增殖诱导配体(APRIL)研究进展

增殖诱导配体 (aproliferation inducingligand ,APRIL)是肿瘤坏死因子 (TNF)家族的新成员 ,在多种肿瘤组织中有高表达 ,能促进肿瘤细胞增殖 ,防止肿瘤细胞受CD95L、FasL等诱导的凋亡 ;调节体液免疫 ;并在T、B淋巴细胞的成熟和活化中起一定作用。因此 ,APRIL与肿瘤的发生。

稳定表达人可溶性增殖诱导配体(sAPRIL)的CHO细胞株的建立及鉴定

目的:构建稳定表达人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation-inducing ligand,sAPRIL)的CHO细胞株。方法:利用RT-PCR方法克隆出sAPRIL基因,构建表达该基因的慢病毒表达载体,与辅助质粒共转染HEK-293T细胞,以包装病毒颗粒。将病毒上清感染CHO细胞,获得稳定表达sAPRIL的细胞株。利用RT-PCR、Western blot及FACS等方法鉴定其表达。结果:成功克隆出人sAPRIL基因,RT-PCR、Western blot及FACS结果显示成功构建了稳定表达sAPRIL的CHO细胞株。结论:结论:成功获得了稳定表达sAPRIL的细胞株,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

B细胞活化因子/增殖诱导配体对特发性炎性肌病B细胞影响的研究进展

特发性炎性肌病(idiopathic inflammatory myopathies,IIM)是免疫介导肌肉炎症为主要特征的系统性自身免疫性疾病。淋巴细胞是IIM发病机制中的关键免疫调节细胞,可引起自身免疫和炎症反应。B细胞活化因子(B cell activating factor,BAFF)/增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)是肿瘤坏死因子超家族成员,BAFF/APRIL通过与相应受体结合,影响B细胞的增殖、成熟和分化,浆细胞的存活,免疫球蛋白类别的转换,从而调控免疫反应。研究发现,BAFF/APRIL参与多种自身免疫性疾病的发病机制,与IIM发生和发展密切相关,文章对BAFF/APRIL在IIM的研究进展进行综述。

老年多发性骨髓瘤患者血清增殖诱导配体、可溶性细胞间黏附分子-1、血小板生成素和血管内皮生长因子表达水平

多发性骨髓瘤主要特征是恶性变的细胞分泌大量单克隆免疫球蛋白。由于树突细胞是重要的抗原递呈细胞，在激发和控制获得性免疫反应的程度和范围中起重要的作用，也是免疫应答的起始细胞〔1，2〕，因此与其相关的蛋白，可能是促使骨髓瘤发生和发展的因子〔3〕。血清增殖诱导配体（ APRIL）、可溶性细胞间黏附分子（sICAM）－1、血小板生成素（TPO）和血管内皮生长因子（ VEGF）均为此类相关蛋白，骨髓瘤患者四种蛋白血清表达升高〔4～7〕，四者对病变有一定促进作用。本文关注 A－PRIL、sICAM－1、TPO和VEGF在老年人多发性骨髓瘤中的表达及其相关性。

人胰腺癌组织中增殖诱导配体蛋白的表达及意义

目的观察人胰腺癌组织中增殖诱导配体(APRIL)蛋白的表达情况,探讨其与胰腺癌生物学行为的关系。方法免疫组化染色法检测人胰腺癌组织(n=20)及正常胰腺组织(n=10)APRIL蛋白的表达,分析不同临床病理指标下胰腺癌组织中APRIL蛋白的表达。结果胰腺癌组织中APRIL阳性率为90.0%(18/20),明显高于正常胰腺组织0(0/10)。胰腺癌组织不同临床病理指标下(肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、有无远处转移、肿瘤大小),APRIL蛋白表达无显著差异。结论APRIL蛋白表达可能与胰腺癌的发生、发展有关。

