腺苷预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响

目的 观察腺苷预处理(AP)对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响,探讨AP对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用机制。方法 将36只健康雄性Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注(IR)组和AP组,每组12只。AP组大鼠术前3 d腹腔注射1.5 mg·kg^(-1)腺苷注射液,每日1次;假手术组和IR组大鼠术前3 d腹腔注射等量生理盐水,每日1次。IR组及AP组大鼠采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,并于栓塞2 h后拔出栓线恢复血供制备IR模型;假手术组大鼠不插入栓线,余处理同IR组及AP组。于再灌注24 h时,根据5分制神经行为学评分标准对3组大鼠进行神经功能缺损评分;然后,断头处死3组大鼠,取脑组织;应用苏木精-伊红染色法观察3组大鼠脑组织病理学改变,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测3组大鼠脑组织中CHOP mRNA相对表达量,免疫组织化学法检测3组大鼠脑组织中CHOP蛋白阳性表达情况,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测3组大鼠脑组织细胞凋亡情况。结果 3组大鼠神经功能缺损评分比较差异有统计学意义(F=157.923,P<0.05);IR组和AP组大鼠神经功能缺损评分显著高于假手术组(t=17.663、7.133,P<0.05),AP组大鼠神经功能缺损评分显著低于IR组(t=-10.530,P<0.05)。假手术组大鼠脑组织神经元形态结构正常,细胞核完整,间质无水肿;IR组大鼠脑组织神经元数目减少、细胞核溶解、出现空泡,间质水肿,组织疏松;AP组大鼠神经元损伤程度显著低于IR组。3组大鼠脑组织中CHOP mRNA相对表达量比较差异有统计学意义(F=2 989.751,P<0.05);IR组和AP组大鼠脑组织中CHOP mRNA相对表达量显著高于假手术组(t=75.514、23.502,P<0.05),AP组大鼠脑组织中CHOP mRNA相对表达量显著低于IR组(t=-52.171,P<0.05)。3组大鼠脑组织中CHOP蛋白阳性细胞表达率比较差异有统计学意义(F=2 257.096,P<0.05);IR组和AP组大鼠脑组织中CHOP蛋白阳性细胞表达率显著高于假手术组(t=65.927、21.744,P<0.05),AP组大鼠脑组织中CHOP蛋白阳性细胞表达率显著低于IR组(t=-44.183,P<0.05)。3组大鼠脑组织细胞凋亡率比较差异有统计学意义(F=1 519.372,P<0.05);IR组和AP组大鼠脑组织细胞凋亡率显著高于假手术组(t=5.512、2.693,P<0.05),AP组大鼠脑组织细胞凋亡率显著低于IR组(t=-2.818,P<0.05)。结论 AP可通过抑制CHOP的表达减轻脑缺血再灌注损伤。

CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白在高血压全脑缺血大鼠海马区的表达

目的观察血压正常大鼠和自发性高血压大鼠全脑缺血后海马区CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)的表达变化,探讨其在高血压加重脑缺血神经损伤中的作用。方法分别取血压正常大鼠和自发性高血压大鼠,应用改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注模型。分别在脑缺血6、24、48h应用HE染色观察海马区神经细胞形态变化、免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区CHOP表达;在48h应用八臂迷宫检测动物行为学的变化。结果与血压正常脑缺血组比较,高血压脑缺血组各时间点存活神经细胞数量减少,6h和24hCHOP表达增多,48h减少;八臂迷宫检测动物总错误次数、参考记忆错误次数和工作记忆错误次数增多。结论高血压可加重脑缺血后神经损伤,其机制与加重CHOP表达增加有关。

内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78及增强子结合蛋白同源蛋白在高血压大鼠全脑缺血海马区的表达变化

目的：观察血压正常大鼠和高血压大鼠全脑缺血再灌注后海马区CAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达变化，探讨内质网应激在高血压增加脑缺血再灌注神经易损性中的作用。方法：60只雄性血压正常Wistar-Kyoto（WKY）大鼠随机分为假手术组（Sham）和全脑缺血再灌注组（I／R）；另取30只雄性自发性高血压大鼠为高血压全脑缺血再灌注组（SHR＋I／R）。应用改良的Pulsineli 4血管阻断（4-VO）法制作全脑缺血再灌注模型。各组分别在术后6、24、48h，H-E染色观察海马区神经细胞形态变化；免疫组织化学和免疫印迹检测海马区CHOP、GRP78的表达；48h八臂迷宫检测动物行为学变化。结果：与Sham组比较，I／R组各时间点存活神经元数量降低；GRP78表达增高，24h达高峰CHOP表达增高，24h达高峰，高表达持续至48h；与I／R组比较，SHR＋IR组各时间点存活神经细胞数量降低GPR78表达6h增高，24、48h显著减少；6、24hCHOP表达增高，48h明显减少；八臂迷宫结果显示SHR＋I／R组与I／R组比较，各检测指标变化差异有统计学意义。结论：高血压可增加脑缺血再灌注神经易损性，与加重缺血再灌注后GRP78表达下降、CHOP活体表达增高有关。

