脑脊液基质金属蛋白酶9水平和基质金属蛋白酶9/基质金属蛋白酶组织抑制剂1比值与结核性脑膜炎病情严重程度的相关性及对预后的预测价值研究

目的 探讨脑脊液基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平和MMP-9/基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)比值与结核性脑膜炎病情严重程度的相关性及对预后的预测价值。方法 选择2021年1月至2023年2月在湖南省胸科医院住院的结核性脑膜炎患者72例为观察组,以同期住院的非肿瘤非感染性头痛患者52例为对照组。比较2组患者脑脊液MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值。根据改良的英国医学研究理事会结核性脑膜炎分期标准将观察组患者分为Ⅰ期组、Ⅱ期组、Ⅲ期组,比较3组患者MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值。根据预后情况将观察组患者分为预后良好组和预后不良组,比较2组MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值,并以受试者工作特征(ROC)曲线法评估各指标对结核性脑膜炎的预后预测价值。结果 观察组MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值均大于对照组[(96±21)μg/L比(50±12)μg/L、(1.21±0.33)比(0.67±0.15)](均P<0.05),但2组间TIMP-1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同严重程度结核性脑膜炎患者MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值差异均有统计学意义,且均呈Ⅰ期<Ⅱ期<Ⅲ期(均P<0.05);不同严重程度结核性脑膜炎患者TIMP-1水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。相关性分析结果显示,结核性脑膜炎病情严重程度与MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值均呈正相关(r=0.861、P=0.012;r=0.731、P=0.008),与TIMP-1无相关性(r=0.220,P=0.063)。预后不良组患者MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值均高于预后良好组(均P<0.05),2组TIMP-1水平差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,MMP-9水平、MMP-9/TIMP-1比值预测结核性脑膜炎患者预后不良的截断值分别为112.04μg/L、1.41,曲线下面积分别为0.803、0.905(均P<0.05)。结论 结核性脑膜炎患者脑脊液MMP-9水平、MMP-9/TIMP-1比值明显升高,且MMP-9水平、MMP-9/TIMP-1比值与结核性脑膜炎的病情严重程度呈正相关,并可用于预测患者预后。

基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶组织抑制剂1,2在子宫剖宫产疤痕中的表达和相关性

目的研究基质金属蛋白酶9（MMPs-9）和基质金属蛋白酶组织抑制剂1，2（TIMP-1，2）在子宫剖宫产疤痕愈合中的影响。方法收集2009年8月～2011年11月在我院收治的有严重并发症的疤痕子宫妊娠病人22例（子宫刮宫产疤痕早期8例妊娠（CSP）、因胎盘粘连或植人而行子宫切除术的疤痕子宫足月妊娠病例14例）；选择同期孕期检查正常无并发症疤痕子宫足月妊娠病人38例作为对照1组；同期孕期检查正常、无任何并发症因社会因素要求剖宫产的足月妊娠病人32例作为对照2组。采用免疫组织化学EnVision二步法检测3组中MMPs-9和TIMP—1，2的表达，并对其表达进行相关性分析。结果MMPs-9、TIMP-1在3组间的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。TIMP-2在3组间的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。Spearman等级相关分析显示，在疤痕组织中MMPs-9的表达随疤痕愈合不良呈正相关，相关系数分别是0．309、0．643。随着疤痕愈合不良程度加重，MMPs-9的表达逐渐增强，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论子宫疤痕愈合不良、CSP可能和损伤修复中MMPs-9、TIMP—1的表达失衡有关。

贞清方对2型糖尿病大鼠肾组织基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制物-1表达的调节作用

目的探讨中药贞清方(含女贞子、地龙等中药)对2型糖尿病大鼠肾脏结构及肾组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)表达的影响。方法采用高糖高脂饲料喂养加小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射的方法建立2型糖尿病模型。将成模大鼠随机分成模型组,贞清方高、低剂量组,依那普利组,并设立正常对照组,治疗8周。用免疫组化法检测MMP-9、TIMP-1以及纤维连结蛋白(FN)在肾脏的表达,光镜观察肾小球和肾小管形态。结果糖尿病模型组较对照组TIMP-1、FN表达增强,MMP-9表达减弱；治疗组TIMP-1、FN表达较模型组减弱,MMP-9表达增强。其中贞清方高剂量组作用最明显。形态学观察显示治疗组肾小球和肾小管病变比模型组减轻。结论贞清方可能通过影响糖尿病大鼠肾脏MMP-9、TIMP-1的表达而发挥其对糖尿病大鼠肾脏结构的保护作用。

