血管紧张素Ⅱ在正常和高血压条件下上调心肌细胞中基质金属酶蛋白-2和组织金属酶蛋白抑制物-1的表达

目的:研究在正常和高血压条件下血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对心肌细胞中基质金属酶蛋白-2(MMP-2)和组织金属酶蛋白抑制物-1(TIMP-1)表达的影响,观察其对氧化应激的影响。方法:AngⅡ预处理体外培养的原代心肌细胞,利用试剂盒检测细胞中丙二醛水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和超氧化物歧化酶(SOD)活力的变化;同时利用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中MMP-2和TIMP-1基因信使核糖核苷酸(mRNA)和蛋白的表达变化。建立大鼠高血压模型,检测模型大鼠及缬沙坦治疗大鼠心肌组织中丙二醛、GPx和SOD酶活力的变化,并运用qRT-PCR和Western blot方法分析心肌组织中MMP-2和TIMP-1基因mRNA和蛋白的表达变化。结果:AngⅡ预处理能显著提高心肌细胞中氧化应激水平,同时AngⅡ预处理上调心肌细胞中MMP-2和TIMP-1基因表达。在高血压大鼠中,心肌组织的氧化应激水平明显高于假手术组,而经AngⅡ受体阻断剂缬沙坦处理后氧化应激水平则下降。并且,缬沙坦治疗也能降低高血压大鼠心肌组织中MMP-2和TIMP-1基因表达。结论:AngⅡ可同时上调氧化应激并调控MMP-2基因和TIMP-1基因在心肌细胞中的表达,但其具体机制还不完全清楚,仍需进一步探讨。

尿基质金属酶蛋白抑制剂-2和胰岛素样生长因子结合蛋白7联合检测在对比剂诱导急性肾损伤中的早期预测作用

目的 探讨对比剂(contrast medium,CM)损伤后,基质金属酶蛋白抑制剂-2(tissue inhibitor of metalloproteinases-2,TIMP-2)和胰岛素样生长因子结合蛋白7(insulin-like growth factorbinding protein 7,IGFBP7)在肾组织及尿液中的表达及尿[TIMP-2]·[IGFBP7]对急诊经皮冠状动脉介入治疗(primary percutaneous coronary intervention,PPCI)患者术后发生对比剂诱导的急性肾损伤(contrast-induced acute kidney injury,CI-AKI)的早期预测作用。方法 将20只大鼠按随机数字表法分为CI-AKI组(n=9)和对照组。采集大鼠术前及术后24 h动脉血液,检测血肌酐(serum creatinine,Scr);术后24 h采集大鼠肾组织标本,采用HE染色评价肾组织损伤情况,并于电镜下观察肾小管上皮细胞超微结构改变情况;进行免疫组化及蛋白质印迹法检测,观察TIMP-2和IGFBP7在肾组织中的表达。收集大鼠术前、术后4 h、12 h、24 h尿标本,采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测尿TIMP-2和尿IGFBP7水平。临床上,纳入临泉县人民医院2019年6月至2020年12月行PPCI患者109例,收集患者的一般资料及实验室检查指标,留取术前、术后6 h、12 h、24 h尿标本,使用NephroCheck?试剂盒检测尿[TIMP-2]·[IGFBP7]水平,绘制术后6 h尿[TIMP-2]·[IGFBP7]预测CI-AKI的ROC曲线,评估其对于CI-AKI早期预测的价值。结果 CI-AKI组大鼠术后24 h的Scr升高,显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,CI-AKI组大鼠肾组织HE染色可以观察到明显的小管上皮细胞空泡样变性、核固缩及凋亡小体形成,Paller评分明显高于对照组(P<0.05),电镜下可见广泛线粒体自噬体形成。CI-AKI组大鼠术后尿TIMP-2水平于术后4 h达到峰值,显著高于同期对照组水平(P<0.05)。CI-AKI组大鼠尿IGFBP-7水平于术后4 h开始升高,12 h达峰,术后4 h及12 h水平均高于同期对照组(P<0.05)。免疫组化和蛋白质印迹法结果显示,CM损伤后,TIMP-2和IGFBP7在肾小管上皮细胞中表达均显著升高。109例患者中有16例发生了CI-AKI,发生率为14.7%。发生CI-AKI的PPCI患者,尿[TIMP-2]·[IGFBP7]水平在术后6 h达峰,显著高于同期对照组水平(P<0.05)。以术后6 h的尿[TIMP-2]·[IGFBP7]结果绘制ROC曲线,其预测CI-AKI的AUC为0.841。以0.33作为界值,其预测CI-AKI的敏感性为0.750,特异性为0.893。结论 CM损伤后TIMP-2和IGFBP7在肾小管细胞及尿液中的表达均显著升高。尿[TIMP-2]·[IGFBP7]对于PPCI患者术后CI-AKI的发生具有早期预测作用。

