盐酸塔斯品碱促进大鼠皮肤创伤愈合及其作用机制的研究

目的:研究盐酸塔斯品碱对皮肤创伤愈合的促进作用及其机制。方法:建立大鼠背部双侧圆形创伤模型,观察创伤创面的愈合时间,测量其面积,检测组织中羟脯氨酸与蛋白质含量的变化,并进行组织形态学观察。结果:盐酸塔斯品碱可明显缩短创面的愈合时间。创伤后第3-14天,盐酸塔斯品碱组大鼠创面愈合率显著高于自身二甲亚砜对照组(P<0.05或P<0.01);创伤后第3-7天,大鼠创伤肉芽组织中蛋白质含量在盐酸塔斯品碱2mg/ml组明显高于模型组(P<0.05),创伤后第7天蛋白质含量达到峰值,第14-21天逐渐降至正常皮肤组织的含量水平;创伤后第3-21天,大鼠创伤组织中羟脯氨酸的含量,在盐酸塔斯品碱组明显高于模型组(P<0.05或P<0.01),创伤后第14天羟脯氨酸的含量达到峰值,第21天接近正常皮肤组织的含量水平。组织形态学结果显示:在大鼠创伤组织修复早期,盐酸塔斯品碱能够促进新生毛细血管的形成。结论:盐酸塔斯品碱具有促进大鼠皮肤创伤愈合的作用,其作用机制可能与促进肉芽组织中新生毛细血管的生成以及蛋白质和胶原的合成有关。

RP-HPLC法研究塔斯品碱在大鼠体内的药代动力学

目的:建立大鼠血浆中塔斯品碱浓度的 RP-HPLC 分析方法,并研究其药代动力学特性。方法:用液液萃取技术对血浆中的塔斯品碱进行纯化、浓集,用 RP-HPLC 法进行测定。色谱柱:Kromsil C_(18)ODS 柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-60 mmol·L^(-1)磷酸二氢钠-20 mmol·L^(-1)SDS(70:30);流速:1.0 mL(min^(-1);检测波长:245nm;柱温:室温。结果:方法线性范围为15.63～903.7 ng·mL^(-1)(r=0.994 0),日内、日间精密度的 RSD 分别为3.8%～4.9%和4.2%～7.6%,平均回收率为(107.33±7.3)%～(97.30±4.8)%。塔斯品碱在大鼠体内的达峰时间约2.84 h,平均峰浓度为64.15 ng·mL^(-1),药时曲线下面积为1214.98 ng·mL^(-1)·h,消除半衰期为10.96 h。结论:分析方法灵敏、准确,适合于塔斯品碱的药代动力学研究。塔斯品碱经大鼠口服吸收较慢,而消除很慢。

塔斯品碱衍生物对人肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用研究

目的:分析探讨塔斯品碱衍生物对人肝癌SMMC7721细胞的生长抑制作用,研究其作用机制。方法:采用MTT法测定5种塔斯品碱衍生物对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测Tas-D1对肝癌SMMC7721细胞周期的影响,ELISA法测定Tas-D1对肝癌SMMC7721细胞EGF和VEGF蛋白的影响,PCR法测定Tas-D1对EGF和VEGF的mRNA水平的影响。结果:塔斯品碱衍生物Tas-D1对SMMC7721细胞生长具有明显的抑制作用,使细胞阻滞在S期,呈现出良好的剂量依赖性。ELISA法和RT-PCR法结果表明Tas-D1对SMMC7721细胞的EGF和VEGF蛋白质的表达和mRNA的表达有一定的抑制作用(P<0.05)。结论:塔斯品碱衍生物Tas-D1能抑制人肝癌SMMC7721细胞的生长,转换细胞周期,初步作用机制主要为Tas-D1抑制SMMC7721细胞EGF和VEGF的表达。

高效毛细管区带电泳法同时分离测定红毛七药材中红毛新碱和塔斯品碱的含量

目的:建立高效毛细管电泳法同时分离测定红毛七药材中红毛新碱和塔斯品碱的含量。方法:采用 HP^(3D)CE G1600AX高效毛细管电泳仪,未涂渍熔融石英毛细管(75μm×50 cm,有效长度41.5 cm),压力进样50 mbar×5 sec,运行缓冲液为90mmol·L^(-1)的醋酸钠—15%甲醇溶液,冰醋酸调节 pH 至5.0,检测波长:245 nm,运行电压23 kV,温度30℃。结果:红毛新碱在21.2～106.0μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9987),塔斯品碱在33.6～168.0μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9981);平均加样回收率(n=6):红毛新碱99.46%,塔斯品碱100.13%。结论:该方法简单、快速、准确,结果可靠,重现性好,可用于红毛七药材中红毛新碱和塔斯品碱的含量测定。

