人促卵泡激素光激化学发光免疫分析法的建立及性能评价

目的利用光激化学发光免疫分析法(AlphaLISA)建立人促卵泡激素(hFSH)的快速检测试剂。方法使用2株配对的hFSH单克隆抗体,一株hFSH单克隆抗体用生物素标记,另一株hFSH单克隆抗体包被于受体微球上,与包被有链霉亲合素的供体微球共同构成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果自制hFSH试剂分析敏感性和功能敏感性分别为0.09和0.12 U/L,线性测量范围为0.09～192.00 U/L,试剂的分析内变异系数(CV)和分析间CV分别为4.2%～7.1%和7.5%～8.3%,均<10.0%,与人黄体生成素(hLH)、人促甲状腺素(hTSH)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)的交叉率分别为0.16%、0.08%和0.02%。100份临床血清样本用本试剂与西门子Immulite 2000促卵泡生成激素化学发光(CLIA)检测试剂盒检测,其相关系数为0.979(P<0.001)。结论自制hFSH AlphaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,可用于临床血清样本hFSH浓度的测定。

LiCA800光激化学发光法在人类免疫缺陷病毒血清抗体检测中的评价

目的评价LiCA800光激化学发光法在人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体检测中的准确性。方法回顾性分析2021年5—10月于苏州大学附属第三医院送检的临床血液标本中,符合检测要求并通过LiCA800光激化学发光法检测HIV抗体,结果S/CO≥1的标本53例。以疾控中心反馈的WB结果为HIV抗体检测结果的金标准,分析LiCA800的检测结果。结果LiCA800检测有反应性结果(S/CO≥1)样本53例,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和RT方法进行初筛试验:两种初筛方法均为阴性24例,对其余29例初筛呈反应性的样本进行WB抗体确证试验,WB条带阴性6例(11.32%),WB条带不确定7例(13.21%),WB条带阳性16例(30.19%)。WB条带阳性样本的S/CO值在30.31~223.97,S/CO值>100的病例占比75.00%。WB条带阳性样本S/CO值明显高于WB条带不确定、WB结果阴性和ELISA和RT法初筛阴性标本S/CO值,差异有统计学意义(P<0.05)。WB阳性结果中,gp160、gp120、p24出现率为100.00%,p55出现率较最低为43.75%。结论LiCA800检测血清HIV抗体时阳性符合率不高,仅为30.19%,S/CO值与血清HIV抗体WB确证结果相关,实验人员应对S/CO值和WB结果予以关注,避免纠纷。

光激化学发光免疫分析法检测孕妇血清W物质

目的建立定量检测孕妇血清W物质的光激化学发光免疫分析(LICIA)法并进行方法学评价。方法包被有W物质(T2S类似物)的感光微粒与兔抗W物质抗体连接,与生物素化羊抗兔IgG及包被有链霉亲合素的发光微粒构成检测体系;对LICIA法反应条件进行探索并进行方法学评价。结果 LICIA法的检测灵敏度为5 pg/mL,线性范围为5～10 000 pg/mL;批内、批间变异系数(CV)均<10%;回收率为89.2%～108.1%;T3S<10 ng/mL、T4S<100 ng/mL、Hb<5.0 g/L、T-Bil<500mol/L、TG<3 mmol/L对LICIA法检测W物质无显著干扰;LICIA法稳定性较好;与放射免疫分析(RIA)法比较,LICIA法检测W物质差异无统计学意义(t=1.012,P>0.05)。检测孕早期孕妇血清W物质的参考值上限为847 pg/mL。结论 LICIA法检测W物质灵敏且简便易行,可用于孕妇血清W物质的检测。

β-人绒毛膜促性腺激素光激化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种检测人血清β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）浓度的光激化学发光免疫分析方法。方法采用2株针对不同抗原表位的抗β-HCG抗体,其中一株抗体用来包被发光微粒,另一株抗体标记生物素,以双抗体夹心法检测人血清中的β-HCG浓度,并与Beckman-Coulter公司试剂（化学发光法）进行比较。结果发光微粒浓度为100μg/mL、生物素标记抗体浓度为7μg/mL时,检测范围为0~1 000 mIU/mL,灵敏度为0.16 mIU/mL,平均回收率为100.3%,批内变异系数（CV）为0.80%~3.99%,批间CV为2.25%,与TSH、FSH和LH的交叉反应率低,稳定性较好,与化学发光法的符合率好（r=0.99）。结论光激化学发光免疫分析方法测定β-HCG具有较高灵敏度、精密度和准确性,与化学发光法的符合率较好,适用于临床测定。