扶阳温灸膏对阳虚体质膝骨关节炎患者关节液PACAP和血清IL-1β、MMP-3的影响

目的:研究扶阳温灸膏对阳虚体质膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)患者关节液垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylyl cyclase activating polypeptide,PACAP)和血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)表达的影响。方法:选择2021年1—12月于广东省第二中医院接受治疗的120例阳虚体质KOA患者,并采用随机数字表法的分组方法,把患者分为对照组和观察组,各60例。对照组给予玻璃酸钠注射液治疗,观察组行扶阳温灸膏治疗。比较两组临床总有效率、PACAP、IL-1β、MMP-3、视觉模拟评分法(VAS)评分、Lysholm膝关节评分、简明健康状况调查量表(SF-36)评分。结果:观察组临床治疗总有效率较对照组更高(P<0.05)。治疗4、8周后,两组PACAP水平均较治疗前升高,且治疗8周后两组PACAP水平均较治疗4周后更高,观察组高于对照组(P<0.05);两组IL-1β、MMP-3水平、VAS评分均较治疗前下降,且治疗8周后两组IL-1β、MMP-3水平、VAS评分均较治疗4周后更低,观察组均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗4、8周后,两组Lysholm膝关节评分均较治疗前升高,且治疗8周后两组Lysholm膝关节评分均高于治疗4周后,且观察组均较对照组更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗4、8周后,两组SF-36评分均较治疗前增加,且治疗8周后两组患者SF-36评分均较治疗4周后更高,观察组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:扶阳温灸膏治疗阳虚体质KOA效果显著,可调控患者关节液PACAP和血清IL-1β、MMP-3水平表达并改善膝关节疼痛症状与功能,可有效提高生活质量水平。

针刀联合葛根素膝关节内注射治疗兔膝骨关节炎的实验研究

目的:探讨针刀联合葛根素膝关节腔内注射对兔膝骨关节炎模型的影响。方法:选择新西兰白兔30只,随机分为空白对照组、模型组、葛根素组、针刀联合葛根素组和针刀联合透明质酸钠组,每组6只。除空白对照组外,其余4组均制备兔膝骨关节炎动物模型。造模成功后,葛根素组关节腔内注入葛根素注射液,针刀联合葛根素组针刀松解术的同时注入葛根素注射液,针刀联合透明质酸钠组予以针刀松解术的同时注入透明质酸钠,空白对照组和模型组注射等体积的生理盐水,各组均连续治疗5周。RT-PCR检测膝兔软骨检测基质金属酶蛋白1(matrix metalloproteinases-1,MMP-1)和基质金属酶蛋白13(matrix metalloproteinases-1,MMP-13)的mRNA含量,ELISA法检测兔关节腔内细胞因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素6(Interleukin-1,IL-6)的含量。结果:针刀联合葛根素组中IL-1、IL-6和TNF-α水平及MMP-1和MMP-13的mRNA表达较其他组明显减少(P<0.05)。结论:针刀联合葛根素可以明显减少软骨关节肿MMP-1和MMP-13的mRNA含量,降低IL-1、IL-6和TNF-α细胞因子表达。

