增食欲素受体2在哺乳仔猪空肠中的表达规律

采食状况是影响猪早期生长发育的一个主要因素。增食欲素在调节食欲上具有重要作用,但其发挥作用的前提是必须与其受体结合。为研究增食欲素受体2(HCRTR2)在哺乳仔猪肠道是否表达及其表达规律,本研究采用实时荧光定量PCR方法,检测其在0、3、8、14、21日龄大约克仔猪空肠中的表达。结果表明:HCRTR2能在哺乳仔猪空肠中表达,与0日龄相比,HCRTR2在3、8、14、21日龄表达水平均明显上升,其中在3日龄的表达量达到最高水平,而后逐渐下降趋于平稳状态,增加幅度分别为5.2、3.5、2.9、2.7倍。这表明HCRTR2在哺乳仔猪空肠中有表达,且在3日龄达到高峰。据此可以推测,该基因在仔猪肠道生长发育过程中具有调节作用。

增食欲素研究进展及应用前景

本文介绍了增食欲素的发现、结构、功能、定位及其应用前景。

营养性肥胖大鼠的脂代谢紊乱与下丘脑中增食欲素A的表达分析

目的:研究营养性肥胖大鼠下丘脑中增食欲素(orexin A)表达与脂代谢紊乱的规律。方法:高脂饮食诱导并评估营养性肥胖大鼠动物模型;采用化学发光免疫分析法和生化酶法测定大鼠血清胰岛素(Ins)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC);应用实时定量PCR检测下丘脑组织中orexin A mRNA的表达规律。结果:大鼠高脂膳食饲养8周后,营养性肥胖大鼠的体重、体脂含量和Lee′s指数均高于对照组,血清Ins增加约50%,TG和TC分别增加约94%和43%(P<0.05);营养性肥胖大鼠下丘脑中orexin A的mRNA表达减少约57%(P<0.05),且orexin A的表达量与Lee′s指数、Ins、TG、TC呈显著负相关,相关系数分别为r=-0.798(P<0.05)、r=-0.868(P<0.05)、r=-0.981(P<0.05)和r=-0.815(P<0.05)。结论:在大鼠高脂膳食诱导的营养性肥胖过程中,下丘脑orexin A的低表达和脂代谢紊乱均与营养性肥胖的发生密切相关。

胰岛素诱导的低血糖大鼠下丘脑增食欲素-A的表达

目的:探讨急性低血糖应激对大鼠下丘脑增食欲素-A(orexin-A)的表达影响。方法:胰岛素皮下注射建立急性低血糖大鼠模型,检测外周血中葡萄糖和胰岛素水平的变化。采用免疫组织化学染色观察下丘脑orexin-A表达的改变和灰度值测量,观察其染色强度。结果:低血糖禁食组大鼠下丘脑orexin-A的表达明显增加(P<0.05),而低血糖进食组orexin-A表达无明显改变。灰度分析显示低血糖禁食组染色强度最高,与对照组比较有明显统计学差异(P<0.05)。结论:急性血糖的降低可以增强大鼠下丘脑orexin-A的表达,而摄食行为可抑制此效应。

增食欲素受体1在大鼠胰岛细胞中的表达研究

目的确立中枢神经系统外(胰岛细胞中)增食欲素受体1(OX1R)的存在;探讨葡萄糖对胰岛细胞产生的影响及可能的作用机制。方法原位杂交定位检测大鼠胰腺组织中OX1R mRNA的表达情况;观察不同浓度葡萄糖(2.8,8.3,16.7mmol/L)对体外细胞培养的大鼠胰岛细胞中orexin系统的影响;实时定量PCR检测胰岛细胞中orexin和OX1RmRNA的表达;应用流式细胞仪检测胰岛细胞增殖情况。结果大鼠胰岛细胞胞浆中有OX1R mRNA的表达,而没有OX2R mRNA的表达。培养液中2.8mmol/L葡萄糖导致胰岛细胞中orexin的基因表达增高约100%,16.7mmol/L葡萄糖使orexin表达减少近50%;OX1R mRNA的表达对血糖快速变化的反应不敏感。培养液中葡萄糖升高或降低均抑制胰岛细胞增殖。结论OX1R基因在中枢神经系统外的胰腺组织中有表达,在周围系统可能直接参与能量平衡及内分泌代谢的调控;培养液中葡萄糖浓度的变化对胰岛细胞中OX1R的表达没有显著影响,但会影响胰岛细胞的增殖功能。

