人增殖抑制基因(HSG)对肿瘤细胞系化疗敏感性的作用

目的:将人增殖抑制基因 (hHSG)用电子穿孔的转基因方式转染到体外培养的人肿瘤细胞系中,观察hHSG基因对内源性hHSG表达水平不同的肿瘤细胞系的化疗敏感性的影响。方法:首先用免疫组化方法检测不同组织来源的肿瘤细胞系中hHSG的表达水平,然后选择内源性hHSG表达水平较低的肺腺癌 (A549 )和内源性hHSG表达水平较高的宫颈癌(HeLaS3)细胞系,用电穿孔方法转染含有hHSG的真核表达载体 (pEGFP hHSG) 24h后,加入放线菌酮(CHX),采用细胞计数、MTT法观察hHSG对肿瘤细胞增殖抑制作用及对CHX的化疗敏感性的影响。结果:hHSG在不同组织来源的肿瘤细胞系都有不同程度的表达, pEGFP hHSG转染到两种内源性hHSG表达水平不同的肿瘤细胞系后,这两种肿瘤细胞的生长增殖都明显受到抑制,同时外源性的hHSG也增强了这些肿瘤细胞系对CHX的敏感性。结论:外源性hHSG可不依赖其内源性表达水平而抑制肿瘤细胞的增殖,与CHX并用可增强肿瘤细胞对CHX的敏感性,具有协同作用。

增殖抑制基因HSG和抑癌基因p16在膀胱癌中的表达及意义

目的探讨增殖抑制基因HSG和抑癌基因p16在膀胱癌中的表达及意义。方法应用原位杂交法检测65例膀胱癌组织标本HSG mRNA和p16 mRNA的表达情况,其病理分期：Ⅰ级29例、Ⅱ级25例、Ⅲ级8例、Ⅳ级3例,另选正常膀胱组织、良性膀胱肿瘤组织各15例标本作为对照。结果 HSG mRNA在65例膀胱癌组织中的阳性表达率为69.23%,正常及良性膀胱肿瘤组织HSG mRNA表达与膀胱癌组织比较差异有统计学意义（P〈0.05）,膀胱癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ级组织HSG mRNA的阳性表达率分别为79.31%、72.00%、36.36%,膀胱癌HSG mRNA的表达与肿瘤分化程度和病理分期有关;32.31%膀胱癌细胞内有p16 mRNA的阳性表达,p16 mRNA在正常和良性膀胱肿瘤组织中的阳性表达率明显高于膀胱癌组织,差异有统计学意义（P〈0.05）,随肿瘤分级的增加,p16 mRNA的阳性表达率显著降低,失表达率显著升高（P〈0.05）。结论 HSG和p16表达可能成为判断膀胱癌生物学行为的重要指标之一。

人增殖抑制基因(hHSG)联合热处理对结肠癌细胞系HT-29的体外诱导凋亡效应

目的:观察人增殖抑制基因(human hyperplasia suppressor gene,hHSG)超表达联合热处理对结肠癌细胞株HT-29的细胞存活及其诱导凋亡的效应。方法:首先制备复制缺陷5型腺病毒-hHSG表达载体(Ad5-hHSG),然后将其在HT-29中超表达,观察Ad5-hHSG对肿瘤细胞的热增敏效应。采用细胞计数法检测其对细胞存活的影响,流式细胞术检测细胞凋亡和周期改变。结果:100感染复数(multiplicity of infection,MOI)剂量Ad5-hHSG与42℃加热1h联合应用后,活细胞数显著低于单用加热组和单用Ad5-hHSG组(P<0.01)。流式细胞术检测细胞凋亡,Ad5-hHSG单独作用组、单独加热组以及联合作用组细胞凋亡率均较对照组显著升高,而且联合作用组与单独作用组之间差异具有统计学意义(P<0.01)。细胞周期结果显示,Ad5-hHSG与42℃加热1h联合作用可明显导致HT-29细胞阻滞在G2/M期。结论:Ad5-hHSG对肿瘤细胞具有热增敏效应。

