基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法测定干制米粉中霉菌和酵母菌

目的建立基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法快速测定干制米粉中霉菌、酵母菌的分析方法。方法采用GB 4789.15—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》对实验室2021年至2022年所抽检干制米粉进行霉菌、酵母菌检测并分析,得到10株野生菌株,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定。结果经统计,实验室2021年至2022年所抽检干制米粉存在真菌污染,其中霉菌、酵母菌总检出率约为45.45%。通过MALDI-TOF MS鉴定,10株野生菌株里,霉菌占80%,酵母菌占20%。结论MALDI-TOF MS作为一种快速、灵敏、准确、高通量的微生物鉴定技术,实现了对干制米粉中霉菌酵母菌的特异性快速鉴定,能够为干制米粉中霉菌酵母菌的检测提供科学依据。

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法溯源分析云南省肉制品中金黄色葡萄球菌

目的利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALD1-TOF MS)技术对zj南省肉制品中金黄色葡萄球菌进行溯源。方法通过MALDI-TOF MS,主成分分析及聚类分析等方法,对来源于云南省肉制品的88株金黄色葡萄球菌,包括耐苯唑西林或敏感金黄色葡萄球菌株(MRSA/MSSA)的进行溯源研究。结果86株金黄色葡萄球菌可鉴定到种的水平,2株可鉴定到属的水平。用MALD丨-TOF M S鉴定金黄色葡萄球菌与生化和血清学方法的分型高度相关,聚类分析表明,88株菌株在距离水平为500的情况下被划分为4个类型,其中5型同数据库中来自欧美的9株标准菌株亲缘关系最近。88株金黄色葡萄球菌中来源相同地区的菌株MALDI-TOF M S肽指纹图谱相似性较好,相同类别来源或地区来源的金黄色葡萄球菌菌体蛋白表达更为相似,MRSA和MSSA菌株MALDI-TOF M S肽指纹图谱未观察到显著差异。结论MALDI-TOF M S是一种快速、高敏感、高通量、高精度的金黄色葡萄球菌鉴定技术,具有良好的可追溯性。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法分析天然牦牛酸奶中的德氏乳杆菌

目的探索基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)在牦牛酸奶中德氏乳杆菌检测中的应用。方法采用MALDI-TOF MS对分离自天然牦牛酸奶中的德氏乳杆菌进行分析研究。针对10株分离自牦牛酸奶经16S rDNA鉴定的德氏乳杆菌进行质谱分析,根据乳酸菌的特异性特征,设计6种微生物破碎方法和5种微生物蛋白质抽提方法进行正交组合实验,在同一质谱条件下采用加权计算及均方根误差分析的获得变异较低稳定性高的处理方法。在最佳处理组合下采用SARAMIS Premium对德氏乳杆菌进行相关分析。结果实验结果表明在液氮、超声、甲酸处理下德氏乳杆菌在基质解析电离中可产生稳定且丰富的蛋白质峰组,且相关分析较离散,但实验结果可为菌种差异性分析提供理论帮助。结论 MALDI-TOFMS对天然牦牛酸奶中德氏乳杆菌特征性分析具有较强应用价值。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法对金桔表面细菌的筛查

目的采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法对金桔表面细菌进行筛查,初步掌握金桔表面细菌分布情况,为金桔的食用安全提供科学依据。方法以4种常见食源性致病菌(沙门氏菌、阪崎肠杆菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌)为目标菌,同时分离未知菌,通过基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法进行鉴定。结果共从17个样品中分离到12种细菌,分别为产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、肺炎克雷伯菌、腐生葡萄球菌、木糖葡萄球菌、大肠埃希氏菌、生癌肠杆菌、解鸟氨酸拉乌尔菌、阪崎肠杆菌、分散团菌和恶臭假单胞菌。结论本方法能快速鉴定未知细菌,从金桔上分离到的细菌多数为条件致病菌,存在一定的食用风险。