槲皮素抑制小鼠血吸虫病肝组织即早基因和基质金属蛋白酶组织抑制因子1的表达

分别运用槲皮素及吡喹酮治疗小鼠日本血吸虫肝纤维化。槲皮素治疗后小鼠肝纤维化程度减轻,肝组织中即早基因c-fos与c-jun及基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量均明显低于感染对照组;与吡喹酮组相比,c-junmRNA、Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显降低,而c-fosmRNA、TIMP1含量无显著改变,提示其远期抗血吸虫肝纤维化效果优于吡喹酮。

急性心肌梗死合并心室震颤与基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1的相关性

目的探讨急性心肌梗死合并心室震颤（NF）与急性期基质金属蛋白酶（MMP）-9及基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-1表达水平。方法10例急性心肌梗死合并VF患者纳入实验组；同期10例急性心肌梗死未合并VF患者作为对照组。比较两组患者MMP-9与TIMP-1及空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、超敏c反应蛋白水平。结果实验组第1天MMP-9基因表达比对照组高1．7：3倍（1．03—2．96），第3天MMP-9基因表达比对照组高1．54倍（1．09-2．92），第5天MMP-9基因表达比对照组高1．61倍（1．07～3．09）（均P〈0．05）；实验组TIMP-1水平显著高于同时相点对照组TIMP-1水平（P均〈0．05）。同时相点，实验组血清MMP-9与TIMP．1均呈明显正相关（均P〈0．05）。急性心肌梗死合并VF与hs-cae（DR=1．742，95％Cl=1．896～3．467）、收缩压（OR=2．835，95％CI=1．896～3．467）、空腹血糖（OR=1．801，95％Cl：1．436—2．347）均呈正相关（P均〈0．05）。结论急性心肌梗死合并VF与血清MMP-9、TIMP-1水平升高存在关联性，即高水平的MMP-9和TIMP-1预示急性心肌梗死患者发生vF的可能性更高。

社区获得性肺炎患者血清和肺泡灌洗液基质金属蛋白酶-2、-29和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1检测

目的:通过检测社区获得性肺炎(CAP)患者血清和肺泡灌洗液(BALF)的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的水平,探讨它们在CAP发病中的可能机制。方法:60例CAP患者分为2组:重症CAP组20例;普通CAP组40例,其中20例收集BALF,所有患者均收集血清。健康志愿者26例为对照组,收集血清和BALF。用ELISA法检测血清及BALF中MMP-2、MMP-9和TIMP-1的水平,同时进行CAP组患者外周血中性粒细胞计数。结果:①CAP组血清MMP-2、MMP-9和TIMP-1水平均高于对照组(t值分别为4.874、9.961和4.500,P均<0.001)。②CAP组BALFMMP-2和MMP-9水平高于对照组(t值分别为4.513和8.165,P均<0.001),而2组TIMP-1差异无统计学意义(t=1.717,P=0.093)。③重症CAP组血清MMP-2及MMP-9水平高于普通CAP组(t=3.995,P=0.002;t=3.539,P=0.008),而2组的TIMP-1差异无统计学意义(t=0.759,P=0.080)。④CAP组血清MMP-9水平与外周血中性粒细胞计数呈正相关(r=0.855,P<0.001)。结论:MMP-2、MMP-9和TIMP-1参与了CAP的发病过程;血清MMP-2、MMP-9可以作为CAP诊断和判断病情的血清学指标;在CAP中中性粒细胞可能是MMP-9的主要来源。

