棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因2.1kb片段在大肠杆菌中的表达

以棉铃虫颗粒体病毒 (Helicoverpaarmigeragranulosisvirus,简称HaGV)基因组DNA为模板 ,设计引物PCR扩增病毒增效蛋白 (Enhancin)基因 ,然后经SacI/PstI双酶切消化 ,得到 5′端截短的约 2 1kb增效蛋白基因片段 ,再与 pQE30质粒连接 ,构建了重组表达载体pQE/EnC ,转化大肠杆菌M15 (pREP4) ,在IPTG诱导下表达出分子量约为 78× 10 3 D的融合蛋白并命名为P78,纯化的P78包涵体显示了明显的增效活性 ,可提高AcMNPV对小菜蛾幼虫的感染率 2 7 88%～ 32 92 %。

棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因2.6kb片段的表达

以棉铃虫颗粒体病毒 (Helicoverpaarmigeragranulosisvirus ,简称HaGV)基因组的DNA为模板设计引物 ,PCR扩增病毒增效蛋白 (Enhanicn)基因 ,然后经BamHI/PstI双酶切消化 ,得到近乎全长的约 2 .6kb的增效蛋白基因片段 ,再与pQE32质粒连接 ,构建了重组表达载体pQE32 /En ,转化大肠杆菌M15 (pREP4 ) ,在IPTG诱导下表达出分子量约为 10 2kD的融合蛋白并命名为P10 2 ,纯化的P10 2 包涵体显示了明显的增效活性 ,在感染后 16 8h时统计可提高HaNPV对棉铃虫幼虫的感染死亡率 6 .2 5 %～ 2 7.0 9% ,缩短LT50 12 .3h以上 ;在感染后 72h时统计可提高Bt对棉铃虫幼虫的感染死亡率 2 8.18% ,缩短LT50 12 .33h。