circRAF1调节人卵巢颗粒细胞的增殖与凋亡

目的探讨circRAF1在早发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)中的表达及对人卵巢颗粒细胞(GCs)系(KGN细胞)增殖、凋亡的影响。方法RT-qPCR检测正常卵巢储备功能的患者(n=50)和POI患者(n=50)卵巢GCs及血清中circRAF1的表达,并分析其与卵巢储备功能指标的相关性;构建针对circRAF1的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染至KGN细胞;利用CCK-8、EdU实验检测细胞增殖,JC-1、Tunel实验检测细胞凋亡;RT-qPCR和WB检测细胞增殖与凋亡相关基因(FSHR、PCNA、Bcl-2、Casp-9、Bax)的表达。结果circRAF1在POI患者GCs及血清中表达下降,circRAF1的表达与血清中基础E2和AMH水平呈正相关(P<0.001),而与血清中基础FSH、LH水平呈负相关(P<0.001),同时,circRAF1的表达与AFC呈正相关(P<0.001)。干扰circRAF1的表达可抑制KGN细胞的增殖,促进其凋亡。结论POI患者GCs及血清中的circRAF1表达下调,且与卵巢储备功能下降有关;干扰circRAF1可以抑制GCs增殖,促进其凋亡。

Y-box结合蛋白1通过沉默信息调节因子1 mRNA稳定性调节抑制人颗粒细胞凋亡在早发性卵巢功能不全中的作用与机制

目的:探讨Y-box结合蛋白1(YBX1)调节沉默信息调节因子1(SIRT1)对颗粒细胞增殖和凋亡的影响,研究YBX1和SIRT1在早发性卵巢功能不全(POI)患者及卵巢功能正常患者间表达水平差异及临床意义。方法:留取2022年6月至2023年7月于江苏大学第四附属医院生殖医学中心进行体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)助孕的POI患者(POI组)及卵巢储备功能正常患者(对照组)的颗粒细胞和血清,利用免疫印迹(WB)检测YBX1蛋白表达水平;利用实时荧光定量核酸扩增法(RT-qPCR)检测YBX1及SIRT1 mRNA表达水平,并分析血清中其与卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、抗苗勒管激素(AMH)、窦卵泡数(AFC)的相关性;利用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)、细胞计数试剂8(CCK8)检测细胞增殖、原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;RT-qPCR检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达情况;RNA免疫沉淀(RIP)实验检测YBX1与SIRT1的相互作用。结果:与对照组患者相比,POI组患者颗粒细胞和血清中YBX1蛋白及SIRT1 mRNA的表达降低(P<0.05);血清中YBX1、SIRT1 mRNA表达与FSH、LH负相关(r<0,P<0.05),与E_(2)、AMH、AFC正相关(r>0,P<0.05);在颗粒细胞中上调YBX1后SIRT1蛋白表达量、SIRT1 mRNA的稳定性、EdU阳性率、细胞活性、PCNA mRNA表达量、Bcl2/BAX比值均增加(P<0.05),Caspase-3 mRNA表达量、TUNEL阳性率均降低(P<0.05)。结论:YBX1和SIRT1在POI患者中表达水平显著下调,且其表达水平与临床卵巢功能指标相关;YBX1结合SIRT1 mRNA增强其稳定性,可能促进颗粒细胞增殖,抑制细胞凋亡,提示YBX1和SIRT1有望成为POI诊疗的新靶点。

醛固酮产生腺瘤中细胞死亡和增殖机制

醛固酮产生腺瘤(APA)是原发性醛固酮增多症(PA)的主要病因之一,目前对于其自主分泌醛固酮机制的研究主要集中于体细胞驱动基因突变的筛查。然而,在APA中,肾上腺皮质细胞的死亡和增殖,以及腺瘤的发生和发展的具体机制尚无定论。本文结合近期已发表的肾上腺组织相关的基因组学、转录组学、代谢组学及表观遗传学等的研究,综述APA中细胞死亡与增殖机制的研究进展。

芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的作用机制研究

目的:观察芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:以DU145细胞为研究对象,通过观察不同浓度芪蓝方组(400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0μg/ml)细胞形态变化,筛选出高、中、低浓度应用于后续实验,并采用CCK-8法检测DU145细胞增殖,流式细胞术检测DU145细胞周期、凋亡情况,Western印迹检测DU145细胞中细胞周期、凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase 3的表达。结果:筛选结果显示100、200、400μg/ml浓度的芪蓝方均能显著抑制DU145细胞的生长、降低轮廓清晰度和贴壁能力,且200、400μg/ml浓度的芪蓝方可显著降低DU145细胞活力,故确定高中低浓度为400、200、100μg/ml,并用于后续实验研究。与空白组比较,G2期各浓度组DU145细胞数显著增加(P<0.01),而S期高、中浓度组细胞数显著下降(P<0.01、P<0.05);与空白对照组相比,芪蓝方各组DU145细胞总凋亡数均显著增高(P<0.01),高浓度组Cyclin D1表达显著降低,高、中浓度组Bcl-2表达明显降低,Bax和Cleaved-Caspase 3表达水平明显上升(P均<0.01)。结论:芪蓝方能够抑制前列腺癌DU145细胞的细胞增殖,促进其细胞凋亡,其机制可能与下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达,破坏Bax/Bcl-2平衡,上调Cleaved-Caspase 3表达相关。

miR-153-3p靶向结合BCL2基因调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的实验研究

目的探讨miR-153-3p调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的作用。方法利用生物信息学软件对miR-153-3p的候选靶基因进行预测。实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测miR-153-3p对细胞内mRNA和蛋白表达的影响。用密理博MUSETM细胞检测仪对细胞周期和细胞凋亡情况进行检测。用CCK8法和克隆技术形成实验检测细胞增殖能力。结果生物信息学预测结果显示,miR-153-3p与BCL2分子之间存在一个高可信度的结合区。miR-153-3p mimic能上调miR-153-3p的表达,降低BCL2蛋白的表达。与对照组相比,过表达miR-153-3p的6-10B细胞的凋亡明显增加,增殖能力受到显著抑制。结论miR-153-3p通过下调BCL2的表达,能够促进鼻咽癌细胞凋亡,抑制其增殖。

miR-139—3p在胃癌组织中的表达及其对细胞增殖和凋亡的作用

目的研究miR-139—3p在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平及其对AGS和SGC-7901胃癌细胞株的增殖和凋亡的作用。方法采用qRT—PCR检测38例患者胃癌组织与癌旁组织中miR-139—3p的表达情况，并分析miR-139—3p的表达与胃癌临床病理特征之间的关系；利用miR-139—3p抑制剂下调胃癌细胞株中miR-139—3p的表达，MTT法检测对AGS和SGC-7901细胞增殖的影响，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果miR-139—3p在胃癌组织中表达高于癌旁组织（P〈0.01），其表达增高与肿瘤大小和部位相关（均P〈0．05）；下调miR-139—3p的表达能够抑制胃癌细胞的增殖、促进细胞凋亡（均P〈005）。结论miR-139—3p在胃癌组织中表达增高，可能参与胃癌的发生、发展过程。

大黄素对人肺腺癌A549细胞体外增殖凋亡及VEGF和TNF-α分泌的影响

目的为大黄素抗肺腺癌的临床应用提供理论依据。方法MTT实验检测大黄素不同浓度梯度(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,80μmol/L)和时间梯度(12,24,48和72h)处理后A549细胞的增殖活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术和Hoechst 33258染色法检测大黄素作用A549细胞后引起的细胞凋亡程度;应用酶联免疫吸附分析(ELISA)实验检测大黄素各处理组培养上清液中所含的VEGF、TNF-α的浓度。结果大黄素体外可浓度和时间依赖性地抑制人肺腺癌A549细胞的增殖活力及促进细胞凋亡,抑制A549细胞VEGF的表达和分泌,促进TNF-α的表达和分泌。结论大黄素具有抗增殖、促凋亡、抗血管生成等多种潜能,具有良好的抗人非小细胞肺癌特别是肺腺癌的临床应用前景。