光激化学发光免疫分析法测定低浓度HBsAg效果评价

目的比较光激化学发光免疫分析法(LICA)与电化学发光免疫分析法(ECLIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及胶体金法测定低浓度HBsAg,并评价LICA测定HBsAg的临床效果。方法以广西壮族自治区临检中心提供的临界值控制品作为质控,经ECLIA筛选的HBsAg标本吸光度与仪器所给临界值(Cut-off)的比值(COI)为1～50(低浓度)的临床标本80例(观察组),HBsAg COI<1的临床标本30例(对照组),分别使用LICA、ECLIA、ELISA及金标法测定。结果 LICA测定HBsAg的灵敏度为0.25ng/mL,平均批内变异系数(CV)为8.6%;ECLIA法测定HBsAg的灵敏度为0.12ng/mL,CV为7.8%;ELISA法测HBsAg灵敏度为0.50ng/mL,CV为11.9%,胶体金法灵敏度1ng/mL。观察组标本中LICA检出阳性为79例,ELISA检出阳性为75例,胶体金法检出阳性为20例。结论 LICA检测HBsAg与ECLIA有很高的符合率,在低浓度的HBsAg检测中,可最大程度地减少假阴性结果,且该法可进行自动化定量检测,适于临床使用。

胃蛋白酶原光激化学发光免疫测定方法的建立

目的建立一种检测人血清胃蛋白酶原浓度的光激化学发光免疫测定方法。方法采用双抗体夹心法建立检测人血清中胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅱ浓度的方法,评估其分析灵敏度、回收率和批内精密度,并与雅培（化学发光法）进行比较。结果胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ的分析灵敏度分别为0.8ng/mL和0.6ng/mL,回收率分别为100.3%、106.5%,批内变异系数（CV）为0.93%~4.1%、1.2%~4.3%,与化学发光法的相关性较好（r=0.99）。结论该方法测定胃蛋白酶原具有较高灵敏度、精密度和准确性,适用于临床。方法建立后可进一步进行长期稳定性试验。

光激化学发光法与电化学发光免疫法检测甲胎蛋白的一致性

目的:参照美国国家实验室标准委员会(NCCLS)的EP9-A2文件,对测定血清中甲胎蛋白(AFP)含量的电化学发光免疫法和光激化学发光法进行方法学比对试验,比较二者结果的一致性。方法:收集40例患者血清标本,以罗氏Cobas601电化学发光免疫分析仪为比较仪器(x),博阳LICA光激化学发光免疫分析仪为实验仪器(y),同时检测血清中AFP的含量;分析2种生化仪测定结果之间的相关性和2种方法检测结果的一致性。结果:2种仪器测定的结果相关性良好(r=0.9925),预期偏倚可以接受。结论:在严格按操作规程进行检测的前提下,2种方法测定结果基本一致,其偏差可为临床所接受。当同一实验室同一检验项目存在2种以上检测方法时,应进行方法比对,判断其临床可接受性,以保证检验结果的可比性。

Lica光激化学发光免疫分析系统检测乙肝两对半的性能评价

目的对Lica光激化学发光免疫分析系统主要性能进行初步评价。方法以美国临床实验室标准化协会(CLSI)制定的评价标准,通过一系列实验设计,对Lica光激化学发光免疫分析系统进行乙肝"两对半"检测的精密度、准确度、线性、分析灵敏度等进行评价。结果 Lica光激化学发光免疫分析系统进行乙肝"两对半"检测,批内不精密度变异系数在1.49%～4.40%,总不精密度在2.15%～6.22%,回收试验的回收率为96.32%～106.54%,HbsAg、Anti-HBs、HBeAg、Anti-HBe、Anti-HBc的分析灵敏度分别为0.04ng/mL、1.72mIU/mL、0.09PEIU/mL、0.31PEIU/mL、0.02PEIU/mL。结论 Lica光激化学发光免疫分析系统各方面性能良好,测定样本快速、准确、精密可靠,能适应医院日常样本的检测需要。

