双光子显微镜技术下胶质瘤-壁细胞在体多荧光示踪小鼠模型的建立及应用

目的建立双光子显微镜下可视化胶质瘤、壁细胞和血管的活体自发荧光的基因小鼠模型并进行评价。方法以PDGFRβ-Cre^(+/-):Rosa26-tdTomato+/-基因工程小鼠为观察壁细胞和血管结构的载体,接种GL261-CFP小鼠胶质瘤细胞并对颅骨进行透明化,通过双光子显微镜动态跟踪观察胶质瘤增殖侵袭过程中血管与壁细胞的动态变化。结果通过基因鉴定证实PDGFRβ-Cre^(+/-):Rosa26-tdTomato+/-基因工程小鼠成功繁育。对比C57BL/6小鼠,基因工程小鼠的形态外观和繁殖等无显著性差异,组织苏木素-伊红(HE)染色切片分析显示脏器发育无异常。Tamoxifen诱导下基因工程小鼠的Cre重组酶活性至第7天作用完全。接种GL261-CFP后观察到胶质瘤增殖侵袭的动态过程及肿瘤内血管形态结构紊乱、游离壁细胞增多。结论成功构建了荧光可视化壁细胞的基因工程小鼠,分别利用异硫氰酸荧光素-葡聚糖标记血管和青色荧光标记肿瘤细胞,使用玻璃圆片与固定环替代小鼠颅骨,实现了活体状态下长期稳定地动态跟踪小鼠接种脑肿瘤后血管及血管支持细胞的形态结构变化,为研究脑胶质瘤提供了病理可视化的动物模型。

腹壁子宫内膜异位症相关性透明细胞癌的诊治进展

腹壁子宫内膜异位症相关性透明细胞癌(abdominal wall endometriosis-associated clear cell carcinoma,AWECC)发病率低,侵袭性强,预后差,相关文献报道较少。AWECC多由腹壁子宫内膜异位症(abdominal wall endometriosis,AWE)恶变形成。随着剖宫产等进入宫腔的盆腔手术数量增加,AWE的发病率呈上升趋势,但其恶变机制尚不明确。AWECC缺乏特异性的临床特征,临床上易被误诊为AWE,确诊依赖于病理检查。AWECC的治疗多来源于临床医生的个人经验,差异性大,缺乏相应的指南推荐。临床上多采用以扩大腹壁肿瘤切除术为主的手术治疗,化疗和放疗能否使AWECC患者获益尚需进一步探讨。目前关于AWECC的研究多为个案报道,综合国内外文献,探讨AWECC的发病、诊断、治疗及预后,以期引起临床医生对疾病诊断的重视,为临床诊治和随访提供证据。

猪卵丘细胞和壁颗粒细胞转录组差异分析

伴随着卵泡腔的形成,颗粒细胞逐步分化成两种不同类型:壁颗粒细胞(mural granulosa cells,MGCs)和卵丘细胞(cumulus cells,CCs)。目前许多研究表明壁颗粒细胞和卵丘细胞存在功能差异。壁颗粒细胞和卵丘细胞在卵母细胞生长发育过程中发挥着非常重要的作用,在细胞周期、DNA复制、缝隙连接等重要环节担任重要角色。为研究壁颗粒细胞和卵丘细胞存在的功能差异,我们利用转录组测序技术分析了壁颗粒细胞和卵丘细胞的差异基因,又通过GO分析和KEGG信号通路分析对差异基因进行富集。结果表明,壁颗粒细胞和卵丘细胞转录组存在较大差异,两者差异显著基因多达3305个,与壁颗粒细胞相比,卵丘细胞在细胞周期和DNA复制信号通路中大多数基因表达下调,而在缝隙连接信号通路中大多数基因表达上调,两者功能上存在较大差异。

壁细胞抗体阳性的脊髓亚急性联合变性临床特征分析

目的探讨壁细胞抗体(PCA)阳性的脊髓亚急性联合变性(SCD)临床特征,为SCD早期诊断提供参考。方法回顾性分析2020年12月至2022年2月安徽医科大学第一附属医院神经内科收治的13例SCD患者临床资料。结果13例患者均以麻木无力症状起病,查体可见周围神经和脊髓受累的阳性体征,其中10例存在巨幼细胞贫血,8例维生素B_(12)水平降低,11例同型半胱氨酸(Hcy)水平升高,13例PCA阳性,8例内因子抗体(IFA)阳性,10例脊髓核磁共振(MRI)见脊髓异常病灶,9例脑MRI见白质异常信号,11例神经电生理检查见多发周围神经损害,2例胃镜见萎缩性胃炎。给予患者维生素B_(1)和维生素B_(12)肌肉注射,3个月后随访,病程6个月以内的9例患者无神经系统遗留症状,其余患者仍有麻木和/或无力。结论SCD诊断不能仅依靠维生素B_(12)水平、脊髓MRI和神经电生理检查,结合PCA、IFA和Hcy有助于提高SCD的诊断率。