新型含氟基质在基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法测定全氟磺酸中的应用

基于Witting反应,制备了可用于酸性小分子分析的新型基质1,1-二(3-氟苯基)乙烯(EDF),并通过核磁共振和质谱确认了EDF的结构.首先取适量EDF溶于二氯甲烷中,涡旋振荡5min,配制成1g·L^(-1)的EDF基质溶液;将食品级包装材料汉堡包装纸剪成0.5cm×0.5cm的碎片,取100.00mg在5mL甲醇中室温超声提取2h,过0.22μm滤膜,得到待测样品溶液.然后采用逐层点样的方法,移取0.6μL的EDF基质溶液快速点在不锈钢靶板圆点处,以二氯甲烷为溶剂的EDF基质溶液迅速挥干,因其沸点低以及移取的量少,正好覆盖圆点的范围,再移取0.8μL待测样品溶液点在不锈钢靶板的相同位置,待其自然挥干后,进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)分析,并对比了EDF与常用基质9-氨基吖啶(9-AA)、α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)以及1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)对全氟辛烷磺酸(PFOS)和全氟丁烷磺酸(PFBS)的检测性能.结果表明,EDF可以达到和上述几种常见基质类似的信号强度,且背景更干净、几乎无基质干扰峰.以EDF为基质,以二十一烷酸为内标,建立的PFOS和PFBS标准曲线的线性范围均为20~250μg·L^(-1),检出限(3S/N)均为1μg·L^(-1).按标准加入法对实际包装纸样品进行回收试验,回收率为90.3%~108%,测定值的相对标准误差(n=7)在30%以内.说明该EDF基质检测结果较理想,适用于检测包装材料中的全氟磺酸.

免疫富集联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法测定牛奶、鸡蛋中的沙门氏菌

目的建立免疫富集联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)检测牛奶、鸡蛋中沙门氏菌的方法。方法沙门氏菌经免疫磁珠特异性富集后采用MALDI-TOF MS鉴定,并优化富集过程中的抗体、免疫磁珠添加量以及捕获时间,研究其特异性,并用于实际样品中沙门氏菌的检测。结果富集过程最佳反应条件为:每1 mg磁珠中抗体添加量为250μg,1 mL菌样中免疫磁珠添加量为600μL,捕获时间为30 min,免疫磁珠捕获沙门氏菌具有特异性;用于检测牛奶和鸡蛋中的沙门氏菌时,将浓度为3 CFU/mL的沙门氏菌特异性富集后选择性增菌9h即可被MALDI-TOF MS准确鉴定。结论该方法具有选择性好,特异性高,耗时短,结果准确的优点,为食品中沙门氏菌的检测提供相关参考。

基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法对铜绿假单胞菌的鉴定与聚类分析

目的建立基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法(matrix assisted laser desorption lonization-time offlight mass spectrometery,MALDI-TOF MS)快速鉴定和聚类分析铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)。方法将全自动微生物分析仪鉴定为P.aeruginosa的20株分离株和1株标准菌株(CICC 21636)进行MALDI-TOF MS检测。经离线微生物鉴定软件分析,所有菌株均报告为P.aeruginosa。获取21株P.aeruginosa的特征蛋白质指纹图谱,建立命名为Pseudomonas aeruginosa的自建数据库,并采用P.aeruginosa标准菌株CICC 21636进行验证。结果Pseudomonas aeruginosa自建数据库对P.aeruginosa的鉴定结果较设备自带数据库明显提高。而且自建数据库信息基础上,进一步对21株P.aeruginosa进行聚类分型,实现了对不同来源P.aeruginosa可能污染源的追溯。结论作为一种快速、准确、高通量的全新技术手段,MALDI-TOF MS能够实现对P.aeruginosa的特异性快速鉴定,能满足在公共安全卫生、突发食品安全事件和口岸快速通关方面对P.aeruginosa的快速鉴定需求。