细胞增殖抑制基因HSG/Mfn2的研究进展

陈光惠等研究表明,高血压模型中细胞增殖抑制基因（hyperplasic suppress gene,HSG）在增生活跃的血管平滑肌中呈低水平表达,而外源性给予HSG可明显地抑制血管平滑肌细胞的生长,同时证实HSG对多种肿瘤传代细胞系同样有明显的生长抑制和诱导凋亡的作用,提示HSG有可能成为新的抑癌基因。下面就HSG的结构、功能及其与高血压、肿瘤等疾病的关系作一综述。

肿瘤抑制基因联合增殖细胞核抗原免疫组化检测在早期宫颈病变中的诊断价值分析

目的:探讨肿瘤抑制基因(P16)联合增殖细胞核抗原(Ki-67)免疫组化检测在早期宫颈病变中的诊断价值。方法:选取2020年1月—2022年9月江苏省淮安市淮安医院收治的100例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为研究对象,按镜下病理诊断分为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组;将同期宫颈炎症且鳞状上皮正常的100例患者作为对照组。进行免疫组化检测,比较四组免疫组化检测阳性表达情况。结果:对照组免疫组化检测均为阴性,CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组P16与Ki-67阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:随着宫颈病变分级越来越高,P16和Ki-67的表达也越来越高,患者阳性率也越来越高。P16与Ki-67的表达在宫颈病变诊断中发挥着重要价值,可作为宫颈早期病变病理检测的检测手段。

增殖抑制基因和血管内皮生长因子在乳腺癌组织中的表达及与微血管密度的关系

目的探讨新的增殖抑制基因(HSG)以及血管内皮生长因子(VEGF)在乳腺癌中的表达及与微血管密度(MVD)的关系。方法应用免疫组织化学方法检测唐山市工人医院60例乳腺癌标本、20例乳腺纤维腺瘤及20例正常乳腺组织标本中HSG和VEGF的表达,并用CD34标记乳腺癌组织中的微血管,采用图像分析进行微血管密度(MVD)测定。结果 HSG在乳腺纤维腺瘤和正常乳腺组织中高表达,而在乳腺癌组织中低表达,差异有显著性(P<0.05);乳腺癌组织中,MVD在HSG阳性表达组低于阴性表达组,差异有显著性(P<0.05);VEGF在乳腺纤维腺瘤和正常乳腺组织中低表达,在乳腺癌组织中高表达,且Spearman等级相关分析显示,在乳腺癌组织中,HSG与VEGF表达呈负相关(r=-0.795,P<0.05);MVD在VEGF阳性表达组高于阴性表达组,差异有显著性(P<0.05);另外,在乳腺癌组织中MVD的表达与肿瘤大小和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 HSG在某种程度上可以抑制肿瘤微血管的生成而降低乳腺癌的转移。可见联合检测HSG和VEGF与MVD的表达有利于更好地判断乳腺癌的进展及预后。

大鼠增殖抑制基因抑制大鼠胶质瘤细胞的增殖及其机制

目的观察腺病毒介导的大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)在大鼠胶质瘤细胞(C6)中的表达及其对大鼠胶质瘤细胞增殖的影响,并探讨其作用的机制。方法用含有rHSG基因的重组腺病毒载体(Adv-rHSG-GFP)转染C6细胞,采用Western blot和免疫细胞化学法检测rHSG蛋白的表达;使用流式细胞仪分析细胞周期,并结合MTT、细胞计数法和平板克隆形成实验观察rHSG对细胞增殖的影响;应用Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期调控蛋白p27Kip1、p21Cip1的蛋白表达变化。结果 Adv-rHSG-GFP转染组C6细胞中:rHSG蛋白的相对表达量均明显高于未转染组和Adv-GFP转染组(P<0.01);流式细胞仪分析结果表明细胞周期被阻滞在G0/G1期,且MTT、细胞计数和平板克隆形成实验显示大鼠胶质瘤细胞增殖受到明显抑制(P<0.01);与未转染组和Adv-GFP转染组相比,周期调控蛋白p27Kip1、p21Cip1表达升高,PCNA表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论 rHSG基因过表达能够抑制大鼠胶质瘤细胞增殖,其机制可能是通过参与细胞周期调节发挥作用。

