堆型艾美耳球虫裂殖子外分泌蛋白对细胞凋亡的抑制作用

为了研究堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)裂殖子的外分泌蛋白对马-达氏牛肾(MDBK)细胞凋亡的抑制作用,本试验建立Transwell小室间接共培养体系,即将E.acervulina裂殖子与MDBK细胞共培养,采用流式细胞术分别检测共培养1.5、3和6 h MDBK细胞的凋亡情况,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)对共培养6 h后的细胞上清液中的成分进行鉴定。结果显示,1.5、3和6 h共培养组MDBK细胞的总细胞凋亡率分别为(5.92±0.19)%、(8.13±0.32)%和(11.57±0.37)%,与对照组相比,总细胞凋亡率均极显著降低(P<0.01)。LC-MS/MS分析共鉴定到65个E.acervulina的外分泌蛋白,包括热休克蛋白、微线蛋白、能量代谢酶分子、蛋白磷酸酶分子和未知功能蛋白等。结果表明,E.acervulina裂殖子外分泌蛋白可抑制MDBK细胞凋亡,具体哪种蛋白在抑制细胞凋亡中发挥作用有待后续进一步研究。

基于压电导纳的叠堆型压电智能骨料工作性能试验研究

叠堆型压电智能骨料是一种以压电叠堆为核心元件制备的新型换能器。相比于传统的智能骨料,它有着更优异的力电耦合性能,可有效提高结构损伤诊断的精度和可靠性,在结构健康监测领域有重要的应用前景。但是,目前主要侧重于器件的设计和理论建模,基于压电导纳的器件工作性能还需进一步评估。设计了温度敏感性试验,分析了器件的谐振频率在温度梯度下的变化规律;开展了28 d的浸水试验,绘制了器件谐振频率随浸水天数的变化曲线;制备了三个200 mm×200 mm×200 mm土体试件,并将器件嵌入到土体试件中开展含水率的监测试验,通过分析不同含水率下的量化指标对土体含水状态进行监测。研究结果表明:叠堆型压电智能骨料的谐振频率随温度的升高而线性下降;在28 d浸水过程中,谐振频率的最大偏移率不超过10%,稳定性良好;基于导纳信号计算得到的量化指标均随土体试件含水率的升高而增大,可有效监测土体含水率的变化。

我国主力堆型核电生命周期碳排放因子核算研究

基于生命周期一般模型,构建包括燃料周期和电厂周期的核电生命周期模型,设计碳排放因子核算方法,基于CNP1000、华龙一号、CNP650、AP1000、VVER等五种主力堆型的建设、设施设备、发电运行的能源消耗等生产数据,计算核电生命周期碳排放因子为10.86~15.41g CO_(2)/kW·h,验证了核算方法的有效性。

迷迭香酸对堆型艾美耳球虫攻毒肉鸡生长性能、免疫机能及炎症反应的影响

本试验旨在探究饲粮添加迷迭香酸对堆型艾美耳球虫攻毒肉鸡生长性能、免疫机能和炎症反应的影响。选用1日龄雄性黄羽肉鸡360羽,随机分为6组,每组6个重复,每个重复10羽。对照组、攻毒对照组饲喂基础饲粮,阳性对照组在基础饲粮中添加20 mg/kg地克珠利,试验组在基础饲粮中分别添加40、80和160 mg/kg迷迭香酸,在14日龄对攻毒对照组、阳性对照组和试验组进行堆型艾美耳球虫攻毒,试验期为56 d。结果表明:1)与对照组相比,堆型艾美耳球虫攻毒后肉鸡第4、7、10天每克粪便中卵囊数量(OPG),21日龄肝脏指数、脾脏指数、血清谷丙转氨酶(ALT)活性以及血清与肝脏补体3(C3)、补体4(C4)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量均显著上升(P<0.05),15~21日龄平均日增重、21日龄血清免疫球蛋白M(IgM)与肝脏免疫球蛋白A(IgA)含量显著下降(P<0.05)。2)与攻毒对照组相比,饲粮添加160 mg/kg迷迭香酸显著降低了堆型艾美耳球虫攻毒肉鸡OPG(攻毒后第4、7、10天),21日龄肝脏指数、血清谷丙转氨酶活性以及血清与肝脏C3、C4、IL-1β、IL-6、TNF-α含量(P<0.05),显著提高了15~21日龄平均日增重以及21日龄血清中IgA和IgM含量(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加160 mg/kg迷迭香酸能缓解堆型艾美耳球虫感染引起的肉鸡生长减缓,提高其免疫机能,抑制肝脏炎症。