基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法的3种中药材中污染菌的快速鉴定

目的运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrixa ssisted laser analytical ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对9批中药材中相关污染菌进行快速鉴定,考察其微生物污染情况。方法参照2015年版《中国药典》四部,并结合MALDI-TOF-MS对分离出来的菌落进行鉴定。结果甘草、黄芪、党参的lg TAMC(需氧菌总数, total aerobic microbial count)、lg TYMC(霉菌和酵母菌总数, total yeasts and molds count)分别为4.91~7.04、1.0~4.11, lgTB(耐热菌总数, total thermophilic bacteria count)为1.48~2.65,而且经过100℃、30 min热处理后lgTAMC数值下降百分比均在50%以上。鉴定结果中显示污染概率最大的是成团泛菌、简单芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌。结论甘草、黄芪、党参药材中污染的微生物多为成团泛菌和芽孢杆菌,在后期药材加工环节,可以采用有针对性的、有效的处理方法,从而避免由于原药材本身带来的不利影响。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法检测副溶血性弧菌

目的建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)检测副溶血性弧菌的方法。方法从样品预处理方法、分析菌量、培养基、培养时间方面分析各因素对MALDI-TOF-MS方法重复性、鉴定结果准确性的影响。将从市售420份水产品中分离并用全自动微生物鉴定及药敏分析系统生化鉴定为副溶血性弧菌的123株菌株,用MALDI-TOF-MS对其进行鉴定,对比2种方法的鉴定结果。结果采用混合溶液法进行预处理,3%NaCl营养琼脂培养基,36℃培养24 h,分析菌量为8 mg,用MALDI-TOF-MS进行分析所得到的特征峰多、峰型稳定、杂峰少,质谱图的准确性和重复性高、与生化鉴定匹配性好。分离得到的123株副溶血性弧菌鉴定分值大于2.000的达98.4%。结论MALDI-TOF-MS作为一种快速、准确、高效的检测方法,可用于食品中副溶血性弧菌快速检测。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法对环境中芽孢杆菌的鉴定及溯源

目的 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption lionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)对芽孢杆菌进行快速鉴定及聚类分析,研究MALDI-TOF MS对芽孢杆菌溯源的可行性。方法 实验菌株利用甲酸提取法提取蛋白,应用MALDI-TOF MS对22株环境分离菌株和枯草芽孢杆菌标准菌株CGMCC(B)1.1086进行鉴定。采集22株实验菌株的蛋白质指纹图谱,使用SARAMIS软件进行聚类分析。结果 枯草芽孢杆菌标准菌株CGMCC(B)1.1086的鉴定结果可信度为99.9%。22株环境菌均为芽孢杆菌,其中,6株菌鉴定到属水平,16株菌鉴定到种水平。在相似水平为80%的条件下,22株芽孢杆菌分为22个分支。结论 应用MALDI-TOF MS对芽孢杆菌进行快速鉴定与分型,对于芽孢杆菌溯源有重要意义,能够满足环境中芽孢杆菌检测及溯源的需求。

致病菌快速检测管联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法鉴定即食食品中的大肠埃希氏菌O157:H

目的建立基于致病菌快速检测管技术联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)快速、高效、准确鉴定即时食品中大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)O157:H7的方法。方法选取改良胰蛋白胨大豆肉汤(modified tryptone soya broth,mTSB)为初筛培养基,制作出针对即时食品中E.coli O157:H7的致病菌快速检测管,初筛阳性结果采用MALDI-TOF MS技术鉴定。结果5株常见E.coli O157:H7菌株均能特异检出,而其他非E.coli O157:H7均未检出,灵敏度可达51 CFU/mL;通过对人工污染样品和自然样品检测,鉴定结果和GB 4789.36—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》方法完全一致,且检测效率提高了30%。结论两种技术联合应用建立的鉴定即时食品中E.coli O157:H7的新方法,操作简便、成本低廉,适合推广,为快速、准确鉴定即时食品中E.coli O157:H7打开了新思路。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法提取阳澄湖全谱图范围内大闸蟹蛋白条件优化