前列腺癌中锌指蛋白ZIC2表达及对细胞增殖和凋亡的影响

背景与目的:锌指蛋白ZIC2在肿瘤中的表达及作用呈组织特异性,其异常表达与肿瘤的预后紧密相关。但ZIC2在前列腺癌中的表达与作用未见相应研究。该研究拟检测前列腺癌组织及细胞中ZIC2蛋白表达情况,明确ZIC2异常与临床病理参数间的关系与及对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用免疫组织化学SP法检测31例经穿刺活检诊断的前列腺癌标本及同期35例经尿道前列腺电切(transurethral resection of the prostate,TURP)获取的良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)组织中ZIC2的表达,分析其异常表达与临床病理参数间的关系;应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰ZIC2基因并转染前列腺癌DU145细胞,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白水平。采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡变化。结果:前列腺癌组织及BPH中ZIC2总阳性表达率分别为90.32%(28/31)及20.00%(7/35),两者间差异有统计学意义(χ^2=32.639,P=0.000)。ZIC2阳性表达率与前列腺癌Gleason评分相关(χ^2=9.753,P=0.003),与前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)、浸润深度无相关性(P均>0.05)。前列腺癌细胞中ZIC2表达明显升高,受干扰后蛋白显著降低;MTT法检测结果显示,ZIC2低表达后细胞生长明显减慢;流式细胞术检测结果显示,ZIC2降低后能有效抑制癌细胞增殖并增加凋亡。结论:ZIC2在前列腺癌中高表达,属癌基因,与Gleason评分密切相关;其表达降低后能有效抑制前列腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。

孕激素对PR-M阳性原代子宫肌瘤细胞增殖和凋亡影响

目的:研究孕激素对孕激素受体M(PR-M)阳性原代子宫肌瘤细胞生长的作用,并探讨其机制。方法:收集2015年9月到2016年6月在郑州大学第三附属医院妇科因子宫肌瘤行全子宫切除的肌瘤标本,原代培养细胞成功后用Western blot分别检测筛选出PR-M(+)/PR-A/B(-)的标本作为实验组和PR-M(-)/PR-A/B(+)作为对照组。用不同浓度米非司酮(MIF)处理,培养48h后,应用MTT法和流式细胞仪分别检测其对PR-M阳性和PR-M阴性子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果:随着浓度的增加与作用时间的延长,PR-M(+)和PR-M(-)子宫肌瘤细胞生长均受到抑制,浓度≥1×10^(-6)mol/L MIF处理48h后,两组肌瘤细胞的增殖抑制率和凋亡率逐渐增加,呈浓度和剂量依赖性(均<0.05)。其中PR-M(+)组肌瘤细胞各浓度增殖抑制率和凋亡率均小于PR-M(-)组,差异有统计学意义(均<0.05)。结论:MIF对PR-M原代培养子宫肌瘤细胞凋亡的作用和抑制增殖的作用时间-剂量依赖性。孕激素可能通过PR-M抑制原代培养子宫肌瘤细胞的凋亡促进肌瘤的发生发展,这种作用可被孕激素受体拮抗剂阻断。

硝酸镓对胃癌细胞增殖与凋亡的作用

目的通过硝酸镓、顺铂单药及二者联合用药对胃癌BGC823细胞作用,观察其对胃癌BGC823细胞诱导凋亡、抑制增殖的影响。方法通过对胃腺癌BGC823细胞培养及干预,采用流式细胞仪技术对凋亡细胞进行测定;MTT技术对肿瘤细胞增殖进行测定。结果 MTT及流式细胞仪检测结果显示:硝酸镓对BGC823细胞作用呈剂量-时间依赖效应;小剂量硝酸镓与顺铂配伍应用能大大提高顺铂作用效应,配伍高浓度组在24 h、48 h、72 h的抑制率为70.0%、71.4%、72.3%。结论硝酸镓对胃癌细胞的作用与顺铂无明显差异,为肿瘤治疗及制备抗肿瘤药物提供新的途径。

FAK表达水平对人肝癌细胞运动、增殖、凋亡等的影响

构建了FAK基因siRNA质粒表达载体并用磷酸钙法转染人肝癌细胞SMMC—7721,采用半定量RT-PCR、Western Blot检测FAK siRNA转染后SMMC—7721细胞FAK mRNA和蛋白表达的变化.以损伤修复法检测FAK siRNA对SMMC—7721细胞迁移的影响,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测FAK siRNA转染对SMMC—7721细胞生长的抑制作用,以Hoechst染色法检测FAK siRNA对SMMC—7721细胞凋亡的影响.结果显示,特异性的FAK siRNA片段能有效降低SMMC—7721细胞FAK mRNA和蛋白的表达水平;转染FAK siRNA后,SMMC—7721细胞生长和迁移均受到抑制,凋亡细胞的数目也显著增多.表明靶向FAK基因的siRNA可以明显抑制SMMC—7721细胞的运动和增殖等生物学行为.

