犬睾丸塞尔托利氏细胞瘤病例

病犬为设得兰绵羊公犬,8岁,体重10.9千克,临床主要表现为呕吐,流涎,精神不振,食欲废绝,腹部皮肤下垂、脱毛、色素沉集,乳房、乳头肿大,隐睾,持续血便,血小板减少,血液凝固时间延长,X线检查和触诊发现腹腔内有两个拳头大的肿瘤,实施切除术;术中发现切口处及接触处有出血现象,结肠及肠系膜有出血斑;术后持续发生血便、贫血,死亡后肿瘤经病理学检查,诊断为伴有精母细胞瘤的塞尔托利氏细胞瘤.

鸡的塞尔托利氏细胞样颗粒膜细胞瘤

日本学者发现90日龄雌性肉鸡,卵巢部位有一灰黄色肿瘤,表面有点状出血,切面无结构,质地 柔软,卵巢未发育,输卵管发育良好。病理组织学检查,肿瘤组织呈蜂窝状结构和睾丸样结构(类似塞尔托利氏细胞),瘤细胞呈圆柱形或纺锤形,有伊红着染的大的细胞质,核呈圆形或椭圆形,散见核分裂像。睾丸样的构造和蜂窝状结构部的肿瘤细胞PAS染色为阴性,渡银染色可见嗜银纤维增生,嗜银纤维包围一个或数个肿瘤细胞。瘤组织附近可见正常卵巢组织和卵泡。

卵巢Sertoli-Leydig细胞瘤的影像表现(附3例报道及文献复习)

目的探讨卵巢Sertoli-Leydig细胞瘤的影像表现及临床特征,以提高对该肿瘤的认识及诊断水平。材料与方法搜集经病理证实的3例卵巢SertoliLeydig细胞瘤的CT、MRI影像资料,观察病变的影像学特征,并分析病变的影像学特征与预后的关系。结果 3例患者(17岁,71岁,58岁)共发现3个肿瘤,其中2例位于左侧卵巢,1例位于右侧卵巢,病变于CT、MRI均表现为边界清楚的实性或囊实性肿块,实性部分于T2WI呈等或稍高信号,囊性部分多位于实性部分内部,呈T2WI高信号,DWI病变呈高信号。增强扫描,病变实性部分呈明显强化。3例患者中有2例雄激素水平升高,临床呈男性化表现。结论卵巢Sertoli-Leydig细胞瘤有一定的影像学特征,若发现卵巢实性或以实性成分为主的囊实性肿瘤,且实性成分于T2WI呈等或稍高信号时,结合患者临床病史,应考虑到该肿瘤的诊断。

Sertoli细胞与成人胰岛细胞共同培养的研究

目的观察塞尔托利(Sertoli)细胞对体外培养的成人胰岛细胞形态、存活率及功能的影响。方法胰腺、睾丸取自志愿捐赠的成年男性尸体多器官供者,共12例。分离纯化后的成人胰岛细胞分为单独培养组和共同培养组,单独培养组取成人胰岛细胞单独培养,共同培养组为成人胰岛细胞+Sertoli细胞共同培养,均在RPMI1640培养液培养14d,采用倒置相差显微镜观察胰岛细胞形态,比较两组的胰岛细胞存活率、胰岛素分泌量和胰岛素刺激指数。结果培养14d后,共同培养组胰岛细胞存活率为(90±3)%,较单独培养组的(57±4)%明显提高(P<0.01),胰岛细胞的形态亦较单独培养组完整。共同培养组胰岛细胞始终对葡萄糖刺激保持较高的敏感度,而单独培养组胰岛细胞对葡萄糖刺激的敏感度随时间的延长明显降低(P<0.05)。培养14d后,共同培养组的胰岛素分泌量为(249±12)mIU/L、胰岛素刺激指数为8.15±0.64,而单独培养组则分别为(47±7)mIU/L和1.68±0.34,两组比较差异有统计学意义(均为P<0.01)。结论成人胰岛细胞与Sertoli细胞共同培养可以提高胰岛细胞的存活率,改善胰岛细胞的功能。