内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白在甲亢性肌病中的作用

目的:探讨内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在甲亢性肌病中的作用。方法:选取2020年2月至2021年6月在南宁市第一人民医院初次诊断的急性甲亢性肌病患者21例,单纯甲亢患者30例,同时选取健康者25例作为正常对照组。比较3组血清促甲状腺素(TSH)、游离甲状腺素(FT_(4))、游离三碘甲状腺原氨酸(FT_(3))和促甲状腺受体抗体(TRAb)水平,提取外周静脉血RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PERK、CHOP mRNA的表达水平。结果:与单纯甲亢组比较,TRAb、FT_(4)、FT_(3)、PERK、CHOP mRNA水平在急性甲亢性肌病组中增高(P<0.01)。在急性甲亢性肌病中,TRAb与PERK、CHOP mRNA表达水平呈正相关关系(r=0.898,P<0.01;r=0.897,P<0.01)。结论:内质网应激PERK、CHOP可能在急性甲亢性肌病发病的过程中起着重要的作用,TRAb结合PERK、CHOP有利于早期判断急性甲亢性肌病。

右美托咪定对大鼠移植肝缺血／再灌注所致急性肺损伤中细胞凋亡及CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白的影响

目的探讨右美托咪定预处理对大鼠原位移植肝缺血／再灌注（I／R）所致急性肺损伤（ALI）中细胞凋亡及CCAAT增强子结合蛋白（C／EBP）同源蛋白（CHOP）的作用。方法选择雄性sD大鼠40只，按随机数字表法分为假手术组、I／R模型组、右美托咪定低剂量组和右美托咪定高剂量组，每组10只。采用二袖套法结扎并切断肝动脉，供体肝脏移植入后即可完全开放门静脉复制肝I／R模型；假手术组开腹后只游离肝周韧带，不进行其他特殊处理；右美托咪定低剂量组和高剂量组分别于I／R前1h静脉泵注右美托咪定2．5μg kg-1h-1和5．0μg kg-1h-1，1h内完成。实验结束后留取肺组织，检测肺组织湿／干质量（W／D）比值；光镜下观察肺组织病理学变化并进行肺泡损伤定量评估（IQA），电镜下观察肺组织超微结构变化；反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测CHOPmRNA表达水平；蛋白质免疫印迹法（WesternBlot）检测CHOP的蛋白表达水平；原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测肺组织细胞凋亡情况，并计算凋亡指数（AI）。结果与假手术组比较，I／R模型组肺w／D比值（4．94±0，84比2．29±0．54）、IQA[（40．52±5．15）％比（4．55±1．85）％]和AI[（36．57±5．85）％比（2．85±0．95）％]均明显升高（均P〈0．01）；光镜和电镜下均显示肺组织结构发生明显的损伤。与I／R模型组比较，右美托咪定低剂量组和右美托咪定高剂量组肺W／D比值（3．29±0．85，2．68±0．78比4．94±0．84）、IQA[（23．69±2．62）％，（15．86±3．61）％比（40．52±5．15）％J和AI[（25．73±3．71）％，（14．66±2．61）％比（36．57±5．85）％]均明显降低（均P〈O．01），光镜和电镜下可见肺组织结构损伤明显减轻。I／R模型组有大量肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞发生凋亡，而右美托咪定低剂量组和高剂量组细胞凋亡则明显减少。与假手术组比较，I／R模型组CHOPmRNA[吸光度（A）值：0．96±0．18比0．43±0．08]及蛋白（灰度值：2．79±0．74比1．02±0．27）表达水平均明显升高（均P〈0．01）。与I／R模型组比较，右美托咪定低剂量组和高剂量组CHOPmRNA（A值：0．69±0．13、0．56±0．12比0．96±0．18）及蛋白（灰度值：1．96±0．58、1．34±0．49比2．79±0．74）表达水平均明显降低，且以高剂量组的降低更显著（均P〈0．01）。结论右美托咪定对移植肝I／R肺组织具有保护作用，该作用可能与其抑制CHOP的活化、减少肺组织细胞凋亡有关。

CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白与钙联蛋白在内侧颞叶癫痫模型小鼠海马中的表达

目的观察CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及钙联蛋白(CNX)在内侧颞叶癫痫小鼠海马区域中表达的时间和空间分布。方法采用海人酸(KA)诱导内侧颞叶癫痫小鼠模型,免疫印迹和免疫荧光技术检测CHOP和CNX在急性期(12、24 h)小鼠海马CA3区的表达量及分布差异,并与注射PBS的正常小鼠进行对照。结果免疫印迹检测结果显示,KA注射后12 h小鼠海马中的CHOP(F=1.136,P=0.4069)和CNX表达量(F=2.378,P=0.2087)与对照组差异没有统计学意义,KA注射后24 h注射侧海马中的CHOP(F=8.510,P=0.0362)和CNX表达量(F=6.968,P=0.0497)明显高于对照组。免疫荧光结果显示,KA注射后12 h CHOP的表达主要集中于CA3区,注射后24 h在CA1和CA3区表达水平均升高;KA注射后24 h CHOP蛋白(F=24.480,P=0.0057)和CNX蛋白(F=7.149,P=0.0478)的表达量显著高于对照组。结论伴随着癫痫发作的产生,CHOP蛋白表达量上升,提示神经元内质网应激水平不断增加,可能需要更多CNX作为分子伴侣帮助更多未折叠蛋白完成折叠过程。

内质网应激及蛋白激酶R样内质网激酶/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白/门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12信号通路介导的细胞凋亡在糖尿病肾病发病机制中的作用研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病微血管并发症,主要表现为血糖升高、蛋白尿、肾功能下降,也是患者后期肾功能衰竭的主要原因。临床上主要通过控制血压和血糖水平来抑制DN的进展,但效果不佳。现有研究发现,内质网应激及其介导的细胞凋亡是引起DN的重要原因,蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)/门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)信号通路在其中发挥关键性作用,其中PERK是内质网应激启动的标志,CHOP是内质网应激由抗凋亡作用开始转为促凋亡作用的重要分子,caspase-12是内质网应激介导细胞凋亡的最终执行分子。本文就内质网应激及相关信号通路介导的细胞凋亡在DN发病机制中的作用进行综述。

Tribbles相关蛋白及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白在非酒精性脂肪肝中的表达变化

目的:对Tribbles相关蛋白3(Tribbles related protein 3,TRB3)及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)在高脂高糖饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)中的表达变化进行研究并探讨他们在NAFLD中的作用.方法:将30只Wistar大鼠随机分为正常组和NAFLD模型组,每组各15只.模型组大鼠采用高脂高糖饮食诱导NAFLD,正常组大鼠则给予普通饲料喂养,造模时间总计为16 wk.血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein,HDL)和低密度脂蛋白(lowdensity lipoprotein,LDL)的含量采用全自动生化分析仪进行检测;应用PCR技术对肝脏中TRB3及CHOP m RNA水平的改变进行检测;应用免疫组织化学技术对肝脏中TRB3及CHOP蛋白水平的改变进行检测;采用流式细胞仪检测细胞凋亡改变.结果:模型组大鼠血清中TC、TG和LDL含量较正常组大鼠显著升高(P<0.05),而HDL则明显低于正常组(P<0.05);与正常组相比,模型组大鼠肝脏中TRB3及CHOP m RNA水平均显著增加(P<0.05或P<0.01);免疫组织化学结果显示模型组大鼠肝脏中TRB3及CHOP蛋白表达水平较正常组大鼠显著升高(P<0.01);此外流式细胞仪对大鼠肝细胞凋亡进行检测发现,模型组大鼠肝细胞凋亡与正常组相比明显增多.结论:TRB3和CHOP在基因及蛋白水平表达上调可能与高脂高糖诱导的NAFLD的发生发展有关.

