直投式发酵剂制备中乳酸菌增殖条件的探讨

为获得高浓度的乳酸菌细胞,对化学中和法培养乳酸菌的增殖条件进行了研究。主要采用菌落计数和显微镜检的方法,确定乳酸菌增殖的最佳温度、pH值及菌种中球菌与杆菌的比例。结果表明,在优化条件下,即32℃、pH5.8及球菌与杆菌比例为1∶2的培养条件下,乳酸菌活菌数达3.2×1010cfu/mL。

同步接毒条件下鳜传染性脾肾坏死病毒在CPB细胞中的最适增殖条件

为了获知鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)同步接毒最适增殖条件,通过检测不同血清浓度、病毒接种量、细胞状态等培养条件下的病毒拷贝数,确定鳜脑组织细胞(CPB)同步接种ISKNV的最适体外增殖条件。结果表明,上述各因素对ISKNV的增殖量均有明显影响。其中选取处于对数生长中期的CPB细胞,胰酶消化后按照病毒感染复数(MOI)为0.2同步接种ISKNV,培养液中胎牛血清终浓度为6%时,28℃恒温培养9 d后收获,所得病毒拷贝数最多,为2.54×108拷贝/m L。将所测得病毒拷贝数折算成培养基成本进一步分析表明,按照上述相同条件进行接毒,每元人民币培养基所得病毒量也最高,为4.24×1011拷贝。综上所述,本研究基于病毒增殖量及培养基成本对病毒增殖条件进行优化,可为低成本ISKNV疫苗的生产提供理论依据。

基于CPB细胞扩增体系的鳜弹状病毒增殖条件的优化

为获知鳜弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)QY株在体外培养细胞中最适增殖条件,以鳜脑细胞系(Chinese perch brain cell line,CPB)为增殖体系,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)技术所测病毒拷贝数为判断指标,比较同步接毒和异步接毒2种接种方式以及病毒接种量、血清浓度等培养条件对病毒增殖的影响,确定SCRV-QY株在CPB细胞中的最适增殖条件。结果显示,单位体积病毒增殖量方面,异步接毒法优于同步接毒法,以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10将病毒接种长满单层的CPB细胞中,28°C吸附1.5 h,用含2%胎牛血清的L15培养液于28°C培养时,病毒增殖量最高,为5.59×10^(10)拷贝/mL;而从单位成本所获病毒量考虑,同步接毒法筛选出的4种增殖条件单位成本所获的病毒产量优于异步接毒法,其中当MOI=0.03、胎牛血清终浓度为6%时,同步接种对数生长中期的CPB细胞,28°C恒温培养70 h后收获病毒液,单位成本所获病毒量最高,为4.88×10^(13)个拷贝/元。综上所述,本研究以病毒增殖量和培养基成本作为考量,优化SCRV-QY株的增殖条件,可为SCRV疫苗低成本、规模化生产提供理论依据。

8种甜荞的种子消毒及愈伤组织诱导和增殖条件

8种甜荞种子表面消毒所适用的消毒剂和处理时间有所不同。 1 0 %H2 O2 溶液处理1 50min ,对榆 3- 3、黎麻道、浦江荞、龙山荞和富源红花荞的种子有很好的消毒作用 ,并且处理以后种子仍具有很高的萌发率。 862 1、B大粒和美国荞种子的消毒以 0 .1 %的HgCl2 处理 1 2min效果为好。在无菌苗子叶和下胚轴外植体脱分化形成愈伤组织的过程中 ,2 ,4-D起主要作用 ,BA起独特的作用。BA与 2 ,4-D配合使用对于愈伤组织的诱导和增殖具有良好的促进作用。高浓度的 2 ,4-D或低浓度的 2 ,4-D与BA配合使用都可抑制愈伤组织分化根。

