核富集转录体1、肌细胞增强因子2D在子宫内膜癌中的表达及其与预后的相关性

目的研究子宫内膜癌(EC)中核富集转录体1(NEAT1)、肌细胞增强因子2D(MEF2D)的表达,探讨两者之间的相关性。方法以2016年3月至2018年3月延安市人民医院妇产科91例手术治疗EC患者的资料为研究对象。利用荧光定量PCR检测组织中NEAT1及MEF2D mRNA的表达,利用免疫组化检测组织MEF2D蛋白表达。以NEAT1、MEF2D mRNA相对表达量的平均数1.752、1.514为界,分别分为NEAT1高表达组(n=46)、NEAT1低表达组(n=45),MEF2D高表达组(n=44)、MEF2D低表达组(n=47)。Pearson相关分析NEAT1和MEF2D mRNA的相关性。Kaplan-Meier生存分析不同NEAT1、MEF2D mRNA表达与患者预后的关系。单因素及多因素COX回归分析影响EC患者预后的因素。结果荧光定量PCR结果EC癌组织中NEAT1、MEF2D mRNA的表达均高于癌旁组织(P<0.05)。EC癌组织中MEF2D蛋白阳性表达主要位于细胞核。EC癌组织中MEF2D蛋白阳性表达率为73.60%(67/91)明显高于癌旁组织21.98%(20/91)(χ^(2)=48.643,P=0.000)。不同肿瘤分期的EC患者NEAT1、MEF2D mRNA表达差异有统计学意义(均P<0.05)。NEAT1与MEF2D mRNA的表达呈显著正相关(r=0.591,P=0.000)。NEAT1高表达组和低表达组的3年总体生存率(OS)分别为71.74%(33/46)、88.89%(40/45);MEF2D mRNA高表达组和低表达组的3年总体生存率(OS)分别为70.50%(31/44)、89.36%(42/47),Kaplan-Meier分析(log-rank检验)表明:高NEAT1、MEF2D mRNA表达组生存率明显低于低NEAT1、MEF2D mRNA表达组患者(χ^(2)=5.318、5.420,P=0.021、0.018)。肿瘤FIGO分期Ⅱ期、NEAT1高表达、MEF2D mRNA高表达是影响EC患者不良预后的独立危险因素。结论EC中NEAT1、MEF2D表达升高,两者表达呈正相关,协同参与促进EC的疾病进展,是新的EC预后判断的肿瘤标志物。

白细胞介素17通过上调肌细胞增强因子2C促进PC9细胞程序性死亡配体1表达

目的研究白细胞介素17(IL-17)促进PC9细胞表达程序性死亡配体1(PD⁃L1)的分子调控机制。方法用IL-1750μg·L^(-1)刺激PC9细胞0(细胞对照),1,2,3,6和12 h,用逆转录PCR(RT-PCR)和Western印迹法分别检测PC9细胞肌细胞增强因子2C(MEF2C)和PD-L1 mRNA及蛋白表达。构建pIRES2⁃MEF2C及其对照质粒pIRES2-EGFP和MEF2C短发夹RNA(shMEF2C)及其对照质粒shCTR,分别转染PC9细胞48 h(shRNA质粒转染后加IL-17刺激3 h),即分pIRES2-EGFP和pIRES2-MEF2C组或shCTR,shCTR+IL-17和shMEF2C-4+IL-17组,同上检测MEF2C和PD-L1 mRNA及蛋白表达。另构建PD-L1启动子全长(pGL3-PD-L1-FL)和不同截短的pGL3-PD-L1-1~pGL3-PD-L1-4质粒。先将pGL3-PDL1-FL与pIRES2⁃MEF2C共转染PC9细胞48 h或与shMEF2C-4共转染48 h加IL-17刺激3 h,用双荧光素酶报告基因实验测定PD-L1-FL启动子活性(分组同上)。此外,将对照pGL3-basic和pGL3-PD-L1-FL及pGL3-PD-L1-1~pGL3-PD-L1-4截短启动子质粒分别转染PC9细胞48 h再加IL-17刺激3 h或与pIRES2⁃MEF2C共转染PC9细胞后再测PD-L1启动子活性。结果与细胞对照组相比,IL-17刺激2 h,MEF2C和PD-L1 mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),3 h达峰(P<0.01)。与pIRES2⁃EGFP组相比,pIRES2⁃MEF2C组PD-L1 mRNA(P<0.05)和蛋白表达(P<0.01)及启动子活性(P<0.05)明显升高;与shCTR组相比,shCTR+IL-17组上述指标均显著升高(P<0.05,P<0.01),但shMEF2C-4+IL-17组则明显低于shCTR+IL-17组(P<0.01)。此外,与pGL3-basic组比,IL-17刺激或过表达MEF2C可增加pGL3-PD-L1-FL,pGL3-PD-L1-1,pGL3-PD-L1-2和pGL3-PD-L1-3启动子活性(P<0.05,P<0.01),但pGL3-PD-L1-3和pGL3-PD-L1-4启动子活性则显著低于pGL3-PD-L1-FL组(P<0.05,P<0.01),提示PD-L1启动子这2个区域含有MEF2C的结合部位。结论IL-17通过上调MEF2C表达促进PC9细胞PD-L1表达,其机制可能与MEF2C结合PD-L1启动子的相应部位有关。