慢性间歇低氧大鼠肺泡上皮细胞CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达增强

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS）是呼吸科的一种常见慢性病,其对人体的多个系统都可能造成损害,如认知功能障碍、心脑血管疾病、糖尿病等,其特点为睡眠时反复发生的上气道部分或全部塌陷,导致呼吸暂停和（或）气流受限[1-4],使人体处于慢性间歇低氧（chronic intermittent hypoxia,CIH）状态。

促红细胞生成素对高氧脑损伤新生大鼠CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白及葡萄糖调节蛋白78表达的影响

[目的]探讨促红细胞生成素(EPO)对高氧脑损伤新生大鼠CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响.[方法]取足月新生Wistar大鼠随机分为正常对照组(FiO2为21%)、高氧组(FiO2高于85%)和高氧+EPO组(FiO2高于85%).将正常对照组新生大鼠置于室内空气中饲养,高氧组和高氧+EPO组大鼠置于FiO2高于85%的室内玻璃箱中饲养.实验第1 d起,高氧+EPO组大鼠每日腹腔注射给予EPO(800 U/kg),实验第1,3,7,14 d时测定各组大鼠脑组织湿/干质量(W/D)比值,采用蛋白免疫印记法检测脑组织中CHOP,GRP78蛋白表达水平.[结果]高氧组新生大鼠第1,3,7,14 d时的脑组织W/D值较正常对照组显著升高(P<0.05),高氧下暴露时间越长,W/D值升高越显著;高氧+EPO组新生大鼠脑组织含水量较高氧组显著降低(P<0.05).高氧组第1,3,7,14 d时的CHOP和GRP78蛋白表达水平较正常对照组显著升高(P<0.05),高氧+EPO组CHOP,GRP78蛋白表达水平较高氧组显著降低(P<0.05).[结论] EPO可缓解高氧引起的新生大鼠脑水肿,对高氧脑损伤具有神经保护作用,其机制认为可能与下调CHOP和GRP78蛋白表达有关系.

靶向小干扰RNA对小鼠肺缺血／再灌注损伤时细胞凋亡及CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白的作用

目的观察靶向小干扰RNA（siRNA）对小鼠肺缺血／再灌注损伤（PIRI）时细胞凋亡及CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的影响。方法荧光标记法观察靶向siRNA在小鼠体内的分布并评估转染效率。C57BL／6J小鼠50只，随机分为5组（n=10）：假手术组（Sham组）、缺血／再灌注组（I／R组）、I／R＋载体组（I／R＋Vehicle组）、I／R＋阴性对照组（I／R＋Control—siRNA组）和IVR＋CHOP．siRNA组（I／R＋CHOP—siRNA组）。取左肺，检测肺湿／干重比（W／D）、总肺水含量（TLW）和肺泡损伤定量评估（]QA），光镜和电镜观察肺组织结构改变，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot检测CHOP、葡萄糖调节蛋白78（GR-VT8）mRNA和蛋白表达水平，原位末端转移酶标记（TUNEL）法检测细胞凋亡指数（AI）。结果靶向siRNA通过滴鼻法可有效分布于肺脏中。与Sham组比较，L／R组中CHOP、GRP78mRNA和蛋白表达水平（0．80±．03、0．80±0．02；0．80±0．04、0．84±0．02）均升高（P〈0．05），W／D（5．24±0．49）、TLW（4．24±0．49）、IQA[（42．80±4．21）％]和AI[（34．50±1．51）％]均明显增加（P〈0．01）；肺组织形态结构发生明显损伤；与I／R＋Vehicle组和L／R＋Contr01．siRNA组比较，I／R＋CHOP-siRNA组中GRP78mRNA和蛋白表达水平（0．84±0．04、0．85±0．04）无明显变化（P〉0．05），而CHOPmRNA和蛋白表达水平（0．40±0．03、0．44±0．04）均降低（P〈0．05），W／D（2．54±0．24）、TLW（1．54±0．24）、IQA[（16．71±2．33）％]和AI[（11．50±1．58）％]亦均降低（P〈0．01）；肺组织形态结构损伤减轻。结论靶向siRNA对I／R损伤肺具有良好的保护作用，其机制可能与其对抗过度的未折叠蛋白反应（UPR）中CHOP介导的细胞凋亡有关。

噪声应激对大鼠心肌葡萄糖调节蛋白78和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响与高血压及心肌重构的关系

