羟基壬烯醛通过抑制内皮细胞焦亡减轻新生儿脓毒症诱导的急性肺损伤

目的探讨4-羟基壬烯醛(HNE)通过抑制内皮细胞(ECs)焦亡在减轻新生儿脓毒症诱导的急性肺损伤(ALI)中的作用。方法新生小鼠随机分为5组:(1)假手术组(Sham组);(2)假手术小鼠接受HNE治疗组(Sham+HNE组);(3)盲肠浆液(cecal slurry,CS)处理组(CS组);(4)CS处理的GSDMD^(-/-)小鼠组(CS+GSDMD^(-/-)组);(5)CS小鼠接受HNE治疗组(CS+HNE组)。通过肺组织病理学和肺湿/干重量比评估肺损伤程度。分离小鼠ECs,并分为Ctrl组、LPS+ATP组、LPS+ATP+HNE-L组和LPS+ATP+HNE-H组。蛋白质印迹法评估HNE和Caspase-1途径表达。结果与CS组相比,CS+HNE组和CS+GSDMD^(-/-)组小鼠的肺组织评分显著降低(P<0.05),并且肺组织的湿和干重量比显著降低(P<0.05)。小鼠72 h存活率观察结果显示,与CS组相比,CS+HNE组和CS+GSDMD^(-/-)组小鼠的存活率显著提高(P<0.05)。CS+HNE组和CS+GSDMD^(-/-)组小鼠的肺ECs中GSDMD-N、C-caspase-1、NLRP3、IL-18、IL-1β表达显著低于CS组(P<0.05)。与Ctrl组细胞相比,LPS+ATP显著降低细胞活力(P<0.05),和增加了GSDMD、C-caspase-1、NLRP3、IL-18、IL-1β的蛋白表达(P<0.05),而这些作用也被HNE抑制。结论HNE可以通过抑制NLRP3/Caspase-1信号传导来抑制肺ECs细胞焦亡,并改善脓毒症小鼠的ALI。

降低反-2-壬烯醛及老化前驱体的酿造工艺研究

为降低麦汁和啤酒中反-2-壬烯醛与老化前驱体壬烯醛潜力的含量,研究糖化过程中影响麦芽脂肪氧合酶(LOX)作用的关键因素(蛋白休止温度、醪液p H值、麦芽粉碎度、麦芽LOX活力),确定最佳工艺:蛋白休止温度为55~60℃、醪液pH为5.5、EBC粉碎机磨盘间距为0.5mm、LOX活力越低越好。大生产验证试验显示:蛋白质休止温度为55℃、使用低LOX麦芽时,啤酒中反-2-壬烯醛、壬烯醛潜力降低幅度分别为6.7%~25.0%、9.2%~20.3%,啤酒新鲜度得分提高4.2%~16.1%。

敲减AKR1A1基因对H_2O_2及4-羟基壬烯醛诱导的1321N1脑星形细胞瘤细胞损伤的影响

目的初步探讨星形胶质细胞瘤细胞中的醛酮还原酶1A1(AKR1A1)在抗氧化应激和有毒醛代谢中的作用。方法通过LipofectamineTM RNAiMax以siRNA转染1321N1细胞,用Western blot法和qRT-PCR检测1321N1细胞中AKR1A1基因抑制水平。siRNA转染后的细胞经H2O2和4-羟基壬烯醛处理后使用MTT法检测细胞成活率;采用2',7'-二氯二氢荧光黄双乙酸酯(DCFH-DA)标记法检测敲减AKR1A1基因对H2O2诱导的1321N1细胞内活性氧(ROS)水平的影响。结果 Western blot法和qRT-PCR结果显示1321N1细胞经特异性siRNA转染后,AKR1A1基因的表达受到明显抑制(70%)。MTT法检测结果显示,siRNA-AKR1A1转染后的1321N1细胞在H2O2或4-羟基壬烯醛压力下的细胞成活率显著降低,而且敲减AKR1A1的1321细胞内H2O2诱导的ROS水平显著高于对照细胞。结论使用的特异性siRNA能有效抑制AKR1A1基因在1321N1星形细胞瘤细胞中表达,AKR1A1参与1321N1脑星形细胞瘤细胞中的4-羟基壬烯醛代谢,并且很可能参与调节脑细胞的抗氧化应激机制。

