨酸化肽段化学衍生反应的基础,α-二羰基类化合物中不同的侧链结构又决定了衍生化产物的结构、衍生化效率及副产物的生成。通过进一步合成含有亲和标签的α-二羰基类化合物,可以实现瓜氨酸化肽段的特异性富集和精准鉴定,有助于瓜氨酸化蛋白质及其位点鉴定的新方法开发。 展开更多
关键词 辅助激光解吸电离-飞行时间质谱 二羰结构 瓜氨酸化肽段 化学衍生
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱自建库鉴定临床常见致病丝状真菌的研究
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作者 张璐 赵蓉芬 +4 位作者 孙艳霞 Sde Hoog Jos Houbraken 邓淑文 张虹 《广西医科大学学报》 CAS 2024年第4期500-507,共8页
目的:评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术鉴定临床常见致病丝状真菌的准确性。方法:采用AUTOF MS1000质谱系统,在原有商业参考库的基础上,增补构建自建数据库,采用125株临床分离菌株对自建库进行验证。结果:自建... 目的:评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术鉴定临床常见致病丝状真菌的准确性。方法:采用AUTOF MS1000质谱系统,在原有商业参考库的基础上,增补构建自建数据库,采用125株临床分离菌株对自建库进行验证。结果:自建库新增菌株包括:皮肤癣菌3个属15种菌种,共76株;曲霉属30个菌种,共75株。以已有商业数据库加自建数据库为比对标准,125株临床分离菌株属水平鉴定率100%,种水平鉴定率达80.8%;以分子鉴定结果为金标准,正确鉴定率94.1%。其中,69株皮肤癣菌的种水平鉴定率为79.7%,正确鉴定率92.7%;56株曲霉菌种水平鉴定率为82.1%,正确鉴定率95.6%;错误鉴定6株,集中在须癣毛癣菌复合体(T.mentagrophytes series)菌种趾间毛癣菌/须癣毛癣菌/昆可努发癣菌(T.interdigitale/T.mentagrophytes/T.quinckeanum)交叉识别及Sect.Nigri中黑曲霉(A.niger)与塔宾曲霉(A.tubingensis)交叉识别。结论:通过补充完善自建库可提高MALDI-TOF MS鉴定丝状真菌的准确率;同时,参考数据库及时扩展和更新,以确保MALDI-TOF MS准确鉴定真菌菌种的能力。 展开更多
关键词 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 自建库 皮肤癣菌 曲霉
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在流感嗜血杆菌鉴定中的应用
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作者 张雪英 叶慧 《实用检验医师杂志》 2024年第3期270-273,共4页
目的分析基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOP MS)在流感嗜血杆菌鉴定中的应用。方法收集2022年1—12月南京艾迪康医学检验所有限公司实验室接收的1300份呼吸道感染患者的痰液或咽拭子样本培养和分离的嗜血杆菌,经16SrDNA序列... 目的分析基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOP MS)在流感嗜血杆菌鉴定中的应用。方法收集2022年1—12月南京艾迪康医学检验所有限公司实验室接收的1300份呼吸道感染患者的痰液或咽拭子样本培养和分离的嗜血杆菌,经16SrDNA序列测定检出50株为流感嗜血杆菌;分别使用MALDI-TOP MS检测系统、Analytic Products INC(API)生化细菌鉴定系统以及纸片法卫星试验对流感嗜血杆菌进行鉴定,比较并分析3种方法对流感嗜血杆菌的检出率、检测时间、检测成本及读取方式。结果MALDI-TOP MS检测系统对流感嗜血杆菌的检出率为98.0%,API生化细菌鉴定系统的检出率为90.0%,纸片法卫星试验的检出率为74.0%。MALDI-TOP MS对流感嗜血杆菌的检出率明显高于纸片法卫星试验,差异有统计学意义(P<0.05),而与API生化细菌鉴定系统比较检出率差异无统计学意义(P>0.05)。MALDI-TOP MS检测所用时间为5~10 min,API生化细菌鉴定检测所用时间为4~24 h,纸片法卫星试验检测所用时间为24~48 h。采用MALDI-TOP MS鉴定流感嗜血杆菌的成本更低,传统API生化细菌鉴定方法价格昂贵,而纸片法卫星试验操作比较繁琐。结论MALDI-TOP MS检测系统对流感嗜血杆菌鉴定的准确率较高,鉴定周期较短,成本较低,且使用方便,在临床上对流感嗜血杆菌的检出具有重要价值。 展开更多
关键词 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 流感嗜血杆菌 Analytic Products INC生化细菌鉴定系统 纸片法卫星试验
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测药物代谢酶基因多态性平台的建立 被引量:17
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作者 叶阿里 张海燕 +3 位作者 窦亚玲 孔令君 张睿 张晓峰 《现代检验医学杂志》 CAS 2016年第5期30-33,共4页
