4-羟基壬稀酸刺激人视网膜微血管内皮细胞的定量蛋白质组学研究

目的观察4-羟基壬稀酸(4-HNE)刺激人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)增生后蛋白表达变化。方法培养对数生长期hRMECs,并将其分为4-HNE刺激组和阴性对照组。4-HNE刺激组加入浓度分别为5、10、20、50 μmol/L的4-HNE培养基,并据此再分为不同浓度亚组;阴性对照组加入等体积无水乙醇(4-HNE的溶剂)培养基。刺激细胞24 h后加入CCK-8孵育4 h,检测吸光度[A,旧称光密度(OD)]值。采用基于超滤辅助样品制备酶切方法进行蛋白质谱样本制备,非数据依赖的采集模式采集数据,并对差异表达蛋白结果进行基因注释分析和通路富集分析。结果CCK-8增生分析法结果显示,10、20 μmol/L 4-HNE刺激组A值均高于阴性对照组和5 μmol/L 4-HNE刺激组,差异有统计学意义(F=25.42,P<0.05);10、20 μmol/L 4-HNE刺激组之间A值差异无统计学意义(P>0.05);50 μmol/L 4-HNE刺激组A值较阴性对照组低,差异有统计学意义(F=25.42,P<0.05)。质谱共鉴定出2710个可定量蛋白。与阴性对照组比较,10 μmol/L 4-HNE刺激组差异表达倍数大于1.5倍的蛋白118个,差异有统计学意义(P<0.05)。其中,上调蛋白72个,下调蛋白46个。10 μmol/L 4-HNE刺激组血红素氧合酶1、磺胺嘧啶1、热休克蛋白A1B、硫氧还蛋白还原酶1、谷胱甘肽还原酶、三磷酸腺苷(ATP)酶和凝血酶原等蛋白表达增加;载脂蛋白A1和程序性细胞凋亡因子4等表达降低。差异蛋白主要参与氧化应激、细胞解毒、ATP偶联的膜转运等生物学进程。结论4-HNE刺激hRMECs时通过改变氧化应激、细胞解毒相关蛋白、ATP膜偶联等蛋白的表达,共同调控细胞氧化应激和生长状态。

香烟烟雾暴露对大鼠支气管肺泡灌洗液及外周血4-HNE和γ-GCS表达的影响

目的研究香烟烟雾暴露对大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)及外周血4-羟基壬稀醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma-Glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)表达的影响,探讨4-HNE及γ-GCS在COPD氧化$抗氧化失衡发病机制中的作用。方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为不吸烟组、吸烟6周组和吸烟12周组;采用双抗体夹心酶联免疫吸附(ABC-ELISA)法分别检测各组大鼠BALF及外周血4-HNE和γ-GCS的含量。结果 (1)与不吸烟组(15.917±1.584;12.305±1.822)比较,吸烟6周组(21.376±2.80;18.333±2.585)和吸烟12周组(28.634±2.999;22.754±3.882)大鼠BALF和外周血中4-HNE含量明显增加,差异均有统计学意义(P均<0.01);吸烟12周组与吸烟6周组比较有所增加,差异也有统计学意义(P<0.01)。(2)与不吸烟组(13.525±2.311;11.847±1.171)比较,吸烟6周组(15.802±1.647;16.221±1.577)大鼠BALF和外周血中γ-GCS的表达明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05;P<0.01);与不吸烟组比较,吸烟12周组(11.527±1.606;9.015±1.569)的表达明显减少,差异也有统计学意义(P<0.05;P<0.01)。(3)吸烟6周组BALF及外周血4-HNE和γ-GCS的表达呈正相关(r=0.764,r=0.674),吸烟12周组BALF中4-HNE和γ-GCS表达呈负相关(r=-0.777),差异均有统计学意义(P均<0.05),而外周血中二者表达无显著相关性。结论香烟烟雾暴露可使大鼠体液4-HNE及γ-GCS的表达水平增高,随着吸烟时间延长,γ-GCS逐渐降低,提示二者在COPD氧化$抗氧化失衡中发挥一定的作用。

Cu-Ag合金原位纤维复合材料的沉淀强化效应

研究了形变态Cu-10Ag和Cu-10Ag-RE合金原位纤维复合材料时效强化效应。在300℃以下温度时效显示连续沉淀并导致合金强化,在300℃以上温度时效显示不连续沉淀,析出片层状Ag沉淀并与Cu基体保持共格位向关系。在真应变η=6时效,合金具有高的时效强化效应,其极限拉伸强度增幅可达约12%;而在真应变η=9.8时效,时效强化效应减弱,极限拉伸强度增幅约4%～5%。微量Ce或Y添加剂提高Cu-10Ag合金的时效强化效应及不连续沉淀温度。

利用多维气相色谱分析壬烯中烯烃含量

通过多维色谱法确定壬烯中烯烃含量。用适合的稀释液将样品按一定比例进行稀释,稀释后的样品符合PE多维气相色谱分析的适用范围。将样品按规程打入PE多维色谱进行分析。样品进入设备后通过极性柱、捕集阱等设施进行分离,最终通过检测器检测换算得到所需结果。建立的壬烯中烯烃含量分析方法,能够准确快速完成壬烯中烯烃含量检测。此检测方法简便易操作,能够满足分析需求。