增强型RACE技术克隆辐射诱导小鼠肠上皮新基因RS1

目的 在获得了辐射诱导小鼠肠上皮新基因RS1EST序列的基础上获得全长cDNA。方法 RT PCR方法对RS1基因进行表达谱分析 ,找到表达丰度较高的组织提取总RNA作为模板 ,应用增强RACE技术即结合生物素探针富集靶cDNA的方法克隆RS1的cDNA末端。结果 克隆到RS1片段 3′端约 2kb的序列。该序列 5′端包含已知的RS1片段 ,3′端具有明显的polyA加尾信号 ,有编码区的终止密码子。明确了RS1的正、负链及其蛋白编码方向 ,为RS15′端的克隆提供了必要信息。结论 结果与本实验的设计完全一致 ,说明这一方法对从表达丰度低 ,难以设计最佳基因特异性引物的EST序列克隆其对应的全长cDNA是可行的 ,同时为下一步研究RS1在小鼠肠上皮辐射应激反应中的作用和被辐射诱导表达的调控模式奠定了基础。