目的:建立基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测患者体内药物代谢酶基因多态性的平台。方法选取2013年10月~2014年6月在北京协和医院门诊就诊患者53例 EDTA抗凝外周血,提取全血基因组DNA,用 MALDI-TOF-MS... 目的:建立基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测患者体内药物代谢酶基因多态性的平台。方法选取2013年10月~2014年6月在北京协和医院门诊就诊患者53例 EDTA抗凝外周血,提取全血基因组DNA,用 MALDI-TOF-MS技术检测53例患者药物代谢酶基因 CYP2C9*2(rs1799853),CYP2C9*3(rs1057910), CYP2C19*2(rs4244285),CYP2C19*3(rs4986893),CYP2C19*4(rs28399504),CYP2C19*5(rs56337013)和 CYP2C19*17(rs12248560)的单核苷酸多态性(SNP)位点,并用 Sanger测序法进行验证。结果用 MALDI-TOF-MS 技术可以同时完成53份样本,2个药物代谢酶基因,7个 SNP位点的检测。53例患者中,发现CYP2C19*2(rs4244285)AG型25例, AA型6例,GG型22例,A等位基因频率为34.9%。CYP2C19*3(rs4986893)AG型4例,GG型49例,A等位基因频率为3.8%。CYP2C9*3(rs1057910)CA型5例,AA型48例,C等位基因频率为4.7%。未发现 CYP2C9*2(rs1799853), CYP2C19*4(rs28399504),CYP2C19*5(rs56337013)和CYP2C19*17(rs12248560)位点突变。经与 Sanger测序法比较,两种检测方法结果的符合率为100%。结论成功建立 MALDI-TOF-MS技术检测药物代谢酶基因多态性的平台,该平台具有高通量、准确的特点,对个性化用药治疗具有重要的临床应用价值。 展开更多
关键词 药物代谢酶 辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术 单核苷酸多态性
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MALDI Sepsityper^(TM) Kit和血清分离胶促凝管法两种前处理方法在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术直接鉴定阳性血培养病原菌的应用评估 被引量:11
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作者 秦娟秀 黄芊 +3 位作者 高倩倩 谢乙慧 李敏 张灏旻 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期546-551,共6页
目的比较MALDI Sepsityper^(TM) Kit和血清分离胶促凝管法两种前处理方法在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术直接鉴定血培养阳性病... 目的比较MALDI Sepsityper^(TM) Kit和血清分离胶促凝管法两种前处理方法在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术直接鉴定血培养阳性病原菌的有效性。方法收集上海交通大学医学院附属仁济医院2016年4-6月血培养仪报警的非重复血培养瓶138个,以传统培养鉴定的方法为金标准,同时采用以上两种前处理方法处理阳性标本,再进行MALDI-TOF MS鉴定。结果本次共收集非重复的血培养阳性标本138份,排除6个假阳性血瓶,鉴定出的病原菌包括革兰阴性菌70株(53.03%)、革兰阳性菌57株(43.18%)、真菌3株和2例复数菌。MALDI Sepsityper^(TM)Kit和血清分离胶促凝管法两种前处理方法的血培养快速鉴定病原菌准确率分别为91.67%和84.09%,种鉴定准确率分别为83.33%和61.36%。两种前处理方法处理后,革兰阴性菌的准确率分别为98.57%和95.71%,革兰阳性菌的准确率分别为87.72%和78.59%,两者鉴定所需时间为40 min/样本和25 min/样本。结论虽然MALDI Sepsityper^(TM)Kit比血清分离胶促凝管法鉴定准确率稍高但两者差异无统计学意义(91.67%对84.09%,P>0.05),与MALDI Sepsityper^(TM) Kit相比,血清分离胶促凝管法是一种快速、易获得、低廉的MALDI-TOF MS直接鉴定血培养病原菌的前处理方法。 展开更多
关键词 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 MALDI Sepsityper^TM KIT 血清分离胶促凝管法 血培养 病原菌
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析技术在微生物检测与鉴定中的应用 被引量:20
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作者 杜美红 赵瑞雪 李静雯 《食品安全质量检测学报》 CAS 2017年第2期457-461,共5页