5-氮胞苷对HSG细胞增殖抑制作用的体外研究

目的体外研究5-氮胞苷(5-azacytidine,5-azaC)对起源于人颌下腺闰管的HSG(HumanSalivaryGland,HSG,)细胞的增殖抑制作用,为5azaC治疗涎腺肿瘤奠定理论和实验基础。方法通过形态学研究、生长曲线的测定、细胞分裂指数测定、银染核仁组织者区分析、流式细胞仪、克隆形成率检测5azaC对HSG细胞的作用。结果光镜下培养的细胞为多边形,细胞可连接成片,胞膜清楚,核大,位于中间,核仁清楚,核仁1～2个。加入5azaC后,部分细胞脱落到培养液中。5μmol/L和10μmol/L5azaC对HSG细胞增殖抑制率分别为85%和95%,细胞分裂减慢,细胞软琼脂克隆形成率降低,流式细胞仪结果表明HSG细胞主要被抑制在G1期。结论5azaC在体外能抑制HSG细胞的增殖。

大鼠增殖抑制基因表达变化与恶性脑胶质瘤生长的关系

目的:探讨大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)表达变化与恶性脑胶质瘤生长之间的关系,为外源性rHSG治疗提供实验依据。方法:采用立体定向法,于尾状核注射C6细胞建立SD大鼠脑胶质瘤动物模型;采用SABC免疫组织化学法检测注射C6细胞后第9、15和21天,脑胶质瘤中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、rHSG及微血管度(microvessel density,MVD)的表达;RT-PCR法检测不同生长期脑胶质瘤中rHSG mRNA的表达。结果:第9、15和21天脑胶质瘤中PCNA标记指数和MVD高于对照组,rHSG蛋白的表达低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);实验组大鼠胶质瘤rHSG mRNA相对表达量分别为(13.53±2.11)%、(10.39±2.71)%和(8.86±1.91)%,低于对照组的(19.94±3.23)%。差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rHSG表达下调可能与大鼠脑恶性胶质瘤的发生、发展及血管增生有关,rHSG的高表达可能会抑制肿瘤的生长。

甲基化抑制剂5-aza-2′-deoxycytidine对K562细胞SHP-1基因表达及细胞增殖与凋亡的影响

本研究探讨5-氮杂胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)对K562细胞中抑癌基因SHP-1的转录调控作用及对K562细胞增殖凋亡的生物学影响,为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据。采用MSP方法检测SHP-1基因甲基化状态,MTT法检测不同剂量(0.5,1,2μmol/L)5-aza-CdR作用K562细胞1,3,5天时对K562细胞存活率的影响,流式细胞术(FCM)分析5-aza-CdR作用1,3,5天时细胞周期及凋亡率的变化,实时定量PCR(FQ-PCR)和Westernblot方法检测5-aza-CdR处理前后SHP-1mRNA及蛋白表达水平、p-STAT5蛋白表达变化。结果表明,K562细胞中存在SHP-1基因的甲基化,5-aza-CdR作用使K562细胞中SHP-1mRNA和蛋白重新表达,而p-JAK2蛋白表达随之呈下降趋势;5-aza-CdR明显抑制K562细胞增殖,并与药物浓度及作用时间呈正相关。JAK2特异性抑制剂AG490明显抑制K562细胞增殖;5-aza-CdR可使K562细胞凋亡率增加,且作用也呈时间依赖性,用药1,3,5天细胞凋亡率分别为9.3%,24.2%,37.7%。2μmol/L的5-aza-CdR处理24小时后,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期。5-aza-CdR作用1,3,5天时G2/M期细胞比例分别为30.7%,23.4%,19.3%。结论:特异性甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR能使K562细胞中沉默的SHP-1基因重新表达,并可能通过JAK/STAT路径活化抑制白血病细胞增殖并诱导其凋亡。