XIAP过度表达对新生小鼠缺氧缺血后脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛表达的影响

目的探讨X-染色体连锁的凋亡抑制剂(XIAP)过度表达对正常凋亡相关蛋白的影响,以及XIAP对未成熟脑在缺氧缺血(HI)后硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛(4-HNE)形成的影响。方法新生9日龄转基因XIAP过度表达及同期野生型C57BL/6小鼠在HI(结扎左颈总动脉加10%氧气吸入55min)后3、24、72h处死,取脑组织进行硝基酪氨酸和4-HNE免疫组化染色;部分未进行HI的动物取脑组织进行匀浆用于Western蛋白印迹。结果West鄄ern蛋白印迹显示雌性转基因动物XIAP蛋白表达量高于雄性,XIAP过度表达组和野生组脑组织中细胞色素C、凋亡诱导因子、半胱天冬酶-9、半胱天冬酶-3、诱导型一氧化氮合酶、神经元型一氧化氮合酶含量差异均无显著性。免疫组化显示HI后24hXIAP过度表达组大脑皮层和海马CA1区硝基酪氨酸和4-HNE阳性细胞数明显低于野生组(P均<0.01)。结论XIAP过度表达对正常情况下凋亡相关蛋白表达无影响,其对缺氧缺血性脑损伤的保护作用可能与减轻氧化应激损伤有关。

啤酒和麦汁中反-2-壬烯醛前体物质检测方法的优化及应用

对固相微萃取-气质联用法(SPME-GC-MS)测定啤酒或麦汁反-2-壬烯醛前体物质的方法进行了优化,分别研究了前处理保护气种类、流速、通气时间、反应体系p H值和加热环境对反-2-壬烯醛前体物质转化效果的影响。结果表明,选择保护气为氮气、气体流速为2 mL/s,通气时间为3 min最为合适;反应体系pH值在4.5时转化率最高,加热环境油浴效果要好于水浴。通过验证试验得出上述各条件优化后,转化率提高了19.49%,说明该方法较传统方法的转化率大大提高,可用于啤酒生产中对啤酒老化潜在隐患的预判。

SPE-HPLC法测定啤酒中的微量反-2-壬烯醛

采用固相萃取-高效液相色谱法对啤酒中的微量反-2-壬烯醛进行检测。啤酒样品经水蒸汽蒸馏、Supelclean LC-18固相萃取小柱净化后，采用Nucleosil 100—5C18色谱柱（250mm×4．0mm，5μm）分离，流动相乙腈：水：55：45（V／V），流速为1mL／min，检测波长226nm。在10～150μg／L范围内，峰面积与反-2-壬烯醛浓度呈良好的线性关系（r=0．9998），精密度（RSD）小于5％，样品浓缩250倍后检测限为0．25μg／L，平均回收率在80．4％-109．8％之间。

依达拉奉对老年痴呆大鼠学习记忆及海马4-羟基壬烯醛表达的影响

目的:探讨依达拉奉对老年痴呆大鼠学习记忆及海马组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)及4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,HNE)表达的影响。方法:采用单次双侧脑室注射Aβ蛋白的方法制备老年痴呆大鼠模型,分依达拉奉治疗组(1次/d,3 mg/kg,皮下注射)、空白对照组和模型组。自手术前1 d起给药,第10 d,各组分别进行Morris水迷宫检测后,处死动物并取脑,生物化学方法测定大鼠海马组织MDA含量,免疫组织化学技术检测海马HNE表达。结果:模型组与对照组相比水迷宫实验潜伏期时间显著延长,目的象限停留时间百分比降低,前脑组织MDA含量增加,海马CA1区HNE表达增多。依达拉奉组较模型组水迷宫结果显著改善,前脑组织MDA含量减少,且海马CA1区HNE表达显著减少。结论:依达拉奉能提高老年痴呆大鼠的学习和记忆能力,这种作用可能通过降低MDA及HNE等自由基氧化损伤产物而得以实现。