小鼠肿瘤坏死因子-α光激化学发光免疫法的建立

采用光激化学发光免疫法（LICA）建立快速定量检测小鼠mTNF-α。用两株mTNF-α不同表位的单克隆抗体（McAb）,一株McAb包被发光微粒,另一株为生物素化McAb,两者与链亲和素包被的感光微粒构建双McAb夹心法mT-NF-α-LICA。数据采用双对数函数处理程序。结果表明：方法灵敏度为0.5ng/L;ED20、ED50、ED80分别为14.96 ng/L、77.5 ng/L、401.0 ng/L;可测范围为0.5~1200 ng/L;批内和批间CV分别为7.8%和10.5%;平均回收率为100.3%。mTNF-α-LICA与ELISA有较好的相关性。本文建立的mTNF-α-LICA法是mTNF-α检测中灵敏的方法,该方法稳定性好,具有很好的应用前景。

光激化学发光均相免疫分析的应用动态

光激化学发光均相免疫分析(LOCI)技术,是一种新型的免疫纳米传感技术,它结合了激光技术、化学发光传感技术与免疫分析技术的优点,并以其简单快速、灵敏度高、特异性强、适用面广等优势引起越来越多的关注,成为当今免疫传感检测领域的前沿热点.LOCI技术有效避免了传统免疫分析方法中的洗脱、分离等繁琐步骤,降低了交叉反应的可能性以及背景噪音的影响,显著提高了分析效率和检测灵敏度.LOCI技术在诸多领域的高通量检测和筛选中得到了广泛应用,因此,极有必要对LOCI技术的相关应用及发展趋势进行总结,从而加速其推广应用.本文综述了LOCI技术在生物医学、药物学、食品安全以及检验检疫等领域的应用状况,并根据各自学科发展的不同特点探索了其发展趋势.

均相光激化学发光免疫分析技术的研究进展

均相光激化学发光免疫分析技术是一种基于纳米微珠的化学发光的新型技术,其具有更高的敏感度、均一性、背景低,且不用洗涤及样本需求量少等特点。该技术可用于生物标志物、激酶及抗原抗体的检测,蛋白:蛋白相互作用的检测,高通量分析的研究及疾病诊断等方面。优化和发展均相光激化学发光免疫分析技术将会在更多研究领域中得到应用。

光激化学发光分析法定性检测血清CMV-IgM抗体

目的:建立一种基于光激化学发光分析(LiCA)技术定性检测血清CMV-IgM抗体的新方法。方法:利用CMV抗原包被的发光微球,生物素标记的鼠抗人IgM抗体以及链霉亲和素包被的感光微球共同构成完整的分析体系,优化反应缓冲液、抗原抗体工作浓度和待检血清稀释比例,并进行方法学评价和临床结果比对。结果:本方法的批内和批间变异系数为5.3%~6.1%和6.9%~9.8%,均小于10%;ROC曲线分析显示,曲线下面积为0.997,灵敏度为100%,特异度为98.9%;在100例血清样本的检测中,本方法与LIAISON检测结果符合率为95.0%。结论:成功建立了LiCA间接法反应模式定性检测CMV-IgM抗体的方法。该检测方法操作简单、快速、灵敏度高,有潜在的临床应用前景。