腹壁子宫内膜异位症恶变为透明细胞癌1例报道

0引言子宫内膜异位症(简称内异症)为生育年龄妇女的常见病,其发病率为10%~15%。内异症是指具有功能的子宫内膜腺体和间质出现在子宫以外的部位。以卵巢、腹膜、子宫骶韧带最常见,也可种植在膀胱、输尿管、肺和腹壁等处。尽管内异症为良性病变,但也有一定的恶变率^([1])。大约80%的子宫内膜异位症恶变部位发生在卵巢,20%的恶变发生在卵巢以外的部位,其中发生在腹壁疤痕处的恶变仅占0.9%^([2])。内异症恶变的病理类型多为透明细胞癌和子宫内膜样癌。本文报道一例腹壁疤痕子宫内膜异位症恶变患者的临床病理特征,并结合文献报道,探讨其诊疗要点。

壁层上皮细胞与肾小球疾病

肾小球内皮细胞、系膜细胞、足细胞和壁层上皮细胞(parietal epithelial cells, PECs)作为肾小球的固有细胞,在肾小球疾病的发病机制中发挥着重要的作用。近年来,随着对PECs研究的不断深入,发现了其在正常生理功能和病理过程中可活化,并在肾小球新月体和球性硬化的形成和转归过程中发挥着重要作用。本文将对PECs在维持肾小球正常生理功能及在肾小球疾病发生发展过程中的作用及相关信号通路和信号分子作一综述。

应激对胃粘膜表面上皮层抗酸形态屏障及壁细胞超微结构的影响

为揭示应激状态下胃粘膜上皮层抗酸形态屏障及壁细胞超微结构变化，作者采用大鼠水浸束缚方法制作应激模型。检测对照组及应激组胃粘膜损伤指数，并取腺胃区胃粘膜组织制作透射电镜标本，检测粘膜上皮细胞、上皮细胞间连接、上皮下基底膜及壁细胞的超微结构变化。结果发现应激组大鼠较对照组胃粘膜损伤重；电镜观察显示对照组壁细胞多呈静息状态，应激组壁细胞内线粒体丰富，分泌小管密集，呈明显分泌状态；腔面细胞膜损伤，细胞间连接及基底膜无明显破坏。结果提示应激可刺激壁细胞呈分泌状态，胃粘膜上皮层损伤过程中以腔面细胞膜破坏在先，细胞间连接和基底膜在应激性溃疡发生的早期无显著的形态学改变。提示胃粘膜表面上皮层腔面膜的破坏在应激性溃疡的发生过程中具有重要的意义。

应激性溃疡时大鼠胃壁细胞功能及超微结构的动态变化

目的 :探讨应激条件下大鼠胃壁细胞泌酸功能和超微结构的动态变化及与急性胃粘膜损伤之间的关系。方法 :将 32只雄性SD大鼠随机分成 4组 ,即对照组、水浸束缚应激 1,2、4h组。检测各组胃液pH值、胃粘膜溃疡指数 (UI) ,并取腺胃区粘膜制作透射电镜标本 ,观察壁细胞超微结构变化。结果 :应激条件下大鼠胃泌酸多于对照组 ,随应激时间延长胃液pH值明显低于对照组 (P <0 0 1) ;UI随应激时间延长明显增加 (P <0 0 1) ,与pH值之间呈明显负相关 (r=- 0 9987,P <0 0 1) ;电镜下见对照组壁细胞呈静息状态 ,而应激 1、2、4h组壁细胞呈现不同的激活状态 ,且以 4h为明显 ,壁细胞内线粒体丰富 ,分泌小管密集 ,囊管泡减少或消失 ,呈明显泌酸活跃状态。结论 :水浸束缚应激可引起大鼠胃酸分泌增加 ,这与壁细胞超微结构改变相一致 ,并与胃粘膜损伤程度有明显相关性。提示胃酸在应激性溃疡的发生发展过程中具有重要意义。