儿童营养状态与血增食欲素A、瘦素的相关性

目的探讨不同营养状态儿童血中增食欲素A、瘦素水平的变化及其相关性。方法检测29例营养不良儿童和29例肥胖儿童的外周血增食欲素A、瘦素水平,并与29例性别、年龄匹配的健康儿童比较,同时分析血增食欲素A、瘦素、BMI之间的相关性。结果①营养不良儿童中外周血增食欲素A水平显著高于对照组(F=4.551,P=0.012),瘦素水平显著低于对照组(F=4.074,P=0.005),未发现性别对增食欲素A、瘦素水平的影响存在交互作用(P>0.05);②肥胖组儿童外周血增食欲素A水平显著低于对照组(F=5.063,P=0.008),肥胖组血清瘦素水平显著高于对照组(F=5.105,P=0.007),未发现性别对增食欲素A、瘦素水平的影响存在交互作用(P>0.05);③相关性分析表明营养不良组、肥胖组与对照组3组中血增食欲素A与BMI成负相关(P<0.05),血瘦素水平与BMI存在着正相关性性(P<0.05),而血增食欲素A与血瘦素水平无显著相关性存在(P>0.05)。结论外周血增食欲素A水平、瘦素水平与儿童的营养状态有关,增食欲素A与瘦素参与了机体营养状态的调节。

新生儿外周血增食欲素A水平分析

目的观察足月儿与早产儿外周血增食欲素A水平的差异,分析影响外周血增食欲素A水平的相关因素。方法检测并比较25例早产儿和27例足月儿的外周血增食欲素A水平,同时分析外周血增食欲素A水平与新生儿出生体重、胎龄和母亲BMI之间的相关性。结果(1)早产儿组外周血增食欲素A水平显著高于足月儿(F=6.025,P=0.002),未发现性别对增食欲素A水平的影响与新生儿是否足月存在交互作用(P=0.776);(2)相关性分析表明早产儿中外周血增食欲素A水平与出生体重呈负相关(P=0.001),与出生时胎龄呈负相关性(P=0.007);足月儿中外周血增食欲素A水平与出生体重呈负相关性(P=0.000),与出生时胎龄无明显相关性(P=0.206);而两组中外周血增食欲素A水平与母亲BMI均无明显相关性(P=0.327,P=0.511)。结论外周血增食欲素A水平与新生儿发育成熟程度有关。

间断低氧对大鼠下丘脑超微结构及前增食欲素水平的影响

目的探讨睡眠中间断低氧对大鼠下丘脑前增食欲素及受体水平的影响以及下丘脑超微结构的变化。方法大鼠分成对照组、间断低氧组和持续低氧组,分别给予吸入空气,持续低氧和间断低氧气体,并在实验开始后1d、3d、1w和4w应用RT-PCR方法测定大鼠下丘脑前增食欲素及受体水平,分析其间的变化关系,电镜观察下丘脑的超微结构变化。结果与对照组和持续低氧组比较,间断低氧4w后大鼠下丘脑前增食欲素mRNA水平明显降低,受体水平升高,但在持续低氧和对照组之间无明显差异。在低氧后1d、3d、7d后大鼠下丘脑前增食欲素mRNA降低,受体水平升高,在4w后,持续低氧组则接近正常。急性持续低氧大鼠超微结构变化更严重,而慢性间断低氧变化更持久。结论慢性间断低氧可以引起下丘脑前增食欲素下降及受体水平升高,急性持续低氧也可引起上述变化,而慢性持续低氧未引起增食欲素改变;慢性间断低氧大鼠下丘脑超微结构表现为严重而持久的变化。

下丘脑中增食欲素在大鼠急性低血糖应激中的表达研究

目的研究急性葡萄糖水平的下降对大鼠下丘脑组织中增食欲素(Orexin)的调节作用。方法应用单次皮下注射胰岛素并伴(或不伴)禁食的方法,构建急性低血糖大鼠模型。检测外周血中葡萄糖和胰岛素水平的变化规律。采用原位杂交方法鉴定下丘脑组织中Orexin mRNA的定位表达。应用实时定量PCR和Western印迹杂交分析检测下丘脑组织中Orexin mRNA和蛋白质在急性低血糖应激状态下的表达改变。结果下丘脑神经元细胞核中有Orexin mRNA表达。在低血糖伴禁食应激状态下,大鼠下丘脑Orexin mRNA表达明显增加3倍,Orexin的蛋白质表达明显增加2.5倍,差异有统计学意义(P<0.05)。但在低血糖伴进食状态下,Orexin基因表达无明显改变。结论急性血糖的降低将在基因转录和翻译水平增强大鼠下丘脑中Orexin的表达,而摄食行为可以抑制此调控效应。

