六磷酸肌醇对人前列腺癌细胞增殖的抑制作用及其与胰岛素样生长因子结合蛋白-3的关系

目的：研究六磷酸肌醇（IP6）抑制人前列腺癌细胞LNCaP细胞增殖的情况,及该抑制过程与胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）表达水平的关系.方法：将LNCaP细胞分为四组：空白对照组不做任何处理;小分子干扰RNA（siRNA）组使用siRNA技术对LNCaP细胞实施IGFBP-3基因沉默;siRNA＋ IP6组为接受IP6刺激的IGFBP-3基因沉默的LNCaP细胞;IP6组为接受IP6刺激的普通LNCaP细胞.MTT法计算不同浓度IP6处理后各组细胞的存活率.PI染色结合流式细胞技术分析各组细胞的细胞周期,AnnexinV-FITC/PI双染结合流式细胞技术分析IP6对LNCaP细胞的凋亡诱导情况.荧光实时定量PCR技术和蛋白质印迹法分析各组细胞内IGFBP-3和Bcl-2的表达变化.结果：1.5 mmol的IP6可以引起LNCaP细胞的增殖抑制,诱导G2期阻滞,并可以诱导细胞凋亡.IP6刺激细胞后可以引起IGFBP-3的表达增高,Bcl-2的表达降低,而IGFBP-3基因沉默可以减轻IP6对LNCaP细胞的增殖抑制作用,同时抑制Bcl-2的表达降低.结论：IP6可引起LNCaP细胞的增殖抑制,其机制可能与IGFBP-3的高表达有关,IGFBP-3可能通过影响Bcl-2的表达发挥作用.

续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期的影响

在动物实验的基础上 ,探讨续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期和 Ⅰ 型前胶原αmRNA表达影响。根据文献方法培养大鼠成骨细胞株UMR 10 6 /0 1,采用3 H Tdr法检测细胞增殖 ,PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素活性、矿化结节形成和Ⅰ 型胶原αmRNA的表达 ,从而了解续断对成骨细胞增殖、分化的影响 ;FCM法检测细胞周期。结果显示续断中、高剂量能显著促进成骨细胞的增殖、增加碱性磷酸酶的表达及矿化结节形成的数量 ,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ 型前胶原mRNA的表达 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,和雌激素组比较差异无显著性。续断高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,和雌激素组比较差异也无显著性。细胞凋亡率和G0 G1期细胞比率显著低于空白对照组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。表明续断能有效促进成骨细胞的分化、增殖 ,防止成骨细胞凋亡 ,可能是该药促进骨折愈合、防治骨质疏松的机制之一。

二氢青蒿素抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖和诱导凋亡

目的:研究二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)增殖和凋亡的影响。方法:在培养的C6细胞,加入DHA1～125μmol/L作用24、48、72h。以台盼蓝染色计数和噻唑蓝(MTT)还原反应,观察细胞增殖和活性;以Hoechst33342染色,观察细胞凋亡;以H2DCFDA氧化试验检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化。结果:DHA5～125μmol/L浓度及时间依赖性抑制C6细胞的增殖,作用48h后的IC50是23.4μmol/L;5～25μmol/L能诱导细胞凋亡(P<0.05);5～125μmol/L DHA可增高细胞内的ROS(P<0.01)。结论:DHA能够抑制C6细胞增殖,并诱导其凋亡,其细胞毒作用与细胞内ROS增加相关。

N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的研究新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物[N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺]对人肺腺癌A549细胞株体外增殖及凋亡的影响。方法3种浓度的ATRA衍生物和ATRA(1、5、10mg/L)分别处理A549细胞1、2、3、7d,应用MTT法和流式细胞技术分别观察该ATRA衍生物对A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响;Western blot分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果ATRA衍生物处理组A549细胞增殖抑制率随药物浓度的增加而提高,分别为9.1%、17.8%、47.0%;抑制率亦随药物作用时间的延长而提高,分别为18.1%、20.6%、40.4%、83.4%。10mg/LATRA衍生物可明显诱导A549细胞凋亡,凋亡率达到40.9%,G0～G1期细胞比例明显下降,细胞凋亡峰较对照组明显提前,凋亡过程伴随Bcl-2表达下降,而Bax、Bak、酶原形式的Caspase-3、p53、NF-κB的表达无明显变化。结论ATRA衍生物对A549细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;并诱导细胞凋亡,可能与Bcl-2蛋白的表达下调有关。