大鼠应激性胃粘膜损伤与壁细胞泌酸的关系

目的 探讨应激状态下大鼠胃粘膜损伤与壁细胞泌酸状态的关系。方法 将 48只SD大鼠随机分成对照组、水浸束缚应激 1、2、4h组、奥美拉唑组及生理盐水组。检测胃液pH值、胃粘膜损伤指数 (UI) ,光镜观察胃粘膜组织学改变 ,电镜观察壁细胞超微结构变化。结果 随应激时间延长UI明显增加 ,而胃液pH值明显降低 (P <0 0 1) ,二者之间呈明显负相关 (r=-0 9987,P <0 0 1) ;奥美拉唑组与应激 4h组和生理盐水组比 ,UI明显降低 (P <0 0 1)。电镜示壁细胞在对照组呈静息状态 ,而应激 1h ,2h ,4h组呈不同激活状态 ,以 4h最明显 ,呈泌酸活跃状态。奥美拉唑组壁细胞见分泌小管扩张 ,有绒毛稀少或密集分布的不同表现。

应激状态下大鼠胃壁细胞H^+-K^+-ATP酶活性测定及电镜酶细胞化学研究

目的:探讨应激状态下大鼠胃壁细胞H+-K+-ATP酶活性及电镜酶细胞化学染色的变化。方法:将24只SD大鼠随机分为对照组、应激组和应激+奥美拉唑(OM)组,采用水浸-束缚应激(WRS)动物模型,检测胃粘膜溃疡指数(UI)和壁细胞H+-K+-ATP酶活性,观察壁细胞超微结构变化及H+-K+-ATP酶细胞化学染色结果。结果:应激组胃粘膜UI和壁细胞H+-K+-ATP酶活性明显高于对照组(P<0.01和P<0.05),而应激+OM组UI和H+-K+-ATP酶活性明显低于应激组(P<0.01);电镜下对照组壁细胞呈静息状态,应激组壁细胞内分泌小管密集呈激活状态,而应激+OM组分泌小管明显扩张,绒毛稀少;酶细胞化学染色显示对照组壁细胞的分泌小管和顶部质膜有少量黑色点状酶反应产物沉积,应激组壁细胞的分泌小管可见多量的、密集分布的黑色点状酶反应产物,而应激+OM组分泌小管上几乎无反应产物沉积。结论:应激状态下大鼠胃壁细胞H+-K+-ATP酶活性升高,且与壁细胞超微结构改变相一致,提示胃酸是应激性溃疡发生的重要因素之一。

抑酸剂对应激状态下壁细胞形态及功能的影响

为揭示抑酸剂对应激状态下壁细胞形态及功能的影响 ,作者采用水浸束缚应激动物模型 ,检测各组胃粘膜溃疡指数 (ulcerindex ,UI)、胃液pH ,并用透射电镜观察壁细胞形态改变。结果发现奥美拉唑组和西咪替丁组UI明显下降 ,胃液pH明显上升 ,与应激组比较有显著性差异 (P <0 0 1)。电镜示对照组和西咪替丁组壁细胞呈静息状态 ,应激组呈明显激活状态 ,奥美拉唑组可见分泌小管明显扩张 ,并有绒毛稀少或密集分布的不同表现。提示奥美拉唑与西咪替丁均能抑制应激状态下胃酸的分泌 ,但壁细胞形态改变不同 。

补脾方药对脾虚大鼠壁细胞CaM及Ca^(2+)/CaM-PK II活性的影响

目的:观察大黄脾虚模型大鼠壁细胞内CaM及CaCa2+/CaM-PK II活性的变化以及补脾方药党参、白术、补中益气汤对其的作用。方法:EDTA-Pronase酶消化法及Perco ll密度梯度离心分离和纯化大鼠胃壁细胞,根据的CaM的环核苷酸磷酸二酯酶检测法(PDE酶法)检测大鼠壁细胞内CaM活性;根据CaCa2+/CaM-PK II活性与激活底物磷酸化量成线性关系,测定其活性。结果:大黄脾虚模型大鼠壁细胞内CaM及CaCa2+/CaM-PKII活性均明显升高,补脾方药对其均有明显下调作用。结论:脾虚大鼠壁细胞处于高应激状态,党参、白术、补中益气汤等补脾方药可因对细胞内受体后信号传导物质的影响而调节细胞功能。