固相萃取高效液相色谱法检测啤酒中的反-2-壬烯醛

建立了啤酒中反-2-壬烯醛简便、快速的检测方法。用固相萃取与高效液相色谱相结合,以甲醇∶水=60∶40(v∶v)为流动相,流速为1mL/min,检测波长226nm,用外标法进行定量,获得了较高的回收率和较小的相对标准偏差。

4-羟基壬烯醛在百草枯中毒大鼠肺组织中的表达

目的观察百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织中4-羟基壬烯醛(4-HNE)的表达。方法将48只SD大鼠按随机数字表法分为A、B两组,每组24只。B组PQ灌胃(80mg/kg)染毒建立SD大鼠肺损伤模型,A组等量生理盐水灌胃。灌胃后12、24、48、72h观察两组大鼠肺组织病理改变及检测肺组织中4-HNE表达。结果肺组织的病理变化:A组无明显变化;B组肺泡毛细血管扩张,伴弥漫性肺出血,肺泡腔塌陷,肺泡腔内炎性细胞浸润。4-HNE在肺组织中的表达:B组明显高于A组(P<0.01)。结论 PQ中毒时4-HNE表达增强,4-HNE可能为PQ中毒大鼠的肺损伤主要标志之一。

糖化过程降低啤酒反-2-壬烯醛的工艺优化研究

为了研究啤酒生产中麦芽脂肪氧化酶活力、大米脂肪酸含量和麦汁回旋沉淀时间对啤酒老化程度的影响,采用固相微萃取-气质联用法(SPME-GC-MS),对不同麦芽脂肪氧化酶活力和大米脂肪酸含量的麦汁中反-2-壬烯醛前体物质(T2N-P)及硫代巴比妥酸(TBA)值进行了比较分析,并将二者与回旋沉淀时间进行了正交试验。结果表明:三个品种麦芽的脂肪氧化酶活力与麦汁T2N-P和TBA值呈显著正相关(P<0.01),相关系数R2≥0.995,随着大米脂肪酸含量的增加,T2N-P和TBA值也都有不同程度的增加,正交试验结果显示,麦芽脂肪氧化酶活力是影响T2N-P最重要的因素,回旋沉淀时间次之,大米脂肪酸含量影响最小。优化后的啤酒T2N-P和TBA值分别降低了23.25%和29.32%,酯香、协调感、综合评分和各批次产品的质量稳定性均较优化前大幅增加。

不同酿酒酵母对啤酒酿造过程中反-2-壬烯醛的影响

从不同生产用酵母菌泥中分离筛选出3株工业酿酒酵母,编号分别为A、B、C、D。以酿酒酵母C为对照,利用顶空固相微萃取结合气质联用(HS-SPME-GC/MS)法,研究不同酵母在啤酒酿造过程中反-2-壬烯醛(T2N)含量的变化。结果表明,不同发酵液中T2N含量差异显著(P<0.05),A、B、C、D酵母菌发酵液中T2N含量分别为13.63μg/L、9.12μg/L、10.93μg/L、7.63μg/L。4株菌的成品酒中T2N含量均较发酵液高,监测D菌啤酒酿造过程中T2N含量变化结果显示:冷麦汁中T2N含量最高为25.93μg/L,发酵过程中T2N含量相对最低为6.96μg/L,冷贮和成品阶段T2N含量有所增加,分别达到9.27μg/L和11.36μg/L,但与冷麦汁相比低很多。

黄瓜果实反,顺-2,6-壬二烯醛与反-2-壬烯醛比值的变化

黄瓜果实发育的前期和中期,反,顺-2,6-壬二烯醛/反-2-壬烯醛的比值较高,衰老的果实这一比值较低。整个生育期内,在植株生长旺盛的前期和中期,果实中反,顺-2,6-壬二烯醛/反-2-壬烯醛的比值较高;随着植株衰老,果实的此比值下降,反,顺-2,6-壬二烯醛/反-2-壬烯醛比值又受坐果密度的影响。不同品种果实中,反,顺-2,6-壬二烯醛/反-2-壬烯醛的比值均随栽培季节的变化而变化,秋季这一比值较高,夏季较低,冬季高于夏季,但不及秋季的高。