酶联免疫吸附法与光激化学发光法检测乙肝病毒的临床价值对比

目的探讨酶联免疫吸附法与光激化学发光法检测乙型肝炎(乙肝)病毒的临床应用价值。方法84例疑似乙肝患者,均抽取清晨空腹静脉血,分为2份,分别进行光激化学发光法和酶联免疫吸附法检测。对比两种检验方法的乙肝两对半指标[乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(HBeAb)、乙肝核心抗体(HBcAb)]阳性检出率及对乙肝的诊断效果。结果光激化学发光法的HBsAg、HBsAb和HBeAg阳性检出率分别为86.90%、86.90%、85.71%,显著高于酶联免疫吸附法的75.00%、73.81%、72.62%,差异有统计学意义(P<0.05)。光激化学发光法的“小三阳”检出率60.71%显著高于酶联免疫吸附法的45.24%,差异有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA显示:阳性72例、阴性12例。光激化学发光法对乙肝的诊断特异度91.67%高于酶联免疫吸附法的75.00%,但差异无统计学意义(P>0.05);光激化学发光法对乙肝的诊断敏感度98.61%、准确性97.62%显著高于酶联免疫吸附法的87.50%、85.71%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论光激化学发光法用于乙肝病毒血清学检验的敏感度和准确性较高,可作为首选的检验方法,必要时可两者联合,进一步提升诊断准确性。

光激化学发光法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志的性能评价

目的评价光激化学发光法(LICA)对乙型肝炎病毒(HBV)感染血清学标志的检测性能。方法用乙型肝炎表面抗原(HBsAg)定值血清和质控品对LICA检测HBV感染血清学标志的试验性能进行评价;以化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)为比较对象,对LICA检测453例临床样本HBV感染5项血清学标志的结果进行分析。结果 LICA对HBsAg的检测下限(LLD)为0.23 ng/mL,批内的总变异系数(CV)<5%,平均回收率为99.88%。LICA与CMIA检测HBsAg、乙型肝炎表面抗体(抗HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(抗HBe)的阳性率差异无统计学意义(P>0.05),2种方法的符合率>95%,而LICA检测乙型肝炎核心抗体(抗HBc)阳性率低于CMIA,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LICA检测HBV感染HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe 4项血清学标志具有良好的检测性能,与CMIA有很高的符合率。

化学发光成像分析法定量检测人尿液中β-人绒毛膜促性腺激素

采用一种灵敏、简单的方法, 可实现对β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)的高通量检测.本法具有酶联免疫吸附(ELISA)法的特异性、增强化学发光法(ECL)的高灵敏度及化学发光成像分析高样品通量等优点.冷却电感耦合 (CCD)成像系统被用于检测增强化学发光信号.发光强度值与β-HCG在12.5 ～ 400 mIU/mL范围内呈线性关系;检出限为4 mIU/mL.测定了妇女尿液中β-HCG的含量,分析结果与医院的诊断结果一致.

光激化学发光法定量测定AFP和CEA的性能评价

目的探讨光激化学发光法(LiCA)和酶促化学发光法测定甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)结果的可比性,评估LiCA AFP和CEA检测试剂的分析性能。方法依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)和《体外诊断试剂临床研究指导原则》,评估LiCA AFP和CEA检测试剂的分析灵敏度、不精密度和线性;分别用2种系统定量检测血清AFP(406例)和CEA(442例),对结果进行统计学分析。结果 LiCA AFP和CEA检测试剂分析灵敏度分别为0.112和0.05 ng/mL;批内变异系数(CV)分别为4.32%和4.56%;批间CV分别为5.89%和6.47%;线性范围分别为2.6～950.2和1.2～862.6 ng/mL。与酶促化学发光法测定AFP和CEA的相关系数(r)均>0.99。结论 LiCA检测AFP和CEA具有较好的分析性能,与酶促化学发光法高度相关,能满足临床检测要求。

酶联免疫吸附检验与光激化学发光法检测乙肝病毒的临床对比研究

目的探讨酶联免疫吸附检验与光激化学发光法检测乙肝病毒的临床对比。方法选取该院2018年12月—2019年12月收治的100例乙肝病毒携带者,均经临床确诊,两组乙肝病毒携带者均按照常规方式获取标本,检测患者乙肝病毒标记物(乙肝核心抗体、乙肝e抗原、乙肝e抗体、乙肝表面抗体、乙肝表面抗原),根据不同检测分为两组,对照组(n=50)接受酶联免疫吸附法检测,观察组(n=50)接受光激化学发光法检测,对比两种检测方法的乙肝病毒标记物阳性概率和检测灵敏度。结果观察组乙肝核心抗体、乙肝e抗原、乙肝e抗体、乙肝表面抗体、乙肝表面抗原阳性率分别为70.00%、42.00%、44.00%、24.00%、64.00%,对照组分别为66.00%、42.00%、30.00%、12.00%、50.00%。两组乙肝病毒携带者的乙肝病毒标记物中乙肝核心抗体、乙肝e抗原阳性概率对比差异无统计学意义(χ^(2)=0.368、0.000,P>0.05);观察组乙肝病毒标记物中乙肝e抗体、乙肝表面抗体、乙肝表面抗原阳性概率明显高于对照组,差异有统计学意义(χ^(2)=4.204、4.878、3.998,P<0.05)。光激化学发光法的检测最低浓度为0.05 IU/mL;酶联免疫吸附法的检测最低浓度为0.14 IU/mL;0.05 IU/mL<0.14 IU/mL,说明光激化学发光法的检测灵敏度更高。结论两种检测方法均具有一定价值,但光激化学发光法的检测准确度和灵敏度更高,有利于动态监测乙型肝炎。