耐力、力量和混合运动对成年C57BL/6小鼠骨骼肌卫星细胞激活信号通路的影响

目的:研究耐力、力量、混合运动3种训练方式激活静息状态卫星细胞的能力。方法:将32只3月龄C57BL/6小鼠随机分成4组:安静组(C,n=8),耐力运动训练组(E,n=8),力量运动训练组(S,n=8),混合运动训练组(M,n=8)。经过28周运动干涉后,采用实时荧光定量PCR法检测胫骨前肌卫星细胞激活信号通路中相关基因(nNOS,MMP-2,HGF,c-met)mRNA的转录水平。结果:1)与安静组相比,3组运动训练组C57BL/6小鼠胫骨前肌与体重的比值增加;2)耐力训练组nNOS,HGF,c-met mRNA转录水平显著增加,MMP-2mRNA无显著性差异;3)力量训练组nNOS,MMP-2,HGF,c-met mRNA转录水平显著增加;4)混合训练组nNOS,MMP-2,c-met mRNA转录水平无显著性变化,HGF mRNA转录水平显著增加。结论:力量运动对骨骼肌中卫星细胞的激活具有明显的促进作用,在维持骨骼肌卫星细胞池的数量和促进骨骼肌肥大中具有显著意义;耐力运动能促进卫星细胞的激活,在防止骨骼肌中卫星细胞数量减少,在维持骨骼肌质量和力量上,也有其可取之处;混合训练组在促进卫星细胞激活的过程中,混合运动的效果并不是预期所设想的耐力和力量运动的效果叠加,提示在维持卫星细胞数量和促进骨骼肌肥大上应考虑运动强度、时间和频率,合理安排耐力和力量运动。

S100A4真核表达载体构建及对鼻咽癌细胞侵袭转移的影响

目的构建S100A4稳定高表达的鼻咽癌细胞株,研究S100A4与鼻咽癌侵袭转移关系。方法 PCR方法扩增S100A4片段,将产物插入p CMV载体,将重组质粒及其空白质粒分别转染到鼻咽癌细胞CNE2;MTT法绘制细胞生长曲线,Western blot检测S100A4、E-cadherin、Fibronectin、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达;Transwell实验检测细胞侵袭转移能力变化。结果成功构建了S100A4稳定高表达的重组细胞株;细胞生长曲线表明S100A4稳定高表达的重组细胞株生长较快;S100A4稳定高表达的重组细胞株中E-cadherin、Fibronectin低表达而MMP2、MMP9高表达;Transwell实验发现S100A4稳定高表达的重组细胞株的侵袭细胞计数明显高于空白载体转染组和未转染组(P>0.01)。结论 S100A4能调控鼻咽癌上皮-间质转化(EMT)过程,并上调MMP2、MMP9表达而促进鼻咽癌细胞侵袭和转移。

Survivin和MMP-9在子宫内膜异位症中的表达及相关性分析

目的通过检测Survivin(凋亡抑制基因)及MMP-9(基质金属酶蛋白9)在子宫内膜异位症(endom-otriosis,EMS)患者在位内膜、异位内膜组织中的表达,探讨其在子宫内膜异位症发生发展中的作用及两者的相关性。方法采用免疫组化二步法检测40例患者异位子宫内膜组织、在位内膜组织及40例正常子宫内膜(单纯子宫肌瘤)组织中Survivin及MMP-9的表达情况,Survivin及MMP-9二者相关性检验采用Spearman等级相关。结果 Survivin在子宫内膜异位症患者异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜组织中阳性表达率分别为77.5%、60.0%和7.5%;MMP-9在三组子宫内膜阳性表达率分别为72.5%、62.5%和20.0%;两种蛋白在三组中的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。Survivin与MMP-9在子宫内膜异位症中表达呈正相关(P<0.05)。结论 Survivin蛋白和MMP-9在子宫内膜异位症患者的在位及异位内膜均高表达,二者在子宫内膜异位症的发生发展中有协同作用。