热休克蛋白47在增生性玻璃体视网膜病变增生膜组织的表达以及转化生长子因2-β对视网膜色素上皮细胞中热休克蛋白47表达的影响

目的：观察热休克蛋白（HSP）47在增生性玻璃体视网膜病变（PVR）增生膜中的表达及转化生长因子（TGF）-β2对视网膜色素上皮（RPE）细胞 HSP47表达的影响。方法收集行玻璃体切割手术的PVR 患者增生膜病理标本,苏木精-伊红、Masson 及免疫组织化学染色,观察其组织病理特征及 HSP47的表达。加入浓度分别为0、1、5、10 ng/ml 的 TGF-β2刺激培养人 RPE（ARPE-19）细胞,并根据此浓度此分为4组；浓度为5 ng/ml TGF-β2刺激细胞0、12、24、48 h。荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞内 HSP47、Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）的 mRNA 和蛋白表达情况。结果光学显微镜观察发现,PVR 增生膜中可见类圆形上皮样细胞及色素颗粒,大量胶原蛋白成分；HSP47在多数上皮样细胞胞浆及间质内呈阳性表达。RT-PCR 检测结果显示,1、5、10 ng/ml 组细胞内 HSP47、Col-ⅠmRNA表达较0 ng/ml 组分别上调了1.32、2.35、1.85倍和1.29、1.52、2.11倍,差异均有统计学意义（HSP47：F =27.21,P 〈0.05；Col-Ⅰ：F =23.45,P 〈0.05）；TGF-β2作用0、12、24、48 h 后,细胞内 HSP47、Col-ⅠmRNA 表达较0 h 分别上调了1.56、1.84、2.86倍和1.57、1.86、2.78倍,差异均有统计学意义（HSP47：F =31.56,P 〈0.05；Col-Ⅰ：F =54.43,P 〈0.001）。Western blot 检测结果显示,1、5、10 ng/ml 组细胞内HSP47、Col-Ⅰ蛋白表达较0 ng/ml 组分别上调了2.33、2.89、2.60倍和1.18、1.49、2.11倍,差异均有统计学意义（HSP47：F =39.78,P 〈0.05；Col-Ⅰ：F =29.10,P 〈0.05）。TGF-β2作用12、24、48 h 后,细胞内HSP47、Col-Ⅰ蛋白表达量较0 h 分别上调了2.08、2.37、2.80倍和1.38、1.59、2.16倍,差异均有统计学意义（HSP47：F =49.18,P〈0.05；Col-Ⅰ：F =42.52,P〈0.05）。结论 HSP47在 PVR 增生膜中呈阳性表达,TGF-β2可能通过促进 ARPE-19细胞 HSP47的表达,增加 Col-Ⅰ的合成与沉积。

热休克蛋白47和转化生长因子-β2在增生性玻璃体视网膜疾病患眼玻璃体及视网膜前增生膜组织中的表达

目的观察探讨热休克蛋白（HSP）47和转化生长因子（TGF）-β2在增生性玻璃体视网膜疾病患眼玻璃体组织与视网膜前增生膜组织中的表达及其意义。方法临床确诊为增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的48例48只眼及增生型糖尿病视网膜病变（PDR）的50例50只眼纳入研究。同时纳入特发性黄斑裂孔（IMH）患者20例20只眼作为对照。收集患眼玻璃体及PVR、PDR患眼视网膜前增生膜、IMH患眼内界膜组织。采用酶联免疫吸附测定法检测所有患眼玻璃体组织中HSP47、TGF-β2的表达；免疫组织化学染色观察PVR、PDR患眼视网膜前增生膜以及IMH患眼内界膜组织中HSP47、TGF-β2及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。分析PVR、PDR患眼视网膜前增生膜组织中HSP47阳性表达与TGF-β2和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白阳性表达之间的相关性。结果PVR、PDR、IMH患眼玻璃体组织中HSP47表达分别为（212．35±23．32）、（231．30±26．79）、（171．06±28．91）pg／ml；TGF-β2表达分别为（1919．96±318．55）、（1939．39±177．57）、（1194．61±234．20）pg／ml。与IMH患眼比较，PVR、PDR患眼玻璃体组织中HSP47、TGF-β2表达明显增强，差异有统计学意义（F=12．952、34．532，P〈0．01）。PVR、PDR患眼视网膜前增生膜组织中HSP47、TGF-β2及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白均呈强阳性表达，HSP47、TGF-β2表达在细胞浆及细胞间质中，Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达在细胞浆及细胞外基质中。IMH患眼内界膜组织中HSP47及Ⅲ型胶原蛋白表达呈阴性，TGF-β2表达呈弱阳性，Ⅰ型胶原蛋白表达呈阳性。PVR、PDR患眼视网膜前增生膜组织中HSP47、TGF-β2及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达较IMH患眼明显提高，差异有统计学意义（F=13．469、18．752、12．875、20．358，P〈0．01）。PVR（r=0．475、0．556、0．468）、PDR（r=0．484、0．589、0．512）患眼视网膜前增生膜组织中HSP47阳性表达与TGF-β2和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白阳性表达均呈正相关（P〈0．05）。结论HSP47、TGF-β2在PVR、PDR患眼玻璃体及视网膜前增生膜组织中表达增强；其表达部位均在细胞浆及细胞外间质中。HSP47和TGF-β2可能通过促进胶原蛋白合成参与PVR与PDR的病理过程。

增生性玻璃体视网膜病变中上皮-间质转化机制研究现状

上皮-间质转化（EMT）是指上皮细胞在特定生理或病理情况下向间质细胞表型转变的过程；是增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的重要病理变化。转化生长因子β等细胞因子通过调控下游信号通路诱导视网膜色素上皮（RPE）细胞发生 EMT；微小 RNA 也参与调控 RPE 细胞发生 EMT。深入了解 EMT调控因素和相关信号通路,从而抑制 RPE 细胞发生 EMT,将为 PVR 防治提供新的途径。