过氧化氢对血管平滑肌细胞增殖和明胶酶A及其抑制因子基因表达的影响

目的 :探讨过氧化氢 (H2 O2 )对体外培养大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖和明胶酶A(MMP - 2 )、及其抑制因子 (TIMP - 2 )基因表达的影响。方法 :先用四甲基偶氮唑 (MTT)法筛选出H2 O2 对VSMC的毒性作用浓度和增殖作用浓度 ,在此基础上用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)法测定H2 O2 对MMP - 2、TIMP - 2mRNA表达的影响。结果 :H2 O2 浓度大于 30 0 μmol/L后显示出对VSMC的致死毒性作用 ;H2 O2 浓度在 0 0 1 - 50 μmol/L内可以刺激VSMC的增殖 ,且呈时间依赖性 ;1 μmol/LH2 O2 、1 0 μmol/LH2 O2 对MMP - 2基因转录有明显的促进作用 ;不同浓度的H2 O2对TIMP - 2基因转录无明显促进作用。结论 :适当浓度的H2 O2 可以促进VSMC的增殖和MMP - 2mRNA表达 ,但对TIMP - 2mRNA表达无明显作用 ,提示H2 O2 参与了血管重塑的不同病理环节。

增殖抑制基因和血管内皮生长因子在胃癌中的表达及其意义

目的探讨增殖抑制基因(HSG)以及血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌中的表达及其意义。方法采用免疫组化法检测HSG和VEGF在胃正常黏膜、癌旁组织及胃癌组织中的表达。结果胃正常黏膜、癌旁组织及胃癌组织HSG的阳性表达率分别为66.7%、58.0%和38.3%,正常黏膜组到胃癌组HSG表达率呈递减趋势,差异有统计学意义(P<0.05);VEGF在3组中的阳性表达率分别为13.3%、20.0%和68.3%,正常黏膜组到胃癌组的表达率呈递增趋势,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman等级相关分析显示,HSG与VEGF表达呈负相关(r=-0.847,P<0.05)。结论 HSG与VEGF的过表达可能是胃癌发生发展以及转移的重要原因之一。

5-azaC对HSG细胞增殖抑制的实验研究

目的:研究5-azaC对HSG细胞的作用,为5-azaC治疗涎腺肿瘤提供理论和实验基础。方法:通过体外生长曲线测定和体内移植实验检测5-azaC对HSG细胞的增殖抑制作用。结果:体外实验表明5-azaC可以抑制HSG细胞的增殖,5×10-6mol/L和10×10-6mol/L5-azaC对HSG细胞的增殖抑制率分别为85%和92%。与对照组相比,用5-azaC处理HSG细胞后再移植到裸鼠皮下,其致瘤性降低。结论:体内、体外实验表明5-azaC能抑制HSG细胞的增殖。