目的研究内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在噪声应激环境高血压大鼠模型心肌中的表达,并探讨GRP78和CHOP变化与高血压及其心肌重构的关系。方法将成年雄性Sprague-Dawly(SD)大鼠40只随机分为两组:噪声组(采用噪声环境建立高血压模型)和对照组(不予任何刺激正常喂养),每组20只。按应激时间不同,噪声组和对照组又分为2、4、6、8周4个亚组,每组5只大鼠。颈动脉插管测定各组大鼠的平均动脉压(MAP)。超声检测室间隔厚度(IVST)、左心室后壁厚度(LVPWT)、射血分数及E/A。称取体质量及左心室质量,计算左心室质量指数(LVMI)。LVMI=左心室质量/体质量。免疫组化法检测大鼠心肌GRP78及CHOP蛋白表达,Western-blot法检测大鼠心肌GRP78及CHOP蛋白含量,TUNNEL法检测心肌细胞凋亡情况。结果①随应激时间延长,噪声组大鼠MAP逐渐升高,均明显高于对照组(P<0.01);②噪声各亚组的IVST、LVPWT及LVMI随时间的延长逐渐增大,其中4、6及8周亚组的IVST较相应对照组分别增大29%、33%及38%,LVPWT分别增大29%、29%及33%,LVMI分别增高23%、30%和26%(P<0.05);噪声组的E/A及射血分数分别从2周及6周起逐渐下降;③随着应激时间的延长,噪声组大鼠心肌GRP78蛋白含量逐渐增高,4周达最高值,此后逐渐下降;CHOP蛋白表达水平逐渐增高,与相应对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.01)。噪声组的心肌细胞凋亡率增加。结论噪声应激可以引起心肌细胞内质网应激,导致GRP78和CHOP二者呈不对称性表达,促使心肌细胞凋亡逐渐增加,引起心肌细胞的损害,参与大鼠高血压及心肌重构的过程。

SP600125抑制JNK信号通路对高血压全脑缺血模型大鼠海马区CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响

目的观察抑制JNK信号通路对高血压全脑缺血模型大鼠海马区CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响。方法 100只雄性自发性高血压大鼠(SHR)分为高血压假手术(SHR+SO)组、高血压全脑缺血再灌注组(SHR+I/R)和高血压全脑缺血再灌注+JNK特异性抑制剂SP600125干预组(SP600125干预组)。另取63只雄性WKY大鼠随机分为血压正常假手术(SO)组和血压正常全脑缺血再灌注(I/R)组;改良的Pulsineli4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注模型。分别在术后6、24、48h取脑组织,应用HE染色观察海马区神经细胞形态变化;免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区CHOP和磷酸化JNK的表达。结果与SHR+SO组比较,SHR+I/R组各时间点存活神经元密度降低[24h存活神经元密度(10.68±2.18)比(25.20±4.36)/μm2];CHOP阳性细胞数量及表达增高,24h达高峰;磷酸化JNK阳性细胞数量及表达增高,48h达高峰(均P<0.05);与I/R组比较,SHR+I/R组各时间点海马区神经元细胞存活密度降低[24h:(10.68±2.18)比(17.81±4.36)/μm2];6、24hCHOP阳性细胞数量及表达增高,48h减少;各时间点磷酸化JNK阳性细胞数量及表达增高;与SHR+I/R组比较,SP600125干预组中各时间点存活神经元密度增加、CHOP和磷酸化JNK阳性细胞数量及表达减少。结论高血压可增加脑缺血再灌注后磷酸化JNK、CHOP表达增加,抑制JNK信号通路可下调高血压全脑缺血大鼠海马区CHOP表达。

内质网应激相关的蛋白激酶R样内质网激酶-转录活化因子4-CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白通路参与支气管肺发育不良大鼠肺细胞凋亡