基质金属蛋白酶1、3,基质金属蛋白酶组织抑制剂1和miR-29在大鼠肺纤维化中及活性维生素D3处理后的表达与作用

目的:探讨大鼠肺纤维化发生发展中基质金属蛋白酶1(MMP1)、MMP3、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)及miR-29的表达和作用以及活性维生素D3[1,25(OH)_2D_3]处理对这些基因表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为预防组和治疗组。预防组分为对照组Ⅰ、模型组Ⅰ和给药组Ⅰ,治疗组分为对照组Ⅱ、模型组Ⅱ和给药组Ⅱ。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ经气管注入博莱霉素,对照组Ⅰ/Ⅱ经气管注入生理盐水。预防组和治疗组分别于术后第2和14天腹腔注射给药,给药组给予活性维生素D3,模型组给予活性维生素D3溶剂,对照组给予生理盐水。预防组的各组分别于术后第14、21、28天处死大鼠取材,治疗组的各组分别于术后第21和28天处死大鼠取材。实时定量PCR检测大鼠肺组织中miR-29a及TIMP1 mRNA表达水平,免疫组织化学检测组织中MMP1、MMP3和TIMP1的表达水平。结果:模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的MMP1、MMP3和TIMP1的表达均明显高于相同时间点对照组Ⅰ/Ⅱ中的表达,而miR-29a的表达明显低于相应的对照组Ⅰ/Ⅱ;给药组Ⅰ/Ⅱ中MMP1、MMP3和TIMP1的表达均低于相应时间点的模型组Ⅰ/Ⅱ的表达,而给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达则高于模型组Ⅰ/Ⅱ中的表达。结论:MMP1、MMP3、TIMP1和miR-29在大鼠肺纤维化发生发展中具有重要作用,活性维生素D3可以促进miR-29表达,抑制MMP1、MMP3、TIMP1的表达;可能是通过miR-29调节包括MMP1、MMP3、TIMP1在内的多种靶基因来发挥抑制纤维化的作用。

实验性脑出血血肿周围脑组织基质金属蛋白酶组织抑制剂-1的表达及其与脑水肿的关系

目的探讨实验性脑出血(ICH)血肿周围脑组织基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的表达及其与脑水肿的关系。方法采用自体血注入法建立大鼠ICH模型,制模后1h、3h、6h、12h、24h、36h、48h、72h、7d共9个时间点分别用干湿重法测血肿周围脑组织含水量,伊文思蓝(EB)检测血-脑屏障(BBB)通透性,Western Blot方法检测血肿周围组织的TIMP-1的表达;分析三者间的关系,并与假手术组相比较。结果与假手术组比较,ICH后各时间点血肿周围脑组织含水量和EB含量均明显增加(P<0.05～0.01),均于ICH48h达到高峰,且二者呈正相关(r=0.940,P<0.01);TIMP-1在ICH12～36h表达明显减低,ICH1～24h TIMP-1表达量与脑组织含水量以及EB含量呈负相关(r=-0.922,-0.950,均P<0.05)。结论大鼠ICH后血肿周围脑组织TIMP-1表达下调,可能促进了ICH早期的脑水肿形成。

丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1和血脑屏障的影响

目的：探讨丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）和血脑屏障的影响.方法：90只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,NBP预处理低剂量组、中剂量组、高剂量组.采用线栓法制作大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,缺血2h再灌注24 h后以干湿重法测定脑组织含水量,伊文思蓝（EB）评估血脑屏障的破坏程度,实时PCR检测MMP-9及TIMP-1 mRNA的表达水平.结果：脑缺血再灌注后,脑组织含水量及EB含量明显增加,MMP-9和TIMP-1表达均增强,与假手术组比较差异有统计学意义.丁苯酞预处理各组脑组织含水量及EB含量较模型组明显下降,MMP-9表达显著减少,TIMP-1表达明显增加,丁苯酞预处理中、高剂量组差异无统计学意义.结论：丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠可通过调节MMP-9/TIMP-1的表达,降低血脑屏障通透性,减轻脑水肿,发挥预防性保护作用.