肿瘤转移抑制基因KAI1对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的:探讨肿瘤转移抑制基因KAI1基因对子宫内膜癌细胞(AN3CA和HEC-1-B)增殖及侵袭能力的影响。方法:脂质体介导pcDNA3-KAI1质粒转染人子宫内膜癌细胞AN3CA和HEC-1-B,采用免疫印迹法和流式细胞术检测转染前后肿瘤细胞KAI1蛋白的表达,MTT比色法、软琼脂克隆形成实验观察KAI1基因对肿瘤细胞增殖能力的影响,Transwell侵袭实验检测转染前后肿瘤细胞侵袭能力的变化。结果:转染pcDNA3-KAI1质粒后AN3CA和HEC-1-B细胞内和细胞表面均可检测到KAI1蛋白的稳定表达。转染空白质粒组细胞形成克隆数量多体积较大,细胞克隆形成率为(54.2±3.1)%和(52.7±4.3)%,细胞的倍增时间为21.3h和20.1h;基因转染pcDNA3-KAI1质粒组细胞形成克隆数少体积较小,细胞克隆形成率为(37.4±5.1)%和(32.1±3.7)%,细胞的倍增时间为43.7h和45.2h;两组间细胞增殖能力和克隆形成能力比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。基因转染组细胞的穿膜细胞数为(91±10.7)/HT、(68±10.8)/HT,而空质粒转染组细胞的穿膜细胞数为(292±11.5)/HT、(219+12.7)/HT,两组细胞比较,侵袭能力亦显著下降(P<0.05)。结论:外源性肿瘤转移抑制基因KAI1有效转染可使子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力均下降,KAI1可能成为子宫内膜癌转移的新治疗靶点。

大鼠增殖抑制基因通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖

目的:探究大鼠增殖抑制基因(r HSG)过表达抗C6大鼠胶质瘤细胞增殖的机制。方法:体外培养C6细胞,感染运载r HSG基因的腺病毒载体(Adv-r HSG-GFP),倒置显微镜及流式细胞仪分析腺病毒载体感染效率;应用流式细胞仪分析C6细胞周期;Western blot检测细胞r HSG蛋白、抑癌基因P53蛋白、细胞周期调控蛋白P21cip1、磷酸化及非磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(p-Rb,Rb)表达变化。结果:腺病毒可以高效的将目的基因导入C6靶细胞;Adv-r HSG-GFP组r HSG蛋白的表达量明显高于PBS组和Adv-GFP组(P<0.01);r HSG过表达的C6细胞停滞于G0/G1期细胞的数量明显增加(P<0.01);P53、P21cip1蛋白表达量明显增加(P<0.01),p-Rb蛋白表达降低(P<0.01),Rb蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:r HSG可能通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖。

增殖抑制基因单核苷酸多态性与原发性高血压的相关性

目的探讨增殖抑制基因第二内含子7个单核苷酸多态性位点与原发性高血压的相关性。方法筛选正常血压人群500名和原发性高血压患者930名,提取血中白细胞基因组DNA后设计特定的单核苷酸多态性引物进行定量多聚酶链反应,通过荧光定量方法确定该基因是否存在着某种特定的多态性位点。结果 7个不同的单核苷酸多态性中有3种即rs873457、rs2336384和rs4846085的基因型频率在正常血压组和原发性高血压组之间存在明显的差别(P<0.05),分别为TT∶TC∶CC=21.8%∶46.6%∶31.6%/22.5%∶53.0%∶24.5%、CC∶CA∶AA=21.8%∶46.8%∶31.4%/22.8%∶52.6%∶24.6%及TT∶TC∶CC=22.6%∶46.4%∶31.0%/23.4%∶51.8%∶24.7%,等位基因频率在正常血压组与原发性高血压组之间也存在明显差别(P<0.05),分别为T∶C=45.1%∶51.0%/49.0%∶51.0%、C∶A=45.2%∶54.8%/49.1%∶50.9%及T∶C=45.8%∶54.2%/49.1%∶50.6%,其余4个单核苷酸多态性位点在正常血压组和原发性高血压组之间不存在明显的差别。对不同性别进行分析后发现在男性正常血压组与原发性高血压组的7个单核苷酸多态性位点之间均存在着明显的差别(P<0.05或P<0.01),而在女性正常血压组与原发性高血压组之间没有明显差别(P>0.05)。相关性分析发现体质指数、年龄和基因型与血压之间存在着明显的相关性(P<0.05)。在进行了年龄和性别调整后,回归分析发现体质指数和rs873457与血压密切相关。单倍体型分析发现C-G-A-A-A-C-C(以rs873457、rs2336384、rs1474868、rs4846065、rs4240897、rsrs2236055和rs873458为序)无论在总体人群、男性还是女性人群中,均存在着明显的差别(P<0.01)。结论增殖抑制基因的基因多态性与高血压尤其是男性高血压之间存在着明显的差别。

