壮药汗衣台抗HBV有效成分分析及对HBVDNA、HBVcccDNA的影响

目的:了解汗衣台抗HBV有效成分及对HepG2.2.15细胞HBVcccDNA和HBVDNA的影响。方法:对汗衣台分离提取及HPLC-ESI-MS/MS测定,发现6种含量较高的有效成分:古伦宾、异古伦宾、掌叶防己碱、蝙蝠葛碱、非洲防己碱、药根碱。予各有效成分标准品不同浓度作用于2.2.15细胞,孵育9天,取上清ELISA法测定HBsAg和HBeAg含量;荧光定量PCR法检测HBVDNA;提取细胞总DNA并以PSAD酶消化后选择性荧光定量PCR法检测HBVcccDNA;后两者抑制率做相关性分析。结果:全部浓度的异古伦宾(10~160μmol/L)、非洲防己碱(10~160μmol/L)、蝙蝠葛碱(0.25~10μmol/L)、药根碱(20~320μmol/L)以及40~160μmol/L浓度的古伦宾、50~400μmol/L掌叶防己碱对HBsAg有明显抑制作用,40~160μmol/L浓度非洲防己碱、5μmol/L蝙蝠葛碱、80~320μmol/L药根碱及200~400μmol/L的掌叶防己碱对HBeAg有明显抑制作用;全部浓度的异古伦宾、药根碱,20~160μmol/L的古伦宾、160μmol/L非洲防己碱及400μmol/L浓度掌叶防己碱、5~10μmol/L蝙蝠葛碱对HBVDNA具有抑制作用,抑制率均不高;所有有效成分在较低浓度以上对HBVcccDNA均具有抑制作用,抑制率普遍较高,呈剂量依赖性,160μmol/L的非洲防己碱抑制率39.55%超过干扰素21.44%,200μmol/L的掌叶防己碱抑制率29.55%超过干扰素及拉米夫定24.6%;HBVDNA与HBVcccDNA相关性比较情况复杂,趋势一致但程度差异较大。结论:汗衣台6种主要成分均具有不同程度的抗HBV作用,均可视为抗HBV的有效成分。6种有效成分不同程度抑制HBVDNA复制,对HBVcccDNA的抑制呈剂量依赖性;上清HBVDNA检测并不能完全代表细胞内HBVcccDNA情况。