塔斯品碱对小鼠S180肉瘤的抑制作用及其机制探讨

目的:研究塔斯品碱对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用及其机制。方法:建立小鼠S180肉瘤动物模型,利用该模型观察塔斯品碱的体内抗肿瘤作用。通过免疫组织化学Elivision plus法检测肿瘤组织内微血管密度(MVD)及血管内皮细胞生长因子(VEGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),凋亡基因Bcl-2,Bax蛋白表达情况。结果:塔斯品碱对小鼠S180肉瘤具有抑制作用,瘤体血管内的VEGF,bFGF,Bcl-2,Bax蛋白表达逐渐下降,Bax/Bcl-2比值逐渐上升,存在良好的量效关系。结论:塔斯品碱能够抑制小鼠S180肉瘤的生长,其机制可能与降低瘤体组织内VEGF,bFGF,Bcl-2和Bax的蛋白表达,促进血管内皮细胞凋亡有关。

均匀设计法优化塔斯品碱脂质体处方

目的优化塔斯品碱脂质体的制备处方。方法采用薄膜挤压法制备塔斯品碱脂质体,根据均匀实验设计,以外观、脂质体粒径、复溶情况及包封率为指标综合评价。结果塔斯品碱脂质体的最佳制备处方为:蛋黄卵磷脂与胆固醇摩尔比50:50;水合介质用量10 mL;冻干保护剂选用蔗糖,用量为13%。所得塔斯品碱脂质体的平均粒径为186.4 nm,包封率为(88.29±4.2)%。结论由最佳处方制备的塔斯品碱脂质体,粒径均匀,包封率较高。

塔斯品碱诱导肺癌细胞A549凋亡的实验研究

目的:探讨塔斯品碱对肺癌细胞A549增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法:进行人肺腺癌细胞株A549细胞培养,不同浓度塔斯品碱干预,采用MTT法、流式细胞术、透射电镜等技术,研究不同浓度塔斯品碱对其增生、凋亡以及细胞周期的影响。结果:塔斯品碱可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,且呈时间剂量依赖性;FCM检测发现塔斯品碱阻滞细胞周期于S期;电镜下可见塔斯品碱能够诱导细胞出现核固缩、细胞核内染色质凝聚和凋亡小体等凋亡现象。结论:塔斯品碱有抗肿瘤和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。

塔斯品碱对体外培养成纤维细胞自分泌生长因子的影响

目的探讨塔斯品碱盐酸盐(TA)对成纤维细胞作用及促进伤口愈合的机制。方法体外培养L929成纤维细胞,经不同质量浓度塔斯品碱盐酸盐(0.05,0.1,0.2,0.4和0.5 μg·mL-1)作用后,以及加入0.4 μg·mL-1塔斯品碱盐酸盐作用不同时间(24,48和72 h)后,采用ELISA测定其自分泌转化生长因子-β1(TGF-β1)及表皮生长因子(EGF)的变化规律。结果塔斯品碱盐酸盐可促进成纤维细胞自分泌TGF-β1和EGF,且随质量浓度的增大,作用时间的延长而增强。结论塔斯品碱盐酸盐可促进TGF-β1和EGF的自分泌,促进成纤维细胞及炎性细胞的趋化性,促进细胞外基质的沉积,促进创面愈合。

内酯开环塔斯品碱香豆素酯衍生荧光化合物的合成及其抗癌活性

以异香草醛为原料,经溴代、苄基保护、氧化、Ulmman反应和还原等6步反应合成了塔斯品碱内酯开环衍生物(化合物8)。通过在其结构中分别引入含有2种不同取代基的香豆素衍生物,设计、合成了2个新型荧光性的内酯开环塔斯品碱香豆素酯衍生物(化合物9a和9b)。产物结构经IR、1H NMR和MS进行了表征。同时,对产物的荧光特性及其对乳腺肿瘤细胞增殖的抑制活性进行了初步测定。