目的建立最佳的蟹肉组织蛋白分析方案,获得最佳基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)图,为基于MALDI-TOF MS技术的阳澄湖大闸蟹产地鉴别分析建立条件。方法从蛋白提取液、基质液以及基质液与提取液配比3个方面对大闸蟹蛋白提取方案进行优化,从激光强度和聚焦质量2个参数对质谱参数进行优化,最终获得最佳的阳澄湖大闸蟹蛋白提取及质谱分析方案。结果通过观察不同条件下的质谱图,最终选择0.1%三氟乙酸进行蛋白提取,芥子酸作为基质液,样品提取液与基质液的上样体积比例选用1:9。而在质谱参数方面,选择9μJ的激光强度和10000 Da的聚焦质量。结论本研究通过比较不同的蛋白提取方法及不同的质谱采集条件,建立最佳的蟹肉组织蛋白分析方案,获得最佳质谱图,为基于MALDI-TOF MS技术的阳澄湖大闸蟹产地鉴别分析建立了条件。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法在婴幼儿食品蜡样芽胞杆菌检测中的应用

[目的]探讨3种不同检测方法测定婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染情况。[方法]运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)法对婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染情况进行检测,并与国标法、VITEK 2 Compact和实时荧光PCR法进行检测结果比对。[结果]MALDI-TOF MS法与上述3种方法的定性结果一致,且具有准确度高、耗时短、灵敏度高等特点,适用于样品的快速鉴定。[结论]通过研究发现,婴幼儿食品存在蜡样芽胞杆菌污染的风险,应加强对该类产品的监测和监管。

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法鉴定食源性致病菌有效性的Meta分析

目的系统评价基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)检测食源性致病菌有效性.方法使用计算机检索中国期刊全文数据库、万方学术期刊全文数据库等数据库中通过MALDI-TOF MS鉴定食源性致病菌的相关文献.采用Review Manager 5.4软件进行Meta分析.结果MALDI-TOF-MS鉴定的有效性低于食品安全国家标准的传统培养法.结论MALDI-TOF-MS技术具有操作简便、高效的特点,在食品检验中值得推广应用,但仍然需要纳入更多高质量的文献做进一步证实.

基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱结合化学计量学技术筛查原奶掺假研究

目的建立基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF)结合化学计量学的方法快速筛查鲜奶掺假。方法样品经0.1%三氟乙酸水溶液稀释50倍,与10 mg/mL芥子酸溶液等体积混合,取2μL混合液点靶板,待样品干燥后载入基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱,在线性模式下采集数据。通过主成分分析(principal component analysis,PCA)分析不同来源的数据,建立鲜奶蛋白质信息数据库。通过检测掺假样品,结果与数据库进行比较,评估检测方法性能。结果确定了MALDI-TOF蛋白质图谱可作为鲜奶的指纹图谱。建立了一个涉及2个产地和2个季节的鲜奶蛋白质信息数据库。该方法能够检测含有0.3%(m:m)猪皮明胶、大豆分离蛋白或乳清蛋白的掺假样品。方法操作简单快速,从进样到获得结果,一个样品仅需几分钟。结论 MALDI-TOF结合化学计量学方法能够快速检测在0.3%(m:m)浓度下含有猪皮明胶、大豆分离蛋白或乳清蛋白的鲜奶掺假。

霍乱弧菌基质辅助激光解吸飞行时间质谱数据库的建立与应用

目的建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)快速检测霍乱弧菌,并建立数据库。方法考察培养基、培养时间、培养温度以及样品前处理方法对图谱质量和鉴定结果的影响,对方法的稳定性、重复性进行研究;采集101株霍乱弧菌食品分离株MALDI-TOF-MS指纹图谱,并对图谱进行分析。其中标准菌株CICC23794及40株分离株作为建库菌株,其余60株用于建库后的测试。结果采用2%NaCl-TSA培养基,在37℃、24h条件下培养,可达到强峰值信号,谱图重现性良好,甲酸-乙腈提取法获得的质谱图特征峰多,信噪比高;建库后,60株霍乱弧菌均可达到高于2.0的水平,其中约有20株霍乱弧菌鉴定分值可达到2.4以上。结论本研究建立的霍乱弧菌MALDI-TOF-MS鉴定方法结果准确,可用于实际检测。