淫羊藿苷对人成骨细胞的作用

为探讨淫羊藿苷对人成骨细胞的影响,采用分次酶消化法做离体人成骨细胞培养,得到性状稳定、纯度高的成骨细胞;用MTT法做淫羊藿苷对成骨细胞增殖的研究。结果发现不同浓度的淫羊藿苷对成骨细胞的生长增殖均有促进作用,以10ng·ml-1浓度时其作用最强(P<0.05);生化方法测定淫羊藿苷浓度为100ng·ml-1和10ng·ml-1对成骨细胞分泌碱性磷酸酶(AKP)有促进作用。表明淫羊藿苷促进成骨细胞增殖的同时,增强了成骨细胞成骨活性。

雷帕霉素协同去甲氧柔红霉素诱导人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡的作用

目的:探讨去甲氧柔红霉素(idarubicin,IDA)联合雷帕霉素(rapamycin,Rapa)抗人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞株的效应及机制。方法:应用CCK-8法分析两药联用对细胞增殖的影响;Isobologram法分析两药联合作用的性质;电镜形态学观察和Annexin V/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测凋亡相关基因Caspase3、PARP、Caspase8、Caspase9及Akt、p-Akt、P85S6K、p-P85S6K、P70S6K、p-P70S6K、ERK1/2、p-ERK1/2等蛋白质水平表达。结果:CCK-8法示IDA联合Rapa能明显降低IDA的半数抑制浓度(50%inhibition concentration,IC50)值。Isobologram法示两药联合指数小于1。免疫印迹法示两药联用组较IDA单用组更能激活Caspase3和底物PARP,Caspase8和Caspase9在两药联用组均呈现明显激活。IDA联用Rapa后能使mTOR信号通路上游的Akt及下游的P85S6K、P70S6K分子磷酸化水平明显降低,并能协同下调ERK的磷酸化水平。结论:Rapa和IDA对Jurkat细胞的生长抑制具有协同作用,两药联用时细胞凋亡增加,且通过线粒体和细胞膜双途径增强凋亡效应。其协同机制可能与Rapa逆转IDA引起的Akt/mTOR信号通路激活,并抑制ERK信号活化有关。

多西环素对小细胞肺癌H446细胞增殖及HIF表达的影响

目的探讨多西环素对小细胞肺癌H446细胞增殖及HIF-1α和HIF-2α表达的影响。方法采用MTT法检测多西环素对H446细胞增殖抑制作用。采用倒置相差光学显微镜观察多西环素对细胞凋亡形态的影响。通过流式细胞仪合并Cell Fit软件对细胞周期分布进行分析,采用Annexin V-FITC荧光染色检测细胞凋亡率。采用细胞健康分析软件检测细胞内线粒体膜电位。实时荧光定量PCR检测HIF-1α和HIF-2α表达。Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。结果多西环素(2.5、5、10、20、40、80 mg/L作用24或48小时)呈剂量-时间依赖性抑制H446细胞增殖。经光学显微镜可明显观察到多西环素能导致H446细胞凋亡,呈时间-剂量依赖性。流式细胞仪结果显示,10、20、40 mg/L多西环素作用48小时能阻滞H446细胞周期S期,并且随着细胞凋亡率增加,呈剂量依赖性。浓度为10、20、40 mg/L多西环素作用48小时的细胞线粒体膜电位低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);经10、20、40 mg/L多西环素作用48小时的细胞HIF-1α、HIF-2αmRNA表达均低于对照组(均P<0.05),HIF-1α、HIF-2α蛋白表达量低于对照组,且HIF-1α和HIF-2α变化趋势均相同,随着多西环素浓度增加、表达量降低(P<0.05)。结论多西环素对小细胞肺癌H446细胞具有增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,可阻滞细胞于S期,降低线粒体膜电位,下调HIF-1α、和HIF-2α蛋白表达,且伴随有H446细胞凋亡的现象。