增殖诱导配体及其受体在肿瘤组织中的表达与意义

目的分析增殖诱导配体(APRIL)及其受体在不同肿瘤组织及肿瘤发展不同阶段的表达水平,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测了临床上常见肿瘤组织中APRIL及其受体mRNA的准确含量,并以靶基因和内参mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果肿瘤组织中APRIL表达水平显著高于交界组织(P<0.05)和正常组织(P<0.05);B细胞成熟抗原(BCMA)和穿膜蛋白活化物(TACI)表达水平在大多数肿瘤组织中与正常组织差异无统计学意义(P>0.05);APRIL在肠上皮化生、异型增生和胃癌组织中表达水平显著高于正常黏膜(P<0.05),APRIL在胃癌组织中表达水平显著高于肠上皮化生和异型增生(P<0.05),而其受体BCMA和TACI在各组胃黏膜病变之间表达水平无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立RFQ-PCR检测APRIL及其受体mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;APRIL在肿瘤发生、发展过程中可能起了重要作用;除了BCMA和TACI外,肿瘤细胞可能还存在APRIL未知受体;APRIL在某些类型肿瘤有可能主要是通过受体BCMA而不是TACI发挥作用。

特发性膜性肾病患者血清增殖诱导配体水平与临床病理指标及预后的关系

目的探讨特发性膜性肾病(IMN)患者血清增殖诱导配体(APRIL)水平与临床病理指标及预后的关系。方法选取2018年1月至2020年1月于该院肾脏内科住院,并行肾活检术的188例肾病综合征患者为研究对象,根据诊断标准分为IMN组72例,继发性膜性肾病(SMN)组12例和非膜性肾病(non-MN)组104例,比较3组一般资料及血清APRIL水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析APRIL在诊断IMN中的临床价值。根据IMN组APRIL水平平均值将IMN组分为高表达组38例和低表达组34例,比较两组临床病理特征。对IMN组进行随访,采用生存曲线分析评估不同APRIL水平对IMN患者预后的影响。结果与SMN组和non-MN组比较,IMN组患者24 h尿蛋白、三酰甘油、总胆固醇、抗PLA2R抗体及血清APRIL水平升高,血肌酐、免疫球蛋白G、免疫球蛋白A水平降低(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,当APRIL最佳截断值为13.782μg/L时,诊断IMN的曲线下面积(AUC)为0.875。APRIL高表达组24 h尿蛋白、抗PLA2R抗体、免疫球蛋白G(IgG)染色强度均高于APRIL低表达组(P<0.05)。生存曲线分析结果显示,与高表达组比较,低表达组累积缓解率更高(P<0.05)。结论血清APRIL水平与IMN患者病情严重程度相关,检测APRIL水平可作为辅助诊断IMN的生物标志物之一。患者APRIL水平过高时可能影响预后。

自身免疫病患者增殖诱导配体基因mRNA表达水平的研究

目的建立检测增殖诱导配体（a proliferation—inducing ligand，APRIL）mRNA的SYBRGreenⅠ实时定量PCR方法，了解系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）等自身免疫病患者外周血单个核细胞（PBMC）中APRIL的表达水平及其与自身免疫性疾病发病机制、预后之间的关系。方法构建克隆载体pGEM—TEasy—APRIL作为定量模板，定量检测58例自身免疫病（SLE、RA）确诊病人和20例健康献血者的外周血APRIL mRNA表达量，以APRIL mRNA和内参GAPDH mRNA表达量的比值作为APRIL表达水平的指标。结果自身免疫病患者的APRIL mRNA表达范围3．95～192．0，均值为29．68±4．5。20例正常对照者APRIL mRNA的表达范围3．1-18．7，均值为10．56±2．0。自身免疫病患者APRIL mRNA的表达水平高于正常对照组；久治不愈或疗效差者APRIL mRNA表达水平显著高于初发患者及治疗后缓解患者，但后两组差异无显著性意义。结论自身免疫性疾病（SLE、RA）患者的APRIL mRNA表达水平升高，疗效差、久治不愈患者表达水平更高。

肿瘤坏死相关凋亡诱导配体对前列腺癌及膀胱癌细胞增殖、凋亡的作用

目的:研究重组并纯化的肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白对前列腺癌及膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:将不同浓度的TRAIL蛋白与培养的前列腺癌细胞(PC-3细胞)和膀胱癌细胞(5637细胞)共孵育24 h后,采用细胞增殖实验及流式细胞术检测肿瘤细胞的增殖及凋亡。结果:PC-3细胞株中,与未处理组比较,TRAIL蛋白浓度在20、40、80、160 ng·ml-1时细胞增殖率均有显著性差异;而在5637细胞株中,与未处理组比较,TRAIL蛋白浓度在5、10、20、40 ng·ml-1时细胞增殖率均有显著性差异。流式细胞实验结果也证实,随TRAIL蛋白浓度的增高,两种肿瘤细胞凋亡率增加。结论:重组并纯化TRAIL蛋白可通过抑制前列腺癌及膀胱癌细胞的增殖,诱导其凋亡而产生抗肿瘤的作用。