载脂蛋白E拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响

目的探讨载脂蛋白E（ApoE）拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）小鼠基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的影响。方法将30只雌性C57BL/6J小鼠随机分为ApoE拟肽组、EAE组和正常组,每组10只小鼠。EAE模型通过以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55为抗原诱导。ApoE拟肽组在免疫后第2 d到30 d每隔2 d按5 mg/（kg·d）背部皮下注射Apo E拟肽。EAE组和正常组均以等体积生理盐水替代。免疫后第0-35 d每日对小鼠进行神经功能评分。免疫后第35d解剖小鼠,分离大脑和脊髓并行HE染色。采用免疫组化染色法检测各组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9和TIMP-1的表达。结果正常组小鼠均未发病。ApoE拟肽组、EAE组的小鼠全部发病,但各有1只小鼠发病后死亡。ApoE拟肽组与EAE组的发病潜伏期差异无统计学意义（P=0.72）。ApoE拟肽组的神经功能评分在峰值和慢性期（第35 d）均明显低于EAE组（均P〈0.05）。HE染色示,正常组未见炎症细胞浸润;EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓均有不同程度的炎性细胞浸润,以脑干和脊髓较为明显;ApoE拟肽组小鼠CNS炎性细胞浸润相对于EAE组明显减少。EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9表达均高于正常组（均P〈0.05）。ApoE拟肽组小鼠大脑和脊髓的MMP-9表达要明显低于EAE组（均P〈0.05）,其中ApoE拟肽组小鼠中脑和脊髓的MMP-9表达与正常组相比无明显差异（均P〉0.05）。正常组小鼠脊髓TIMP-1的表达明显高于EAE组和Apo E拟肽组（均P〈0.05）。而ApoE拟肽组与EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓TIMP-1表达的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论 ApoE拟肽能通过抑制大脑和脊髓MMP-9的表达改善EAE小鼠的症状。

基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制因子与糖尿病肾病的研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)的主要并发症之一,基质金属蛋白酶(MMPs)及其特异性抑制物基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)在DN发病机制中起重要作用,本文综述MMPs/TIMPs在DN中的变化机制及其临床意义。

应力环境组织培养法保存的人骨软骨移植物中胶原和基质金属蛋白酶组织抑制剂3

背景:应力可以对体内外软骨组织或软骨细胞产生多种影响。目的:观察应力环境对普通组织培养基体外保存的骨软骨移植物保存质量的影响。方法:将正常人的骨软骨移植物分成3组:对照组即新鲜移植物,普通组移植物采用普通组织培养法保存,应力组用摇床作为动态加载装置对普通组织培养法保存的骨软骨移植物进行持续周期性应力加载。结果与结论:储存移植物2周时,Western blot法和透射电镜观察显示,与静态环境下保存相比,动态加载环境使关节软骨细胞外基质中基质金属蛋白酶组织抑制剂3的表达明显提高(P<0.01),能更好地保护基质中胶原成分的超微结构。结果证实,应力环境有利于保存人同种异体移植物软骨细胞和胶原的超微结构,动态非接触加载可提供一种更好的库存人同种异体骨软骨移植物的方法。

来曲唑与克罗米酚对子宫内膜整合素α_Vβ_3和基质金属蛋白酶组织抑制因子-3表达的影响

目的 比较来曲唑（LE）与克罗米酚（CC）促排卵治疗时对植入窗期子宫内膜整合素αvβ3和基质金属蛋白酶组织抑制因子-3（TIMP-3）表达的影响。方法 收集2004年3～10月在本中心服用LE或CC促排卵治疗20例患者植入窗期子宫内膜（LE组9例，CC组11例），另取12例自然月经周期的相应时期内膜作为对照。通过免疫组织化学法测定整合素αvβ3和TIMP-3的表达强度。结果 三组子宫内膜整合素αvβ3的表达强度无显著性差异；TIMP-3表达强度CC组高于LE和对照组。结论 LE和CC都不影响植入窗期子宫内膜中整合素αvβ3的表达。CC使TIMP-3的表达信号明显加强。

高体积分数氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织基质金属蛋白酶-13和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1表达的意义