HIV抗原抗体光激化学发光法联合检测试剂的评价

目的评价北京科美生物技术有限公司的人类免疫缺陷病毒抗原抗体(HIV Ag/Ab)检测试剂盒(光激化学发光法)与已上市HIV抗原抗体检测试剂盒的一致性以及血清转化灵敏度。方法收集363例血清样本,包括HIV患者样本、健康人员样本、以及类风湿因子样本、孕妇样本、ANA阳性样本、乙型病毒性肝炎和丙型病毒性肝炎患者等干扰样本;另外有10套HIV血清转换盘共120份血清样本。检测采用LiCA 500自动光激化学发光检测仪和相应的检测试剂、校准品和质控品以及检测参数,定性检测血清HIV1 p24抗原和HIV1/2抗体并评价与参比试剂结果一致性和血清转化灵敏度。结果北京科美生物技术有限公司的人类免疫缺陷病毒抗原抗体(HIVAg/Ab)检测试剂盒(光激化学发光法)血清样本检测结果和参比试剂检测结果具有较好一致性;评估试剂的血清转化灵敏度同参比试剂相当。结论北京科美生物技术有限公司的人类免疫缺陷病毒抗原抗体(HIVAg/Ab)检测试剂盒(光激化学发光法)与已上市同品种试剂盒检测结果具有一致性,血清转换灵敏度较高,有利于筛查HIV早期感染,为临床HIV早期诊断提供有效的实验室诊断依据。

光激化学发光法检测甲胎蛋白实验性能评价

目的评价光激化学发光法(LICA)检测血清甲胎蛋白(AFP)的实验性能。方法利用定标品和质控品对LICA检测AFP的实验性能进行评价;利用358份含不同浓度AFP的血清标本对LICA和罗氏电化学发光免疫法进行方法学对比评价。结果LICA检测AFP的分析敏感性为0.25μg/L,在平均浓度10和500μg/L的检测总变异系数(CV)均<5%。与参比方法所测AFP浓度差异无统计学意义,2种方法所测结果的对数值呈直线相关(r=0.966,P<0.001),对标本阴、阳性分类差异无统计学意义(P=0.824),有较好的一致性(Kappa=0.886,P<0.001)。结论LICA检测AFP具有良好的检测性能;与罗氏电化学发光法具有类似的实验性能。

血清肌钙蛋白-I均相化学发光免疫检测方法的建立

目的：采用光激化学发光免疫分析技术建立血清肌钙蛋白-I（cTnI）均相免疫检测方法。方法：使用兔抗人cTnI多克隆抗体包被受体微球,羊抗人cTnI单克隆抗体进行生物素化与链霉亲和素包被的供体微球共同构成检测试剂,优化反应条件并进行方法学评价。结果：本方法快速、敏感,检测时间为17.5 min;分析灵敏度为0.045 ng/mL,功能灵敏度为0.053 ng/mL;回收率为104.96%～108.21%;批内精密度为3.88%～5.53%,批间精密度为7.60%～8.75%;特异性分析中各种内源性物质的干扰率均〈10%;本方法测得的cTnI正常参考值上限为1.05 ng/mL。与直接化学发光检测法具有良好的相关性（r2=0.979）。结论：本研究建立的方法能够用于定量检测血清cTnI,该方法具有均相、免清洗分离等优点,为临床提供了一个便捷高敏的检测平台。