重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因经角膜基质瓣转染兔角膜基质细胞的实验研究

目的研究重组腺相关病毒(rAAV)介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因经角膜基质瓣转染兔角膜基质细胞的有效性和安全性。方法微型角膜刀制作兔角膜基质瓣;转染组用含rAAV-EGFP转染液浸泡角膜瓣和角膜基质床10min,对照组用等量BSS液浸泡角膜瓣和角膜基质床10min,不同时间点(1,3,7,14,21d)通过荧光体视镜观察角膜出现EGFP荧光的起始时间及分布情况,收集角膜,其中一半用激光共聚焦显微镜观察、照相,另一半固定后行HE染色。结果转染组于转染第3天,体视荧光显微镜下观察到兔眼角膜瓣内面及基质床中开始有GFP阳性表达;7d达到高峰,21d时仍有微弱表达。第7天在激光共聚焦显微镜下可观察到兔角膜基质中有明显的荧光表达,对照组角膜始终未见荧光表达,转染组和对照组角膜HE染色均未见炎症细胞浸润及新生血管等异常。结论rAAV-EGFP经兔角膜基质瓣转染角膜基质细胞的方法可将基因安全、相对高效地转入角膜基质细胞,为转基因治疗角膜病提供了新的转染途径。