人肝再生增强因子融合蛋白表达载体的构建

目的 :克隆人肝再生增强因子的cDNA并构建谷胱甘肽巯基转移酶 -人肝再生增强因子 (GST -hALR)融合蛋白表达载体。方法 :根据人肝再生增强因子核苷酸序列 ,从人胎肝cDNA文库中扩增到hALRcDNA ,亚克隆于pUC18载体 ,核苷酸序列测定证实为hALR ;将hALRcDNA亚克隆于 pGEX - 4T质粒 ,转化大肠杆菌JM10 9,筛选阳性克隆酶切鉴定。结果 :重组阳性克隆经酶切鉴定证实重组片段已正确插入相应酶切位点 ,片段与PCR扩增片段大小相同 ,碱基序列正确。结论 :GST -hALR融合蛋白表达载体的成功构建 。

心肌细胞增强因子2家族与冠状动脉粥样硬化性心脏病的关系

心肌细胞增强因子2家族的缺失、突变和表达异常可以促进冠状动脉粥样硬化的发生和发展,因而与冠状动脉粥样硬化性心脏病关系密切,近年来对于心肌细胞增强因子2A的研究较多,发现心肌细胞增强因子2A的突变可以诱发冠心病的发生,本文就近年的研究作一综述。

重组人肝再生增强因子在体外能刺激HTC肝癌细胞DNA合成

在成功克隆人肝再生增强因子（hALR）CDNA的基础上，本研究将人ALR编码区cDNA亚克隆于真核瞬间表达质粒pCDNAⅠ，构建了真核表达质粒pCDNAⅠ－hALR，转染cos-7细胞后，表达产物生物活性检测表明：真核表达的hALR在体外能刺激HTC肝癌细胞增殖，这一体外活性的确定为重组人ALR的纯化提供了简洁、可靠的检测方法。

重组人肝再生增强因子可预防免疫损伤性肝纤维化的形成

观察重组人肝再生增强因子（ｒｈＡＬＲ）对免疫损伤性肝纤维化的预防作用。建立人血白蛋白免疫损伤性大鼠肝纤维化模型。在造模的同时予ｒｈＡＬＲ腹腔注射。观察大鼠存活率，血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ水平，肝组织胶原蛋白含量及肝脏病理学改变。结果：ｒｈＡＬＲ可提高人血白蛋白免疫损伤性肝纤维化大鼠存活率；降低肝纤维化大鼠的ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ水平；病理检查显示ｒｈＡＬＲ有明显减轻大鼠肝纤维化形成的作用；肝组织胶原蛋白含量的测定也表明ｒｈＡＬＲ预防组大鼠肝组织胶原蛋白含量明显低于模型组及阴性对照组。结论：重组人肝再生增强因子可预防免疫损伤性肝纤维化的形成。

肝部分切除后肝再生增强因子信使核糖核酸(mRNA)表达增强

肝再生增强因子（ALR）是一种新的肝增殖刺激因子。本研究选择70％肝部分切除（PH）大鼠为模型，观察了PH后残存肝组织胞浆液促肝细胞增殖活性与ALR特异mRNA表达动态变化的关系。发现正常肝组织几无ALRmRNA表达，其肝胞质液也无促肝细胞增殖活性；70％PH后12h肝组织AthmRNA表达明显增加，并于术后24h达高峰，肝胞质液活性也于术后24h内达高峰，这种mRNA表达一效应的时间关系提示：ALR可能是一种重要的生理性肝再生调控因子。