大鼠FasL阳性Sertoli细胞的分离与鉴定

目的分离鉴定Sertoli细胞,并检测其FasL的表达。方法取雄性Wistar大鼠睾丸,分离Sertoli细胞。培养72h,用多种方法进行形态学观察,做透射电镜进行形态学鉴定,免疫组化检测FasL的表达情况。结果所获得的Sertoli细胞占细胞总数的90%以上,细胞培养72h后FasL仍然高表达。结论本研究分离的Sertoli细胞可以用于细胞联合移植,发挥免疫豁免作用。

婴儿卵巢Sertoli细胞瘤1例及文献复习

卵巢Sertoli细胞瘤是一种极其罕见的性索-间质来源性肿瘤,约占卵巢肿瘤的0.02%。本文回顾了在昆明市儿童医院就诊的1例婴儿卵巢中-低分化Sertoli细胞瘤的临床与病理资料,并结合国内外文献,总结该疾病的临床表现及治疗经验。

睾丸支持细胞的研究现状及应用前景

目的:综合分析睾丸支持细胞的研究动态及意义。资料来源:应用计算机检索Pubmed1995-01/2006-02有关睾丸支持细胞研究的文章,检索词为"sertolicell,application,transplantation"等,限定语言种类为英文。同时检索中国期刊网全文数据库1995-01/2006-02有关睾丸支持细胞研究的文章,检索词为"睾丸支持细胞,应用,移植",并限定语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选择与睾丸支持细胞研究进展及应用前景相关的文章,筛选与以上要求无明显关系的文章以及重复性研究。同一领域的文献则选择近5年来在权威刊物上发表的文章。资料提炼:共收集到57篇文献,其中32篇符合要求。排除25篇,为重复性文章。资料综合:由于睾丸支持细胞具有分泌多种营养因子和免疫豁免功能,睾丸支持细胞已成为细胞培养技术、组织工程及器官移植领域的研究热点之一,在临床移植领域中有良好的应用前景。结论:睾丸支持细胞为器官移植、帕金森病及糖尿病等疾病的治疗提供了新的治疗途径,虽然还有许多问题尚需解决,但对睾丸支持细胞的研究已经取得了一系列可喜的成果,在临床应用中具有良好的应用前景,也将会给人类临床事业的发展作出巨大贡献。

猪胰岛与大鼠睾丸支持细胞共同移植对糖尿病大鼠胰岛生长的影响

目的 研究胰岛异种移植的方法。 方法 用SD大鼠睾丸支持细胞 (Sertoli细胞 )与新生猪胰岛样细胞团 (ICCs)共同培养后进行异种移植。 结果 对照组胰岛细胞存活率及存活时间分别为 (63 .6%± 4.2 %和 3 .4d± 1.2d) ,较共同培养组 (87.2 %± 2 .7%和 13 .5d± 4.6d)显著为低(P <0 .0 1) ;对照组大部分胰岛细胞超微结构破坏 ,而共同培养组胰岛细胞超微结构基本正常 ;对照组胰岛素 2 4h累积分泌量和对葡萄糖刺激的反应性下降 ,共同培养组胰岛素分泌量始终处于高水平状态 (P <0 .0 1)。 结论 猪胰岛细胞与Sertoli细胞共同培养移植可以促进胰岛生长 。