盐酸西布曲明对高脂肥胖大鼠下丘脑增食欲素系统的影响

目的观察盐酸西布曲明对高脂饮食肥胖大鼠下丘脑增食欲素系统基因表达的变化。方法建立高脂饮食肥胖大鼠模型,分组连续灌胃给药4wk,观察盐酸西布曲明给药对高脂饮食肥胖大鼠体重、血脂、血糖及下丘脑前增食欲素原及增食欲素受体mRNA表达的影响。结果盐酸西布曲明8mg·kg-1能明显降低高脂肥胖大鼠体重、血糖和血脂;升高肥胖大鼠下丘脑前增食欲素原mRNA表达水平;各组间增食欲素受体1和2mRNA表达无变化。结论盐酸西布曲明具有减重、降脂和增加高脂饮食肥胖大鼠下丘脑前增食欲素原基因表达的作用。

孕期营养异常子鼠增食欲素变化的研究

目的:探讨孕期营养异常子代大鼠生后增食欲素的变化及意义。方法:建立孕期营养异常大鼠模型,全程分别给予低蛋白或高脂食物,自然分娩后观察出生体重;依据新生鼠体重,分成小于孕龄(SGA)组、大于孕龄(LGA)组与正常体重对照组,每组随机选取子鼠30只。于生后4周、12周龄采用放免法测定增食欲素A、B的表达。结果:低蛋白饮食组分娩的新生鼠体重明显低于正常对照组(P<0.01),63.93%新生鼠为SGA。高能营养组新生鼠体重则明显高于对照组(P<0.01),38.89%新生鼠为LGA。SGA组子鼠至4周时与对照组比较体重已无显著差异,且肾周脂重、肾周脂重与体重之比(FW/BW)显著高于对照组(P<0.01、P<0.05);LGA组鼠FW/BW则与对照组无明显差别;但两组食欲素A、B表达均显著升高(P<0.05)。12周时SGA与LGA组鼠的体重均明显高于对照组(P<0.05,P<0.01)。两组FW/BW均明显高于对照组(P<0.01);但仅LGA组食欲素A、B表达仍高于对照组,SGA组的表达却明显降低(P<0.01)。结论:孕期营养导致出生体重异常,低出生体重与高出生体重在成年后均导致腹型肥胖,但发生肥胖的过程与机制不同;增食欲素在低出生体重儿发育期生长追赶过程中明显升高可能参与成年肥胖的发生;高出生体重儿发育至成年肥胖的过程中,增食欲素始终起了明显作用。

增食欲素受体1在营养性肥胖大鼠肾上腺皮质中的表达及意义

目的探讨营养性肥胖大鼠肾上腺皮质组织中增食欲素受体1(OX1R)的表达规律,以及下丘脑增食欲素(orexin)系统对其调节作用。方法高脂饮食诱导构建并评估营养性肥胖大鼠动物模型;免疫组化法检测肾上腺皮质组织中OX1R的表达;侧脑室注射orexin反义的硫代磷酸化-脱氧寡核苷酸(OX-PS-ODNs)干预下丘脑增食欲素系统,分析肾上腺皮质中OX1R的变化规律。结果大鼠高脂膳食饲养8周后,营养性肥胖组大鼠体质量、体脂含量、Lee′s指数、血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇高于对照组(P<0.05)。OX1R的蛋白表达定位于大鼠肾上腺皮质束状带细胞的细胞质中;与正常对照组相比,营养性肥胖大鼠肾上腺皮质中的OX1R的表达升高(P<0.05),且OX1R的表达量与Lee′s指数、血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇呈显著负相关(r分别为-0.829,-0.710,-0.801,-0.733和-0.756)。OX-PS-ODNs干预下丘脑orexin系统2d后,营养性肥胖大鼠肾上腺皮质中OX1R的表达明显下降(P<0.05)。结论大鼠肾上腺皮质束状带细胞的细胞质中有OX1R的表达,营养性肥胖大鼠体内orexin系统可能通过下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴参与调控能量代谢。

学龄前单纯性肥胖儿童外周血中增食欲素-A和瘦素水平及其相关性

目的探讨学龄前单纯性肥胖儿童血中增食欲素-A和瘦素的水平及其相关性。方法采用放射免疫法检测56名肥胖组儿童和56名健康对照组儿童血中增食欲素-A和瘦素水平。结果肥胖组男女童血中增食欲素-A水平均显著低于对照组，瘦素水平均显著高于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．01），而同组内男女童血中增食欲素-A和瘦素水平分别比较差异无统计学意义（P〉0．05）。肥胖组和对照组血中增食欲素-A和瘦素水平无显著相关性（P〉0．05）。结论肥胖儿童与健康儿童相比，血中增食欲素-A水平明显降低，瘦素水平明显增高，儿童肥胖的发生与增食欲素-A和瘦素有关。