阻断肝再生增强因子的表达对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用

背景与目的:前期研究中已发现人肝再生增强因子(humanaugmenterofliverregeneration,hALR)在肝癌细胞中呈高表达,在正常肝细胞中几乎不表达,并在体外能刺激肝癌细胞株增殖,而对正常肝细胞无影响。本研究通过运用hALR的siRNA和hALR单克隆抗体阻断人肝癌细胞株HepG2表达,探讨hALR对细胞增殖的影响。方法:设计、构建siRNA表达质粒pSIALR-A及其阴性对照质粒pSIALR-B。将构建的pSIALR-A和pSIALR-B分别转染HepG2细胞。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,以计算转染效率。转染48h后,免疫细胞化学及RT-PCR法检测HepG2细胞中hALR的表达。用3H-TdR掺入法检测hALR的siRNA和特异性单克隆抗体对HepG2细胞增殖的影响。结果:HepG2细胞中有hALR的表达。成功构建了针对hALR基因编码区的siRNA表达质粒pSIALR-A。转染入细胞后发现,pSIALR-A能明显抑制hALR的表达(mRNA的表达量减少83%),而随机序列的siRNA却无此作用。hALR的siRNA在体外能显著抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,分别转染质粒pSIALR-A和pSIALR-B后HepG2细胞的cpm值为67687±6548和104807±5713(P<0.05)。抗hALR单克隆抗体特异性地阻断hALR的作用后,可部分抑制肿瘤细胞自主性生长(P<0.05)。结论:HepG2细胞高表达hALR;针对hALR的siRNA能显著、特异性地抑制hALR表达,进而抑制HepG2细胞的生长。抗hALR单克隆抗体也能部分抑制HepG2细胞自主性生长。

IPTG诱导浓度对重组人肝再生增强因子基因表达的影响

以人肝再生增强因子(humanaugmenterofliverregeneration,hALR)基因与含有T7启动子的融合表达载体pET28a(+)相连的重组子(pET-A)作为研究对象,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG作为诱导剂,分析比较不同IPTG诱导浓度对于表达产物的影响,以确定最佳的IPTG诱导浓度。结果表明,当IPTG终浓度为1.0mmol·L-1时,hALR表达量最大。这为IPTG作为诱导剂最终应用于重组基因工程药物的工业化生产提供了可靠的实验依据。

重组大鼠再生增强因子救治急性肝衰竭的实验研究

肝再生增强因子是一种新的肝细胞增殖刺激因子。在本实验利用我们自行表达的重组大鼠肝再生增强因子，观察了其对四氯化碳诱导的急性肝功能衰竭大鼠的救治作用。初步结果表明：重组肝再生增强因子能够显著提高中毒大鼠的存活率，降低中毒大鼠外周血ＡＬＴ，ＡＳＴ的水平。提示重组肝再生增强因子可能应用临床治疗严重肝病。

肝再生增强因子对大鼠脾单个核细胞增殖及IL-2产生能力的影响

目的:通过体外实验探讨rALR对脾脏单个核细胞是否具有直接的免疫调控作用和作用特点。方法:以3H-TdR掺入法检测脾脏单个核细胞在不同处理情况下的增殖状况:①不同剂量的rALR与5μg/ml ConA同时加入;②5μg/ml ConA预刺激脾脏单个核细胞10和32小时后,再加入30μg/ml rALR;③30μg/ml rALR预处理脾脏单个核细胞至30小时,再加5μg/ml ConA刺激。以环孢霉素A作为阳性对照,以转空质粒的酵母表达上清提取物作为阴性对照。以放免法检测培养上清中IL-2分泌情况。结果:不同剂量的rALR与ConA同时加入时,能以剂量依赖方式明显抑制ConA对脾脏单个核细胞的促增殖作用。ConA预刺激脾脏单个核细胞10、32小时后,再给予30μg/ml rALR仍可明显抑制脾脏单个核细胞的增殖,但用30μg/ml rALR预处理脾脏单个核细胞至30小时,并不影响脾脏单个核细胞对ConA刺激的反应能力。ConA+rALR(30μg/ml)组的IL-2分泌在24小时明显低于ConA组。结论:rALR对ConA活化的脾脏单个核细胞增殖有明显的抑制作用,而对未活化的脾脏单个核细胞则无明显影响,提示未经抗原激活的免疫细胞可能不表达ALR受体。