增殖诱导配体在乳腺癌原发灶表达及与预后的关系

目的探讨早期乳腺癌原发灶增殖诱导配体（A proliferation inducing ligand,APRIL）表达分布与预后的关系。方法回顾性收集2000年1月~2002年12月在解放军总医院手术的130例Ⅰ~Ⅲ期乳腺癌患者的临床资料及石蜡切片,用免疫组织化学法检测乳腺癌原发灶APRIL表达分布情况并分析其与CD8、CD4阳性淋巴细胞浸润强度的关系。分析APRIL表达分布情况与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。结果在大部分病例均可观察到肿瘤细胞的细胞质、间质细胞及部分基质为APRIL染色阳性。APRIL肿瘤细胞质强度与APRIL阳性间质细胞密度正相关（P=0.009）,与Ki67百分比正相关（P=0.003）。APRIL阳性间质细胞密度与CD4＋间质细胞密度（P〈0.001）和CD8＋间质细胞密度（P〈0.001）均正相关。在激素受体阴性（雌激素受体和孕激素受体均为阴性）患者,APRIL阳性间质细胞密度升高与较好的预后相关,是DFS（HR=0.313,95%CI=0.107-0.920,P=0.035）的独立保护性预后因素。结论乳腺癌间质免疫细胞广泛表达APRIL,乳腺癌细胞APRIL染色强度与肿瘤细胞的增殖正相关,提示免疫细胞可能通过分泌APRIL促进乳腺癌细胞增殖。在激素受体阴性患者,乳腺癌间质APRIL阳性细胞较多的患者预后较好。

过敏性紫癜患儿免疫功能变化及增殖诱导配体表达的研究

过敏性紫癜（HSP）是儿童时期常见的一种以全身性小血管炎症为主要病变的出血性变态反应性疾病,发病机制至今仍不明确,近年研究发现,机体免疫功能紊乱在HSP的发病中具有重要作用。增殖诱导配体（APRIL）作为1998年发现的肿瘤坏死因子配体家族新成员,近年来受到越来越多的关注。

系统性红斑狼疮患者血清增殖诱导配体水平的检测及其临床意义

目的:检测系统性红斑狼疮(SLE)和类风湿性关节炎(RA)患者血清中增殖诱导配体(APRIL)的水平,探讨APRIL水平与SLE患者临床指标的相关性及APRIL在SLE发病中的作用。方法:采用ELISA法检测SLE患者组(48例)、RA患者组(16例)和正常对照组(16例)血清APRIL水平,并与SLE活动指数(SLEDAI)及实验室指标进行对比分析。结果:SLE组和RA组血清APRIL水平高于正常对照组(P<0.01),SLE组高于RA组(P<0.01)。SLE组中抗Sm抗体阳性患者APRIL水平高于阴性患者(P<0.05)。抗U1-RNP抗体阳性患者APRIL水平高于阴性患者(P<0.05),抗SSA/SSB抗体、抗ACL抗体、抗ds-DNA抗体阳性和阴性患者APRIL水平差异无统计学意义。SLE患者血清APRIL水平与其补体C3、C4呈负相关关系(r1=-0.819,P<0.01;r2=-0.549,P<0.01),与SLEDAI评分、免疫球蛋白、抗核抗体谱等免疫学指标无相关性。结论:APRIL在SLE患者中特异性升高,可能在狼疮发病中起重要作用;血清APRIL水平可能与SLE患者疾病活动程度有关联,但尚不能确定是否可作为疾病活动性指标。