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)在微生物检测与鉴定中有着广泛的应用前景。本文着重介绍了MALDI-TOF MS分析技术微生物检测原理... 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)在微生物检测与鉴定中有着广泛的应用前景。本文着重介绍了MALDI-TOF MS分析技术微生物检测原理、前处理技术及其在微生物检测、鉴定、分型、溯源分析中的应用。与传统的检测鉴定方法相比,MALDI-TOF MS分析技术表现出成本低、检测时间短、易于操作等显著的技术优势。随着微生物质谱数据库以及分析方法的逐渐完善,该技术将成为微生物实验室致病菌快速检测鉴定的重要分析手段。 展开更多
关键词 辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术 微生物检测 微生物分型鉴定 微生物溯源
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应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测载脂蛋白E基因多态性 被引量:4
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作者 欧雪玲 赵方 +2 位作者 许传超 伍新尧 区敬华 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期564-567,共4页
【目的】应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测人类载脂蛋白E(apoE)基因的多态性。【方法】用PCR扩增出含apoE两个单核苷酸多态性(SNPs)位点(334T/C和472C/T)的DNA片段作为模板,经延伸反应,产物纯化后利用MALDI-TOFMS进行检测... 【目的】应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测人类载脂蛋白E(apoE)基因的多态性。【方法】用PCR扩增出含apoE两个单核苷酸多态性(SNPs)位点(334T/C和472C/T)的DNA片段作为模板,经延伸反应,产物纯化后利用MALDI-TOFMS进行检测。从而确定样本apoE基因型。【结果】应用本技术对50例广东地区无关个体进行apoE基因多态性检测,共检出3种常见的apoE基因型,其中以apoEΣ3/3型最多,占总数的74.00%;等位基因频率分布以ε3(87.00%)最高。【结论】本实验建立的基于MALDI-TOFMS与引物延伸技术检测apoE基因多态性的方法,具有快速、准确和可靠的特点。 展开更多
关键词 APOE 载脂蛋白E因多态性 MS 常见 检出 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 单核苷酸多态性 maldi-tof DNA片段 SNP
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术研究人血清转铁蛋白稳定性及裂解产物 被引量:5
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作者 卓慧钦 金宏伟 +2 位作者 黄河清 黄慧英 蔡宗苇 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第6期791-796,共6页
制备质谱纯人血清转铁蛋白(HTF),供分子结构分析。选用SDS-PAGE、胶外酶解、基质辅助激光解吸/电离质谱技术(MALDI-TOF)、数据库检索和比对技术鉴定铁饱和HTF、双铁HTF(HTF-2Fe3+)、单铁HTF(HTF-Fe3+)和脱铁HTF(apoHTF)的稳定性和裂解... 制备质谱纯人血清转铁蛋白(HTF),供分子结构分析。选用SDS-PAGE、胶外酶解、基质辅助激光解吸/电离质谱技术(MALDI-TOF)、数据库检索和比对技术鉴定铁饱和HTF、双铁HTF(HTF-2Fe3+)、单铁HTF(HTF-Fe3+)和脱铁HTF(apoHTF)的稳定性和裂解产物。以乙腈溶液作为洗脱相,发现铁饱和HTF在RP-HPLC分离纯化过程中产生裂解现象。铁饱和HTF和HTF-2Fe3+经乙腈处理后均能产生不同分子量的短肽裂解产物,指出HTF结构稳定性与络合铁离子数量有关。铁组分改善了HTF分子结构的稳定性。采用比对法,研究在乙腈作用下HTF裂解成为各种各样短肽的规律,初步阐明其裂解机理。在乙腈作用下,HTF可能通过蛋白质去折叠途径,形成不同多聚态HTF或多肽裂解产物。推测目前用于临床诊断先天性糖基化紊乱(CDG)和慢性酒精滥用(CAA)疾病低准确率的起因可能是受HTF裂解产物或多聚体的干扰。 展开更多
关键词 血清转铁蛋白 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 胶内酶解 反相高效液相色谱 标志蛋白
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在新生儿β-地中海贫血筛查中的应用 被引量:6
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作者 黄盛文 许吟 +2 位作者 吴娴 周曼 刘兴梅 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2015年第5期341-343,共3页