阴极金属微凸起电场增强因子数值模拟

利用有限元方法对无穷大平板二极管中阴极表面金属微凸起的微观电场增强因子进行了计算研究,给出了微凸起微观电场增强因子随凸起参数的变化规律,拟合得到了微观电场增强因子的简单实用的经验表达式,并与文献中的近似公式进行了比较。模拟的结果表明,对锥状球头微凸起的电场增强因子,文献给出的近似公式误差较大,应避免使用。

人肝再生增强因子在毕赤酵母中的表达

目的从人胎肝cDNA文库中克隆出人肝再生增强因子(human augmenter of liver,regeneration,hALR),并实现hALR在毕赤酵母中的表达方法利用PCR从胎肝cDNA文库中扩增出与文献报道序列一致的ALR cDNA,亚克隆到pPIC9K的α因子下游并置于AOX1启动子控制下,构建成含有ALR基因的酵母表达载体转化酵母细胞后,挑选出能在浓度为4.0g·L^(-1)的G418平板上生长的His^+的重组酵母,利用PCR鉴定是否插入了hALR基因.重组酵母的表达在甲醇培养中进行,并利用SDS-PAGE分析hALR的表达.结果 PCR从胎肝cDNA文库中扩增出与文献报道序列一致的ALR cDNA,实现了其在酵母中的整和表达结论 hALR在毕赤酵母中的表达是可行的.

填料吸收塔内乙醇胺溶液吸收CO_2增强因子

醇胺溶液吸收CO2是沼气提纯领域重要的研究课题。在实验填料吸收塔中,以NaOH水溶液吸收低浓度CO2的实验结果估算了填料的有效相界面积,建立了乙醇胺(MEA)溶液吸收高浓度CO2增强因子的数学模型,并从数学模型和实验的角度研究了MEA浓度、进气流率、CO2浓度等工艺参数对MEA吸收CO2增强因子的影响。结果表明,增强因子数学模型计算值与实验值能够良好吻合,MEA吸收CO2化学反应增强因子随进气CO2浓度增加而降低,随MEA浓度增加而增加,随进气流率增加而减小。

肝再生增强因子的cDNA克隆、表达及表达产物的生物活性研究

以肝部分切除后再生肝组织为起始材料，利用RT-PCR扩增出大鼠肝再生增强因子（ALR），亚克隆于pGEM-T载体，核苷酸序列测定证实为大鼠ALR；将ALRcDNA亚克隆于pBV220质粒，构建了原核表达栽体，并获高效表达菌株，特异表达蛋白占细菌总蛋白的15％，原核表达的ALR在体外缺乏促进大鼠原代培养肝细胞及SMMC-7721肝癌细胞DNA合成的活性，但在体内1／3肝部分切除模型中可刺激肝细胞DNA合成；ALR在生物学活性方面与肝脏刺激物（HSS）存在一定差别，ALR和HSS应是两种不同的活性因子．ALR还具有促肝损伤修复的作用，对其深入研究可能为临床治疗严重肝病提供有效的药物.

同种肝细胞移植细胞排斥反应机理及肝再生增强因子的作用

目的探讨同种异体肝细胞腹腔内移植治疗急性肝衰竭大鼠的细胞排斥反应机制及肝再生增强因子(ALR)的免疫作用。方法采用D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝衰竭(ALF),诱导后24h,随机分成5组。Ⅰ组:注射生理盐水;Ⅱ组:单纯移植肝细胞;Ⅲ组:肝细胞移植联合CsA;Ⅳ组:肝细胞移植联合ALR;Ⅴ组:注射ALR;肝细胞和药物均腹腔内注射。观察大鼠的存活率、组织学改变、移植肝细胞存活情况,检测大网膜CD4、CD8、CD68。结果Ⅳ组存活率显著高于Ⅰ组(66.7%vs0%,P=0.001),余组间无差异。Ⅳ组移植肝细胞存活时间更长。d1-2大网膜CD68阳性率Ⅱ组高于Ⅰ、Ⅳ组;CD4、CD8阳性率Ⅰ、Ⅱ组均高于Ⅳ、Ⅴ组,且Ⅱ组CD4阳性率高于Ⅲ组。d14大网膜CD4、CD8、CD68阳性率各组间无差异,但Ⅳ组CD4、CD8、CD68阳性率d1-2均低于d14的,Ⅱ组CD68阳性率d1-2高于d14的。结论同种肝细胞腹腔内移植联合ALR能提高ALF大鼠的存活率,同种肝细胞移植能引起CD4、CD8、CD68介导的细胞免疫,ALR能有效的抑制同种异体细胞免疫,促进移植肝细胞存活和增殖。