4-羟基壬烯醛诱导支气管上皮细胞凋亡

目的探讨4-羟基壬烯醛(4-HNE)对支气管上皮细胞(16-HBE)凋亡的诱导作用及其机制。方法将支气管上皮细胞(16-HBE)分为空白对照组、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L4-HNE作用4h组,观察4-HNE作用4h后的细胞凋亡情况。Western印迹方法检测磷酸化(p-)SAPK-JNK和caspase-3蛋白表达的情况。结果细胞经30μmol/L、50μmol/L4-HNE作用后,姬姆萨染色可见明显细胞凋亡改变。对照组、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L4-HNE组的AnnexinV-PI染色凋亡细胞数分别为1.94±1.03,2.03±1.04,43.36±1.3,65.92±3.45。30μmol/L和50μmol/L4-HNE组与对照组及10μmol/L4-HNE组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。各组p-SAPK-JNK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。30μmol/L、50μmol/L4-HNE刺激组caspase-3的表达较对照组和10μmol/L4-HNE组差异有统计学意义(P<0.01)。结论30、50μmol/L4-HNE可通过caspase-3的激活引起支气管上皮细胞的凋亡。

缺血性脑卒中与4-羟基壬烯醛的相关性研究

目的探讨缺血性脑卒中与4-羟基壬烯醛(4-HNE)的相关性。方法选择脑卒中倾向的自发性高血压大鼠和自发性高血压大鼠,检测4-HNE在大脑皮层和血清中的表达水平,观察其与大鼠生存时间的关系;同时检测缺血性脑卒中患者和对照人群血浆4-HNE水平及其在急性期和慢性期的变化。结果与自发性高血压大鼠相比,脑卒中倾向的自发性高血压大鼠大脑皮层和血清的4-HNE表达明显升高(P<0.01),且4-HNE水平与大鼠生存时间呈负相关(r=-0.602 08,P<0.01);脑卒中患者血浆4-HNE水平较正常人群升高(P<0.01),且慢性期患者较急性期患者有降低的趋势(P<0.05)。结论缺血性脑卒中时4-HNE升高,4-HNE水平与缺血性脑卒中具有相关性。

XIAP过度表达对未成熟脑急性放射损伤后脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛表达的影响

目的探讨急性放射损伤对未成熟脑高增殖细胞的影响以及X-染色体连锁的凋亡抑制剂(XIAP)过度表达对放射后氧化应激产物硝基酪氨酸(NT)和4-羟基壬烯醛(4-HNE)形成的影响。方法新生10日龄XIAP过度表达转基因C57BL/6小鼠(XIAP组)及同期野生型10日龄C57BL/6小鼠在8Gy单一剂量放射线照射后6h或7d处死取脑,进行脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛免疫组化染色,以及海马齿状回、侧脑室下区面积测量。结果照射后7d海马齿状回、侧脑室下区面积较对照组明显下降,照射后脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛免疫活性明显增加,照射后6hXIAP过度表达组大脑海马齿状回、侧脑室下区硝基酪氨酸和4-HNE的阳性细胞数明显低于野生组(P<0.05,P<0.001)。结论放射线照射可导致活性氧、活性氮基团过度表达,进而引起高增殖细胞损伤;XIAP过度表达可能抑制照射后硝基酪氨酸和4-HNE的形成。

在糖化过程中反-2-壬烯醛的降解产物

老化啤酒中反-2-壬烯醛的形成途径仍旧存在着广泛的争议。通过对麦汁 PH的研究揭示了:来自原料的反-2-壬烯醛稳定性有关机理的复杂性。质谱分析法已经鉴定出,反-2-壬烯醛的主要降解产物中大量存在一些新的、在酿造文献中无法查到的化合物。根据推测:其中一些可能在啤酒存储条件下是纸板风味的前驱物——在啤酒的老化过程中释放出反-2-壬烯醛。

ω-6多不饱和脂肪酸氧化产物4-羟基壬烯醛的研究进展

4-羟基壬烯醛(HNE)是ω-6多不饱和脂肪酸(PUFAs)的氧化产物,研究表明HNE具有生理和病理学作用,与多种疾病的发生、发展密切相关。就HNE的形成机制、形态分布、代谢、病理和生理学意义、检测方法、安全问题等进行综述,并对提升食品营养风味、减少HNE形成的新型食品加工方法进行展望。