目的 探讨内质网应激（ERS）相关的蛋白激酶R 样内质网激酶（PERK）-转录活化因子 4（ATF4）-CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）通路在支气管肺发育不良（BPD）大鼠肺细胞凋亡中的作用。方法 将48只新生早产SD大鼠按随机数字表法分为 BPD 组和对照组。BPD 组持续暴露于体积分数为850 mL/L的高体积分数氧（高氧）中，对照组置于空气中。在7 d、14 d和21 d取肺组织，采用DNA断裂的原位末端标记法（TUNEL）检测肺细胞凋亡，实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、PERK、ATF4和CHOP mRNA表达，W esternblot技术检测GRP78、磷酸化PERK（pho-PERK）、ATF4和CHOP蛋白表达。结果 随高氧暴露时间延长，BPD组大鼠肺细胞凋亡指数（AI）逐渐增加，与同时间点对照组比较差异均有统计学意义（7 d：15.50±0.58比 1.25±0.50，14 d：27.75±1.71比 3.25±0.96，21 d：50.50±3.70比 4.00±1.15；t=57.00、20.58、25.16，P均 〈0.01）；GRP78、PERK、ATF4和 CHOP mRNA 表达较同时间点对照组明显上升［GRP78：7 d（33.88±3.73）比（11.65±1.00），14 d（54.50±2.18）比（12.84±1.41），21 d（95.34±7.61）比（12.43 ±0.59）；PERK：7 d（5.23 ±0.92）比（1.45 ±0.46），14 d（7.60 ±1.56）比（2.18 ±0.97），21 d（16.55±0.50）比（2.90±1.18）；ATF4：7 d（23.04±2.45）比（12.56±2.81），14 d（28.66±2.66）比（15.18±2.92），21 d（36.63 ±2.99）比（15.14 ±2.09）；CHOP：7 d（2.21 ±0.19）比（0.81 ±0.02），14 d（4.19±0.17）比（0.90±0.08），21 d（6.08±0.38）比（0.88±0.10）；P均 〈0.05］；GRP78、pho-PERK、ATF4和CHOP蛋白表达较对照组亦明显增高［GRP78：7 d（1.33 ±0.03）比（0.85 ±0.04），14 d（1.31 ±0.02）比（0.92±0.01），21 d（1.82 ±0.28）比（0.87 ±0.01）；pho-PERK：7 d（0.68 ±0.02）比（0.54 ±0.01），14 d（1.04±0.01）比（0.65±0.01），21 d（1.29 ±0.02）比（0.73 ±0.01）；ATF4：7 d（1.26 ±0.01）比（0.83 ±0.01），14 d（1.39±0.02）比（0.87±0.02），21 d（1.67±0.02）比（0.94±0.02）；CHOP：7 d（1.37±0.01）比（0.47±0.06），14 d（1.50±0.04）比（0.74±0.05），21 d（1.61±0.03）比（0.55 ±0.02）；P均 〈0.05］。BPD组大鼠肺组织CHOP蛋白表达与AI、PERK及ATF4均呈显著正相关（r=0.87、0.92、0.93，P均 〈0.05）。结论 CHOP介导的细胞凋亡参与BPD发生发展，其机制可能与ERS相关的PERK-ATF4-CHOP通路激活有关。

姜黄素对大鼠体外循环所致急性肺损伤中细胞凋亡及CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白的影响

目的观察姜黄素（Cur）对大鼠体外循环（CPB）所致急性肺损伤（ALI）中细胞凋亡及CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的影响。方法Sprague．Dawley（SD）大鼠60只，按照随机数字表法分为6组（n=10）：假手术组（Sham组）、CPB组、Cur剂量分别为50、100、150及200mg／kg组（Cur-50、Cur-100、Cur-150、Cur-200组）。实验结束后留取大鼠左肺，测定肺湿干／重比（W／D）和总肺水含量（TLW），光镜下观察肺组织形态学改变和进行肺组织损伤定量评估（IQA），电镜观察肺组织超微结构改变，反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot法分别检测CHOP mRNA及蛋白表达，原位末端细胞凋亡检测法（TUNEL法）检测肺组织细胞凋亡指数（AI）。结果与Sham组比较，CPB组中CHOP mRNA（0．96±0．18比0．43±0．08）及蛋白（2．79±0．74比1．02±0．27）表达均升高（P（0．05），W／D（4．99±0．72比2．32±0．49）、TLW（3．99±0．72比1．32±0．49）、IQA（40．22±5．39比4．71±1．68）和AI（35．19±5．94比2．89±0．99）均增加（P〈0．05），肺组织形态学结构及超微结构均呈明显损伤性变化；与CPB组比较，Cur-100组、Cur-150组和Cur-200组CHOPmRNA（0．87±0．18、0．69±0．13、0．56±0．12比0．96±0．18）及蛋白（2．88±0．79、1．96±0．58、1．34±0．49比2．79±0.74）表达均降低（P〈0.05），W／D（4．13±0．89、3．43±0．97、2．65±0．85比4．99±0．72）、TLW（3．13±0．89、2．43±0．97、1．65±0．85比3．99±0．72）、IQA（31．47±3．48、20．52±2．69、14．99±3．56比40．22±5．39）和AI（31．49±2．91、24．78±3．41、14．47±2．69比35．19±5．94）亦均下降（P〈0．05），肺组织形态学结构及超微结构异常改变均有不同程度的减轻。结论浓度为200mg／kg的Cur对CPB损伤发生的大鼠肺脏具有较好的保护作用，其机制可能与其抑制CHOP诱导的细胞凋亡有关。