一氧化氮在17-β雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖和原癌基因c-fos表达中的作用

实验利用大鼠血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells ,VSMC)作为模型 ,观察 17 β雌二醇 (E2 )对VSMC增殖和原癌基因c fos表达的影响 ,并探讨VSMC源性一氧化氮 (NO)在其中的作用。检测指标包括NO释放的测定、细胞计数、3 H Tdr掺入、噻唑蓝 (MTT)测定和c fosmRNA表达。结果显示 ,E2 ( 10 12 ～ 10 -8mol/L)呈浓度依赖性地促进VSMC中NO的释放 ;10 -8mol/LE2 能明显抑制 10 %小牛血清 (FCS)和 10 -7mol/L内皮素 1(ET 1)诱导的细胞增殖和DNA合成 ,E2 的抑制作用均可被雌激素受体 (ER)拮抗剂tamoxifen ( 10 -7mol/L)和一氧化氮合酶抑制剂L NAME( 10 -6 mol/L)明显减轻 ;E2 ( 10 -8mol/L)可明显抑制 10 -7mol/LET 1诱导的VSMCc fos表达 ,这种抑制作用可被L NAME ( 10 -6 mol/L)明显减轻。这些结果提示E2 能抑制VSMC增殖和原癌基因c fos表达 ,这和促进VSMC的NO释放密切相关 。

转染IL-16基因对T淋巴瘤细胞的增殖抑制作用

目的 构建 IL-1 6真核表达载体 ,研究其对 T淋巴瘤细胞的增殖抑制作用。 方法 应用 RT-PCR技术从人外周血单个核细胞中获取 IL-1 6c DNA,构建并鉴定真核表达载体 Pc DNA3 -IL-1 6转染 Karpas T淋巴瘤细胞 ,采用 MTT法和流式细胞术分析 IL-1 6对 Karpas T淋巴瘤细胞的增殖抑制。 结果 PT-PCR显示转染 Pc DNA3 -IL-1 6的 Karpas T淋巴瘤细胞高表达 IL-1 6m RNA,MTT法检测显示其对 Karpas T淋巴瘤细胞具有抑制作用 ,流式细胞术检测转染 Pc DNA3 -IL-1 6的 Karpas T淋巴瘤细胞高表达 CD95分子。 结论 成功构建了真核表达载体 Pc DNA3 -IL-1 6,转染 Karpas T淋巴瘤细胞能使其生长受到明显抑制 ,并且 CD95分子表达增高 ,可能与诱导细胞凋亡有关 ,说明向肿瘤细胞转染 IL-1 6是一种有用的肿瘤生物治疗方法。

rHSG基因调控COPD大鼠气道成纤维细胞增殖凋亡

目的采用脂质体介导携带大鼠增殖抑制基因(rHSG)的真核表达载体,转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,为干预COPD的气道成纤维细胞增殖,打下基因治疗基础。方法构建真核表达载体pEGFP-N1,对重组质粒pEGFP-rHSG进行鉴定并测序;采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-rHSG转染至COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24和48 h及3、5和7 d后,用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测rHSG mRNA的不同时段表达水平,MTT、流式细胞仪检测转染后成纤维细胞增殖及凋亡。结果证实重组质粒pEGFP-rHSG构建成功。转染24 h,rHSG mRNA表达量开始增加,7 d达到高峰,各转染组间rHSG mRNA表达差异显著(P<0.05);转染48 h后rHSG基因转染组成纤维细胞的增殖抑制明显低于未转染组成纤维细胞(P<0.05);转染后48 h凋亡开始,与模型对照组相比,随着时间延长,凋亡逐渐增加,7 d时凋亡率达最大(P<0.05)。结论外源性rHSG基因介导,能够使气道成纤维细胞的增殖受到抑制并诱导其凋亡。