质谱法测定4种真菌毒素与载体蛋白偶联物的结合比

采用基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOFMS)对由3种真菌毒素伏马菌素B1(FB1)、赭曲霉毒素A(OTA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与两种载体蛋白卵清白蛋白(OVA)、血清白蛋白(BSA)分别偶联制备得到的4种小分子-载体蛋白偶联物FB1-OVA、FB1-BSA、OTA-BSA、DON-OVA的偶联结合比进行测定,并与紫外吸收光谱法进行比较。基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱法测得偶联物FB1-OVA、FB1-BSA、OTA-BSA、DON-OVA的结合比分别为5:1、11:1、3:1、0;紫外吸收光谱法测得OTA-BSA的结合比为4.4:1,DON-OVA的结合比为3.4:1,无法测定FB1-OVA、FB1-BSA结合比。

胃肠间质瘤相关基因表达及突变的研究

目的分析胃肠间质瘤(GISTs)中DOG1、CD117与类胰岛素生长因子1受体(IGF1R)的表达以及c-KIT和PDGFRA基因突变情况,并探讨它们与GISTs临床病理特征的关系及意义。方法免疫组化检测98例GISTs中DOG1、CD117和IGF1R的表达情况及40例非GISTs间叶源性肿瘤中DOG1和CD117的表达情况。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法检测77例GISTs中c-KIT和PDGFRA基因突变情况。结果 GISTs中DOG1、CD117及IGF1R的阳性表达率分别为92.9%、95.9%和6.1%,非GISTs间叶源性肿瘤中DOG1和CD117阳性表达率分别为10.0%和17.5%,两者中DOG1和CD117阳性表达率的差异有统计学意义(P<0.001)。GISTs中DOG1的表达与肿瘤大小及危险度有关,CD117表达与肿瘤部位及组织学类型有关,IGF1R表达与临床病理特征无关。77例GISTs中c-KIT、PDGFRA基因的突变率分别为64.9%和22.1%,两个基因分别以外显子11(54.0%)和外显子12(16.9%)突变最多见。c-KIT、PDGFRA基因突变仅与肿瘤部位有关(P=0.001,P=0.002)。CD117、DOG1的表达与c-KIT和PDGFRA基因是否突变无关,而野生型及突变型(存在c-KIT或PDGFRA基因突变)GISTs中IGF1R表达差异有统计学意义。结论联合检测DOG1、CD117可以提高诊断GISTs的准确性,尤其是CD117表达,两者均与临床病理特征有关。IGF1R可能是野生型GISTs特异性的免疫组化指标和潜在治疗靶点。将肿瘤原发部位与基因突变检测结果相结合,对预测GISTs患者应用酪氨酸激酶抑制剂的疗效以及预后更具指导价值。

发展蛋白质组学为基础的乳腺癌诊断学的探索

在过去的十余年里,多种基因组学和组织学技术加快了新的乳腺癌诊疗模式的发展,对患者进行分子水平诊断和个性化治疗成为今后的发展趋势。与基因组学和组织学技术快速发展相比较,用于指导乳腺癌的筛查和治疗的肿瘤标志物研究进展却微乎其微,尤其是对血清或组织中乳腺癌特异性标志物的检测。该文就基因组学与蛋白质学在乳腺癌分子诊断学应用进展中存在巨大差距的潜在原因,以及改进蛋白质组学研究设计的策略予以综述。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法对金黄色葡萄球菌的鉴定效果

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对金黄色葡萄球菌的鉴定效果。方法按照质谱操作手册,对2016年福建省食品安全风险监测检出的13株金黄色葡萄球菌进行检测,并与数据库中的图谱进行验证和比较。结果对13株葡萄球菌属、血浆凝固酶为阳性的菌株进行质谱鉴定,通过MALDI-TOFMS鉴定软件分析,金黄色葡萄球菌的图谱与数据库中的图谱匹配程度高,鉴定结果均为金黄色葡萄球菌。结论MALDI-TOF-MS技术鉴定结果可信度高,有快速、简便和准确等优点,可实现对金黄色葡萄球菌的快速鉴定。