VVER堆型厚壁辅助管道自动焊工艺研究

选择碳素钢管道(φ426mm×24mm)为研究对象,通过对碳素钢管道焊接特点分析,主要研究打底焊接工艺,研究自动焊焊接参数、热输入量、背部充氩气保护等对打底焊缝单因素影响,设计适用的碳素钢管道焊接工艺,通过连续两道焊缝RT100%合格来验证焊接工艺的正确性;选择不锈钢管道(φ351mm×36mm)为研究对象,针对不锈钢管道焊接特点分析,不锈钢管道坡口尺寸特点是坡口面角度较大,收缩量大,焊缝内部余高被收缩“挤压”容易超高,通过减小层道间温度梯度来控制焊缝收缩的措施,使焊缝内部余高控制在标准范围以内。

堆型艾美耳球虫(E.acervulina)单克隆抗体细胞株的建立

利用细胞融合技术 ,将堆型艾美耳球虫 (Eimeria acervulina)的子孢子可溶性抗原免疫的小鼠脾细胞和 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,通过间接 EL ISA方法筛选 ,得到能稳定分泌针对堆型艾美耳球虫子孢子的特异性抗体细胞株 5 B4和5 G7。用间接 EL ISA方法对这 2株细胞的腹水效价进行测定 ,结果 5 G7细胞株的腹水效价为 1∶ 2 6 2 14 4 ,5 B4细胞株的腹水效价为 1∶ 1310 72。腹水经正辛酸 -硫酸铵二步法纯化 ,SDS- PAGE结果表明 ,此方法对 5 G7细胞株纯化效果较好 ,但对 5

第三代核电堆型AP1000运行特点及堆芯仿真研究

第三核电堆型AP1000有望成为我国未来核电发展的主力堆型。分析AP1000的设计理念及其功率运行特点,结果表明,AP1000机组具有良好的负荷调整特性,能参与电网的调峰运行。在掌握AP1000堆芯反应性物理特点及与中子通量耦合特性的基础上,建立堆芯仿真模型。仿真研究了堆芯内小扰动和堆芯外大扰动情况下,堆芯状态变量和控制变量的相互作用关系。结果表明,状态变量引起的反应性主要应对小扰动后堆芯稳定运行问题,控制变量引起的反应性保证堆芯在大扰动后能按照扰动轨迹运行。

堆型艾美球虫子孢子单克隆抗体的制备及鉴定

目的建立堆型艾美球虫(Eimeriaacervulina)子孢子表面抗原的杂交瘤细胞株。方法使用纯化的堆型艾美球虫子孢子直接免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术建立细胞株,制备单克隆抗体。用ELISA确定单克隆抗体的交叉反应性、相对亲和力、免疫球蛋白的类型和亚类,并对单克隆抗体进行鉴定。结果获得4株可稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中Easp-3G3、Easp-5G10为IgG1类,Easp-3H6为IgG2b类,Easp-5H4为IgG2a类。4株单克隆抗体均能与堆型艾美球虫子孢子的抗原蛋白反应,但仅Easp-5H4能与柔嫩艾美球虫子孢子抗原蛋白反应。Easp-3G3和Easp-5G10与另外2种单克隆抗体的识别位点不同,而Easp-3G3与Easp-5G10、Easp-3H6与Easp-5H4的识别位点相近。结论制备了4株堆型艾美球虫子孢子单克隆抗体。

堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)早熟株与毒株的繁殖力和致病性比较试验

对经 15代选育的堆型艾美耳球虫 (Eimeria acervulina)北京株的早熟株与其毒株的繁殖力和致病性进行了比较研究 ,证实早熟株的潜隐期比毒株缩短 2 7h,繁殖力有所下降 ;对致病性的研究显示 ,早熟株感染后对鸡只增重的影响较小 ,而且肠道病变记分亦较毒株下降。由此认为 ,该早熟株符合球虫早熟株的基本生物学特性 。