BDNF AS对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨脑源性神经营养因子反义长链非编码RNA(brain-derived neurotrophic factor antisense long noncoding RNA,BDNF AS)对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用BDNF AS过表达质粒及空载体瞬时转染肝癌细胞株HepG2和MHCC 97-H,采用实时PCR方法检测BDNF AS在肝癌细胞中的表达水平,采用3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium(MTS)方法检测细胞增殖情况,采用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色流式细胞术检测细胞周期变化,采用划痕实验和transwell小室评价细胞迁移能力的变化。结果 HepG2和MHCC 97-H细胞转染BDNF AS过表达质粒后BDNF AS和mRNA表达均上调(均P<0.01)。转染第4天,细胞增殖均受到抑制(均P<0.05)。转染48 h后,HepG2和MHCC 97-H细胞均出现S期阻滞(均P<0.01),细胞的迁移能力均下降(均P<0.01)。结论 BDNF AS过表达抑制肝癌细胞的增殖和迁移,可能对肝癌细胞的生长运动具有重要的负性调控作用。

丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞增殖的影响

目的:研究中药复方制剂丹芍化纤胶囊对体内外活化肝星状细胞(HSCs)增殖的影响。方法:(1)体内实验:雄性 Wistar大鼠57只分为正常组、模型组、治疗组。除正常组外,其余各组采用 CCl_4、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合病因刺激制备肝纤维化动物模型8周,然后治疗组给予丹芍化纤胶囊(1g/kg体重)灌胃治疗8周。实验结束时部分大鼠用于测定肝功能及肝脏纤维化程度;部分用于分离 HSCs,流式细胞仪检测细胞周期百分比。(2)体外实验:制备丹芍化纤胶囊大鼠药物血清;分离培养大鼠 HSCs,并分为小牛血清组、正常大鼠血清组、丹芍化纤药物血清组,分别加入5%、10%、20%以上3种血清干预培养的HSCs,MTT 比色法测定原代 HSCs 增殖情况。结果:(1)体内实验:治疗组较模型组肝功能、肝脏纤维化程度及 HSCs 增殖明显减轻。(2)体外实验:丹芍化纤药物血清组较同浓度小牛血清组、正常大鼠血清组明显抑制 HSCs 增殖,且此作用呈剂量依赖性。结论:丹芍化纤胶囊能显著抑制体内外 HSCs 增殖。

奈达铂联合顺铂对人食管癌细胞株(Eca-109)抑制作用机制的研究

目的研究奈达铂(NDP)联合顺铂(DDP)对人食管癌细胞株Eca-109的增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法采用MTT法检测NDP联合DDP对Eca-109细胞的增殖抑制率,中效原理法判断联合用药的相互作用;采用RT-PCR和蛋白印迹法分析Ki-67及Bax表达的变化。结果NDP、DDP均明显抑制Eca-109细胞的生长,且呈剂量依赖性;两者联合使用低浓度时呈拮抗效应,高浓度时呈协同效应;IC50浓度的NDP、DDP和1/2IC50(NDP)+1/2IC50(DDP)对Eca-109细胞的抑制率分别为(41.9±4.1)%、(47.4±2.9)%和(52.5±0.9)%;与单独用药组比较,联合用药组Ki-67基因(蛋白)表达显著降低,而Bax基因(蛋白)表达显著增高。结论1/2IC50浓度NDP和DDP联合应用与两药IC50浓度单独应用相比,对Eca-109细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡能力均有明显增强。

加减下瘀血汤对脂质诱导小鼠肾小球足细胞增殖影响的实验研究

目的：观察加减下瘀血汤对脂质诱导小鼠肾足细胞增殖的影响。方法：用不同浓度低密度脂蛋白(LDL)和氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导小鼠肾足细胞增殖,再用不同浓度加减下瘀血汤及强的松龙、缬沙坦的含药血清进行刺激干预,然后用四唑盐(MIT)法检测足细胞增殖。结果：25μml浓度LDL与100μg/ml OX-LDL刺激足细胞增殖达峰值,加减下瘀血汤的高、低剂量,强的松龙的中、高剂量及缬沙坦的中、高剂量含药血清有明显抑制足细胞增殖作用。结论：①LDL和OX-LDL在一定的剂量和时间条件下可以刺激足细胞增殖。②加减下瘀血汤、可抑制脂质诱导的足细胞增殖现象。