睾丸支持细胞对异基因T淋巴细胞的毒性作用

目的:分析睾丸支持细胞(塞尔托利氏细胞)对异基因T淋巴的细胞毒性作用。方法:实验于2006-01/07在解放军广州军区武汉总医院实验科完成。睾丸支持细胞取材于二三周龄SPF级Wistar雄性大鼠,由湖北省实验动物中心提供(许可证号:SCXK(鄂)-2003-005)。T淋巴细胞取材于体质量为200-250g的SPF级SD雄性大鼠脾脏,由湖北省实验动物中心提供(许可证号:SCXK(鄂)-2003-005)。将Wistar大鼠睾丸支持细胞与异基因SD大鼠T淋巴细胞共同培养。按睾丸支持细胞含量将实验分6组:对照组(0个睾丸支持细胞+DMEM/F12培养基100μL)、睾丸支持细胞1×103组(100μL)、睾丸支持细胞1×104组(100μL)、睾丸支持细胞1×105组(100μL)、睾丸支持细胞1×106组(100μL)及FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组(经0.2μg抗FasL单克隆抗体封闭过的睾丸支持细胞1×106,100μL),每组均加1×105T淋巴细胞,6复孔培养48h,应用噻唑蓝比色法测定睾丸支持细胞对T淋巴细胞的毒性作用,用酶标仪于570nm处测各孔吸光度(A值),细胞毒性百分比(%)=(对照组A值-试验孔A值)/对照组A值×100%。结果:睾丸支持细胞1×103组、睾丸支持细胞1×104组、睾丸支持细胞1×105组及睾丸支持细胞1×106组对T淋巴细胞的细胞毒性百分比显著高于对照组、FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组(8.75%,20.37%,65.07%,62.96%;0,3.85%,P<0.01);睾丸支持细胞1×103组-睾丸支持细胞1×105组随睾丸支持细胞数量增加,对T淋巴细胞的毒性作用也明显增加,当睾丸支持细胞数增加至1×105,杀伤作用的增加不再显著。FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:睾丸支持细胞对异基因T淋巴细胞有明显毒性作用,随着睾丸支持细胞增加,对异基因T淋巴细胞的抑制和杀伤作用也越大;但是当睾丸支持细胞达到一定数量后,其毒性作用不再增加;这种作用也可以被抗FasL单克隆抗体阻断。表明睾丸支持细胞FasL的表达是发挥免疫豁免作用的主要作用途径。

哺乳动物血睾屏障相关细胞连接及连接蛋白的研究进展

在雄性哺乳动物的睾丸中,紧密连接是血睾屏障中的主要结构,为相邻Sertoli细胞之间的一种联系,并与基部外胞质特殊结构和细胞桥粒连接共同存在。血睾屏障在生理上将生精上皮分为两个腔室:基底小室和近腔小室。基底小室内主要有精原细胞和早期精母细胞,而近腔小室有精子发生过程中各个阶段的生精细胞。前细线期精母细胞为了能够进入近腔小室必须穿过血睾屏障,该过程涉及多种分子以及相关的信号传导通路。分析目前与血睾屏障相关的细胞连接及连接蛋白的研究结果,进一步探讨这些细胞连接及连接蛋白对前细线期精母细胞穿越血睾屏障过程的作用。

The Effect of Proteins From Defined Stages of Seminiferous Tubules on Secretory Function of Sertoli Cell in Rats

The influence of the proteins secreted by defined stages of seminiferous tubules of rat on the production of total protein and transferrin secreted by Sertoli cell of 10 days' rat was investigated in the bicameral chamber system. The results indicated that the proteins secreted by stage Ⅱ-Ⅵ Ⅶ-Ⅷ,Ⅸ-Ⅻ，ⅩⅢ-Ⅰ of seminiferous tubules stimulated the production of total protein secreted by Sertoli ceils by an increase of 290±117%, 253±59%. 268±27%, 290±25% (X±SD) respectively. The autoradiography either from electrophoresis of(^35S)-methionine labeled total protein or transferrin seereted by Sertoli cells exhibited the stimulatory, effect from defined stage of serainiferous tubules. Most de novo proteins synthesized by Sertoli cells were secreted into the apical chamber. However, no significant differenee in stimulatory effeet from different stages of seminiferous tubules has been observed.