塔斯品碱对A549细胞MMP-2与MMP-9表达的影响

目的:探讨塔斯品碱对A549细胞基质金属蛋白酶MMP-2、-9表达的影响,阐明塔斯品碱抑制肿瘤血管生成的作用机制。方法:采用免疫细胞化学SABC法和RT-PCR法检测MMP-2和MMP9在A549细胞中的表达。结果:塔斯品碱对A549细胞中MMP-2、-9蛋白及其mRNA的表达均显示一定的抑制作用并有剂量依赖关系(P<0.05)。结论:塔斯品碱抑制A549细胞中与血管生成密切相关的基质金属蛋白酶MMP-2、-9的表达,有可能用于肿瘤抗血管治疗。

塔斯品碱在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究

目的研究塔斯品碱在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法用Caco-2细胞单层模型研究塔斯品碱的双向转运,考察时间、药物质量浓度对塔斯品碱吸收的影响。采用高效液相色谱法检测塔斯品碱的质量浓度,计算其表观渗透系数(Papp)。结果塔斯品碱在Caco-2细胞模型中,从单层细胞层顶端到基底端的转运与基底端到顶端的转运大致相同。结论塔斯品碱在Caco-2细胞模型中的吸收主要是被动转运。

新型塔斯品碱衍生物HMQ-T-B10诱导人结肠癌细胞LoVo凋亡作用及机制研究

探讨塔斯品碱衍生物HMQ-T-B10对人结肠癌LoVo细胞生长的影响及其诱导细胞凋亡的可能作用机制。采用MTT法、细胞克隆形成实验、Hoechst染色法、流式细胞术法检测低(2μmol/L)、中(4μmol/L)、高(8μmol/L)3种浓度HMQ-T-B10对LoVo细胞株增殖及凋亡的影响;Western-Blot法检测3种浓度HMQ-T-B10对Bcl-2、Mcl-1、Bax、Cyto-C、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-7蛋白表达水平的影响。MTT法结果显示HMQ-T-B10能明显抑制LoVo细胞的增殖,其半数抑制浓度(IC_(50))值为(7.9±1.1)μmol/L。细胞克隆形成实验表明3种浓度的HMQ-T-B10均可剂量依赖性抑制LoVo细胞增殖,Hoechst染色及流式细胞术显示HMQ-T-B10可剂量依赖性诱导LoVo细胞凋亡。Western-Blot结果显示4μmol/L及8μmol/L HMQ-T-B10可显著下调Bcl-2蛋白表达并增加Cyto-C表达,3种浓度的HMQ-T-B10均可显著抑制Mcl-1蛋白表达并升高Bax及Cleaved caspase-7表达,8μmol/L HMQ-T-B10可显著性增加Cleaved caspase-3表达。HMQ-T-B10可抑制LoVo细胞增殖,可能通过Bcl-2/Caspase通路诱导其凋亡。

塔斯品碱衍生物TasD1-6对肝癌Hep3B细胞生长的抑制作用研究

目的考察塔斯品碱衍生物Tas D1-6对肝癌细胞株Hep3B、Hep G2和BEL7402的生长抑制作用及其作用机制。方法应用MTT法和实时细胞分析(RTCA)技术检测Tas D1-6对Hep3B、Hep G2和BEL7402细胞增殖的影响,筛选敏感株后采用结晶紫染色进行细胞形态学观察,根据Annexin V FITC/PI双染法和Hoechst 33258染色法考察Tas D1-6对细胞凋亡的影响,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 MTT法和RTCA结果均表明Tas D1-6能明显抑制Hep3B细胞的增殖,MTT检测其半数抑制浓度(IC50)值为(11.3±1.6)μmol/L,确定后续给药浓度分别为3、6、12μmol/L;形态学观察结果表明Tas D1-6高浓度下能明显抑制Hep3B细胞增殖,且细胞皱缩,形态发生明显变化;Annexin V FITC/PI双染法和Hoechst 33258染色法均表明Tas D1-6可诱导细胞发生凋亡,且呈剂量依赖性;Western blotting结果表明Tas D1-6可上调p53和促凋亡蛋白Bax表达,并下调抑凋亡蛋白Mcl-1表达;流式细胞仪检测细胞周期表明Tas D1-6可将Hep3B细胞阻滞于G1期。结论 Tas D1-6可抑制肝癌细胞增殖,其对Hep3B细胞作用最为显著,其作用机制可能为通过上调p53和促凋亡蛋白Bax,下调抑凋亡蛋白Mcl-1诱导细胞凋亡的产生,同时将细胞周期阻滞于G_1期,抑制细胞增殖。