痿症方对嗅鞘细胞增殖影响的药效学研究

目的:探讨痿症方对嗅鞘细胞(Olfactory ensheathing cells OECs)增殖影响的血清药理学实验方法的建立。方法:采用MTT法检测各组给药剂量、采血时间、血清浓度的痿症方的血清培养大鼠OECs9天后的OD值。结果:5倍剂量组(给药剂量),1小时组(采血时间)的OD值,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),各组培养血清浓度OD值10%组>20%组>5%组。结论:痿症方5倍剂量灌胃,末次给药1小时后腹主动脉采血,制备血清后,以10%的浓度培养,能较好的促进大鼠OECs的增殖。

苦参素对人食管癌Eca-109体外细胞增殖活性影响研究

目的:探讨苦参素对人食管癌Eca-109细胞增殖活性的影响。方法:运用MTT和流式细胞术分别检测细胞增殖率和细胞周期变化。结果:苦参素对Eca-109细胞持续作用48 h后,细胞增殖率由100%降为9.64%(P<0.001);细胞周期结果显示,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,与阴性对照组和阳性对照组比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论:苦参素对人食管癌Eca-109细胞增殖活性具有抑制作用,其作用机制与细胞周期阻滞于G0/G1期有关。

稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及培养液中ET-1水平的影响

目的:观察稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的抑制作用。方法:采用(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)MTT法测定稳心草黄酮类化合物对大鼠PASMC增殖的抑制率、放射免疫法检测培养液中ET-1含量的变化。结果:稳心草黄酮类化合物对体外培养的PASMC有抑制增殖及降低培养液中ET-1水平的作用(P<0.05)。结论:稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠PASMC有抑制增殖的作用。

人参皂甙Rg3联合三氧化二砷对人肝癌裸鼠的治疗作用

目的:探讨人参皂甙Rg3联合三氧化二砷对肝癌裸鼠移植瘤模型的治疗作用。方法:采用人肝癌细胞株Bel-7402细胞株,种植于32只雄性裸鼠皮下,随机均分成4组:联合用药组、Rg3组、三氧化二砷组及对照组。人参皂甙Rg3,隔日灌胃,共20次,三氧化二砷,腹腔内注射连续28 d。采用免疫组织化学法检测各组中PCNA、血管第因子在裸鼠肝癌移植瘤组织中的表达情况。结果:Rg3组抑制新生血管形成作用强于三氧化二砷组,三氧化二砷组抑制肝癌细胞增殖作用强于Rg3组,二者联合用药,可以明显抑制移植瘤肝癌细胞增殖性。结论:人参皂甙Rg3联合三氧化二砷,对移植瘤肝癌细胞增殖性的抑制有协同作用。

雷帕霉素对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的研究雷帕霉素(rapamycin)对培养的兔晶状体上皮细胞增殖的作用及其对细胞周期的影响。方法将传代的兔晶状体上皮细胞用含不同雷帕霉素浓度的培养液培养24h后,用MTT法测定5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml雷帕霉素浓度组及对照组细胞的增殖情况;用流式细胞仪测定20ng/ml雷帕霉素浓度组及对照组细胞周期的变化情况。结果用5ng/ml的培养液培养细胞时,细胞增殖受到抑制(P<0.05),随药物浓度增加,细胞增殖受抑制越明显;用10ng/ml的培养液培养细胞时,细胞增殖明显受到抑制(P<0.01)。细胞周期分析显示,雷帕霉素(20ng/ml)作用后,G0/G1期细胞较对照组增多(由51.72%增加到61.63%),S期细胞较对照组减少(由34.92%减少至10.85%)。结论雷帕霉素具有抑制兔晶状体上皮细胞增殖的作用,且随浓度增加抑制作用增强。雷帕霉素将细胞抑制在G1期的限制点内。