内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白及Caspase-12在癫性脑损伤大鼠中的表达及促红细胞生成素对其影响

目的在建立氯化锂-毛果芸香碱癫持续状态模型的基础上,观察内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和Caspase-12的表达变化,探讨促红细胞生成素(EPO)产生脑保护作用的可能机制。方法 21～30 d SD大鼠96只随机分为对照组(n=32)、氯化锂-毛果芸香碱癫组(n=32)及EPO干预组(n=32),每组按6 h、24 h、48 h、72 h时间点又分为4个亚组,每亚组8只。观察各组大鼠的行为学变化,用免疫组织化学法检测各时间点各组大鼠CHOP及Caspase-12的表达水平。结果氯化锂-毛果芸香碱癫组大鼠海马区CHOP的表达水平明显增加,6 h开始增加,24 h达到高峰,后逐渐下降,至72 h仍高于对照组,与对照组同一时间点比较差异均有统计学意义(Pa<0.05);氯化锂-毛果芸香碱癫组大鼠海马区Caspase-12的表达水平在6 h开始增加,48 h达到高峰,72 h开始下降,但仍高于对照组,与对照组同一时间点比较差异均有统计学意义(Pa<0.05)。EPO干预组海马区CHOP及Caspase-12的表达较同一时间点氯化锂-毛果芸香碱癫组均下降,差异有统计学意义(Pa<0.05)。结论CHOP和Capase-12在癫发作后表达明显增加,提示内质网应激机制在癫性脑损伤的发生发展中具有重要作用;EPO可能通过内质网应激机制产生脑保护作用。

AT1受体自身抗体对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激通路相关分子葡萄糖调节蛋白78和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响

目的探讨AT1受体自身抗体(AT1-AA)对DN大鼠肾脏内质网应激(ERS)通路相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响。方法制备DN大鼠模型,ELISA检测血清AT1-AA,根据ELISA结果随机选择AT1-AA阳性和阴性DN大鼠纳入DN组(n=12),同时设立正常对照组(NC,n=6)。电镜观察肾脏超微结构变化;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;RT-PCR测定大鼠肾组织GRP78和CHOP mRNA水平;Western blot分析肾组织中GRP78和CHOP蛋白的表达量。结果 DN组肾脏细胞凋亡率较NC组升高,其中,AT1-AA阳性大鼠凋亡率高于AT1-AA阴性大鼠[(20.05±1.71)%vs(13.24±4.93)%](P<0.01)。与NC组相比,DN组肾组织GRP78、CHOP蛋白和mRNA水平均上调;进一步比较发现,AT1-AA阳性DN大鼠GRP78,CHOP蛋白及mRNA水平升高较AT1-AA阴性DN大鼠更明显。结论 AT1-AA可能通过诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并经ERS相关的CHOP凋亡信号通路而促进肾脏细胞凋亡,加重肾脏损害。

锰对新生大鼠神经细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响

目的研究不同浓度锰对大鼠神经细胞凋亡及内质网应激信号分子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）mRNA与蛋白以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12（caspase-12）蛋白表达的影响。方法以出生4～7d的SPF级Wistar大鼠脑片为模型，分别用0（对照）、25、100、400μmol／L锰暴露24h。检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的释放量，神经细胞凋亡率以及神经细胞内GRP78、CHOPmRNA和蛋白及caspase-12蛋白的表达。结果与对照组比较，100和400μmol／L锰暴露组培养液中LDH的释放量均较高，而各浓度锰暴露组大鼠神经细胞凋亡率均较高，差异有统计学意义（P〈0．01）；且随着锰暴露浓度的升高，培养液中LDH的释放量和大鼠神经细胞凋亡率均呈逐渐升高的趋势。与对照组比较，100和400μmol／L锰暴露组神经细胞内GRP78mRNA及各浓度锰暴露组大鼠神经细胞内CHOPmRNA的表达均较高，而100、400μmol／L锰暴露组神经细胞内GRP78和CHOP蛋白及各浓度锰暴露组大鼠神经细胞内caspase-12蛋白的表达也均较高，差异有统计学意义（P〈0．01）；且随着锰暴露浓度的升高，大鼠神经细胞内GRP78、CHOPmRNA和蛋白及caspase-12蛋白的表达均呈逐渐升高的趋势。结论锰可促使大鼠神经细胞凋亡及GRP78和CHOP表达升高。