噪声应激大鼠胃壁细胞形态和泌酸功能的变化

目的:建立白噪声致大鼠应激性溃疡模型(noise stress,NS),并研究噪声应激大鼠胃壁细胞形态和泌酸功能的变化。方法:采用白噪声应激建立NS大鼠模型。大鼠随机分为对照组、NS 4 h组及NS 8 h组,测定胃液pH值、胃黏膜溃疡指数(ulcer index,UI),用免疫荧光技术标记H+,K+-ATP酶,在激光共聚焦扫描显微镜下观察壁细胞形态并在荧光显微镜下分类、计数。结果:(1)NS 4 h组胃液pH值为2.22±0.05,显著低于对照组的2.59±0.21(P<0.05),NS 8 h组胃液pH值为1.31±0.06,与对照组和NS 4 h组相比均有显著差异(P<0.01)。(2)NS 4 h组UI为10.5±1.29,显著高于对照组(P<0.01),NS 8 h组UI达34.36±2.22,显著高于对照组(P<0.01)及NS 4 h组(P<0.05)。(3)NS 4 h组分泌相壁细胞数(55.5±3.42)/100,NS 8 h组为(62.0±3.46)/100,均显著高于对照组的(42.5±3.70)/100(P<0.01),其中NS 8 h组也显著高于NS 4 h组(P<0.05)。(4)胃液pH值与胃UI呈负相关(r=-0.85,P<0.05),与分泌相壁细胞数呈负相关(r=-0.89,P<0.05)。结论:白噪声应激可以成功的建立大鼠应激性溃疡模型;噪声应激大鼠胃酸分泌增加,胃酸在溃疡形成过程中起不可忽视的作用。

补脾方药对脾虚大鼠壁细胞超微结构的影响

目的:观察补脾方药对脾虚模型大鼠胃壁细胞超微结构的影响。方法:脾虚模型采用大黄泻下方法、酶法(Pronase-EDTA)消化分离及离心纯化大鼠胃壁细胞,透射电镜观察壁细胞的超微结构变化。结果:正常组大鼠壁细胞可见胞质内大量的线粒体和散在的囊泡结构;脾虚组大鼠胃壁细胞电镜下可见明显扩张的分泌小管,小管内可见增长密集的微绒毛,囊泡状结构少见,未见线粒体结构异常。党参、白术、补中益气汤治疗组大鼠壁细胞呈现分泌恢复状态:分泌小管塌陷,其膜被吸收和内胞饮,表面的微绒毛密集、盘绕、重叠,形成几层膜结构而被吞入胞浆。在分泌小管相邻的胞浆内出现高电子密度的图像,为马蹄形、椭圆形或圆形的多层膜结构。结论:大黄脾虚模型大鼠胃壁细胞超微结构呈应激状态,可能致其自身对攻击因子敏感性增高,进而导致胃黏膜的易损性增强。补脾方药对其超微结构的异常改变有恢复作用。

大鼠胃壁细胞胃泌素受体的放射配基结合法

目的 建立大鼠胃壁细胞胃泌素受体放射配基结合实验方法。方法 以12 5I [Leu15] gastrin17 I为标记配基 ,以大鼠胃壁细胞悬液为受体制备 ,反应体系总体积为 2 0 0 μl,37℃恒温水浴振荡孵育 30min ,以 49型玻璃纤维滤膜分离结合和游离配基。结果 胃泌素受体结合符合简单单位点结合模型 ,Scatchard作图求出胃泌素受体结合参数Bmax=4 46 0 4× 10 -12 mol·L-1,Kd=1 2 49× 10 -10 mol·L-1。单点法求出特异结合位点数 70 3 2sites·cell-1。细胞浓度在0 2 5× 10 9～ 2× 10 9cells·L-1范围内 ,与标记配基特异性结合容量成正比。同一样品特异结合测定方法变异系数为7 0 4%。竞争抑制实验证明12 5I Gastin与大鼠胃壁细胞结合特异性良好。