基于Notch通路研究川芎嗪注射液对老年心肌梗死大鼠心肌细胞增殖、凋亡的影响

目的探究川芎嗪注射液对老年心肌梗死大鼠的保护作用及对心肌细胞增殖、凋亡及Notch通路的影响。方法左冠状动脉前降支结扎法建立老年心肌梗死大鼠模型,建模成功后随机分为模型组和干预组;假手术组不结扎做相同处理。干预组腹腔注射120 mg/kg川芎嗪注射液;假手术组和模型组注射等体积生理盐水,持续干预6 w。多普勒超声检测心功能指标左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF);2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死体积;免疫荧光检测心肌组织中细胞增殖蛋白Ki67水平;流式细胞术检测心肌组织凋亡情况;免疫印迹法检测心肌组织中Notch、Ki67、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)1蛋白表达情况。结果与假手术组相比,模型组心功能指标LVEDD、LVESD、心肌梗死体积、心肌细胞凋亡率、心肌组织中Notch、Caspase-1蛋白水平显著升高,LVEF、Ki67细胞数量和蛋白水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,干预组心功能指标LVEDD、LVESD、心肌梗死体积、心肌细胞凋亡率、心肌组织中Notch、Caspase-1蛋白水平显著降低,LVEF、Ki67细胞数量和蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论川芎嗪注射液可实现对老年心肌梗死的保护,可能是通过抑制Notch通路从而促进心肌细胞增殖、抑制心肌细胞凋亡实现的。

自噬与2型糖尿病胰岛β细胞增殖及凋亡

自噬与细胞的生存与死亡密切相关〔1〕。研究发现,自噬在维持胰岛β细胞活性及数量中具有重要作用。在一定氧化应激水平下,自噬可以减少胰岛β细胞凋亡、保证其正常增殖。有研究显示,当环境极度恶劣时,超出自噬的调控能力,自噬和凋亡将同时出现于细胞中。因此,阐述自噬在2型糖尿病(T2DM)中的作用,尤其是对胰岛β细胞生存的影响尤为重要。

乙二醛酶Ⅰ介导孕激素对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡活性的调控

目的:探讨孕激素是否通过其受体调控乙二醛酶Ⅰ(GloⅠ)的表达,进而调控子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡活性。方法:应用Westen blot检测孕激素对GloⅠ,Caspase3,Cyclin D1表达的影响;经孕激素受体(PR)特异性抑制剂RU-486处理后,用Westen blot检测PR介导的GloⅠ,Caspase3,Cyclin D1分子的表达;应用siRNA干扰技术敲除GloⅠ表达后,检测GloⅠ对caspase3和Cyclin D1表达的影响,并分别应用MTT和TUNEL检测孕激素通过GloⅠ介导对细胞增殖和凋亡的影响。结果:(1)孕激素呈剂量依赖效应地下调GloⅠ、Cyclin D1的表达、上调Caspase3的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);(2)MPA+RU-486组GloⅠ,Cyclin D1的蛋白水平比RU-486组、MPA处理组增加,Caspase3的表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);(3)siGloⅠ干扰组GloⅠ蛋白表达水平比阴性对照组明显降低,干扰效率达50%(P<0.05),GloⅠ被干扰后,加入孕激素细胞的增殖活性明显受到抑制,凋亡活性增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:孕激素可通过PR调控GloⅠ介导的子宫内膜癌细胞增殖和凋亡活性。

吗啡和曲马多对MADB-106乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察不同浓度吗啡和曲马多对MADB-106乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步研究。方法将不同浓度吗啡和曲马多与MADB-106乳腺癌细胞直接作用24 h后采用流式细胞法检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖。采用Western blot法检测细胞半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-8(caspase-8)的表达。结果吗啡和曲马多均可浓度依赖性促进MADB-106乳腺癌细胞的凋亡、抑制细胞生长与增殖;等效镇痛浓度吗啡与曲马多对MADB-106乳腺癌细胞的增殖与凋亡的影响并无差异;吗啡可促进MADB-106乳腺癌细胞caspase-3和caspase-8激活片段表达。而曲马多仅促进caspase-3激活片段表达,caspase-8激活片段无显著变化。结论吗啡和曲马多均可浓度依赖性促进MADB-106乳腺癌细胞的凋亡、抑制肿瘤细胞的生长与增殖;吗啡和曲马多均可激活caspase-3途径诱导MADB-106乳腺癌细胞的凋亡,同时吗啡可激活caspase-8途径,而曲马多无此作用。

