壁虎醇提物对人食管癌EC-109细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的:研究壁虎醇提物(Gecko alcohol extract,GAE)对人食管癌EC-109细胞的增殖抑制作用及其机制。方法:MTT法检测GAE对细胞增殖抑制作用;Hoechest 33342荧光染色观察细胞形态学的改变;流式细胞术检测凋亡率;SP免疫组化法检测Fas和Caspase-3蛋白的表达。结果:GAE具有抑制食管癌EC-109细胞增殖的作用;3.0mg/mL、4.0 mg/mL GAE作用细胞48 h后凋亡率分别为20.60%和37.93%;与正常对照组相比GAE组Fas蛋白和Caspase-3蛋白的表达显著增加(P<0.05)。结论:GAE能够抑制EC-109细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加Fas蛋白和Caspase3蛋白的表达有关。

壁虎醇提物对小鼠肾包膜下移植S_(180)肉瘤的抑制作用

目的观察壁虎醇提物对小鼠肾包膜下移植S180肉瘤的作用并探讨机制。方法建立免疫功能正常小鼠肾囊膜下移植S180肉瘤模型,将40只雄鼠随机分为阴性对照生理盐水组、阳性对照环磷酰胺组(0.1g.kg-1)、壁虎醇提物高剂量组(2.4g.kg-1)、壁虎醇提物低剂量组(1.2g.kg-1)共4组。腹腔注射给药6d后,杀鼠称量荷瘤小鼠体重,评价药物对小鼠毒性;测量小鼠肉瘤体积,称取移植瘤小鼠胸腺重、脾脏重,计算抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数;用SABC免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果壁虎醇提物可抑制小鼠肉瘤S180生长,环磷酰胺组、壁虎醇提物高剂量组、壁虎醇提物低剂量组抑瘤率分别为74.5%,77.5%,57.5%,且各组末体重/初体重分别为0.94,1.03,0.99;壁虎醇提物对免疫器官无影响,而环磷酰胺组胸腺指数、脾脏指数与阴性对照组比则有明显的统计学差异(P<0.05);免疫组化显示环磷酰胺组、壁虎醇提物组与生理盐水组比较VEGF蛋白的表达明显减少。结论壁虎醇提物有抗肿瘤活性,其抗肿瘤的部分作用可能通过抑制肿瘤血管的生成而实现。

壁虎醇提物抗肿瘤及增效减毒作用的研究

目的:研究壁虎醇提物对S180小鼠的抗肿瘤作用及其对化疗药物环磷酰胺(CTX)的增效减毒作用。方法:以S180荷瘤小鼠为模型,观察不同剂量的壁虎醇提物的抑瘤率,ELISA法测定小鼠血清TNF-α的含量。腹腔注射壁虎醇提物与CTX(20 mg/kg)联合用药12 d后,检测各组小鼠的抑瘤率、外周血白细胞数、脾指数、胸腺指数等指标,分析壁虎醇提物对CTX的增效减毒作用。结果:不同剂量的壁虎醇提物(0.6、1.2、2.4 g/kg)均可抑制S180肉瘤在昆明小鼠体内生长,抑瘤率分别为44.88%、63.94%、69.53%,对小鼠血清TNF-α含量影响不明显。单用CTX组抑瘤率为46.17%,联用壁虎醇提物低、中、高剂量组的抑瘤率分别为56.93%、67.15%、70.24%,与单用CTX组抑瘤率比较(P<0.01)。壁虎醇提物各组联用CTX,与单用CTX组比较,可不同程度地升高荷瘤小鼠的白细胞数(P<0.01)和胸腺指数、脾指数(P<0.05)。结论:壁虎醇提物对S180荷瘤小鼠具有抗肿瘤作用,对化疗药物CTX具有增效减毒作用。

壁虎醇提物抗C6胶质瘤细胞研究

目的研究壁虎醇提物（Gekkoethanolextract,GEE）对C6胶质瘤细胞生长的抑制作用,并探讨其分子机制.方法（1）倒置显微镜下观察细胞形态的改变：不同GEE作用于C6细胞24h后,观察细胞形态的改变.（2）通过MTT法检测GEE对C6细胞增殖的抑制作用：取对数生长期C6细胞,以5×107·L^-1细胞浓度接种于96孔板,每孔200μL,设置5个复孔.培养24h后加入浓度分别为0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4g·L^-1GEE培养液,并设置阴性对照组、阳性对照组（0.01g·L^-1 5-氟尿嘧啶）,分别处理20、44、68h后,每孔加5g·L^-1MTT溶液20μL.继续培养4h,然后测定光密度,计算抑制率.（3）通过Hoechst33258染色法观察细胞核形态学变化.（4）Westernblot检测细胞内凋亡相关蛋白（AIF、caspase-9）的表达.结果MTT结果显示GEE可明显抑制C6细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性,作用24、48、72h后的后其IC50值分别为0.258、0.191、0.159g·L^-1,0.4g·L^-1在72h抑制率可以达到80.7%.Hoechst33258染色法观察到药物组和阳性对照组细胞则出现典型的细胞凋亡形态学改变,表现为胞核数量减少,明显缩小,形态不规则,,大小不一,可见呈致密强蓝色荧光团块.Westernblot结果显示GEE可诱导AIF、caspase-9蛋白表达随着GEE作用浓度的增加,AIF、Caspase-9蛋白表达逐渐升高.结论GEE可抑制C6细胞增殖并诱导其凋亡,诱导凋亡机制可能与AIF、caspase-9蛋白的表达增加有关.