甘蓝夜蛾核多角体病毒活体增殖因子及最佳增殖条件的研究

甘蓝夜蛾核多角体病毒Mamestra brassicae nucleopolyhedrovirus(简称Mabr NPV)是甘蓝夜蛾最重要的昆虫病原微生物。本文采用正交法研究影响Mabr NPV在甘蓝夜蛾体内增殖的主要因子及因子的主次顺序,确定互作因子并筛选病毒增殖最佳条件。研究结果表明,影响Mabr NPV产量的因子及互作因子主次顺序为C(饲毒虫日龄)>C×D(饲毒虫日龄与收毒时间互作)>B×C(饲毒剂量与饲毒虫日龄互作)>B×D(饲毒剂量与收毒时间互作)>B(饲毒剂量)>D(收毒时间)>A(温度)。明确因子C对病毒产量有极显著影响,因子C和D存在互作且对产量有显著影响。确定Mabr NPV增殖生产的最佳条件为25℃下、以500 PIB/虫的剂量饲喂12日龄幼虫,9 d后提取病毒,平均单虫病毒产量为1.921×109 PIB,幼虫孵化到收集幼虫提取病毒的生产周期为21 d,病毒增殖3.842×106倍。

MTT方法检测肉鸡淋巴细胞增殖条件的优化

细胞的增殖水平是衡量宿主适应性细胞免疫应答的重要指标之一。免疫系统中淋巴细胞增殖是机体对非己抗原刺激产生免疫应答的重要过程,通过淋巴细胞与抗原或丝裂原在体外培养下,其代谢和形态发生变化,来反映机体细胞的免疫状态。检测淋巴细胞反应的方法主要有MTT比色法、3H-TdR掺入法和BrdU标记法等,这些方法在小鼠和灵长类上得到很好的应用。淋巴胞转化试验中最常使用的T细胞丝裂原是植物血凝素（PHA）和刀豆蛋白A（ConA），

凝结芽孢杆菌增殖条件及抗性的研究

试验以凝结芽孢杆菌活菌数为指标,对凝结芽孢杆菌的增殖条件及抗性能力进行研究。结果表明,培养基最适配方为:氯化钠2 g/L,蛋白胨5 g/L,酵母粉25 g/L,麦芽糖6 g/L,磷酸氢二纳∶磷酸二氢钠=5 g/L∶8 g/L,硫酸镁1.2 g/L,硫酸锰0.3 g/L;最适培养条件为:初始pH值7.4、转速180 r/min、37℃培养20 h,菌落总数可达到3.8×10^(11) CFU/m L。凝结芽孢杆菌耐热性值:D_(80℃)=82.24 min,R_(280℃)=0.9943,D_(90℃)=47.92 min,R_(290℃)=0.9955,D_(100℃)=16.92 min,R_(2100℃)=0.9944,凝结芽孢杆菌的热力致死曲线方程为y=-3.266x+342.96。在pH值为2~6及0.2%~1.4%猪胆盐溶液环境中存活率超过100%。试验旨在为该菌种能广泛应用饲料发酵行业提供依据。

湿地松丛生芽主要增殖条件的优化

对湿地松丛生芽增殖条件作了进一步的改良和优化，研究了卡拉胶、pH、光照和赤霉素、抗坏血酸等附加物质对湿地松丛生芽增殖的影响。研究结果表明：增殖培养基中不同的卡拉胶用量、酸碱度、添加物质和培养室的光照度均对湿地松丛生芽的增殖有较大影响。当卡拉胶为7g／L、pH为5．8～6．0、光照度为2000～3000lx时有利于湿地松丛生芽的增殖和生长；培养基中添加抗坏血酸0．05g／L能有效抑制湿地松丛生芽增殖过程中褐化物质的产生，而赤霉素的添加则不利于湿地松丛生芽的增殖和生长。在改良的增殖培养基中，丛生芽增殖倍数最高可达4．55，丛生芽可增殖到第7代。

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)增殖条件研究

试验研究表明：32℃温度条件下增殖病毒多角体的生产效率最高，以甜菜夜蛾为宿主，5龄幼虫是最适宜的喂毒时期，较低的喂毒剂量可以减少毒源多角体的消耗。5龄、32℃和105～106PIB·ml-1处理组合每头供试幼虫平均日产AcMN－PV多角体可达（2．30～2．