靶向胰腺癌细胞株增殖诱导配体基因小干扰RNA的制备及纯化

目的:制备及纯化针对增殖诱导配体基因(APRIL)的小干扰RNA(APRIL siRNA),为进一步研究APRIL基因在人胰腺癌中的作用奠定基础。方法:构建靶向胰腺癌CFPAC-1细胞株APRIL基因双链RNA(APRIL dsRNA)的表达质粒pET-22b-APRIL,在大肠杆菌中发酵表达APRIL dsRNA,并利用CF-11树脂亲和层析纯化;用大肠杆菌Ⅲ型RNA水解酶(RNaseⅢ)水解dsRNA,制备APRIL siRNA,应用DEAE树脂离子交换层析使RNaseⅢ与核苷酸分离,分子筛层析进一步分离纯化APRIL siRNA。将纯化后的APRIL siRNA转染CHO细胞,荧光显微镜下观察转染后CHO细胞APRIL蛋白的表达情况。结果:pET-22b-APRIL转染大肠杆菌后,经IPTG诱导能大量表达APRIL dsRNA,表达产物经CF-11树脂纯化能得到纯化的APRIL dsRNA;dsRNA经RNaseⅢ水解后,过DEAE树脂离子交换层析柱,经5%PAGE、12%SDS-PAGE电泳证实RNaseⅢ与核苷酸分离,进一步经分子筛层析分离纯化,得到纯化APRIL siRNA。荧光显微镜下观察结果表明,APRIL siR- NA转染CHO细胞能明显抑制APRIL蛋白的表达。结论:成功制备了靶向CFPAC-1细胞株的APRIL siRNA,为下一步敲减CFPAC-1细胞APRIL基因的研究奠定了基础。

慢病毒载体介导RNA干扰体外抑制人胰腺癌细胞增殖诱导配体的表达

目的:观察慢病毒表达载体介导的RNA干扰(RNAi)对人胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖诱导配体(a proliferation-inducingligand,APRIL)表达的影响,为后续的以APRIL基因为靶点的胰腺癌基因治疗研究奠定基础。方法:应用基因工程技术,筛选出3条针对APRIL基因的RNAi靶序列,分别与pGCL-GFP载体连接,构建3个重组慢病毒表达载体LV-APRILshRNA1、LV-APRIL shRNA2、LV-APRIL shRNA3;将连接产物转化到DH5α感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定。将LV-APRIL shRNA、pHelper1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度。将包装产生的3种重组慢病毒分别感染CFPAC-1细胞,实时定量PCR和Western印迹检测CFPAC-1细胞APRIL mRNA和蛋白的表达,并与未转染及空转染细胞进行比较。结果:3个慢病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致,经包装产生的病毒滴度分别为5×107、6×107、4×107TU/ml。感染CFPAC-1细胞后,APRIL基因mRNA和蛋白的表达量与未感染慢病毒的细胞组及空载体感染组相比均明显下降(P<0.05),其中LV-APRIL shRNA1、LV-APRIL shRNA2作用较明显,使mRNA表达分别下降73%和68%,蛋白表达分别下降66%和59%(P<0.05);而未感染慢病毒的细胞组与空载体组相比无统计学差异。结论:成功构建针对APRIL基因的3个慢病毒载体LV-APRIL shRNA,体外感染CFPAC-1细胞后可有效抑制APRIL基因和蛋白的表达。

增殖诱导配体在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的定量分析多发性骨髓瘤患者化疗前后外周血单个核细胞和血浆中增殖诱导配体(APRIL)mRNA及蛋白的表达水平。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)及实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)技术测定靶基因及靶蛋白的准确含量。结果 MM患者化疗前APRIL mRNA及蛋白表达水平均显著高于正常对照(P<0.05);化疗前Ⅲ期APRIL mRNA及蛋白表达水平显著高于Ⅰ期及Ⅱ期(P<0.05);化疗后PD组显著高于CR及PR组(P<0.05)。结论 APRIL可能参与MM的发生与发展并与肿瘤负荷量及疗效密切相关,其mRNA与蛋白表达水平相一致,且可能成为有效治疗MM的新靶点。