堆型艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究

为确定堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)早熟株合适的免疫剂量,设立7个早熟株免疫攻虫组、7个母株免疫攻虫组、1个不免疫攻虫组和1个不免疫不攻虫组,7个早熟株/母株免疫组的免疫剂量为孢子化卵囊100、200、400、600、800、1 000、2 000个/羽,经嗉囊感染,7日龄首次免疫,14日龄以同等剂量进行第二次免疫,21日龄以1.5×105个/羽的同源母株进行攻虫,28日龄结束试验,以增重、肠道病变记分和卵囊减少率为试验指标。并对早熟株中免疫保护效果较好的2个免疫剂量进行重复试验,免疫方法、试验周期、试验指标同第一批试验,攻虫剂量为2×105个/羽的同源母株。结果显示,免疫期间,各免疫组的增重与不免疫组差异不显著(P>0.05);攻虫期间,早熟株400、600、800、1 000个/羽和母株600、800、1 000个/羽免疫组的相对增重与不免疫不攻虫组差异不显著(P>0.05);肠道病变记分,除2 000免疫组明显低于不免疫攻虫组(P<0.05)外,其余各免疫组虽低于不免疫攻虫组,但与其差异不显著(P>0.05);卵囊减少率,早熟株和母株400～2 000个/羽免疫组均达90%以上,其中600、800个/羽免疫组达97%以上。用早熟株600、800个/羽进行免疫重复试验,两个免疫组攻虫期间的相对增重和肠道病变记分均与不免疫不攻虫组差异不显著(P>0.05),而与不免疫攻虫组差异显著(P<0.05),其卵囊减少率均在88%以上。研究结果表明,该堆型艾美耳球虫早熟株保持了良好的免疫原性,不同免疫剂量均能诱发鸡产生免疫保护力,其中以600、800个/羽的免疫效果更好,可考虑以600个/羽作为该早熟株在疫苗制备中的推荐免疫剂量。

堆型艾美耳球虫乳酸脱氢酶基因的克隆与表达

克隆了堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)乳酸脱氢酶(LDH)基因(EaLDH),并在大肠杆菌中成功表达出重组蛋白。根据GenBank中收录的EaLDH核苷酸序列设计特异性引物,以其第一代裂殖体总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增获得EaLDH基因。将EaLDH基因片段与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组表达质粒pET28a(+)-LDH,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。结果表明,扩增出的EaLDH基因含993bp的开放阅读框,与GenBank中收录的EaLDH基因序列相似性为98%。诱导后,重组蛋白能够在大肠杆菌中高效表达,融合蛋白相对分子质量约为4.1×104。

帝克珠利对鸡堆型艾美尔球虫的药效实验

球虫病是威胁养鸡业的重要疾病之一，目前对该病的防治仍主要依赖药物［１］。但耐药虫株的出现使现有许多抗球虫药物疗效降低甚至丧失。因此，除了采取轮换用药及穿梭用药等方法以减少或延缓耐药性的产生外，开发评价和应用新型抗型抗球虫药物极为重要和必要。本文报道我...

鸡堆型艾美尔球虫3-1E抗原表位的生物信息学预测

应用生物信息学分析和预测鸡堆型艾美尔球虫3-1E蛋白二级结构和抗原表位,为确定和筛选优势表位,研制安全、高效表位疫苗奠定基础。以克隆获得的鸡堆型艾美尔球虫3-1E蛋白氨基酸一级结构为基础,采用DNAStar软件和生物信息学在线分析程序Prot Param、SOSUI、IEDB、SYFPEITHI等预测3-1E蛋白理化性质和二级结构,并分析其序列跨膜区、可溶性、亲水性、可及性、柔韧性参数以及抗原指数,预测B细胞表位和T细胞表位的可能区域。3-1E蛋白由170个氨基酸组成,分子式C818H1257N213O272S3,分子质量18.5234 ku,理论等电点为4.25,半衰期为10 h;无跨膜区均为膜外区,是一种可溶性蛋白。其二级结构中α螺旋占31.76%,β转角为12.35%。B细胞表位预测区域:44-49、65-67、86-87、111-116;分值较高的T细胞表位区域:52-60、94-102、97-105、154-162、157-165。运用生物信息学方法确定3-1E存在多个抗原表位,对进一步研究3-1E的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要意义。

鸡堆型艾美耳球虫新基因的克隆与生物信息学分析

试验旨在对堆型艾美耳球虫（Eimeria acervulina）孢子化卵囊新基因EST序列进行克隆与生物信息学分析。通过RACE技术扩增从E．acervulina cDNA表达文库中筛选获得的EST序列，得到EST全长cDNA序列，利用多种生物信息学分析软件对其编码蛋白进行分析和预测。结果表明，该EST序列为E．acervulina孢子化卵囊阶段新基因，GenBank登录号为EU590120；该基因含1个492 bp的开放阅读框，编码163个氨基酸，理论分子质量为17．049 ku，等电点为6．69，酸性氨基酸8个，碱性氨基酸8个，分子式为C761H1223N199O219S12总平均亲水性（GRAVY）为0．731；该蛋白有信号肽，为分泌性蛋白；具有4个跨膜结构，在105～115、28～32和132～138位之间有很强的疏水性；具有1个蛋白激酶C磷酸化位点、1个N-糖基化位点、2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、4个N端豆蔻酰基化位点。因此根据生物信息学全面预测和分析，发现该基因所编码的蛋白具有较多的生物学功能位点和潜在的抗原表位区域。