^(125)I联合ADM对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响

目的研究放射性粒子125I联合化疗药物多柔比星(阿霉素,ADM)对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。方法按2×2析因设计将乳腺癌敏感株MCF-7细胞随机分成A、B、C、D 4组,A组:空白对照组;B组:单纯125I粒子组;C组:单纯ADM组;D组:125I粒子+ADM组。采用流式细胞术检测各组干预后的细胞周期分布及细胞凋亡率。结果 (1)单纯125I粒子近距离低剂量率持续照射后将MCF-7细胞阻滞于G2~M期1。25I联合ADM将MCF-7细胞周期主要集中在G0~G1期,同时伴有较大比例的细胞凋亡。(2)各组细胞的早期凋亡率分别为:A组(0.99±0.05)%、B组(19.22±4.92)%、C组(16.57±4.73)%、D组(3.16±1.08)%;各组晚期凋亡及坏死率为:A组(0.32±0.18)%、B组(3.16±1.39)%、C组(3.24±0.75)%、D组(28.99±7.96)%,D组晚期凋亡及死亡率明显提高。结论 125I放射性粒子能有效诱导乳腺癌细胞凋亡,与化疗药物ADM联合作用除诱导细胞凋亡,还可导致大量细胞死亡,具有协同、增效的作用。

霉酚酸对人骨髓来源间充质干细胞的作用

目的:研究霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)对人骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的作用及其机制。方法:在MSCs生长和分化过程中加入不同浓度的MPA,用CCK-8方法分析MSCs增殖的情况,用Annexin V/PI双染色法检测MPA各浓度组的细胞凋亡,RT-PCR方法分析MSCs次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)的表达;应用von Kossa染色、钙定量和real-time PCR方法分析MPA对MSCs成骨分化的影响。结果:1～100μmol/L的MPA呈时间浓度依赖性地抑制间充质干细胞的生长,添加鸟嘌呤核苷可以解除该抑制效应,且该抑制效应与细胞凋亡无关;RT-PCR结果显示,MSCs表达IMPDHⅠ和IMPDHⅡ两种亚型;von Kossa染色和钙定量显示,MPA抑制MSCs的成骨分化,Osteopontin和BMP-2的表达相应减低;进一步研究发现,MPA可能通过影响转录因子Runx2、Osterix的表达而影响MSCs的成骨分化。结论:MPA通过耗竭鸟嘌呤核苷的方式呈时间浓度依赖性抑制人骨髓来源的间充质干细胞的增殖;同时,MPA通过抑制Runx2和Osterix蛋白的表达,抑制MSCs的成骨分化。

二膦酸盐对MG-63细胞增殖及凋亡的影响

目的体外观察二膦酸盐对骨肉瘤MG-63细胞的抑制增殖和促进凋亡作用。方法将不同浓度的二膦酸盐药物与MG-63细胞体外培养,采用MTT比色法测定其细胞活力,绘制细胞生长曲线;Hoechst33258细胞染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪进行细胞周期分析及凋亡检测。结果MTT比色法测得药物作用72h对MG-63细胞的ID50为52.37μmol/L;细胞生长曲线表明细胞增殖数量与药物浓度及时间有显著依赖性;细胞荧光染色观察实验组细胞形态改变;细胞流式观察细胞凋亡实验组较正常差异有显著性,72h后细胞凋亡率40.2%±2.1%相比正常细胞2.8%±0.7%有统计学意义;细胞周期分析实验组细胞SubG1相比正常组显著累积G2/M细胞被阻滞。结论二膦酸盐抑制体外培养骨肉瘤MG-63细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡。

高瘦素影响小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖的实验研究

目的:探讨高瘦素(Leptin)水平在不同免疫状态下对小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖状况的影响。方法:选用8周龄的清洁级BALB/c雄性小鼠共50只,分成5组,分别腹腔注射外源性鼠Leptin和Leptin抗体,形成小鼠的不同Leptin水平状态;应用普乐可复(FK506)将小鼠分为正常免疫和免疫抑制状态两类,两种状态各设对照组,测定脾淋巴细胞增殖情况,ELISA方法检测外周血中IL-2、IL-4、IFN-γ和Leptin的浓度。结果:正常免疫状态下,Leptin组的脾细胞增殖与对照组无差异,细胞因子除IFN-γ升高外,IL-2、IL-4均无差异;Leptin抗体组显示脾细胞增殖能力下降,各细胞因子测定显示差异;免疫抑制状态下,Leptin组的IL-2、IFN-γ水平上升、IL-4分泌降低,这种结果也在几乎所有体外加入Leptin的各组中出现。结论:Leptin可以起免疫调节作用,增加IFN-γ、IL-2的合成,降低IL-4的产生,使免疫应答向Th1细胞方向偏离。在正常免疫状态下,Leptin的免疫调节作用不明显,而在免疫抑制情况下,这种调节作用得到体现。