脑力苏对血管性痴呆小鼠海马细胞增殖及凋亡表达的影响

目的:探讨脑力苏胶囊对小鼠脑组织海马细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用双侧颈总动脉结扎反复脑缺血再灌注的方法制备血管性痴呆小鼠模型。模型成功建立后将其随机分为模型组、假手术组、西药喜得镇组、脑力苏高剂量组、脑力苏低剂量组,后3组为治疗组。给药15 d后进行行为学测验,并采用流式细胞术检测各组海马细胞增殖指数及凋亡率的变化。结果:模型组小鼠学习成绩与记忆成绩下降,各治疗组小鼠的学习成绩与记忆成绩均有提高。流式细胞术检测模型组小鼠海马细胞增殖指数及凋亡率明显增高;其中以脑力苏胶囊低剂量组最为明显,各用药组均低于模型组。结论:脑力苏对血管性痴呆小鼠有明显治疗作用,其作用机理可能与抑制海马细胞过度增殖及凋亡有关。

中药白芷的活性成分欧前胡素对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究中药白芷的活性成分欧前胡素对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法选取2019年1月至2020年4月本院实验室保存的卵巢癌细胞60例,采用96孔板中接种的卵巢癌细胞放置培养箱中培养,分为实验组和对照组,各30例。实验组分别加入不同浓度的欧前胡素干预(1.560、3.125、6.250、12.550、25.250、40.500 mg/L),设置空白对照为对照组。经20μL MTT液培养,去液后检测患者细胞活性;以流式细胞仪检测卵巢癌细胞凋亡率,并进行记录。结果经MTT检测欧前胡素对卵巢癌细胞增殖作用与其剂量相关,且随着欧前胡素浓度升高,其细胞增殖抑制效果也随之升高;经流式细胞仪检测不同浓度的欧前胡素所致的凋亡比例高于对照组,且随着欧前胡素浓度的增加而升高。结论采用中药白芷的活性成分欧前胡素对卵巢癌细胞的增殖有重要的调控作用,促进临床癌细胞的凋亡,可为患者治疗提供可靠帮助,有效控制患者癌变细胞增殖,缓解患者病情,其效果显著,值得临床推广运用。

补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响

目的体外观察补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞的抑制增殖和促进凋亡作用。方法将浓度为640、320、160μmol/L的补骨脂素与MG-63细胞体外培养,采用苔盼蓝染色法绘制细胞生长曲线,噻唑蓝(MTT)比色法测定药物的细胞毒作用,倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化,Hoechst33258细胞荧光染色法观察细胞凋亡的形态变化。结果细胞生长曲线表明细胞增殖数量变化与药物浓度及时间有显著依赖性;MTT测定补骨脂素在72h对MG-63细胞抑制率分别为77.74%、71.05%、61.15%,细胞荧光染色观察到MG-63细胞形态改变。结论补骨脂素抑制体外培养骨肉瘤MG-63细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡。

环氧合酶-2抑制剂对人肝癌细胞增殖凋亡的研究

目的:评价分析环氧合酶-2(COX-2)抑制剂对人肝癌细胞的增殖凋亡作用。方法:采用免疫细胞学、逆转录聚合酶链反应对COX-2在肝癌细胞株中的表达进行检测,经MTT法观察COX-2抑制剂对肝癌细胞增殖的影响;经透射电镜、流式细胞仪对塞来昔布(Celecoxib)诱导肝癌细胞凋亡的作用、对细胞周期的影响进行研究。结果:Celecoxib对肝癌细胞抑制增殖、诱导凋亡呈现出明显的时间、剂量依赖性。Celecoxib作用于HepG2、Bel-7402时间为24 h和48 h的抑制率差异具有统计学意义(P<0.05)。相同浓度时,Celecoxib作用24 h、48 h、72 h肝癌细胞凋亡率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:COX-2抑制剂Celecoxib对肝癌细胞抑制增殖、诱导凋亡呈现出剂量、时间依赖性。在今后的临床诊疗工作中,应对其给予足够的重视。

凉血通瘀方对H_2O_2损伤的血管内皮细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的:观察凉血通瘀方对H2O2损伤的血管内皮细胞增殖、凋亡及P21和P53基因表达的影响。方法:100μmol/L H2O2造成血管内皮细胞氧化应激损伤模型,MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡情况;荧光定量PCR法检测细胞中P21和P53基因表达情况。结果:凉血通瘀方可促进血管内皮细胞增殖,抑制其凋亡;降低P21和P53基因的表达;全面拮抗H2O2对血管内皮细胞的损伤,这可能是凉血通瘀方治疗出血性中风机理所在。