青春期前大鼠睾丸缺血损伤后血清抑制素B及其βB亚基mRNA在塞尔托利细胞内表达变化

目的评价血清抑制素B水平在反映青春发育期前睾丸缺血损伤程度及塞尔托利细胞功能改变中的作用。方法雄性25d龄Wistar大鼠共90只随机分为对照组和单侧、双侧精索血管结扎组(简称缺血组)。对照组只在手术进入腹腔后轻提睾丸;缺血组则予高位结扎切断双侧(双侧组)或右侧(单侧组)精索血管。在术后第1、3、5、7、9d(每小组各6只)取静脉血,采用ELISA法测定血清抑制素B;剖腹切取双侧睾丸行常规组织学检查观察形态组织学改变;并通过原位杂交技术观察抑制素βB亚基mRNA在睾丸塞尔托利细胞内的表达情况。结果随着缺血时间的延长,血清抑制素B水平逐渐下降。缺血单侧组(91.79±23.65)pg/ml和双侧组(78.17±19.22)pg/ml明显低于对照组(166.13±10.76)pg/ml(P<0.01),差异有显著性意义。组织学变化在缺血组主要表现为术后早期曲精细管内的部分生殖细胞及塞尔托利细胞与基底膜分离;随着缺血时间的延长,曲细精管内生殖细胞层数逐渐减少。在严重萎缩睾丸内仅存有形态不一的塞尔托利细胞(唯塞尔托利细胞征)。原位杂交结果显示抑制素βB亚单位mRNA在塞尔托利细胞中随术后缺血时间延长,表达强度逐渐降低;在唯塞尔托利细胞综合征中,几乎未见阳性表达。结论青春发育期前的大鼠睾丸缺血损伤后,血清抑制素B水平能反映睾丸曲细精管内塞尔托利细胞和生殖上皮受损状态和功能缺失情况。

模拟微重力下三维培养的大鼠甲状旁腺细胞与睾丸塞尔托利细胞联合移植

目的观察模拟微重力条件下三维培养的大鼠甲状旁腺细胞与同系睾丸塞尔托利细胞联合移植后的分泌功能，以及移植物存活情况。方法取SD大鼠的甲状旁腺细胞，分别进行常规培养和模拟微重力条件下三维培养；取SD大鼠睾丸塞尔托利细胞，进行常规培养。取Wistar大鼠作为移植受者，制备甲状旁腺功能低下症模型。用随机数字表法将建模成功的Wistar大鼠分为3组：A组大鼠接受常规培养的单纯甲状旁腺细胞移植；B组大鼠接受常规培养的甲状旁腺细胞联合睾丸塞尔托利细胞移植；C组大鼠接受经三维培养的甲状旁腺细胞联合睾丸塞尔托利细胞移植。移植后观察各组移植物的存活情况，并检测移植物的细胞成分，淋巴细胞凋亡及甲状旁腺细胞功能。结果A组、B组和C组移植物的存活时间依次延长，分别为（17．3±1．6）d、（43．2±2．4）d和（52．5±1．5）d，3组间两两比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。C组移植物内甲状旁腺细胞已长人支架材料内部，并与之紧密结合，甲状旁腺激素分泌旺盛；还可见大量散在的、Fas配体表达阳性的睾丸塞尔托利细胞；在移植物与肾实质交界处可见大量淋巴细胞凋亡。结论模拟微重力条件下三维培养技术与具有免疫赦免作用的睾丸sertoli细胞共同应用于甲状旁腺细胞移植，可以提高移植后甲状旁腺细胞的分泌功能，延长移植物的存活时间。