目的观察高体积分数氧(高氧)致慢性肺疾病(CLD)新生大鼠肺组织基质金属蛋白酶-13(MMP-13)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的动态变化,探讨CLD发病与MMPs的关系。方法将新生大鼠于出生24h内随机分为高氧组和对照组,每组各40只;于出生第1、3、7、14、21天处死,留取其肺组织,苏木素-伊红(HE)、Masson染色,酶联免疫吸附法检测其Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达;免疫组织化学法检测其肺组织MMP-13和TIMP-1的表达。结果随高氧暴露时间的延长,新生大鼠肺组织光镜下表现为次级隔数目和肺泡数目减少,终末气腔扩张,肺泡间隔增宽。随高氧暴露时间的延长,肺组织ColⅠ型胶原蛋白沉积在第14天较对照组显著增加(P<0.01),第21天差异更为显著(P<0.001)。MMP-13和TIMP-1主要在上皮细胞、内皮细胞、间质细胞、肺泡巨噬细胞等细胞胞质中表达;第21天高氧组肺组织MMP-13表达与对照组比较明显下降(P<0.05),其余时间点二组比较无明显差异(Pa>0.05),TIMP-1表达随高氧暴露时间延长逐渐增加,高氧组第14、21天较对照组表达均显著增加(Pa<0.01)。结论高氧致CLD新生大鼠肺组织存在MMP-13/TIMP-1表达失衡,是高氧后期以ColⅠ为代表细胞外基质异常沉积的关键。

慢性乙型肝炎患者肝组织基质金属蛋白酶组织抑制物-1表达及其意义

目的：分析慢性乙型肝炎患者血清和肝组织基质金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）表达水平与肝纤维化分期的相关性。方法分别采用免疫组化法和双抗体夹心酶联免疫吸附法检测患者肝组织和血清 TIMP-1表达水平，分析两者相关性；对159例慢性乙型肝炎患者行肝活检病理学检查，以组织学活动指数（HAI）予以分级（G）和分期（S），分析慢性乙型肝炎患者血清 TIMP-1水平与 HAI 分级和纤维化分期的相关性。结果慢性乙型肝炎患者肝组织 TIMP-1表达水平与其血清水平呈显著性正相关（r=0.9521，P＜0.01）；不同肝纤维化分期（S1～S4）慢性乙型肝炎患者血清 TIMP-1水平差异显著（P＜0.05），且血清 TIMP-1水平与肝纤维化分期呈正相关（r=0.704， P＜0.01），但不同炎症分级的慢性乙型肝炎患者血清 TIMP-1水平差异无显著性。结论血清 TIMP-1水平可以较好地反应肝脏纤维化程度，且不受肝组织炎症分级的影响，有望被用于肝组织纤维化程度的临床无创评估。

基质金属蛋白酶组织抑制因子3基因转染血管平滑肌细胞移植对急性心肌梗死后早期心肌重塑的影响

目的研究基质金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor-3of matrix metalloproteinases,TIMP-3)基因转染血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)移植,对急性心肌梗死(acute myocardialinfarction,AMI)后早期心脏结构变化的影响,并探讨其可能的机制。方法取Wistar大鼠胸主动脉采用组织块贴壁法培养VSMCs。另取61只Wistar雌性大鼠建立左冠状动脉远端结扎的AMI动物模型,将存活的54只大鼠模型随机分为三组,每组18只。于冠状动脉结扎后立即向缺血部心室壁内注射含有1×106个TIMP-3基因转染VSMCs(A组)、1×106个VSMCs(B组)或不含细胞的PBS液(C组)各0.5ml。术后1周,进行心脏形态学检测观察大鼠心脏结构变化,免疫组织化学染色验证TIMP-3基因转染VSMCs在缺血心肌中的存活情况,Western blot法测定大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)蛋白的含量。结果成功分离、培养VSMCs,纯度达98%,TIMP-3基因成功转入VSMCs中。术后1周,A组大鼠梗死心肌面积占左室游离壁面积的百分比为28.73%±1.56%,小于B组39.63%±1.84%和C组46.32%±2.16%(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。A组大鼠左室容积指数为5.27±0.21mm3/g,小于B组6.69±0.34mm3/g和C组9.67±0.88mm3/g(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。免疫组织化学染色见TIMP-3基因转染VSMCs被成功植入缺血心肌并在其中存活。Western blot法示A组大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白含量为300704.8±3692.8,高于B、C组的195548.8±3014.2及177991.1±2502.1(P<0.01);B组高于C组(P<0.01)。A组MMP-9蛋白含量为594827.4±5708.5,低于B、C组的921461.4±8887.4及1044445.0±8788.6(P<0.01);B组低于C组(P<0.01)。结论将TIMP-3基因转染的VSMCs移植入心肌缺血区可明显抑制AMI后早期心肌重塑。