壁虎醇提物抗小鼠H_(22)移植瘤作用的研究

目的研究壁虎醇提物抗小鼠H22移植瘤作用。方法采用小鼠H22肝癌移植模型,分模型组、阳性组、壁虎醇提物高、中、低剂量(0.4,0.8,1.6g/kg)组共五组,采用腹腔注射,观察壁虎醇提物对肿瘤生长的抑制作用及对胸腺和脾脏的影响。结果壁虎醇提物各剂量组均对H22荷瘤小鼠均具有明显的抑制作用,抑制率分别为55.25%,47.89%,15.16%,与模型组相比差异显著。高、中、低剂量的荷瘤小鼠脾脏、胸腺质量及其指数同阳性组相比差异均非常显著。结论壁虎醇提物抑制鼠移植瘤的生长,并保护荷瘤小鼠免疫功能。其机制可能与其胸腺、脾产生抑瘤因子有关。

壁虎醇提物急性毒性研究

目的观察壁虎醇提物对小白鼠的急性毒性作用。方法运用急性毒性的实验进行半数致死量(LD50)的计算。预实验用较大范围壁虎醇提物试液少量动物进行实验求出致死范围,然后在全数致死量和零致死量之间将实验用小白鼠分为5组,计算各组剂量公比,每组10只雄性小白鼠,进行正式实验,将实验结果记录后运用改良寇氏法进行计算。结果灌胃给予壁虎醇提物,小鼠无死亡出现,但活动减少,反应迟钝,1 h后恢复正常,小白鼠每日灌胃的最大耐受量(MTD)为48.0 g·kg-1。经腹腔注射给药的LD50为6.475 g·kg-1,95%可信限为6.862~6.088 g·kg^(-1)。结论壁虎醇提物毒性极小,临床应用相对较安全。

壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞EC9706的作用和体内抗肿瘤活性

目的：观察壁虎醇提物体内外抗肿瘤作用。方法：体外实验采用四噻唑蓝法（MTT）检测壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞EC9706的增殖抑制作用;采用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡的形态改变;采用TUNEL法检测细胞凋亡率;采用SP免疫组化法检测细胞内凋亡蛋白Bax和Bc l-2的表达。体内实验以小鼠S180肉瘤为模型,观察壁虎醇提物对肿瘤生长的抑制作用。结果：6-8 g.L-1壁虎醇提物作用于细胞24,48,72 h后能够明显抑制EC9706食管鳞癌细胞株的生长（P（0.01）,抑制作用呈剂量和时间依赖性;Hoechst33258荧光染色可见凋亡细胞;6,7 g.L-1壁虎醇提物处理组细胞凋亡率高于阴性对照组（P〈0.05,P〈0.01）,凋亡率分别为（12.73±3.84）%,（19.80±2.32）%;免疫组化结果显示细胞内Bc l-2蛋白无明显变化,而Bax蛋白表达升高（P（0.01）,Bax/Bc l-2升高。不同剂量的壁虎醇提物（0.6,1.2,2.4 g.kg-1）均可抑制S180肉瘤在昆明小鼠体内生长,抑瘤率分别为44.88%,63.94%,69.53%。结论：壁虎醇提物体内体外具有抗肿瘤作用,体外诱导EC9706细胞凋亡的作用机制可能与凋亡相关蛋白Bax/Bc l-2升高有关。

壁虎醇提物抑制人宫颈癌SiHa细胞迁移及侵袭的研究

目的研究壁虎醇提物(GEE)对宫颈癌SiHa细胞侵袭、迁移能力的影响及其潜在的分子机制。方法实验分为对照组(不加药)和3个浓度(0.02,0.05,0.10 mg·m L^(-1)GEE)实验组。GEE作用于SiHa细胞24 h后,通过划痕实验、Transwell小室实验分别观察其迁移及侵袭能力的改变;通过MTT法检测GEE对SiHa细胞增殖能力的影响。免疫印迹法检测GEE对SiHa细胞E钙黏蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)及Rac1蛋白表达的影响。结果 GEE处理24h后,3个浓度实验组SiHa细胞的增殖抑制率分别为1.5%,5.5%,7.3%。SiHa细胞迁移及侵袭能力均减弱。GEE处理后的SiHa细胞内E钙黏蛋白表达上调,而VEGF和Rac1蛋白表达下调。结论 GEE可抑制SiHa细胞侵袭和迁移,其机制可能与E钙黏蛋白表达的上调、VEGF和Rac1表达的下调有关。