目的建立基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术的β-地中海贫血(β-地贫)基因突变检测方法,探讨其在新生儿β-地贫筛查中的临床价值。方法收集新生儿脐血DNA样本515例,针对中国人群中常见的10种β-地贫基因突变类型... 目的建立基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术的β-地中海贫血(β-地贫)基因突变检测方法,探讨其在新生儿β-地贫筛查中的临床价值。方法收集新生儿脐血DNA样本515例,针对中国人群中常见的10种β-地贫基因突变类型,分别设计一套PCR引物和延伸反应引物。待测样本经PCR和延伸反应后,所得产物用Sequenom Mass Array飞行时间质谱仪进行检测,根据质谱图中的峰值确定每份样本的基因型,并用反向点杂交进行验证。结果 515份样本10个突变位点的总判读成功率为99.55%,检测结果与反向点杂交结果完全一致;共检出β-地贫14例,均为突变杂合子,阳性检出率为2.72%;其中,基因型CD41-42/N 6例,CD17/N 5例,IVS-Ⅱ-654/N 2例,CD71-72/N 1例。结论 MALDI-TOF MS技术准确性高,检测时间短,通量高,适用于新生儿β-地贫筛查。 展开更多
关键词 Β-地中海贫血 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 引物延伸 新生儿筛查
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术分析三七和海兔神经连索内的皂甙组分 被引量:4
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作者 冯丽剑 黄琳 +1 位作者 卓慧钦 黄河清 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1727-1732,共6页
基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱技术能高效解吸三七提取液(Panaxnotoginseng Extraction,PNE)中的混合皂甙分子为皂甙离子,并供质量分析器检测与分析。选用MALDI-TOF质谱技术直接分析色谱纯皂甙样品的纯度,其检测灵敏度... 基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱技术能高效解吸三七提取液(Panaxnotoginseng Extraction,PNE)中的混合皂甙分子为皂甙离子,并供质量分析器检测与分析。选用MALDI-TOF质谱技术直接分析色谱纯皂甙样品的纯度,其检测灵敏度优于反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。优化提取中药三七(Panax notoginseng,PN)的混合皂甙,选用MALDI-TOF质谱技术直接分析PNE中的皂甙种类和相对含量,发现PNE至少含有20种不同分子结构的皂甙组分,其中人参皂甙(Ginsenoside)Rg1和三七皂甙(Notoginsen-oside)R1含量相对较高。选用薄板层析法(TLC)制备PNE中的R1皂甙。MALDI-TOF质谱技术研究蓝斑背肛海兔(Notarcus leachiicirrosus Stimpson,NLCS)神经连索内的超微量R1的组成与分布。建立PNE皂甙的指纹图谱,并适合于评价中药三七的品质和分析体内超微量皂甙的代谢过程与机理。 展开更多
关键词 三七 皂甙 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 指纹图谱
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奈达铂耐药食管鳞癌患者血清双向电泳联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术的蛋白筛选 被引量:3
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作者 马俊 顾勇 +2 位作者 鲁建军 缪蓉 罗红鹤 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1825-1827,共3页
目的探讨奈达铂耐药食管鳞癌患者及奈达铂敏感患者的血清蛋白表达谱的差异性及食管鳞癌奈达铂耐药的相关血清蛋白。方法采用固相p H梯度双向凝胶电泳分离奈达铂敏感及奈达铂耐药患者的血清蛋白样本共40例,建立双向凝胶电泳(2-DE)图谱,... 目的探讨奈达铂耐药食管鳞癌患者及奈达铂敏感患者的血清蛋白表达谱的差异性及食管鳞癌奈达铂耐药的相关血清蛋白。方法采用固相p H梯度双向凝胶电泳分离奈达铂敏感及奈达铂耐药患者的血清蛋白样本共40例,建立双向凝胶电泳(2-DE)图谱,再应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术及数据库鉴定部分差异蛋白质。结果采用2-DE技术成功获得分辨率高和重复性好的蛋白表达图谱,凝胶图像软件分析后获得差异≥1.5倍以上的蛋白质共68个,经质谱分析鉴定出8种蛋白,其中表达增高的有谷胱甘肽转硫酶(GST)P1、乳酸脱氢酶(LDH)-B、Sox-2、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)-1和基质金属蛋白酶(MMP)-7,表达降低的有E-钙黏蛋白(E-cadherin)、激活素结合蛋白(FS)和磷酸甘油酸激酶(PGK)1。结论应用2-DE技术分离奈达铂耐药食管鳞癌患者及奈达铂敏感患者的血清蛋白表达谱,并通过MALDITOF-MS技术鉴定出与食管鳞癌奈达铂耐药相关的蛋白,为食管鳞癌耐药相关标志物的筛选提供了新的技术方法及候选分子。 展开更多
关键词 双向凝胶电泳 辅助激光解吸电离飞行时间质谱 食管鳞癌 耐药 奈达铂
