红光LED照射对体外小鼠脾脏CD8+T细胞活化、增殖和功能的影响

目的探讨波长630 nm红光LED照射对小鼠原代CD8^(+)T细胞活化、增殖和功能的影响。方法实验对象为T细胞受体(T cell receptor,TCR)转基因OT-I小鼠的脾细胞,3×10^(5)个细胞/孔接种于96孔培养板中。细胞先经波长630 nm不同时间(0,15,30和60 min),光照功率密度均为8 mW/cm^(2),LED照射后,再与不同浓度(0,0.01,0.1和1 ng/ml)OT-I肽段(OVA_(257-264),SIINFEKL)共孵育以特异性刺激其中的CD8^(+)T细胞,其中照射时间0 min为各刺激培养条件的对照组。活化4~6 h后用流式细胞仪检测CD8^(+)T细胞表面活化分子CD69/CD25的阳性率和表达水平,以及胞内线粒体的膜电位/大小(线粒体示踪剂)。部分细胞在首次照射8 h后再经同剂量LED二次照射,重复3d(每日2次,中间间隔8 h),培养72 h后用流式细胞仪检测细胞数目,酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定培养上清液中干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的含量。结果波长630 nm LED在功率密度8 mW/cm^(2),照射时间15~60 min时不影响OT-I肽段所诱导的活化CD8^(+)T细胞的比例,但抑制了强TCR信号(OT-I肽段1 ng/ml)刺激下活化细胞表面CD69/CD25分子的表达水平和细胞的增殖能力。LED照射还降低了胞内线粒体的膜电位/大小及活化细胞培养上清液中IFN-γ的水平。LED照射对以上指标的抑制作用在15~60 min的照射时间范围内随时间的延长而增强,照射时间60 min、能量密度为28.8 J/cm^(2)时作用最为显著。结论功率密度8 mW/cm^(2),波长630 nm的红光LED照射时间15~60 min时可抑制TCR信号所诱导的小鼠脾脏CD8^(+)T细胞的活化、增殖和功能。LED照射对CD8^(+)T细胞功能的抑制作用与TCR信号的强度有关,其抑制效果随时间(15~60 min)的增加而增强。