miR-134在无功能垂体腺瘤中的表达及其与肿瘤增殖侵袭能力的关系

目的检测miR-134在正常垂体组织和各垂体腺瘤亚型中的表达情况，分析其表达水平与无功能垂体腺瘤（NFPA）增殖侵袭能力的相关性。方法收集垂体腺瘤标本52例（NFPA33例，PRL腺瘤5例，GH腺瘤9例，ACTH腺瘤5例）和尸检正常腺垂体4例及临床相关病例资料，利用免疫组织化学、实时荧光定量PCR（qRT—PCR）等实验技术检测miR-134、MEG3和Ki-67等在各标本中的表达量，并结合病例资料分析数据。结果mIR-134在NFPA中表达水平明显低于其他类型垂体腺瘤和正常腺垂体（P〈0．01）；并且miR-134的表达水平与NFPA患者发病年龄、肿瘤细胞Ki-67阳性率及肿瘤侵袭性呈负相关（P〈0．01）。结论miR-134表达下调可能是NFPA肿瘤发生及肿瘤呈侵袭样生长的重要原因之一；miR-134有望成为用于NFPA诊疗的新靶点。

CRISPR/Cas9敲除pyk2基因对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

为了探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶(proline rich tyrosine kinase2,Pyk2)对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响,设计了2对以pyk2为靶基因的sgRNA片段,以px335质粒为载体,构建CRISPR/Cas9重组质粒,转染至人脑胶质瘤U251细胞中,同时设置野生型U251细胞作为对照组。通过酶切鉴定及Western blot分析筛选阳性单克隆细胞,并测序揭示突变位点。筛选出的阳性单克隆细胞作为实验组,经RTCA法比较后,发现实验组细胞的增殖能力较对照组明显下降,且具有统计学意义(P<0.05);Transwell小室法及划痕实验的结果均证实,较对照组,实验组细胞的体外侵袭及迁移能力受到明显的抑制,差异显著(P<0.05)。作为验证侵袭能力的代表,基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)在Western blot实验中表达量较对照组也明显下降。通过上述方法成功得到目的基因敲除的稳定细胞株,并证实敲除pyk2基因能明显的抑制人脑胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

HMGB1对绒毛外滋养细胞侵袭和增殖能力的影响

目的:探讨外源性高迁移率蛋白(High Mobility Group Box 1,HMGB1)对绒毛外滋养细胞(HTR8/SVneo细胞)侵袭和迁移能力的影响。方法:①确定HMGB1对绒毛外滋养细胞侵袭性的影响HTR8/SVneo细胞随机分为正常对照组及50μg/L、100μg/L和200μg/L外源性HMGB1刺激组,分别培养6 h、12 h、24 h、48 h,收集不同时间点不同刺激浓度的细胞,采用Transwell体外侵袭实验检测HTR8/SVneo细胞的侵袭性。②确定HMGB1对细胞增殖的影响:细胞随机分为正常对照及50μg/L、100μg/L和200μg/L外源性HMGB1刺激组.分别培养6 h、12 h、24 h、48 h,收集不同时间点不同刺激浓度的细胞,以CCK8方法检测细胞的增殖水平。结果:①HMGB1对绒毛外滋养细胞侵袭性的影响:收集不同时间点、不同刺激浓度的细胞,统计不同时间点、不同刺激浓度的细胞数量,不同时间之间差异有统计学意义(F=204.076,P<0.001);时间与刺激浓度之间存在交互效应(F=16.158,P<0.001);②HMGB1对细胞增殖的影响:不同时间因素之间有统计学意义(F=116.853,P<0.001);时间与处理因素之间不存在交互效应(F=1.933,P>0.05)。结论:外源性HMGB1可以增强绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo的侵袭能力和迁移能力。

Heparanase对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨乙酰肝素酶(Heparanase)对肝癌细胞生物学功能的影响。方法利用荧光定量PCR检测人肝癌细胞HepG2、Huh-7、Bel-7402、MHCC-97H以及SMMC-7721中Heparanase的表达水平;设计及合成3条Heparanase特异性小分子干扰RNA(siRNA)并用于转染Heparanase表达高的一株人肝癌细胞,通过荧光定量PCR和Western blotting检验干扰效率;MTT法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力;Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡。结果 MHCC-97H细胞中的Heparanase表达水平显著高于其余4株肝癌细胞(P<0.05);siRNA3能瞬时下调肝癌细胞的Heparanase水平;siRNA介导的Heparanase基因沉默使肝癌细胞的增殖速度放慢,侵袭能力减弱,凋亡率升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在肝癌细胞中,Heparanase基因的表达下调导致其生物学恶性程度降低,提示Heparanase基因可作为肝癌靶向治疗的一个重要靶点。