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对分枝杆菌液体培养系统菌种鉴定的临床研究 被引量:7
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作者 杜岩青 秦中华 张丽霞 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期871-877,共7页
目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养出的阳性培养物进行高通量、快速、准确的菌种鉴定,为... 目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养出的阳性培养物进行高通量、快速、准确的菌种鉴定,为临床早期、精准治疗提供病原学依据。方法选取我院Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960分枝杆菌快速液体培养的阳性培养物为研究对象,通过不同的孵育时间、不同大小的研磨珠处理、不同的破壁方式摸索出MALDI-TOF MS对Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960阳性培养物鉴定的"最优处理方法",并将所有结果与基因芯片法菌种鉴定做参照进行比对,鉴定不一致的结果通过基因测序确认。结果Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养报阳性后增加孵育时间可提高检出率及鉴定分值,同时使用0.5 mm的氧化锆珠研磨,使用超声震荡混匀处理,鉴定效果最佳。鉴定结果方面,液体系统报阳的420份阳性标本,基因芯片法鉴定结果为结核分枝杆菌占69.05%(290/420),非结核菌占28.81%(121/420),9例未鉴定出,未鉴定占2.14%(9/420),错误鉴定占0.95%(4/420),总鉴定率为97.86%(411/420);采用MALDI-TOF MS质谱鉴定420份阳性标本中鉴定出419例,其中结核分枝杆菌占69.05%(290/420),非结核占30.00%(126/420),星型奴卡菌0.48%(2/420),巴西奴卡菌占0.24%(1/420),1例未鉴定出,总鉴定率为99.76%。质谱鉴定分值≥2.0的400例占95.24%,分值在1.7~2.0的19例占4.52%,分值<1.7的1例占0.24%。结论本实验实现了Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养阳性培养物的直接质谱鉴定,缩短了培养鉴定的时间,将分枝杆菌鉴定到种水平,能区分出结核菌与非结核菌,同时也能将与分枝杆菌相似的奴卡菌鉴定出来,对临床疾病的鉴别诊断起到了积极的作用。 展开更多
关键词 Bactec^(TM)MGIT^(TM)960液体培养 辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术 结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测华法林代谢酶基因多态性 被引量:3
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作者 郭俊 李小燕 +4 位作者 蔡伦 张魁 董然 王绿娅 杜杰 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期410-413,共4页
目的用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术建立检测人群中华法林代谢酶基因多态性的方法。方法选取2011年1月至2013年1月北京安贞医院心脏外科心脏机械瓣膜置换术后接受华法林抗凝治疗的患者10例,采集外周血,提取全血... 目的用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术建立检测人群中华法林代谢酶基因多态性的方法。方法选取2011年1月至2013年1月北京安贞医院心脏外科心脏机械瓣膜置换术后接受华法林抗凝治疗的患者10例,采集外周血,提取全血基因组DNA,用MALDI-TOF-MS技术检测10例患者华法林代谢酶基因CYP2C9*2(rs1799853)、CYP2C9*3(rs1057910)、CYP2C9*6(rs9332131)、VKORC1 C>T(rs9923231)(-1639G>A)、GGCX G>C(rs11676382)的单核苷酸多态性(SNP)位点,并用Sanger测序法进行验证。结果用MALDI-TOF-MS技术可以同时完成10份标本3个华法林代谢酶基因5个SNP位点的检测。10名服华法林的心脏机械瓣膜置换术患者中,发现VKORC1-1639G>A AG型2例,AA型8例,A等位基因频率为90%。未发现CYP2C9*2(rs1799853)、CYP2C9*3(rs1057910)、CYP2C9*6(rs9332131)和GGCX G>C(rs11676382)突变。经与Sanger测序法比较,符合率为100%。结论成功建立MALDI-TOF-MS技术检测华法林代谢酶基因多态性的平台,该法具有高通量、快速、准确的特点,在个性化医疗上有较大的推广应用价值。 展开更多
关键词 心脏机械瓣膜置换术 华法林 辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术 单核苷酸多态性
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