墓头回水提液凉血止血作用及机制评价研究

目的:通过体内实验研究及网络药理学探究墓头回水提液对干酵母联合无水乙醇所致血热出血大鼠模型和正常小鼠凝血系统的作用,探究墓头回水提液的止血作用及其作用机制。方法:断尾法和毛细管法观察小鼠出血和凝血时间。自动凝血分析仪检测干酵母所致血热出血大鼠凝血四项指标;全自动血液细胞分析仪检测干酵母所致血热出血大鼠血常规指标;通过网络药理学筛选墓头回止血的活性成分、作用靶点及通路,并通过分子对接进行验证。结果:墓头回水提液5、10 g/kg组均能显著缩短小鼠出血时间(P<0.05或P<0.01),墓头回水提液5、10、20 g/kg组均能显著缩短小鼠凝血时间(P<0.01);与正常对照组比较,模型对照组大鼠的凝血酶原时间(PT)、凝血活酶时间(APTT)和血浆凝血酶时间(TT)均显著延长(P<0.01),纤维蛋白原(FIB)均显著增加(P<0.01),血小板计数(PLT)和血小板压积(PCT)显著减少(P<0.05或P<0.01),平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血红蛋白量(HGB)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞计数(RBC)、红细胞压积(HCT)均明显增加(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组比较,墓头回水提液5、10 g/kg组均能减少血热出血大鼠TT、APTT、PT和FIB(P<0.05或P<0.01);除墓头回5 g/kg大鼠PDW有所减少但无统计学意义以外,各剂量墓头回水提液均能显著增加血热出血大鼠PLT和PCT(P<0.01),减少MPV和PDW(P<0.01);墓头回水提液10、20 g/kg组均能降低血热出血大鼠RBC、HCT、MCV、HGB(P<0.01),墓头回5 g/kg能显著降低RBC和HCT(P<0.01)。通过网络药理学筛选出邻苯二甲酸二异丁酯、槲皮素、邻苯二甲酸二丁酯、顺式十八烯-9-酸、反亚油酸甲酯、β-古芸烯和α-古芸烯7个墓头回止血活性成分,STAT3、MMP9、MPO、CCR5和JAK25个止血核心靶点,涉及神经活性配体-受体相互作用信号通道、钙信号通路、花生四烯酸代谢信号通道、趋化因子信号通路、HIF-1信号通道等10条信号通道;分子对接结果显示7个活性成分均能与5个核心靶点自发结合。结论:墓头回水提液具有凉血止血作用,能够同时激活内源性和外源性凝血途径,其机制涉及神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、花生四烯酸代谢等信号通道的相关蛋白表达,活性成分主要有槲皮素等。