乳腺癌细胞QSOX1的CRISPR/Cas9基因编辑及其对增殖侵袭的影响研究

目的:乳腺癌细胞的恶性增殖和易于侵袭转移特性与其对患者的危害直接相关,因此,探究其产生的分子机制,对其有效防治具有重要意义。静息巯基氧化酶-1(QSOX1)是巯基氧化酶家族成员之一,有研究证明其对细胞内蛋白质折叠过程中二硫键形成及细胞外基质的形成发挥重要作用。由于QSOX1在乳腺癌和胰腺癌等多种癌细胞中过表达,将探索QSOX1对乳腺癌细胞过度增殖和侵袭转移方面的可能作用。方法:通过利用CRISPR/Cas9技术构建QSOX1基因敲除和敲入的乳腺癌细胞模型,检测分析QSOX1对乳腺癌细胞MCF-7的分裂增殖、侵袭迁移能力等方面的影响。结果:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了QSOX1基因敲除和敲入的乳腺癌MCF-7细胞株,其与对照野生型组细胞相比,QSOX1基因敲除株的增殖能力显著下降,癌细胞在体外的迁移和侵袭能力受到明显抑制;而QSOX1基因敲入株的增殖能力和体外迁移侵袭能力却明显有提高。结论:初步揭示了QSOX1在癌症发生与发展中的作用,为进一步阐明其作用的分子机制和设计靶向药物奠定了重要基础。

miR-134在人垂体腺瘤组织中的表达及其意义(英文)

目的:探讨垂体腺瘤患者miR-134的表达及意义,分析其表达水平与无功能垂体腺瘤(non-functioningpituitaryadenomas,NFPA)增殖侵袭能力的相关性。方法:选择2010年6月至2013年7月本院收集垂体腺瘤标本104例以及8例尸检正常腺垂体的临床资料。采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学技术检测Ki-67、MEG3、miR-134等在NFPA组织中的表达水平,并分析数据。结果:miR-134在NFPA组织中表达水平显著低于正常腺垂体和其他类型垂体腺瘤(P<0.01);miR-134的表达水平与NFPA患者肿瘤侵袭性、肿瘤细胞Ki-67阳性率及发病年龄呈负相关(P<0.01)。结论:miR-134表达下调可能是NFPA肿瘤发生及肿瘤呈侵袭样生长的重要因素,miR-134可作为诊断和评估NFPA预后的参考指标。

盐酸小檗碱/叶酸-壳聚糖纳米粒的制备及其对CNE-1细胞的抑制作用

目的制备载盐酸小檗碱(berberine hydrochloride,BH)的叶酸(folic acid,FA)偶联壳聚糖(chitosan,CTS)纳米粒(BH/FA-CTS-NPs),优化制备工艺并考察BH/FA-CTS-NPs的理化特性及其对CNE-1细胞的抑制作用。方法利用FA活性酯与CTS分子上的氨基反应,制得FA偶联CTS(FA-CTS);BH为模型药物,通过离子交联法制备BH/FA-CTS-NPs。考察其形态、粒径、包封率、载药量及体外释放等理化特性;分别通过MTT法、划痕实验和Annexin-V-FITC单染法进行检测,验证BH/FA-CTS-NPs对CNE-1细胞的抑制作用、抗增殖侵袭能力以及诱导凋亡作用。结果透射电镜下观察所得BH/FA-CTS-NPs形态外观圆整,大小均匀,无粘连,平均粒径为(282.4±4.5)nm;包封率为(89.82±2.91)%;载药量为(9.16±1.01)%;5 h内累积释药率为(80.32±3.24)%,随后缓慢释放,24 h内累积释药率为(90.92±5.21)%。CNE-1细胞实验显示,BH/FA-CTS-NPs能够显著抑制CNE-1细胞的生存和增殖能力,诱导细胞CNE-1凋亡,具有剂量和时间依赖性。结论离子交联法成功制备具有体外缓释作用的BH/FA-CTS-NPs,形态圆整,粒径大小均一,对抑制CNE-1细胞增殖及促进凋亡效果好,为开发抗肿瘤给药系统提供了理论依据。