腐植酸诱导塞尔托利细胞系-TM4生长迟缓

腐植酸是一种深褐色荧光的有机高分子复合物,它是由酚、醛、酸组成。在大鼠腹腔注射腐植酸能诱导大鼠睾丸形态的变化,包括曲细精管的退化,塞尔托利细胞和精原细胞数目的减少和精子细胞的丢失。有人认为塞尔托利细胞可能与睾丸萎缩的过程有关。在本研究中,使用了老鼠的塞尔托利细胞系-TM4研究腐植酸对塞尔托利细胞的影响和腐植酸诱导睾丸萎缩的机制。发现在与腐植酸接触的第1天至第4天TM4细胞生长减慢。使用流式细胞仪分析腐植酸处理的TM4细胞中DNA的含量,发现TM4细胞没有G_1的次高峰,这表明TM4细胞对程序性细胞的死亡没有作用。然而,大部分的TM4细胞在G_1期处于静止状态。在腐植酸处理4天后,处于G_1期的TM4细胞的比例从36%增加到84%。腐植酸处理的TM4细胞的Western免疫印记分析表明:当p27^(kipl)蛋白的表达增加时细胞周期蛋白D_1的表达在减少。研究结果表明,腐植酸诱导睾丸萎缩与对塞尔托利细胞的生长受到抑制有一定的关系。这个模型可能对环境试剂导致的睾丸萎缩的研究有作用。

人类精液中一氧化氮和转铁蛋白含量的关系

目的 :探讨一氧化氮 (NO)与人精液转铁蛋白 (Tf)含量及精子质量的关系 .方法 :参照WHO标准 ,进行精液常规分析 .无菌取大鼠睾丸 ,经胶原酶和透明质酸酶消化 ,分离出纯度较高的支持细胞 ,用Ham sF 1 2培养液培养 .实验组加入NO供体硝普钠 (SNP) ,同对照组一起培养 4 8h取上清液 ,采用镀铜镉还原荧光法检测NO代谢产物硝酸盐 (NO-3 ) .用免疫散射比浊法检测Tf含量 .结果 :1 30例不育者精液Tf含量、精子密度和活动率随NO含量升高而降低 ,呈显著的负相关 (P <0 .0 1 ) ,大鼠睾丸支持细胞悬液Tf含量正常生育组[(2 2± 9) μmol/L]显著高于不育组 [(1 3± 8) μmol/L ,P <0 .0 1 ].结论 :精液Tf含量测定有助于评价精子质量 ,可作为反映支持细胞功能的特异指标 ,NO对精子运动能力及支持细胞产生和分泌Tf有抑制作用 ,这对研究不育症的机制有重要价值 .

新生猪Sertoli细胞与大鼠胰岛细胞联合移植延长大鼠移植胰岛的存活时间

目的探讨新生猪Sertoli细胞（NPSCs）与大鼠胰岛细胞联合移植对延长大鼠同种异体胰岛移植物存活时间的作用及其主要的机制。方法将糖尿病Wistar大鼠随机分为3组。（1）单纯移植组（n=6）：单纯移植150（1个胰岛当量（IEQ）的SD大鼠胰岛细胞至糖尿病大鼠的左肾包膜下；（2）分侧移植组（n=4）：将1500个IEQ的SD大鼠胰岛细胞移植到糖尿病大鼠的左肾包膜下，同时将1×10^7个NPSCs移植到糖尿病大鼠的右肾包膜下；（3）混合移植组（n=6）：将1500个IEQ的SD大鼠胰岛细胞和1×10^7个NPSCs混合移植到糖尿病大鼠的左肾包膜下。移植后每天监测各组的血糖水平，以了解移植物的存活时间；移植后发生排斥反应时获取移植物标本，行HE和免疫组织化学染色，观察移植物中CD3^＋T淋巴细胞浸润情况及细胞凋亡调控基因（Bcl-2）和血红素氧合酶1（HO-1）基因的表达水平。结果单纯移植组、分侧移植组和混合移植组胰岛移植物存活时间分别为（5．7±1．0）d、（5．3±0．5）d和（16．3±1．4）d，混合移植组存活时间较其他两组显著延长（P〈0．05）。单纯移植组移植区可见大量淋巴细胞浸润，主要为CD3^＋T淋巴细胞；混合移植组移植区Bcl-2基因呈高表达；各组移植区HO-1基因均有表达，差异不明显。结论NPSCs与大鼠胰岛细胞联合移植可以延长大鼠同种异体胰岛移植物的存活时间，其机制可能与NPSCs抑制移植物淋巴细胞浸润、促进Bcl-2基因高表达的局部免疫调节作用有关。