高脂肪膳食对大鼠增食欲素及瘦素系统的影响

目的研究高脂肪膳食诱导的胰岛素抵抗(IR)大鼠下丘脑及脂肪组织中增食欲素和瘦素系统的变化,分析其可能的调控因素。方法IR大鼠模型采用高脂肪膳食诱导并经钳夹技术证实;应用RT-PCR技术检测增食欲素及其受体(OX1R、OX2R)和瘦素受体(LR)以及脂肪组织中瘦素基因mRNA的表达;采用生化比色法测定血清游离脂肪酸(FFA)、放射免疫法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)。结果钳夹技术中葡萄糖输注率明显低于对照组;高脂肪膳食诱导的IR大鼠下丘脑中前增食欲素原mRNA的表达较对照组减少约80%(P<0.01);OX1R、OX2R分别增加3.4及3.2倍(P<0.01);瘦素mRNA增加约8倍(P<0.01);LR减少78%;血清FFA和TNF-α均明显高于对照组(P<0.01)。结论高脂肪膳食可诱导大鼠体内IR,并导致增食欲素和瘦素系统平衡状态的破坏;增食欲素和瘦素是机体能量平衡调节网络中的一对重要物质,两者相互作用共同维持机体能量代谢的稳定。血清FFA和TNF-α均可能参与该系统的调控,合理膳食在这一调控中至关重要。

低糖状态对大鼠增食欲素及受体的影响

目的 研究急性葡萄糖水平的下降对大鼠下丘脑及培养胰岛细胞中增食欲素 (orexin)及其受体(OX1 R、OX2 R)的影响。方法 应用单次皮下注射胰岛素并伴 (或不伴 )禁食的方法 ,构建急性低血糖大鼠模型 ;体外原代培养胰岛细胞并调整培养液的葡萄糖浓度 (8 3mmol L及 2 8mmol L) ;应用反转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)检测下丘脑组织和胰岛细胞中orexin系统的变化。结果 在胰岛素 (伴禁食 )诱导的急性低血糖大鼠模型中 ,下丘脑orexin的mRNA表达较对照组增加约 1 5 0 % (P <0 0 1 ) ,OX1 R的mRNA表达减少 30 % (P <0 0 1 ) ,但是OX2 R的mRNA表达没有明显变化 (P >0 0 5 ) ;在培养胰岛细胞体外实验中 ,培养基中葡萄糖浓度由 8 3降至 2 8mmol L ,6h后胰岛细胞的orexinmRNA表达增加 1 0 0 % (P <0 0 1 ) ,而OX1 RmRNA表达对培养基中葡萄糖浓度的急性波动不敏感。结论 急性葡萄糖水平降低将刺激大鼠下丘脑中orexin的表达 ,其受体的变化相反 ;进食将会抑制orexin系统的这一反应。

非酒精性脂肪性肝病患者血清增食欲素A水平变化及其与胰岛素抵抗的关系

目的观察非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清增食欲素A(Orexin A)水平变化及其与胰岛素抵抗的关系。方法测定103例非酒精性脂肪性肝病患者及99名健康体检者的体质指数(BMI)及腰臀比(WHR),采用酶联免疫吸附试验法检测其血清增食欲素A、血脂、空腹胰岛素及空腹血糖值,计算胰岛素抵抗指数,分析血清增食欲素A水平与胰岛素抵抗的关系。结果与健康对照组比较,NAFLD患者BMI、WHR、HOMA-IR及血清TC、TG、FFA水平均明显增高(P<0.05,P<0.01);血清HDL-C及Orexin A水平则显著降低(P<0.05);Orexin A与BMI、WHR、TG、FFA、HOMAIR均呈明显负相关(r分别为-0.689、-0.741、-0.438、-0.377、-0.611,P<0.01);与TC无明显相关性;Orexin A与HDL-C呈明显正相关(r=0.832,P<0.01)。结论非酒精性脂肪性肝病患者存在脂代谢异常及胰岛素抵抗,Orexin A可能通过调控胰岛素抵抗参与NAFLD的发生发展。

增食欲素A调节大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞自噬的研究

目的探讨增食欲素A(orexin-A)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞自噬的影响。方法分别用10^(-6) mol/L orexin-A和10^(-6) mol/L orexin-A+增食欲素受体1(OX_(1)R)抑制剂作用于大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞,另设1个空白对照组。通过Western blotting和ELISA方法测定PC12细胞中OX_(1)R、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白的表达水平和去甲肾上腺素(NE)的分泌水平,并在电镜下观察空白对照组和orexin-A组PC12细胞的自噬情况。结果电镜下可见orexin-A组PC12细胞的自噬体较空白对照组增多。orexin-A组OX_(1)R、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白的表达水平和NE的分泌量均显著高于空白对照组和orexin-A+OX_(1)R抑制剂组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论orexin-A可通过OX_(1)R促进PC12细胞自噬,并能促进PC12细胞分泌NE。