PRRSV NVDC-JXA1株在Marc-145细胞上增殖条件的优化

为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NVDC-JXA1株,优化了细胞培养条件、病毒接种剂量、病毒吸附时间、收毒时间和病毒冻融次数等条件。结果表明Marc-145细胞在MEM培养基、新生牛血清含量80 mL/L,细胞接种密度150 000个/mL,pH7.0条件下生长状态最好;PRRSV NVDC-JXA1株的最佳接种剂量为400 TCID50/mL,病毒吸附时间为30 min,收毒时间为接种后72 h,在-20℃冻融3次,PRRSV NVDC-JXA1株增殖效果最好。该结果为NVDC-JXA1株PRRSV疫苗的生产提供了依据。

响应面法优化草莓品种红颜离体繁殖的增殖条件

为了研究优化红颜草莓继代增殖培养的条件,以草莓品种红颜继代组培苗为试验材料,利用响应面法对其增殖条件进行优化。在单因素的试验基础上,根据Box-Behnken的中心组合试验设计原理,以琼脂浓度、光照度、pH值为试验因子,以增殖系数为响应值,进行3因素3水平的试验设计。结果表明:3因素对植株增殖系数的影响力大小为光照度>pH值>琼脂浓度,最终得到的二元回归方程显示,红颜草莓增殖条件的优化结果如下:琼脂浓度为7.1g/L,pH值为5.37,光照度为2177lx。在此条件下,最佳增殖系数预测值为10.9305,实际操作结果为10.73。

益生屎肠球菌RS3的分离鉴定及增殖条件的优化

为筛选具有益生作用的乳酸菌,该研究从泡菜中筛选到1株细菌菌株RS3,经菌落形态观察、生化试验和16 S rRNA序列分析确定为屎肠球菌。为高效获得屎肠球菌RS3菌体,对其最佳增殖条件进行优化研究。利用单因素筛选和中心复合响应面试验对屎肠球菌RS3菌体增殖用液体培养基和增殖条件进行研究,优化的最佳培养基为乳糖15 g/L、胰蛋白胨25 g/L、初始p H值为8.2、培养温度37℃。与优化前培养条件相比,优化后培养条件下菌体生物量提高了54.9%,乳酸产量提高了53%,为后期规模化培养和益生菌剂开发奠定基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4-F112株在Marc-145细胞上最佳增殖条件的研究

为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HuN4-F112株,优化了细胞培养条件、病毒接种剂量、收毒时间和病毒液冻融次数等条件。结果证明Marc-145细胞在MEM培养基、新生牛血清含量8%、细胞接毒密度1.5×105个/mL、pH7.1条件下生长状态最好;PRRSV HuN4-F112株的最佳接种剂量为3.0×105 TCID50/mL,收毒时间为接种后70～72小时,在-18℃冻融3次,PRRSV HuN4-F112株增殖效果最好。该结果为HuN4-F112株PRRSV疫苗的生产提供了依据。

新城疫病毒(NDV)在免疫鸡胚中增殖条件的优化

新城疫病毒 ( NDV)在鸡胚中的增殖受母源抗体、接种日龄、培养时间、接种剂量、种毒及其稀释倍数、孵化温度、孵化湿度等因素的影响。通过对 NDV在免疫鸡胚中增殖条件的优化配置 ,得出如下结果 :1 0日龄的免疫鸡胚 ,在母源抗体较高的情况下 ( 7log2～ 9log2 ) ,接种种毒的稀释倍数为 1 0 0 0～ 50 0 0倍 ,经过一定孵育时段 。

藏灵菇增殖条件及发酵性能的研究

以藏灵菇增殖率为指标,通过单因素和正交试验研究了藏灵菇的增殖条件为:温度37℃、乳浓度为70%、接种量为5%,藏灵菇的增殖率可达13.05%。藏灵菇发酵性能研究表明,藏灵菇酸乳的乳酸菌菌落总数可达1.35×106 cfu/mL,后酸化现象较弱,且酸乳口感细腻,香气更浓郁。

甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上增殖条件的优化

目的确定甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上最佳增殖条件。方法将3株甲型流感病毒(H1N1 NYMC X-181、H1N1 NYMC X-275和H3N2 NYMC X-263B)在贴壁MDCK细胞上进行传代培养,以其血凝效价和半数细胞感染剂量(median cell culture infective dose,CCID50)为检测指标,分别对其增殖条件胰酶浓度(0.5、1.25、2.5、3.5和4.5μg/m L)、MOI(0.000 1、0.001、0.01、0.1、1)、培养温度(33、34、35、36、37℃)、吸附时间(0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h)、培养时间(24、48、72、96、120 h)进行优化。结果 H1N1 NYMC X-181、H1N1 NYMC X-275和H3N2 NYMC X-263B 3株流感病毒在贴壁MDCK细胞上增殖的最适胰酶浓度分别为2.5、1.25、1.25μg/m L;最适MOI值均为0.01;最适培养温度均为34℃;最适吸附时间分别为1.5～2.0、1.5、1.5 h;最适培养时间均为72 h。结论确定了3株甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上的增殖条件,为后续相关疫苗的研发工作奠定了基础。

条件增殖型腺病毒PSA—ZD55-hTERT对人前列腺癌细胞移植瘤的抑制作用

目的探讨条件增殖型腺病毒PSA—ZD55-hTERT对人前列腺癌LNCaP细胞移植瘤端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达和肿瘤生长的抑制作用。方法建立人前列腺癌LNCaP细胞裸鼠移植瘤模型，瘤体内注射PSA—ZD55-hTERT，定期测量肿瘤体积，免疫荧光检测移植瘤组织中E1A及hTERT表达，原位末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡。结果PSA—ZD55-hTERT能有效沉默hTERT基因，PSA—ZD55-hTERT组hTERT表达水平显著低于Ad—hTERT组、Ad—EGFP组及PBS组，差异显著；Ad—hTERT组、Ad—EGFP组及PBS组细胞凋亡阳性率分别为（49．7±5．1）％、（28．8±4．0）％和（2．8±2．4）％，而PSA—ZD55-hTERT细胞凋亡阳性率为（73．5±6．4）％，表明PSA—ZD55-hTERT能有效诱导肿瘤细胞凋亡；PSA—ZD55-hTERT接种7周后肿瘤体积为（131．5±28．2）mm^3，明显低于Ad—hTERT组[（469．2±74．3）mm^3]、Ad—EGFP组[（583．0±98．5）mm^3]和PBS组[（1547．5±196．4）mm^3]。结论PSA—ZD55-hTERT对裸鼠人前列腺癌LNCaP细胞移植瘤有显著的治疗效果，为治疗前列腺癌提供新的平台。

携带IL-24的条件增殖腺病毒对胃癌化疗的增敏作用

目的观察携带IL-24的条件增殖腺病毒（ZD55-IL24）联合尼美舒利（Nimesulide）对胃癌的抑瘤效应。方法聚合酶链反应（PCR）鉴定条件增殖腺病毒ZD55-IL24并扩增、纯化和滴度测定。ZD55-IL-24感染人胃癌SGC-7901细胞系。结晶紫染色法检测细胞杀伤作用；MTT法检测细胞增殖抑制率；流式细胞术检测细胞凋亡。胃癌SGC7901细胞接种于雌性裸鼠背部，成瘤后随机分组，每组6只。分别瘤体内注射：ZD55-IL24、ZD55IL24＋N、N，磷酸盐缓冲液（PBS），连续注射3d。定期测量肿瘤体积观察肿瘤生长抑制情况，绘制生长曲线。结果PCR鉴定说明ZD55-IL24包含目的基因；流式细胞术显示ZD55IL24能显著诱导SGC7901细胞的凋亡，ZD55-IL24、ZD55-IL24＋N（尼美舒利）、N、无血清培养基处理SGC7901 72h后细胞凋亡率分别为（42．7±3．5）Vo、（60．4±3．7）％、（14．9±2．7）％、（2．4±1．1）％；结晶紫染色结果表明ZD55-IL24对SGC7901细胞有明显的杀伤作用，联合尼美舒利后其作用明显增强；MTT表明用N浓度0．2mmol／L、病毒滴度MOI-10的ZD55-IL24、ZD55-IL24＋N、N作用于SGC7901细胞，72h后细胞增殖抑制率分别为（66．4±3．5）％、（85．7±3．2）％、（19．8±2．3）％。胃癌移植瘤裸鼠模型成瘤率100％。肿瘤生长曲线表明，ZD55-IL24能明显抑制移植瘤生长，联合尼美舒利其作用明显增强。结论ZD55-IL24可在SGC7901细胞内选择性的增殖并诱导细胞凋亡并抑制胃癌裸鼠移植瘤生长，联合尼美舒利后显示出更好的抗肿瘤效果。