壁虎醇提物抑制C6胶质瘤细胞增殖作用的研究

目的研究壁虎醇提物(GEE)对胶质瘤C6细胞生长的抑制作用并探讨其分子机制。方法设置空白组、对照组(0.01 mg·m L-15-氟尿嘧啶)和实验组(0.1,0.15,0.2,0.3,0.4 mg·m L-1GEE)。噻唑蓝(MTT)法检测GEE对C6细胞增殖的影响;GEE作用于C6细胞24 h后,倒置显微镜观察C6细胞的形态学变化;Hoechst 33258染色法检测C6细胞核凋亡的变化;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、凋亡诱导因子(AIF)蛋白的表达。结果 GEE作用于C6细胞48 h后,MTT结果显示GEE可抑制C6细胞的增殖,5个剂量实验组的抑制率分别为19.9%,28.7%,63.1%,75.4%,76.3%,与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。显微镜下可见典型的凋亡形态学变化。GEE可诱导caspase-9、AIF蛋白表达增加。结论 GEE可抑制C6细胞增殖,可能是通过增加caspase-9、AIF蛋白表达而引起凋亡。

壁虎醇提物体外诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及机制研究

目的:研究壁虎醇提物(GAE)体外诱导激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡作用及其可能机制,为激素非依赖性前列腺癌的治疗提供理论依据。方法:以前列腺癌PC-3细胞为研究对象,MTT法检测3.5,4.0,4.5,5.0,5.5 g·L^(-1)GAE作用细胞24,48,72 h后对激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用;3.5,4.0,5.0 g·L^(-1)的GAE作用48 h后,另设空白组,Hoeehst33342荧光染色法,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,SP免疫组化法检测细胞内半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)和Fas的表达情况并做统计学处理。结果:3.5,4.0,4.5,5.0,5.5 g·L^(-1)GAE作用细胞24,48,72 h后能显著抑制PC-3细胞的生长且呈剂量和时间依赖性;与空白组比较,3.5,4.0,5.0 g·L^(-1)的GAE作用48 h后Hoeehst33342荧光染色发现部分PC-3细胞发生典型的凋亡形态学改变;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测显示3.5,4.0,5.0 g·L^(-1)的GAE作用48 h后,早期凋亡细胞分别占6.51%,12.48%和22.81%,且免疫组化显示细胞内蛋白Caspase-3和Fas的表达均上调且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:GAE能够诱导激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡,其作用机制可能与死亡受体介导的信号通路有关。

壁虎醇提物对H22肝癌血管新生的抑制作用

目的研究壁虎醇提物(GEE)对H22小鼠肿瘤组织血管新生的抑制作用及其机制。方法建立腋下移植H22肝癌模型,按照体重随机分为5组:模型组(0.9%Na Cl)、对照组(2 mg·kg^(-1)阿霉素)和高、中、低3个剂量实验组(GEE:80,40,20 mg·kg^(-1)),连续腹腔注射10 d,计算抑瘤率;用免疫组化法观察血管内皮细胞标记物(CD34)表达水平,计算新生微血管密度(MVD);以免疫印迹法检测血管内皮生长因子A(VEGF-A)、基质金属蛋白酶(MMP-2)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化的细胞外信号调节激酶(P-ERK)的表达。结果高、中、低3个剂量实验组的抑瘤率分别为63.18%,50.91%,44.68%,说明GEE对H22小鼠移植瘤的抑瘤作用较明显。模型组小鼠肿瘤组织MVD为平均每个视野(24.7±4.1)个,与模型组比较,对照组、高、中、低3个剂量实验组的MVD分别为平均每个视野(13.6±3.6),(8.0±1.6),(11.0±1.1),(13.9±1.7)个,其中3个剂量实验组差异有统计学意义(均P<0.01)。模型组、对照组、低中高3个剂量实验组的VEGF-A与β-actin灰度比值平均分别为0.17,0.10,0.01,0.03,0.04;这5组的MMP-2与β-actin灰度比值平均分别为1.68,1.27,0.48,1.15,1.50,而P-ERK与ERK灰度比值平均分别为0.10,0.07,0.06,0.07,0.08,与模型组相比,这4组差异均有统计学意义(均P<0.01),说明GEE组和对照组的VEGF-A、MMP-2、P-ERK蛋白水平均明显减弱。结论 GEE可抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长,其抗肿瘤作用机制可能与降低肿瘤组织血管生成相关因子VEGF-A、MMP-2、P-ERK的表达及降低微血管密度有关。

壁虎提取物对U_(14)荷瘤鼠的药效研究

目的:研究壁虎不同方式提取物对U14荷瘤鼠的抗肿瘤作用。方法:制备小鼠U14肿瘤模型,观察壁虎全粉、壁虎水提物及壁虎水提醇沉物对U14荷瘤鼠的抑瘤效果。结果:生药量相等的壁虎全粉①组、壁虎水提物①组、壁虎醇沉物组肿瘤抑瘤率分别为24.27%、43.37%、48.41%;给药重量相等壁虎醇沉物组、壁虎水提物②组、壁虎全粉②组的肿瘤抑瘤率分别为48.41%、40.05%和6.23%,CTX组、壁虎水提物①组、壁虎醇沉物组与对照组比较差异极显著(P<0.01),其余各组抑瘤率比较无明显差异(P>0.05)。结论:壁虎水提醇沉物中对肿瘤有抑制作用的有效成分比较富集。