增殖诱导配体在大肠癌细胞株上的表达、定位及意义

目的了解增殖诱导配体(APRIL)在大肠癌细胞株上的表达、定位及意义。方法分别采用RT-PCR和Western Blotting技术检测APRIL在大肠癌细胞株SW620、LOVO、HCT116、HT29及SW480上的表达,同时采用ATP法检测这些大肠癌细胞株对5-FU的耐药性;以LOVO细胞为研究对象,用细胞免疫荧光技术分析APRIL蛋白的细胞定位情况。结果 RT-PCR和Western-blotting检测显示,APRIL在不同大肠癌细胞株中存在差异性表达,在LOVO、HCT116相对高表达,而在SW480、SW620、HT29相对低表达,其表达水平与5-FU耐药性呈正相关。激光共聚焦显微镜观察发现APRIL蛋白在LOVO细胞中主要定位于细胞浆,胞核中少见。结论 APRIL在大肠癌细胞株上有差异表达,其表达水平与大肠癌细胞株的5-FU耐药性有相关性。APRIL主要定位于胞浆。

血清可溶性增殖诱导配体检测在结直肠癌中的诊断价值研究

目的探讨血清可溶性增殖诱导配体（sAPRIL）检测在结直肠癌中的诊断价值。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测34例结直肠癌患者、32例良性肠部疾病患者及26例健康体检者的血清中sAPRIL水平。结果肠癌组sAPRIL的中位值为10．43ng／ml，高于肠炎组（4．89ng／m1）和健康对照组（3．30ng／m1），差异有统计学显著性意义P=0．000。ROC曲线下面积为0．85（95％CI：0．76～O．93）、cut-off值是5．41ng／ml、敏感度82．4％、特异度62．5％、阳性预测值70．0％、阴性预测值76．9％、诊断效率72．7％。sAPRIL敏感度高于CEA（73．5％）和CAl9-9（64．7％）。血清sA—PRIL与CEA（癌胚抗原）和CAl9—9（糖类抗原19—9）呈线性相关。结论sAPRIL有较好的敏感度，可用于结直肠癌的诊断。

B细胞活化因子/增殖诱导配体系统与系统性红斑狼疮的研究进展

系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病,其发病机制还不完全明确,现有治疗方法效果也不确切。近年来关于肿瘤坏死因子家族新成员B细胞活化因子(BAFF)及其与SLE发病和SLE临床治疗的研究有较多报道。本文从以下几个方面对相关研究进行综述:BAFF/增殖诱导配体(APRIL)系统的研究进展;BAFF/APRIL系统在SLE发病机制中的作用;BAFF/APRIL系统与SLE不同临床表型的关系和该系统作为疾病活动生物标志物的研究进展;BAFF/APRIL系统与SLE靶向治疗的关系。为进一步开展BAFF/APRIL系统与SLE的研究提供参考。

增殖诱导配体在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的:研究各宫颈组织中增殖诱导配体(APRIL)蛋白的表达及其与宫颈癌分型、分期、分化及淋巴结转移之间的关系。方法:选择77例宫颈癌组织,30例正常或慢性宫颈炎组织,45例宫颈癌前病变组织,采用免疫组织化学染色法检测组织标本中APRIL蛋白表达水平。结果:APRIL在正常或慢性宫颈炎组织、宫颈癌前病变组织和宫颈癌组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。不同分化的宫颈癌组织APRIL蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织中APRIL蛋白的表达与肿瘤分型、分期、淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:APRIL蛋白的高表达常见于宫颈癌组织而少见于正常或慢性宫颈炎组织及宫颈癌前病变组织。APRIL蛋白检测对宫颈癌早期诊断、及时治疗有一定临床意义。

结直肠癌变过程中增殖诱导配体及其受体表达水平分析

目的分析结直肠癌发生各阶段组织中增殖诱导配体（APRIL）及其受体mRNA的表达水平。方法在APRIL及其受体基因的高保守区设计相应引物和荧光探针，实时检测PCR产物的荧光强度，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA的准确含量，并以靶基因和内参β2微球蛋白（β2M）mRNA含量比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果批内和批间重复性测定的变异系数（cv）分别为6．52％-12．02％和8．76％-14．16％。APRIL在中、重度异型增生肠组织中的表达水平显著高于正常肠粘膜（P〈0．05），在原位癌、浸润癌组织中的表达水平又显著高于正常肠粘膜（P〈0．05），而其受体B细胞成熟抗原（BCMA）和穿膜蛋白活化物（TACI）在各种胃粘膜病变之间表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论APRIL在结直肠癌病变演进过程中呈现累积和渐进趋势。可能在结直肠癌发生、发展过程中起重要作用。