高乌头愈伤组织诱导及增殖研究

以高乌头(Aconitum SmomontanumNakai.)植株为材料,研究了不同外植体(芽、叶片、叶柄)、基本培养基、植物生长调节剂和培养条件对高乌头愈伤组织诱导和增殖的影响.结果表明:以MS或B5为基本培养基,附加不同组合的2,4-D、NAA、KT、BA,均可诱导产生愈伤组织,但不同外植体、不同生长调节剂组合对愈伤组织发生均有一定影响;作为外植体,高乌头的芽、叶柄和叶片都可顺利诱导出愈伤组织,生长素2,4-D对高乌头外植体的脱分化起促进作用,但NAA却抑制愈伤组织的形成,细胞分裂素KT和BA均能与2,4-D组合促进愈伤组织的诱导.在B5+2,4-D 2.0 mg.L-1+BA 1.0 mg.L-1培养基上,光照14 h.d-1,温度(22±1)℃,最有利于高乌头愈伤组织的诱导.在此条件下,30 d后,芽的诱导率达95%,叶片的诱导率达70%,叶柄的诱导率达87.5%.愈伤组织最佳增殖条件为B5+2,4-D 2.0 mg.L-1+KT 0.5 mg.L-1,光照14 h.d-1,温度(22±1)℃.继代培养14 d后,平均增殖率达197.5%.

夜蛾颗粒体病毒宿主筛选及其增殖因子主次研究

夜蛾颗粒体病毒(GXW9-3 Mamestra oleracea granulosis virus)简称MOGV GXW9-3。该病毒2013年首次由高小文在江苏镇江发现,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCCNO:V201340,样品呈黑色粉末状,保存于4℃冰箱。MOGV GXW9-3是寄生在鳞翅目夜蛾科昆虫真皮、脂肪组织及血细胞中的一种最重要的杆状病原病毒,以蛋白质包涵体的形式存在,蛋白质包含着一个病毒颗粒,核酸为双链DNA。本文研究影响MOGV GXW9-3增殖宿主及增殖因子的主次,筛选该病毒增殖最佳宿主及其增殖因子主次。研究结果表明,影响MOGV GXW9-3产量的因子及互作因子主次顺序为:宿主细胞 > 饲毒虫日龄与收毒时间互作 > 饲毒虫日龄与收毒时间互作 > 收毒时间 > 温度。明确饲毒宿主,饲毒虫日龄因子对病毒产量有极显著影响,饲毒虫日龄和饲毒虫日龄与收毒时间存在互作且对产量有显著影响。确定MOGV GXW9-3增殖宿主为斜纹夜蛾细胞,最佳生产条件为26~28℃、分别按药剂浓度为:6 × 106 GV/mL、4 × 106 GV/mL、3 × 106 GV/mL、2.4 × 106 GV/mL、2 × 106 GV/mL的剂量饲毒斜纹夜蛾6龄幼虫,14~16 d后提取病毒,斜纹夜蛾6龄幼虫平均单虫个体重约1.046 g,冷冻干燥后每头虫体重量约为:0.085~0.108 g,平均单虫病毒产量约为0.069~0.28亿GV/g,幼虫孵化到收集幼虫提取病毒的生产周期为24 d,病毒增殖倍数为:31.25~43.75倍。