复方中草药免疫增强剂对鸡堆型艾美耳球虫早熟株免疫的影响研究

选用两个中草药方剂,采用1.5%、2.0%两个添加水平,在相同方法、相同攻虫强度下,比较其抗鸡堆型艾美耳球虫的效果。结果表明:方剂一在2.0%的添加水平时效果显著,抗球虫指数高达196.04,其E-玫瑰花环形成率也显著提高,具有明显的免疫促进作用。

堆型艾美球虫3-1E基因在大肠杆菌中的可溶性表达及鉴定

将堆型艾美球虫(E.acervulina)3-1E基因克隆至pET-32a(+)载体中,转化大肠杆菌BL21,在37℃下,用终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导表达,得到相对分子质量约为38 500的重组蛋白。Western blot检测证实,该重组蛋白可以与特异性抗血清结合。在20℃条件下,以终浓度分别为2.0、1.0、0.5 mmol/L的IPTG进行诱导,当IPTG终浓度为0.5 mmol/L时,以可溶性形式存在的目的蛋白含量最高。

几种药物的联合使用对堆型艾美耳球虫的疗效及耐药性试验

目的 研究几种药物的联合抗球虫效果及其耐药性。方法 将175只14日龄罗曼粉雏公鸡随机分为7组，设5个试验组，按组分别投予磺胺氯吡嗪300mg／kg＋氨吡啉125mg／kg，磺胺氯吡嗪300mg／kg＋尼卡巴嗪125mg／kg，磺胺氯丙嗪300mg／kg＋左旋咪唑10mg／kg，地克珠利3mg／kg，地克珠利2mg／kg＋氨丙啉125mg／kg，并设立感染不用药和不感染不用药对照组。给药后2d，除不感染不用药对照组的鸡只外，其余全部试验鸡每只分别接种E.acervulina孢子化卵襄8×10^4个。以抗球虫指数（ACI）作为判定药物效力的指标；并根据最适抗球虫活性百分率（POAA）病变记分减少率（RLS）、相对卵囊产量（ROP）、三项指标综合判定球虫对上述抗球虫药的耐药性。结果 地克珠利与氨丙啉的联合使用，其抗球虫指数达181．25，其余各组药的抗球虫指数均在165—170之间；且该球虫株对磺胺氯吡嗪＋尼卡巴嗪、磺胺氯吡嗪＋左旋味唑、地克珠利组药物有轻度耐药性（--＋），对磺胺氯吡嗪＋氨丙啉有中度耐药性（-＋＋）。结论 地克珠利与氨丙啉联合使用对E.acervulina具有高效抗球虫作用。

叠堆型压电陶瓷FBG电流传感器

大电流的实时测量是电力系统稳定、安全、可靠和经济运行的重要保证。该文研制了电流互感器和叠堆型压电陶瓷等元件结合的光纤Bragg光栅电流传感器。传感器通过电流互感器将被测大电流转换成直流低电压信号加载到叠堆型压电陶瓷上,在逆压电效应下,叠堆型压电陶瓷发生伸缩变化,带动粘贴在其上面的测量用光纤Bragg光栅发生形变,检测出测量用光纤Bragg光栅和温度补偿光纤Bragg光栅的波长移位,计算出波长位移之差即可反算出被测一次大电流。测试结果表明,此电流传感器的非线性误差为7.27%FS(满量程),灵敏度为0.056 7pm/A,重复性为7.69%FS。

堆型艾美球虫广东株3-1E基因的克隆与序列分析

根据GenBank中登录的堆型艾美球虫31E基因序列,设计了3条引物,以广东株堆型艾美球虫裂殖子总RNA为模板,利用反转录聚合酶链反应(RTPCR)扩增获得了31E基因部分片段,将这一片段克隆至pGEMTEasy载体中,经PCR、限制性内切酶分析和克隆片段的序列测定、比较,证实了克隆片段的可靠性。序列比较发现,所克隆的基因片段与Eimeriaacervulina美国株(US)、E.acervulinaQH株31EcDNA的核苷酸同源性分别为99.0%和99.2%,推导氨基酸的同源性分别为98.2%和97.6%。

堆型艾美耳球虫早熟株和母株对8种抗球虫药的敏感试验

[目的]探讨堆型艾美耳球虫早熟株和母株对常用抗球虫药的敏感性。[方法]选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西8种抗球虫药,进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)4项指标进行综合评定。[结果]堆型艾美耳球虫早熟株和母株均对地克珠利、氯苯胍、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感,对盐霉素轻度敏感,对二硝托胺不敏感。[结论]遗传背景相同的虫株,其药物敏感性也相同。