基质金属蛋白酶组织抑制剂1基因转染对肾小管上皮细胞PTEN表达的影响

目的观察正反义人TIMP-1转染和酶抑制剂干预HKC细胞对PTEN、VEGF/Flk-1的表达的影响,为研究TIMP-1对肾脏器官衰老的影响机制提供参考。方法将正义和反义人TIMP-1基因转染至人近端肾小管上皮细胞(HKC),同时用与正义转染组细胞酶抑制活性相当的MMP-2/MMP-9抑制剂(MMP-2/MMP-9 InhibitorⅢ,100μmol/L)干预24 h,RT-PCR;间接免疫荧光法检测各组细胞PTEN、VEGF和Flk-1的表达。结果研究显示,与未转染和空载体转染组相比,正义TIMP-1转染组中PTEN表达上调(P<0.05),明胶酶活性降低(P<0.05),VEGF和Flk-1表达下调(P<0.05),而反义TIMP-1转染组则相反(P<0.05);MMP-2/MMP-9 inhibitorⅢ100μmol/L(酶抑制剂组)组PTEN、VEGF和Flk-1表达与未转染和空载体转染组相比无显著差异。结论肾脏器官衰老过程中高表达的TIMP-1,通过上调PTEN(非MMP依赖途径),进而下凋VEGF、Flk-1表达,提示PTEN在TIMP-1介导肾脏衰老微血管生成障碍中起重要作用,为揭示TIMP-1参与肾脏器官衰老分子机制提供了新的理论依据。

基质金属蛋白酶组织抑制剂1基因重组腺病毒载体的构建

目的为探讨基因治疗逆转或延缓椎间盘退变的可行性,构建及制备人基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)cDNA重组腺病毒载体。方法以含TIMP1 cDNA序列的质粒为模板,通过PCR方法扩增TIMP1cDNA片段,将TIMP1 cDNA全长定向克隆到Ad5MaxTM腺病毒系统的穿梭质粒pDC316上,构建pDC316-TIMP1穿梭质粒;使用Ad5MaxTM腺病毒包装系统,脂质体介导的穿梭质粒及骨架质粒pBHGlox-E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组构建含TIMP1 cDNA的重组腺病毒Ad5-TIMP1,通过PCR方法鉴定重组腺病毒Ad5-TIMP1的正确性。通过阴离子柱层析方法纯化重组腺病毒Ad5-TIMP1并测定重组腺病毒感染滴度。结果经PCR及酶切方法证实pDC316-TIMP1穿梭质粒中存在630 bp大小左右的插入片段,与目的基因TIMP1的cDNA大小一致;经PCR鉴定证实TIMP1 cDNA重组腺病毒载体Ad5-TIMP1构建成功,病毒感染性滴度为1×1010IU/mL。结论成功构建TIMP1 cDNA重组腺病毒载体,为应用基因治疗方法逆转或延缓椎间盘退变的研究奠定实验基础。

丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1和血脑屏障的影响

目的探讨丁苯酞(NBP)预处理对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠基质金属蛋白酶(MMP)-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1和血脑屏障的影响。方法 90只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、NBP预处理组低剂量组(NBPⅠ组)、NBP预处理组中剂量组(NBPⅡ组)、NBP预处理组高剂量组(NBPⅢ组),每组18只。采用线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h再灌注24 h后以干湿重法测定脑组织含水量,收集脑血管外伊文思蓝(EB)含量来评估血脑屏障的破坏程度,q PCR法检测MMP-9及TIMP-1 mRNA的表达水平。结果脑缺血再灌注后,脑组织含水量及EB含量明显增加,MMP-9和TIMP-1表达均增强,与假手术组比较有显著差异(P<0.01)。NBP预处理各组脑组织含水量及EB含量较模型组明显下降,MMP-9表达显著减少,TIMP-1表达明显增加(P<0.01),NBPⅡ、Ⅲ组无显著差异(P>0.05)。结论 NBP预处理对CIRI大鼠可通过调节MMP-9/TIMP-1的表达,降低血脑屏障通透性,减轻脑水肿,发挥预防性保护作用。