改良型富血小板纤维蛋白与β⁃磷酸三钙复合物诱导成骨作用与机制

目的探讨改良型富血小板纤维蛋白(advanced platelet⁃rich fibrin,A⁃PRF)与β⁃磷酸三钙(β⁃tricalcium phosphate,β⁃TCP)构成比例对兔股骨缺损模型骨形成的作用及机制,为临床治疗骨缺损提供新思路。方法24只新西兰大白兔构建骨缺损模型并分为模型组、1∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=1∶1)、2∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=2∶1)与4∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=4∶1),每组6只。复合物组在骨缺损处填充复合材料,模型组不充填材料,8周后安乐法处死动物采标本。采用micro⁃CT测定股骨缺损区新生骨的骨密度(bone mineral densi⁃ty,BMD)、骨体积分数(bone volume fraction,BV/TV)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁分离度(trabecular separation/spacing,Tb.Sp)。HE染色观察新骨及新生血管形成情况;扫描电镜观察新生骨组织的形态变化;酶联免疫法检测新生股骨组织中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38(phospho⁃p38 mitogen activated pro⁃tein kinase,p⁃p38MAPK)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer⁃binding protein homologous pro⁃tein,CHOP)、磷酸化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(phospho⁃cysteine aspartic protease⁃3,p⁃Caspase3)含量;实时定量PCR检测新生骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨形态发生蛋白⁃2(bone morphogenetic protein⁃2,BMP⁃2)、核因子κ⁃B配体受体致活剂(receptor activator of nuclear factor kappa⁃B ligand,RANKL)、p38MAPK的mRNA表达量;免疫组织化学法观察新生骨组织中OPG、BMP⁃2、RANKL、p⁃p38MAPK、p⁃Caspase3蛋白表达情况;荧光Tunel染色观察新生股骨组织中细胞凋亡情况。结果模型组股骨缺损区域骨形成缓慢,成骨质量差。与模型组相比,复合物组动物股骨缺损区域成骨情况良好,BMD、BV.TV、Tb.Th、Tb.N升高,Tb.Sp下降,新生股骨组织中见新生毛细血管形成;p⁃p38MAPK、CHOP、p⁃Caspase3蛋白表达降低,OPG、BMP⁃2的mRNA与蛋白表达升高,RANKL与p38MAPK的mRNA表达降低(P<0.05);各组新生骨组织中的凋亡检测表明2:1复合物组样本中细胞凋亡率最低(P<0.05);A⁃PRF∶β⁃TCP=2∶1的配比成骨效果最佳。结论由A⁃PRF与β⁃TCP组成复合物能促进OPG表达,抑制RANKL表达和p38MAPK磷酸化,减少新生骨组织细胞凋亡,促进成骨分化。

CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白介导的内质网应激在丝裂霉素C诱导人成纤维细胞凋亡中的作用

目的观察CCAAT／增强子结合蛋白（C／EBP）同源蛋白（CHOP）在丝裂霉素C（MMC）诱导人硬膜外瘢痕成纤维细胞凋亡中的作用。方法体外培养的人硬膜外瘢痕成纤维细胞用不同浓度的MMC（0、0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0g/L）处理5min，培养不同时间（0、12、24、48、60、72h）后用噻唑蓝（MTT）比色法检测MMC对细胞活力的影响，原位末端转移酶标记（TUNEL）法检测MMC（0．4g／L）对细胞凋亡的影响。Western blot分析CHOP、B淋巴细胞／白血病-2（bcl-2）相关X蛋白（bax）、bcl-2蛋白表达变化。使用RNA干扰技术敲除CHOP，观察CHOP敲除后MMC对细胞活力、细胞凋亡和相关蛋白的影响。结果MMC抑制成纤维细胞的细胞活力，且呈明显的时间和计量依赖性，半数有效剂量（ED50）为0．4g/L。0．4g/LMMC处理组细胞凋亡率[（40．0±5．2）％]明显增加，与对照组[（3．5±1．8）％]比较差异有统计学意义（P〈0．05）。Western blot显示随着作用时间延长CHOP表达逐渐升高，bcl-2的表达逐渐减少。与对照组比较，CHOP敲除后MMC对细胞活力抑制率明显降低，细胞凋亡率也明显下降，差异有统计学意义（P〈0．05）;bcl-2表达水平有所升高。结论CHOP介导的内质网应激凋亡通路参与MMC诱导的人成纤维细胞凋亡，CHOP在MMC诱导的成纤维细胞凋亡中起重要作用。