低中量饮酒通过抑制肿瘤坏死因子-α/Fas相关死亡域蛋白/肿瘤抑制基因p53依赖的心肌细胞凋亡和4-羟基壬烯醛蓄积减少心肌缺血再灌注损伤

目的通过观察低中量饮酒后小鼠心功能、离体心脏抗缺血再灌注损伤能力和相关蛋白表达差异,探索低中量饮酒的心血管保护作用的其他可能机制。方法 20只雄性成年C57BL/6小鼠随机分为对照组和实验组。对照组给予正常饮水,实验组给予低中量梯度乙醇[第1周为0.42 mol/L(2.5%),第2周为0.84mol/L(5%),第3周为1.68mol/L(10%),第4~6周为3.03mol/L(18%)]。6周后行心脏超声检查,检测左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期前壁厚度(LVAWD)、左心室舒张末期后壁厚度(LVPWD)、射血分数(EF)和左心室短轴缩短率(FS)。两组随机各取4只小鼠制备离体缺血再灌注模型(缺血30min,再灌注45min),应用2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测梗死面积。余下小鼠应用H-E染色和Masson染色分析其心肌细胞横截面积和胶原分布。应用Western印迹法检测TNF-α、Fas相关死亡域蛋白(FADD)、肿瘤抑制基因p53(p53)和4-羟基壬烯醛(4-HNE)蛋白表达情况。结果两组间小鼠的LVEDD、LVESD、LVAWD、LVPWD、EF、FS、心肌细胞横截面积和心肌胶原含量的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。对照组的心肌梗死程度显著高于实验组(P<0.05)。对照组心肌组织中TNF-α、FADD、p53和4-HNE的蛋白相对表达量均显著高于实验组(P值均<0.05)。结论小鼠基础状态下低中量饮酒可能通过抑制TNF-α/FADD/p53信号通路减少心肌细胞凋亡和毒性物质4-HNE蓄积来抵抗缺血再灌注损伤。

人参皂苷Rb1对4-羟基壬烯醛诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响

目的研究人参皂苷Rb1对4-羟基壬烯醛(4-HNE)诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)氧化损伤的保护作用及其机制。方法采用CCK-8法检测人参皂苷Rb1、4-HNE处理浓度。将ARPE-19细胞随机分为对照组、Rb1处理组、4-HNE组和4-HNE+Rb1处理组。采用光学显微镜观察各组细胞形态结构,同时采用荧光显微镜检测细胞内的活性氧自由基(ROS)含量。采用Western印迹检测细胞凋亡相关因子B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bax蛋白表达水平。结果CCK-8检测的结果显示人参皂苷Rb1浓度为100μmol/L时ARPE-19细胞的增殖率最高,具有较好的保护作用,因此选择100μmol/L人参皂苷Rb1进行后续实验。与4-HNE组比较,50.0μmol/L和100.0μmol/L人参皂苷Rb1组细胞活力明显升高(P<0.05)。与对照组比较,4-HNE组细胞内ROS含量明显增加(P<0.05),Bax蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量降低。与4-HNE组比较,4-HNE+Rb1处理组细胞内ROS含量显著减少(P<0.05),Bax蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量升高。结论人参皂苷Rb1能改善4-HNE诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤,其机制可能与人参皂苷Rb1减轻细胞凋亡有关。

一种反式-4-羟基-2-壬烯醛的低成本合成方法

介绍了一种反式-4-羟基-2-壬烯醛的低成本合成方法。由呋喃与甲醇反应,制得的1,1,4,4-四甲氧基-2-丁烯进行选择性水解反应,仅得到单水解产物4,4-二甲氧基-2-丁烯醛,而不产生双水解产物1,4-丁烯二醛,这是此方法可降低成本的关键。4,4-二甲氧基-2-丁烯醛再与戊基溴化镁进行格氏反应得1,1-二甲氧基-4-羟基-2-壬烯,然后在树脂催化下,进行缩醛的酸性水解而得到最终产品反式-4-羟基-2-壬烯醛。总收率为8.7%(从呋喃算起)。产物及中间体结构经1HNMR和13CNMR进行了表征。