大鼠骨髓间充质干细胞与Sertoli细胞体外共培育的免疫负调作用

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)与Sertoli细胞(SCs)体外共培育时对免疫应答的调节作用,为两者联合应用于移植修复提供线索。方法用密度梯度离心法分离SD大鼠脾脏单个核细胞(简称L),羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记细胞后,将其加入按照不同的比例混合的BMSCs与SCs共培育体系,设立L细胞为对照组,L+刀豆蛋白A(ConA)、BMSCs+L+ConA、SCs+L+ConA、BMSCs+SCs+L+ConA四大组细胞为实验组。培养4 d,通过流式细胞术分析T淋巴细胞的增殖情况。结果单个核细胞培养体系中加入ConA可以显著刺激T淋巴细胞增殖。BMSCs、SCs均可抑制淋巴细胞增殖,抑制作用随加入BMSCs和SCs的比例增加而增强,BMSCs和SCs混合培养后对淋巴细胞增殖抑制作用进一步增强,且在某些浓度时呈现协同性。结论 BMSCs与SCs体外共培育时可增强免疫抑制作用。

猪睾丸Sertoli细胞的分离、培养及其免疫豁免相关细胞因子的检测

目的探讨猪睾丸Sermli细胞分离、培养的方法，并对其体外培养的状态及免疫豁免相关细胞因子的表达进行检测，为Sertoli细胞用于移植提供依据。方法无菌条件下取10～15日龄的湖北白猪睾丸，剥离睾丸白膜及表面血管，剪碎后用2．0g／LV型胶原酶以及2．5g／L胰蛋白酶和0．5g／L DNaseI消化（两步法）分离Sertoli细胞，于37℃、含体积分数为5％CO2的培养箱中培养。采用倒置相差显微镜观察细胞形态，透射电镜进行超微结构鉴定，流式细胞仪检测细胞体外活率，逆转录聚合酶链反应检测Sertoli细胞sox9、FasL、转化生长因子B（TGF-β）及Clusterin的表达，四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞的活性。结果猪睾丸经分离、培养，所获得的Sertoli细胞纯度达90％以上。培养后的细胞凋亡率为（2．61±0．96）％，死亡率为（2．12±0．74）％；培养的Sertoli细胞稳定表达sox9、TGF-β、Clusterin，而FasL表达较弱。体外培养的Sertoli细胞可以保持良好活性达21d。结论采用V型胶原酶以及胰蛋白酶和DNaseI两步法消化分离可获得大量高纯度的Sertoli细胞，该细胞在培养过程中能够稳定表达FasL、TGF-β和Clusterin分子。

RNA干扰PPT1基因表达对小鼠Sertoli细胞功能的影响

目的：探索PPT1基因在小鼠支持细胞（Sertoli细胞）中的功能。方法采用RNA干扰技术下调小鼠Sertoli细胞株TM4中PPT1基因的表达，并运用MTS法检测细胞活力，Annexin V染色结合流式细胞技术检测细胞凋亡，Mito Tracker Red染料染色细胞，并在激光共聚焦显微镜下观察线粒体且测得荧光强度以检测线粒体活性，透射电镜观察线粒体超微结构变化。结果抑制小鼠TM4细胞中PPT1基因的表达可降低其细胞活力和线粒体活性，导致线粒体超微结构发生改变，并增加细胞凋亡率。结论 PPT1基因对维持小鼠Sertoli细胞的功能具有重要作用。