大鼠肝再生增强因子基因组DNA的克隆化与序列分析

根据大鼠肝再生增强因子 (Augmenterofliverregeneration ,ALR)cDNA序列设计特异性引物 ,采用多聚酶链反应 (PCR)法自Wistar大鼠基因组DNA中扩增出大鼠ALR基因组DNA ,全长为 15 0 8nbp ,结构为 3个外显子和 2个内含子 ,外显子长度分别为 18bp、197bp和 16 3bp ,各编码 6个、6 4个和 5 5个氨基酸残基 ,长度与小鼠、人类ALR的外显子一致。

肝再生增强因子对外原性抗原引起机体免疫应答影响的研究

目的研究rALR对HBsAg及BSA免疫大鼠产生抗体、细胞因子和对脾脏细胞增殖的影响。方法甲醇诱导表达rALR,测定活性并进行以下研究。①rALR对HBsAg免疫的影响:实验分为:生理盐水、HBsAg20μg/只、HBsAg20μg+rALR100μg/kg、HBsAg20μg+rALR25μg/kg、HBsAg20μg+pPIC9K表达上清、HBsAg20μg+CsA10mg/kg,共6组;②rALR对BSA免疫的影响:实验分为:生理盐水、BSA25μg/只、BSA25μg+rALR100μg/kg、BSA25μg+pPIC9K表达上清、BSA25μg+CsA10mg/kg,共5组。以上均皮下注射免疫大鼠,1次/周×4次,ELISA检测血清中相应抗体、IL-2和IFN-γ。③rALR对大鼠脾细胞增殖的影响:Wistar大鼠先皮下注射HBsAg(20μg/只)1次,2周后处死,分离脾单核细胞,种板,再加HBsAg1μg/孔和/或相应处理因素(rALR、空质粒表达产物等),48h后加3H-TdR,12h后收集细胞,检测cpm值。结果rALR100μg/kg+HBsAg组的8只动物中,有2只出现抗HBs的抗体,空质粒对照组和单用HBs Ag组8只动物均出现抗HBs。rALR100μg/kg+BSA组的8只动物中,有3只出现抗BSA抗体,空质粒对照组和单用BSA组8只动物均出现抗BSA的抗体。rALR100μg/kg能明显抑制细胞因子IL-2及IFN-γ的产生。rALR4μg体外能明显抑制脾细胞的增殖。结论rALR能抑制HBsAg和BSA诱导大鼠产生相应抗体及IL-2、IFN-γ的产生;体外能抑制经体内致敏的脾细胞的增殖,说明rALR有免疫抑制作用。

肝再生增强因子研究进展

肝再生增强因子是新近克隆的蛋白质因子 ,能特异地刺激肝源细胞的增殖 ,并对CCl4 所引起的急性肝衰竭有救治作用。本文综述了肝再生增强因子的发现、基因克隆及组织分布等。目前已开始了该因子的基因工程产品研制 。

基于模拟电荷法的微间隙场增强因子研究

运动电极下的微间隙是国际电工委员会推荐安全火花试验装置(IEC-STA)短路火花放电体系的核心组成部分,也是研究装置短路放电特性、揭示短路放电机理的关键性难点.为研究其短路放电特性,运用扫描电镜对其电极进行了扫描分析,重构了最危险打火情形下的电极表面形貌模型.基于模拟电荷法建立了阴极表面场强的数学模型,并对传统模拟电荷法进行了改进,给出了其参数设置、算法流程及病态矩阵处理方法,并对场增强因子进行了数值计算.数值计算结果表明,对于给定的微凸起高度,场增强因子与微凸起密度并不成简单的单调关系,而是存在使场增强因子最大的微凸起密度;对于给定的微凸起密度,在电极间距较大的情况下,场增强因子随间距成单调递减关系,反之,则随间距的减小而增大.数值计算结果为IEC-STA短路放电特性研究奠定了基础.