应激状态下NO的胃粘膜保护作用及其与壁细胞泌酸的关系

目的:探讨应激状态下一氧化氮(NO)的胃粘膜保护作用及其与壁细胞泌酸的关系。方法:采用水浸-束缚应激(WRS)方法制备应激性溃疡(SU)动物模型,检测胃粘膜溃疡指数(UI)、胃粘膜NO含量和壁细胞H+,K+-ATPase活性,观察L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)和L-精氨酸(L-Arg)对应激后大鼠壁细胞H+,K+-ATPase活性及胃粘膜损伤的影响。结果:L-NAME(20mg.kg-1)可使胃粘膜NO含量减少(P<0.01),壁细胞H+,K+-AT-Pase活性增加(P<0.05),并加重应激所致的胃粘膜损伤;L-Arg(300mg.kg-1)则使胃粘膜NO含量增加(P<0.01),壁细胞H+,K+-ATPase活性下降(P<0.05),减轻应激所致胃粘膜损伤。结论:NO对应激状态下大鼠胃粘膜具有保护作用,其机制与抑制壁细胞H+,K+-ATPase活性有关。

L-精氨酸对应激状态下大鼠胃黏膜损伤及壁细胞泌酸的影响

目的探讨L-精氨酸(L-Arg)对应激状态下大鼠胃黏膜损伤及壁细胞泌酸功能的影响。方法 采用水浸-束缚(WRS)方 法建立大鼠应激性溃疡(SU)模型,将动物随机分为正常对照组(NC)、WRS组、WRS+L-Arg组和WRS+L-Arg+L-NAME组,检 测胃黏膜溃疡指数(UI)、胃黏膜一氧化氮(NO)含量、胃液pH值和壁细胞H+,K+-ATP酶活性,光镜下观察胃黏膜组织学改变。 结果 与WRS组相比,WRS+L-Arg组胃液pH值升高,壁细胞H+,K+-ATP酶活性下降,胃黏膜NO含量增加,UI明显下降,光 镜下胃黏膜的损伤轻于WRS组;与WRS+L-Arg(300 mg·kg-1)组相比,WRS+L-Arg+L-NAME组pH值下降,H+,K+-ATP酶活 性升高,胃黏膜NO含量下降,UI升高,胃黏膜损伤加重。结论 L-Arg对应激状态下大鼠胃黏膜具有保护作用,其机制与NO 抑制壁细胞泌酸有关。

人体胃底腺组织学和壁细胞超微结构的增龄变化研究

目的研究人体胃底腺组织学及壁细胞超微结构的增龄变化。方法选择拥有“相对正常胃”的50例受试者作为研究对象，包括中青年组（20~59岁）19例和老年组（≥60岁）31例，其中老年组含60~69岁组11例，70～79岁组10例，≥80岁组10例。在光学显微镜下测定各组固有膜厚度（从上皮到黏膜肌层以上，不包括黏膜肌层）、胃底腺实质比和壁细胞比例，对比研究各组胃底腺形态，在电子显微镜下对比研究各组壁细胞超微结构。结果光学显微镜下观察各组固有膜腺体的形态和细胞的分布无明显差异，但是定量测定老年组固有膜的厚度（892±172）μm明显低于中青年组（1014±203）μm（P〈0．05）；老年组胃底腺实质比例（83±10）％明显高于中青年组（80±7）％（P〈0．05）。壁细胞细胞数目占胃底腺细胞总数比例在各组间差异没有统计学意义。电子显微镜下观察各组胃壁细胞及与泌酸功能相关的细胞器形态分布无明显差异，定量测定线粒体面积分数，中青年组和老年组分别为（48±8）％和（51±8）％，差异无统计学意义（P〉0．05）；管泡系统面积分数，中青年组和老年组分别为（14±4）％和（12±5）％，差异无统计学意义（P〉0．05），各年龄组增龄变化亦无统计学差异。结论胃底腺和壁细胞在数量和形态上没有发生明显退化，为阐明老年人仍有良好的泌酸功能提供了一定的科学依据。

补脾方药对脾虚大鼠壁细胞内三磷酸肌醇(IP_3)含量的影响

目的:观察脾虚大鼠模型壁细胞内IP3含量的变化及补脾方药党参、白术、补中益气汤对其的影响。方法:大鼠壁细胞采用EDTA-Pronase酶消化法,采用竞争蛋白结合法测定大鼠壁细胞内IP3含量。结果:大黄脾虚模型大鼠壁细胞内IP3含量显著低于正常组,经党参、白术、补中益气汤治疗后,IP3含量有不同程度的升高,尤以党参组明显。结论:脾虚证可能与壁细胞内IP含量生成量减少相关,补脾方药对其有一定的调节作用。